寡核苷酸晶片及其在B型肝炎病毒突變位點檢測中的應用的製作方法
2023-06-21 03:31:36 2
專利名稱：寡核苷酸晶片及其在B型肝炎病毒突變位點檢測中的應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及基因晶片技術領域，具體地是涉及B肝病毒突變位點的寡核苷酸檢測晶片，利用寡核苷酸晶片的固相PCR來檢測B肝病毒突變位點。
根據功能分類，基因晶片可分為分為cDNA晶片和寡核苷酸晶片，前者可用於基因功能的分析。寡核苷酸晶片除了可繪製表達譜外，在高通量測序、臨床診斷、疾病耐藥性檢測、單核苷酸多態性、基因分型等方面具有潛在的優勢。例如人線粒體16.6kb基因組多態性的研究、BRCA I外顯子11、CFTR基因、ATM基因、HIV-1逆轉錄酶及蛋白酶基因的突變檢測、分枝杆屬內不同種的識別及利福酶素抗性檢測等。
寡核苷酸晶片識別單核苷酸多態性(SNPs)或單鹼基突變可以通過PCR擴增得到的片段與等位特異性的寡核苷酸探針雜交，根據信號的強弱來分析結果。但由於核酸的雜交效率和形成雜合體的熱穩定性與核酸的序列、結構關係密切，改變反應條件如溫度、雜交嚴謹度等只能部分改善雜交效率和雜合體的熱穩定性。由於該限制性，衍生出許多新方法和新思路。寡核苷酸晶片由最初的固相合成到合成後點樣，高密度晶片與低密度晶片同時並存。基於寡核苷酸陣列的微測序、單鹼基延伸、固相PCR等也應運而生。
肝炎是世界性傳染疾病，我國是公認的肝炎大國，肝炎的患病率和發病率都居世界前列，尤其是B型肝炎在全國範圍內分布最廣。肝炎病毒的感染，不僅與急慢、性肝炎，還與肝硬化、肝癌的發生密切相關。B肝病毒基因不同位點的突變可引起免疫逃避、抗病毒治療逃避，使得臨床檢測出現漏檢、用藥不當，以至延誤治療。傳統的B肝突變檢測，通常是通過限制性片段長度多態性分析(RFLP)等各種分子標記、PCR擴增而實現的。它們難以做到對大量樣品的同時、平行分析，而且所需樣品量大，檢測靈敏度低，操作時間長。
本發明總的構思是集寡核苷酸晶片和固相PCR反應於一體。在PCR反應中，鑑於TaqDNA聚合酶在引物的3′末端存在錯配時不能正確延伸的特點，將突變位點設計在檢測探針的3′末端，然後將其5′末端固定在經過化學修飾的玻璃基片上作為寡核苷酸晶片的探針、固相PCR反應的固相引物，其3′末端游離。設計不同的液相引物，使其與固相引物配對。為確保擴增的效率和準確性，所擴增的PCR區域不超過150bp，螢光標記採用Cy3-dCTP。固相PCR擴增結果的檢測採用螢光掃描或是螢光顯微鏡觀察(見附
圖1)。
在本發明中，採用了三對液相引物。上遊引物3與下遊引物3用於擴增包括S區已知突變位點在內的區域。上遊引物1與下遊引物1用於擴增前C區1762、1764位點聯合突變，上遊引物2與下遊引物2來擴增前C區其它突變位點。液相混合物中的上遊引物分別和其相應的反義鏈上的寡核苷酸檢測探針，即固相下遊引物配對。液相混合物中的下遊引物分別和其相應的正義鏈上的寡核苷酸探針，即固相上遊引物配對。從而擴增出不同長短、包含突變位點信息的帶有螢光標記的片段。
本發明中，B肝每一個突變位點在DNA的正、反義鏈上分別設計有相應的檢測探針，同時還有與檢測探針相對應，僅缺少3′末端待檢測鹼基在內的陽性對照探針。所以，每一突變位點設計有6條寡核苷酸探針，陽性對照探針2條、突變檢測探針2條、野生檢測探針2條，均分別設計在DNA的正、反義鏈上。根據陽性對照，如果某一位點的在正、反義鏈上的突變探針的陽性信號強度遠高於野生探針，證明該位點為純合突變位點M/M；反之為純合野生位點W/W。如果同一位點在正、反義鏈上的探針信號強度相近，證明該位點為雜合位點M/W。
