一步法多指標檢測心肌梗塞的快速金標檢測試劑盒的製作方法

2023-07-01 19:02:01 1

專利名稱：一步法多指標檢測心肌梗塞的快速金標檢測試劑盒的製作方法
技術領域：
本發明涉及生物醫學領域，特別涉及一種在醫學檢驗中應用的一步法多指標檢測心肌梗塞的快速金標檢測試劑盒。
免疫膠體金技術作為一種新的免疫學方法，其發展十分迅速，在生物醫學各研究領域，特別是在醫學檢驗中得到了日益廣泛的應用。膠體金已成為繼螢光素、放射同位素和酶之後，在免疫標記技術中較為常用的一種非放射性標劑。
膠體金是由氯金酸在還原劑如鞣酸、檸檬酸三鈉的作用下聚合形成特定大小的金顆粒，並由於靜電作用成為一種穩定的膠體狀態，它具有高電子密度、能與多種生物大分子結合的特點。免疫金標記技術主要利用了金顆粒的這一特徵，在金標蛋白結合處於顯微鏡下可見黑褐色顆粒，當這些標物在相應的配體處大量聚集時，肉眼可見紅色或紫紅色斑點，因而用於定性或半定量的快速免疫檢測方法中。
由於膠體金檢測試劑盒與放免、酶標試劑盒相比，具有操作使用安全、簡便、易單人份檢測和快速等優點，因此近幾年來金標診斷試劑盒正日益流行，在某些項目上已逐漸替代了放免、酶標試劑盒，如早早孕試劑條(HCG Test Strip)等。
急性心肌梗塞(Acute Myocardial Infarction，AMI)病情兇險，死亡率高，是一種較為危險的疾病，AMI致死的一個重要原因就是不能早期診斷，延誤了治療時機。所以近年來，對於AMI標誌物的研究十分活躍。AMI的生化標誌物包括有肌紅蛋白(Myoglobin，Mb)、心肌肌鈣蛋白T和心肌肌鈣蛋白I(cardiac Troponin T，cTnT，cardiac Troponin I，cTnI)、肌酸激酶(Myoglobin，MB)同工酶(Cytokinase-Myoglobin，CK-MB)、糖原磷酸化酶同工酶(GPBB)等。
目前市場上現有的同類產品有羅氏公司(Roche)生產的cTnT金標檢測條，福建三明藍波生物技術研究所研製的血清Mb金標免疫斑點法等。這些產品具有下列缺點1、只能單獨檢測血液中的某個心梗指標。
2、單個項目檢測結果的靈敏度和特異性稍遜。
3、如果要得到兩項或多項結果則需操作兩次以上，較為麻煩。
4、兩個或多個獨立試劑盒的生產成本要高於一個複合試劑盒。
5、這些試劑盒的組成均適用於醫院診斷，而不適用於家庭，因為試劑盒包裝內無採血針、小吸管及真空包裝酒精綿球。
本發明的目的是提供一種一步法多指標檢測心肌梗塞的快速金標檢測試劑盒，通過一次檢測即可同時獲得兩個以上心肌梗塞的檢測項目結果。
本發明的技術方案如下一種一步法多指標檢測心肌梗塞的快速金標檢測試劑盒，它包括底板，在底板下端設置的樣品墊，在底板上端設置的吸水紙，以及在底板的位於樣品墊上方處貼置的固定有金標抗體的玻璃纖維膜，所述底板的位於玻璃纖維膜與上端吸水紙之間的區域內分別噴有抗A抗體II條帶、鏈黴親和素條帶和抗抗體條帶；所述玻璃纖維膜包被的金標抗體包含金標抗A抗體I和金標抗B抗體I，玻璃纖維膜還包被聯結了生物素的抗B抗體II。
本發明將測心肌梗塞標誌物的兩個或多個單獨的免疫反應系統組合到心肌梗塞的一個檢測試劑盒中，運用於金標檢測板或檢測條，其檢測的檢出率、靈敏度指標符合臨床檢測要求，提高了檢測的準確性和可靠性。
使用本發明時，可將兩個或多個心肌梗塞檢測項目放在一塊檢測板上，一次檢測即可同時獲得兩個或多個檢測項目結果，快速而又簡便，提高了效率。通過多個項目的聯合檢測，增加了檢測的特異性，提高了檢測的靈敏度，準確、可靠，更有助於作出準確的診斷。
