一種利用線蟲鑑定地溝油的方法
2023-05-28 01:15:36 3
專利名稱：一種利用線蟲鑑定地溝油的方法
技術領域：
本發明涉及一種鑑定地溝油的方法。
背景技術：
地溝油，泛指在生活中存在的各類劣質油，如回收的食用油、反覆使用的炸油，以及通過過濾、加熱、沉澱、分離等方法對城市下水道裡的垃圾加工而成的「食用油」。「地溝油」是一種質量極差、極不衛生的非食用油。一旦食用「地溝油」，它會破壞人們的白血球和消化道黏膜，引起食物中毒，甚至致癌的嚴重後果。地溝油回流到餐桌的現象在中國普遍存在並在近年被廣泛關注，而鑑定地溝油成為難題。目前國內尚未有檢測地溝油的統一標準。 單憑人的感官，地溝油的色、香、味與普通食用油幾乎沒有分別。即便是能探明底細的儀器也常常難以辨別真假。見諸報導的地溝油檢測方法都存在一定盲區，準確率也有待提高，尚不足以對地溝油進行充分有效的鑑定。一般地溝油中含有膽固醇類物質，而植物油中沒用這類具有動物油屬性的成分；即使地溝油經過數級精煉，膽固醇也會痕量存在。常規的通過膽固醇檢測鑑定地溝油的方法，具有操作複雜、儀器依賴度大、成本較高的不足，而且常規膽固醇檢測方法5mg/ g(10% )檢出限較高，無法針對特異成分痕量低的高精煉地溝油進行檢測。
發明內容
本發明目的是為了解決常規的通過膽固醇檢測鑑定地溝油的方法，具有操作複雜、儀器依賴度大、成本較高的不足，而且無法針對特異成分痕量低的高精煉地溝油進行檢測的問題，而提供一種利用線蟲鑑定地溝油的方法。利用線蟲鑑定地溝油的方法按以下步驟實現一、將 17g 的瓊脂粉、2. 5g 的蛋白腖、O. Ilg 的 CaCl2、O. 12g 的 MgSO4'3g 的 NaCl 和25mL磷酸鹽緩衝液，加蒸餾水定容至1000ml，然後放入高壓蒸汽滅菌鍋中於120°C滅菌 20min，再降溫至50 60°C，然後在無菌環境下加入I IOml的待檢測食用油，獲得培養基，再倒入培養皿；二、培養皿中的培養基凝固8 12h後接入5 10隻線蟲幼蟲進行觀察，若幼蟲生長緩慢，超過36h後才能發育為成蟲且成蟲體型明顯瘦小，活動能力減弱，運動行為衰退， 則待檢測食用油不是地溝油；若2處內可發育為成蟲且生長和活動狀況良好，則待檢測食用油是地溝油，即完成利用線蟲鑑定地溝油。本發明通過對線蟲生長觀測和行為觀察，藉助膽固醇這樣關鍵因子對地溝油進行判斷。膽固醇是線蟲的關鍵生長因子，在缺乏膽固醇的線蟲培養基中，線蟲發育明顯滯後和不足；地溝油中普遍含有膽固醇，在無膽固醇成分的培養基中添加微量地溝油，線蟲生長狀況與含有膽固醇成分的培養基中生長的線蟲毫無差別。將疑似地溝油添加入無膽固醇成分的線蟲培養基中，如果此培養基上生長的線蟲生長良好、行為正常，與正常培養基生長的線蟲無差別，便可確定此類食用油為地溝油。
本發明與傳統的利用分析儀器鑑定地溝油的方法相比，彌補了常規膽固醇檢測方法5mg/g(10%)檢出限較高的不足，對特異成分痕量低的高精煉地溝油可以有效鑑定。利用線蟲生長和行為指標，可以直觀高效的甄別食用油的質量優劣。此外，本檢測方法對實驗條件要求低，不需要特殊的高精分析儀器和檢測設備，實驗操作方便，靈敏度高，準確度好， 成本低廉，易於培訓和掌握。
圖I為實施例中幼蟲長至成蟲時間，以幼蟲生長產卵小時數計的柱狀圖；圖2為實施例中線蟲頭擺率的柱狀圖。
具體實施例方式具體實施方式