本發明的寡核苷酸檢測晶片，包括玻璃基片和陣列式分布的寡核苷酸探針與對照的點塗層，所述點塗層是在玻璃基片上陣列式均勻分布的，含有包括B肝前核心抗原區和表面抗原區已知的12個突變位點和其相對應的野生位點的72條寡核苷酸探針。
上述玻璃基片為矽烷化玻璃載片，或是經過三甲氧基丙基-乙烯亞胺修飾、丁二酸-N-羥化丁二醯亞胺酯活化的玻璃載片。
上述寡核苷酸晶片上的所有探針通過5′末端氨基己烷連接在修飾後的玻片上。
上述寡核苷酸探針所在陣列與對照的點塗層的大小可以根據點的大小，點間距的變化而變化；陣列的排列和分布數量可以根據待分析樣品的數目而變化。
上述寡核苷酸探針排列如附圖3所示，探針點直徑為100μm，點間距為300μm時，肽核酸探針所在陣列與相應的點塗層大小為2.2mm×2.5mm。
上述的72條寡核苷酸探針包含的12個突變位點是，B肝表面抗原區已知的5個突變位點546C-T、551A-G、552T-C、585A-C、587G-A；前核心抗原區7個已知的突變位點1896G-A、1762A-T與1764G-A聯合突變、1858C-T、1862G-T、1898G-A、1899G-A、1901G-A。
上述的72條寡核苷酸探針，每一個待檢測位點包括6條探針，突變位點和野生位點的正、反義鏈探針共計4條。陽性對照探針2條，分別位於正、反義鏈，它缺少3′末端的待檢測鹼基。
上述的寡核苷酸探針的長度為14-19mer，Tm值相差不超過10℃，GC鹼基百分含量為50％-70％。
本發明寡核苷酸晶片在B型肝炎病毒突變位點檢測中的應用，方法包括(1)B肝突變位點檢測寡核苷酸探針的設計及合成；(2)玻璃基片的修飾和寡核苷酸探針的固定；(3)B肝樣品DNA的提取；(4)固相PCR擴增；(5)寡核苷酸晶片的洗滌和信號檢測分析。
上述的固相PCR是在寡核苷酸晶片上進行的；固相引物為寡核苷酸晶片上的探針，液相引物為上遊引物1、2、3與下遊引物1、2、3的混合物；PCR擴增之中採用Cy3-dCTP螢光摻入標記。
上述的固相PCR擴增中的3對液相引物，分別是用於擴增包括S區已知突變位點在內的區域的上遊引物3與下遊引物3，用於擴增前C區1762、1764位點聯合突變的上遊引物1與下遊引物1，用於擴增前C區其它突變位點的上遊引物2與下遊引物2；3對液相引物具體如下
Tm值為解鏈溫度，GC％為鳥嘌呤與胞嘧啶百分含量。
本發明所述的寡核苷酸晶片在B型肝炎病毒突變位點檢測中的應用，具體包括以下步驟1、B肝突變位點檢測寡核苷酸探針的設計及合成採用奧理勾5.0(Oligo5.0)軟體來設計探針。檢測探針採用寡脫氧核苷酸，長度為14-19mer，每一突變位點的探針包括2條突變檢測探針、2條野生檢測探針、2條陽性對照探針，分別設計在B肝DNA的正、反義鏈。4條檢測探針的3′末端最後一個鹼基分別為正、反義鏈上待檢測突變位點，2條陽性對照探針缺少3′末端待檢測鹼基。(附圖2為S區546位點探針設計示意圖)，所有探針的Tm值按GC百分比計算，在65℃-75℃間。寡核苷酸晶片中所用探針(由上海生工生物工程公司合成)信息見表1。探針的5′端連接有氨基己烷NH2-(CH2)6以與活化的玻璃基片結合。氨基己烷通過polyT15與寡核苷酸探針相連，多聚胸腺嘧啶的加入，可以減少寡核苷酸探針與玻璃基片之間的空間阻遏，利於PCR的進行。2、玻璃基片的修飾和寡核苷酸探針的固定用矽烷化試劑處理乾淨的空白玻片，得到的矽烷化玻片可以直接用於點樣。或是將玻片用1％-3％三甲氧基丙基-乙烯亞胺(95％的乙醇配製)溶液處理玻片1小時，然後用丁二酸-N-羥化丁二醯亞胺酯溶液(用9∶1V/V的DMSODMF配置)處理5個小時。