本發明的產品由於省卻了重複操作的材料，所以其生產成本低於各單項檢測板相加之和的成本。
本產品採用適合家庭用的包裝，即在每一試劑盒中加入採血針、取血吸管、消毒棉球，病人如感不適，可在家中採血檢測，10分鐘即出結果。本產品對患者尤其對隱性心絞痛的患者，根據檢測結果及時去醫院進一步確診和治療具有積極的幫助作用。同時，病人在家中可自我觀察是否再度梗塞，解決了病人若有不適必須去醫院排隊做檢測的問題，節省了病人看病時間。
下面結合附圖和實施例對本發明作詳細說明。


圖1是一種一步法多指標檢測心肌梗塞的快速金標檢測試劑盒的結構示意圖。
圖2是圖1檢測試劑盒的外觀示意圖。
圖3是圖1檢測試劑盒的原理圖。
圖4表示圖1檢測試劑盒的檢測結果釋義。
參看圖1，一種一步法多指標檢測心肌梗塞的快速金標檢測試劑盒包括底板1，在底板1下端設置的樣品墊2，在底板1上端設置的吸水紙3，以及底板1的位於樣品墊2上方處貼置的固定有金標抗體的玻璃纖維膜4。
在底板1的位於玻璃纖維膜4與上端吸水紙3之間的區域內分別噴有抗A抗體II條帶5、鏈黴親和素條帶6和抗抗體條帶7。
玻璃纖維膜4包被的金標抗體包含金標抗A抗體I和金標抗B抗體I。玻璃纖維膜4還包被聯結了生物素的抗B抗體II。
在本實施例中，金標抗A抗體I是抗Mb抗體α。金標抗B抗體I是抗cTnTb抗體a。聯結了生物素的抗B抗體II是聯結了生物素的抗cTnTb抗體b。抗A抗體II條帶5包被了Mb抗體β。抗抗體條帶7包被了羊抗鼠二抗。
參看圖2，標號21是加樣孔，22是T1檢測帶，23是T2檢測帶，24是C對照帶。
此種一步法多指標檢測心肌梗塞標誌物的試劑盒可以有多種形式，如Mb、cTnT聯檢試劑盒，GPBB、cTnI、CK-MB聯檢試劑盒等。由於採用了全血分離膜，因此可同時適用於血清、全血。在試劑盒的生產工藝中，對低濃度的指標(如cTnT等)採用了生物素放大的技術，因而增加了檢測的靈敏度。
該試劑盒組成中還裝有採血針、小吸管及真空包裝酒精棉球，除了在醫院使用外，還可適用於家庭。
本發明的實施例採用肌紅蛋白(myoglobin，Mb)、心肌肌鈣蛋白(cardiacTroponin T，cTnT)聯合檢測快速金標檢測試劑盒。
肌紅蛋白(myoglobin，Mb)和心肌肌鈣蛋白(cardiac Troponin T，cTnT)是心肌受損後釋放的兩種物質，其中Mb是早期釋放物，其臨界值為75ng/ml，cTnT是心肌梗塞最具特異的標誌物，其臨界值為0.1ng/ml。對於這兩種指標的同時檢測能提高靈敏度與特異性。該試劑盒將這兩種檢測放於一塊檢測板上，只需2滴血即可同時進行兩項檢測，快速簡便而準確。
參看圖3，圖中○表示膠體金，↓表示生物素，標號31為聯結了膠體金的cTnT單抗a，32為聯結了膠體金的Mb單抗α，33為聯結了生物素的cTnT單抗b，34為包被在膜上的鏈黴親和素，35為包被在膜上的Mb單抗β，36為包被在膜上的羊抗鼠二抗。
本試劑盒採用全血分離系統、雙抗體夾心免疫檢測系統、生物素信號放大等原理，其檢測原理如下1、在樣品墊上滴加全血後，通過全血分離膜的分離，血清被分離開來，進一步運動到膠體金墊。
2、在Mb檢測系統中，聯結膠體金的抗Mb單抗α與血標本中存在的Mb結合形成抗原一抗體複合物層析移動至檢測區T1處，與包被在此的抗Mb單抗β結合形成一條紫紅色條帶。