一本實施方式利用線蟲鑑定地溝油的方法按以下步驟實現一、將 17g 的瓊脂粉、2. 5g 的蛋白腖、O. Ilg 的 CaCl2、0· 12g 的 MgSO4,3g 的 NaCl 和25mL磷酸鹽緩衝液，加蒸餾水定容至1000ml，然後放入高壓蒸汽滅菌鍋中於120°C滅菌 20min，再降溫至50 60°C，然後在無菌環境下加入I IOml的待檢測食用油，獲得培養基，再倒入培養皿；二、培養皿中的培養基凝固8 12h後接入5 10隻線蟲幼蟲進行觀察，若幼蟲生長緩慢，超過36h後才能發育為成蟲且成蟲體型明顯瘦小，活動能力減弱，運動行為衰退， 則待檢測食用油不是地溝油；若2處內可發育為成蟲且生長和活動狀況良好，則待檢測食用油是地溝油，即完成利用線蟲鑑定地溝油。本實施方式步驟一中待檢測食用油為疑似地溝油的食用油。本實施方式中24h內可發育為成蟲且生長和活動狀況良好，是指幼蟲在24h內開始產卵，即發育為健康正常的成蟲，以頭擺率為指標表徵其活動狀況良好。
具體實施方式
二 本實施方式與具體實施方式
一不同的是步驟一中磷酸鹽緩衝液的配置將13. 6g的KH2PO4和I. 8g的Κ0Η,加蒸餾水定容至IOOmL,調節pH值為6. 0，獲得磷酸鹽緩衝液。其它步驟及參數與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
三本實施方式與具體實施方式
一或二不同的是步驟一中再降溫至 55°C，然後在無菌環境下加入2ml的待檢測食用油。其它步驟及參數與具體實施方式
一或二相同。
具體實施方式
四本實施方式與具體實施方式
一至三之一不同的是步驟二中培養皿中的培養基凝固8h後接入8隻線蟲幼蟲進行觀察。其它步驟及參數與具體實施方式
一至三之一相同。實施例利用線蟲鑑定地溝油的方法按以下步驟實現一、將 17g 的瓊脂粉、2. 5g 的蛋白腖、O. Ilg 的 CaCl2、0· 12g 的 MgSO4,3g 的 NaCl 和25mL磷酸鹽緩衝液，加蒸餾水定容至1000ml，然後放入高壓蒸汽滅菌鍋中於120°C滅菌 20min，再降溫至55°C，然後在無菌環境下加入Iml的待檢測食用油，獲得培養基，再倒入培
養皿；二、培養皿中的培養基凝固8h後接入10隻線蟲幼蟲進行觀察，若幼蟲生長緩慢，超過36h後才能發育為成蟲且成蟲體型明顯瘦小，活動能力減弱，運動行為衰退，則待檢測食用油不是地溝油；若24h內可發育為成蟲且生長和活動狀況良好，則待檢測食用油是地溝油，即完成利用線蟲鑑定地溝油。本實施例步驟一中待檢測食用油為疑似地溝油的食用油。本實施例中24h內可發育為成蟲且生長和活動狀況良好，是指幼蟲在24h內開始產卵(圖I)，即發育為健康正常的成蟲，以頭擺率為指標表徵其活動狀況良好(圖2)。對照組正常培養基上生長的線蟲，即幼蟲在24h內開始產卵，即發育為健康正常的成蟲， 以頭擺率為指標表徵其活動狀況良好；正常培養基將17g的瓊脂粉、2. 5g的蛋白腖、O. Ilg 的CaCl2、0. 12g的MgSO4,3g的NaCl和25mL磷酸鹽緩衝液，加蒸餾水定容至1000ml，然後放入高壓蒸汽滅菌鍋中於120°C滅菌20min，再降溫至55°C，然後在無菌環境下加入Iml膽固醇溶液，獲得正常培養基；其中膽固醇溶液的濃度為10mg/ml。可見，實施例中生長的線蟲與正常培養基上生長的線蟲無差別；實施例中的待檢測食用油含有膽固醇成分，可鑑定為劣質地溝油。實驗佐證I :一、將 17g 的瓊脂粉、2. 5g 的蛋白腖、O. Ilg 的 CaCl2、O. 12g 的 MgSO4'3g 的 NaCl 和25mL磷酸鹽緩衝液，加蒸餾水定容至1000ml，然後放入高壓蒸汽滅菌鍋中於120°C滅菌 20min,再降溫至55°C，然後在無菌環境下加入Iml膽固醇溶液和IOml動物油，獲得培養基， 再倒入培養皿；二、培養皿中的培養基凝固8h後接入10隻線蟲幼蟲進行觀察，幼蟲在24h內開始產卵，即發育為健康正常的成蟲(圖I)，以頭擺率為指標表徵其活動狀況良好(圖2)。可見，實驗佐證I的培養基上生長的線蟲與正常培養基上生長的線蟲無差別；表明添加動物油對線蟲的生長和活動沒有影響。實驗佐證2 一、將 17g 的瓊脂粉、2. 5g 的蛋白腖、O. Ilg 的 CaCl2、O. 12g 的 MgSO4'3g 的 NaCl 和25mL磷酸鹽緩衝液，加蒸餾水定容至1000ml，然後放入高壓蒸汽滅菌鍋中於120°C滅菌 20min,再降溫至55°C，然後在無菌環境下加入Iml膽固醇溶液和IOml植物油，獲得培養基， 再倒入培養皿；二、培養皿中的培養基凝固8h後接入10隻線蟲幼蟲進行觀察，幼蟲在24h內開始產卵，即發育為健康正常的成蟲(圖I)，以頭擺率為指標表徵其活動狀況良好(圖2)。可見，實驗佐證2的培養基上生長的線蟲與正常培養基上生長的線蟲無差別；表明添加植物油對線蟲的生長和活動沒有影響。實驗佐證3 一、將 17g 的瓊脂粉、2. 5g 的蛋白腖、O. Ilg 的 CaCl2、O. 12g 的 MgSO4'3g 的 NaCl 和25mL磷酸鹽緩衝液，加蒸餾水定容至1000ml，然後放入高壓蒸汽滅菌鍋中於120°C滅菌 20min,再降溫至55°C，獲得培養基，再倒入培養皿；二、培養皿中的培養基凝固8h後接入10隻線蟲幼蟲進行觀察，線蟲在無膽固醇培養基中生長緩慢，36h後開始產卵(圖I)，成蟲明顯體弱瘦小，頭擺率顯著降低(圖2)。可見，實驗佐證3中線蟲活動能力減弱，運動行為衰退；不添加膽固醇(或地溝油)，線蟲生長緩慢；表明作為線蟲關鍵生長因子的膽固醇缺失，使線蟲發育受阻，生長減慢，活動能力降低。實驗佐證4 一、將 17g 的瓊脂粉、2. 5g 的蛋白腖、O. Ilg 的 CaCl2、0· 12g 的 MgSO4,3g 的 NaCl 和25mL磷酸鹽緩衝液，加蒸餾水定容至1000ml，然後放入高壓蒸汽滅菌鍋中於120°C滅菌 20min，再降溫至55°C，然後在無菌環境下加入Iml動物油，獲得培養基，再倒入培養皿；二、培養皿中的培養基凝固8h後接入10隻線蟲幼蟲進行觀察，幼蟲在24h內開始產卵，即發育為健康正常的成蟲(圖I)，以頭擺率為指標表徵其活動狀況良好(圖2)。可見，實驗佐證4的培養基上生長的線蟲與正常培養基上生長的線蟲無差別；表明在無膽固醇成分的線蟲培養基中，添加含有膽固醇成分的動物油，彌補了培養基中膽固醇的缺失，使得線蟲的生長和活動得以正常。實驗佐證5 一、將 17g 的瓊脂粉、2. 5g 的蛋白腖、O. Ilg 的 CaCl2、O. 12g 的 MgSO4'3g 的 NaCl 和25mL磷酸鹽緩衝液，加蒸餾水定容至1000ml，然後放入高壓蒸汽滅菌鍋中於120°C滅菌 20min，再降溫至55°C，然後在無菌環境下加入5ml動物油，獲得培養基，再倒入培養皿；二、培養皿中的培養基凝固8h後接入10隻線蟲幼蟲進行觀察，幼蟲在24h內開始產卵，即發育為健康正常的成蟲(圖I)，以頭擺率為指標表徵其活動狀況良好(圖2)。可見，實驗佐證5的培養基上生長的線蟲與正常培養基上生長的線蟲無差別；表明在無膽固醇成分的線蟲培養基中，添加含有膽固醇成分的動物油，彌補了培養基中膽固醇的缺失，使得線蟲的生長和活動得以正常。實驗佐證6 一、將 17g 的瓊脂粉、2. 5g 的蛋白腖、O. Ilg 的 CaCl2、O. 12g 的 MgSO4'3g 的 NaCl 和25mL磷酸鹽緩衝液，加蒸餾水定容至1000ml，然後放入高壓蒸汽滅菌鍋中於120°C滅菌 20min，再降溫至55°C，然後在無菌環境下加入IOml動物油，獲得培養基，再倒入培養皿；二、培養皿中的培養基凝固8h後接入10隻線蟲幼蟲進行觀察，幼蟲在24h內開始產卵，即發育為健康正常的成蟲(圖I)，以頭擺率為指標表徵其活動狀況良好(圖2)。可見，實驗佐證6的培養基上生長的線蟲與正常培養基上生長的線蟲無差別；表明在無膽固醇成分的線蟲培養基中，添加含有膽固醇成分的動物油，彌補了培養基中膽固醇的缺失，使得線蟲的生長和活動得以正常。實驗佐證7 一、將 17g 的瓊脂粉、2. 