3、在cTnT檢測系統中，聯結膠體金的抗cTnT單抗a與血標本中的cTnT結合形成抗原一抗體複合物。此複合物再結合標記了生物素的抗cTnT單抗b，形成另一條紫紅色條帶，經層析移動至檢測區T2處被包埋在此的鏈黴親和素捕獲固定。
4、同時，多餘的Mb單抗α-膠體金及cTnT單抗a-膠體金移動至對照區，與此處的羊抗鼠二抗反應生成一條紫紅色C帶。
本試劑盒的每個包裝中包含檢測板1塊，乾燥劑1g，採血針1支，小吸管1根，真空小包裝消毒棉球1包，使用說明書1份，外包裝鋁箔袋1個。在包裝完好的情況下，於2℃～28℃的條件下保存，保存期為12個月。
使用時，需將檢測板恢復至室溫；撕開外包裝，取出各組分，用消毒棉球擦拭無名指末端，用採血針扎一下；用小吸管取血，滴2滴於檢測板的樣品孔中；過10分鐘後觀察結果。
常規心肌梗塞的檢測需依據不同時間各指標的變化，因此檢測者自胸口不適起就應檢測，2～4小時後再測一次，觀察血液中Mb與cTnT濃度的變化。
判斷結果如下陽性結果為T1區出現紫紅色條帶，說明Mb濃度＞75ng/ml；T2區出現紫紅色條帶，說明cTnT濃度＞0.1ng/ml。
陰性結果為T1區、T2區均無條帶出現。
無效結果為若C區無色帶，則檢測結果無效，標本應重新檢測。
參看圖4，表中列出了檢測結果的情況。
權利要求
1.一種一步法多指標檢測心肌梗塞的快速金標檢測試劑盒，它包括底板，在底板下端設置的樣品墊，在底板上端設置的吸水紙，以及在底板的位於樣品墊上方處貼置的固定有金標抗體的玻璃纖維膜，其特徵在於，所述底板的位於玻璃纖維膜與上端吸水紙之間的區域內分別噴有抗A抗體II條帶、鏈黴親和素條帶和抗抗體條帶；所述玻璃纖維膜包被的金標抗體包含金標抗A抗體I和金標抗B抗體I，玻璃纖維膜還包被聯結了生物素的抗B抗體II。
2.根據權利要求1所述的一步法多指標檢測心肌梗塞的快速金標檢測試劑盒，其特徵在於，所述抗A抗體II條帶包被了Mb抗體β。
3.根據權利要求1所述的一步法多指標檢測心肌梗塞的快速金標檢測試劑盒，其特徵在於，所述抗抗體條帶包被了羊抗鼠二抗。
4.根據權利要求3所述的一步法多指標檢測心肌梗塞的快速金標檢測試劑盒，其特徵在於，所述金標抗A抗體I是抗Mb抗體α。
5.根據權利要求3所述的一步法多指標檢測心肌梗塞的快速金標檢測試劑盒，其特徵在於，所述金標抗B抗體I是抗cTnT抗體a。
6.根據權利要求1所述的一步法多指標檢測心肌梗塞的快速金標檢測試劑盒，其特徵在於，所述聯結了生物素的抗B抗體II是聯結了生物素的抗cTnT抗體b。
全文摘要
本發明涉及一種一步法多指標檢測心肌梗塞的快速金標檢測試劑盒,它包括底板,樣品墊,吸水紙,以及固定有金標抗體的玻璃纖維膜。底板的位於玻璃纖維膜與上端吸水紙之間的區域內分別噴有抗A抗體II條帶、鏈黴親和素條帶和抗抗體條帶。玻璃纖維膜包被的金標抗體包含金標抗A抗體I和金標抗B抗體I,玻璃纖維膜還包被聯結了生物素的抗B抗體II。本發明將測心肌梗塞標誌物的兩個或多個單獨的免疫反應系統組合到心肌梗塞的一個檢測試劑盒中,通過一次檢測即可同時獲得兩個以上心肌梗塞的檢測項目結果,具有檢測靈敏度、準確性和可靠性。
文檔編號G01N33/532GK1335502SQ0111302
公開日2002年2月13日 申請日期2001年5月30日 優先權日2001年5月30日
發明者張濤, 李賓, 周軍, 龔丹, 彭永濟, 任一萍 申請人:上海晶泰生物技術有限公司