5g 的蛋白腖、O. Ilg 的 CaCl2、O. 12g 的 MgSO4'3g 的 NaCl 和25mL磷酸鹽緩衝液，加蒸餾水定容至1000ml，然後放入高壓蒸汽滅菌鍋中於120°C滅菌 20min，再降溫至55°C，然後在無菌環境下加入IOml植物油，獲得培養基，再倒入培養皿；二、培養皿中的培養基凝固12h後接入5隻線蟲幼蟲進行觀察，線蟲在無膽固醇培養基中生長緩慢，36h後開始產卵(圖I)，成蟲明顯體弱瘦小，頭擺率顯著降低(圖2)。可見，實驗佐證7中線蟲活動能力減弱，運動行為衰退；表明僅添加植物油，此培養基中無膽固醇成為，線蟲生長緩慢，活動能力降低。實驗佐證8 一、將 17g 的瓊脂粉、2. 5g 的蛋白腖、O. Ilg 的 CaCl2、O. 12g 的 MgSO4'3g 的 NaCl和25mL磷酸鹽緩衝液，加蒸餾水定容至1000ml，然後放入高壓蒸汽滅菌鍋中於120°C滅菌 20min，再降溫至55°C，然後在無菌環境下加入Iml植物油，獲得培養基，再倒入培養皿；二、培養皿中的培養基凝固12h後接入5隻線蟲幼蟲進行觀察，線蟲在無膽固醇培養基中生長緩慢，36h後開始產卵(圖I)，成蟲明顯體弱瘦小，頭擺率顯著降低(圖2)。可見，實驗佐證8中線蟲活動能力減弱，運動行為衰退；表明僅添加植物油，此培養基中無膽固醇成為，線蟲生長緩慢，活動能力降低。
權利要求
1.一種利用線蟲鑑定地溝油的方法，其特徵在於利用線蟲鑑定地溝油的方法按以下步驟實現一、將17g 的瓊脂粉、2. 5g 的蛋白腖、O. Ilg 的 CaCl2、O. 12g 的 MgS04、3g 的 NaCl 和 25mL 磷酸鹽緩衝液，加蒸餾水定容至1000ml，然後放入高壓蒸汽滅菌鍋中於120°C滅菌20min， 再降溫至50 60°C，然後在無菌環境下加入I IOml的待檢測食用油，獲得培養基，再倒入培養皿；二、培養皿中的培養基凝固8 12h後接入5 10隻線蟲幼蟲進行觀察，若幼蟲生長緩慢，超過36h後才能發育為成蟲且成蟲體型明顯瘦小，活動能力減弱，運動行為衰退，則待檢測食用油不是地溝油；若24h內可發育為成蟲且生長和活動狀況良好，則待檢測食用油是地溝油，即完成利用線蟲鑑定地溝油。
2.根據權利要求I所述的一種利用線蟲鑑定地溝油的方法，其特徵在於步驟一中磷酸鹽緩衝液的配置將13. 6g的KH2PO4和I. 8g的Κ0Η，加蒸餾水定容至IOOmL,調節pH值為 6.0，獲得磷酸鹽緩衝液。
3.根據權利要求I或2所述的一種利用線蟲鑑定地溝油的方法，其特徵在於步驟一中再降溫至55°C，然後在無菌環境下加入2ml的待檢測食用油。
4.根據權利要求3所述的一種利用線蟲鑑定地溝油的方法，其特徵在於步驟二中培養皿中的培養基凝固8h後接入8隻線蟲幼蟲進行觀察。
全文摘要
一種利用線蟲鑑定地溝油的方法，它涉及一種鑑定地溝油的方法。它解決了常規的通過膽固醇檢測鑑定地溝油的方法，具有操作複雜、儀器依賴度大、成本較高的不足，而且無法針對特異成分痕量低的高精煉地溝油進行檢測的問題。方法一、製備培養基，再倒入培養皿；二、培養皿中的培養基凝固後接入線蟲幼蟲進行觀察，若幼蟲生長緩慢，超過36h後才能發育為成蟲且成蟲體型明顯瘦小，活動能力減弱，運動行為衰退，則待檢測食用油不是地溝油；若24h內可發育為成蟲且生長和活動狀況良好，則待檢測食用油是地溝油，即完成。本發明對特異成分痕量低的高精煉地溝油可以有效鑑定。本發明實驗條件要求低，不需要特殊的高精分析儀器，操作方便，成本低廉。
文檔編號G01N33/03GK102608281SQ20121005157
公開日2012年7月25日 申請日期2012年3月1日 優先權日2012年3月1日
發明者徐鏡波, 李鑄衡, 王雲彪 申請人:中國科學院東北地理與農業生態研究所