寡核苷酸探針採用pH9.0的碳酸鈉鹽緩衝液溶液作為點樣液，寡核苷酸探針在基片上的分布原則是每一位點的六條探針為一組，陣列面積可以根據探針的排列以及點、點間距的變化而變化。附圖3中，圓圈內的數字與表1中的探針編號一致，該陣列共計8行9列，探針點直徑為100μm，點間距為300μm，總面積為2.2mm×2.5mm。1-6、7-12、13-18、19-24、25-30、31-36、37-42、43-48、49-54、55-60、61-66、67-72分別代表B肝S區待檢測位點546、551、552、585、587；前C區待檢測位點1896、1762、1764、1858、1862、1898、1899、1901等12組72條寡核苷酸檢測探針。每一組的6條探針分左右兩排排列，左邊的一排從上到下分別是該位點正義鏈上的陽性對照、野生探針和突變探針；右邊的一排從上到下分別是該位點反義鏈上的陽性對照、野生探針和突變探針。點樣後的陣列經水合後直接用於固相PCR擴增。3、B肝樣品DNA的提取取B肝病人血清20-100μl，加入3倍體積的裂解液劇烈振蕩混勻。然後加入等體積的氯仿、異戊醇溶液(24∶1)，混勻後離心。收集上清液，加入2倍體積的無水乙醇於-20℃放置2個小時，離心後所得沉澱用70％的乙醇清洗沉澱2次，自然乾燥。4、固相PCR擴增固相PCR擴增中所用的固相引物為固定在陣列上的寡核苷酸探針，相引物為三對上、下遊引物的混合物。擴增採用MJ Research PTC-200固相PCR擴增儀，應體系為10μl。
PCR擴增採程序為94℃ 6分鐘 1個循環94℃ 15秒、60℃ 30秒、72℃ 45秒，50個循環5、寡核苷酸晶片的洗滌和信號檢測分析固相PCR擴增後的寡核苷酸陣列用1×SSC(0.15M NaCI、17mM檸檬酸鈉，pH7.0)，內含0.1％的SDS溶液清洗兩次。清洗後的寡核苷酸陣列經雷射掃描儀掃描或螢光顯微鏡觀察並收集信號，分析檢測結果。掃描結果顯示如果某一位點的陽性對照有螢光信號，正、反義鏈的野生探針陽性信號遠高於突變探針的信號強度，證明該位點為純合野生位點W/W。反之為純合突變位點M/M。如果同一位點在正、反義鏈的探針信號強度相近，證明該位點為雜合位點M/W。
表1 B肝前S區與C區突變位點檢測探針
其中，每一位點所標出的6條探針的排列次序按序號從低到高分別是正義鏈的陽性對照探針、野生檢測探針和突變檢測探針，反義鏈的陽性對照探針、野生檢測探針和突變檢測探針。同時，該表中還包含了探針的序列、長度、Tm值和GC百分比等內容。
本發明的優良效果如下1)本發明集固相PCR與寡核苷酸晶片於一體。與傳統的突變檢測技術，如PCR和RFLP等分子標記技術相比，它可以同時高通量地檢測很多突變位點，平行分析多個樣品。與常規的基因晶片相比，它直接在晶片上進行PCR擴增，PCR擴增結束後即可直接通過掃描檢測結果而不必要經過雜交，從而縮短了檢測時間。
2)本發明經多輪PCR擴增後，摻入標記的螢光信號的強度大大增加，使得該檢測方法的靈敏度大大提高。
3)對於寡核苷酸晶片檢測突變來說，待檢測序列自身結構對雜交效率和雜交穩定性都有影響，因而難以實現對大量突變位點的同時檢測。本發明利用TaqDNA聚合酶在3′末端存在錯配時不能正確延伸的特點來檢測突變，而不經過雜交。從而使之適用於高通量突變檢測和單核苷酸多態性分析。
4)本發明利用寡核苷酸晶片的固相PCR反應來檢測B型肝炎病毒突變位點，可獲得與突變位點相關的臨床信息，指導臨床用藥。
圖2是以S區546位點為例的正、反義探針設計示意圖。其中，探針1、2、3為正義鏈上的三條探針，4、5、6為反義鏈上的三條探針。探針1、4分別為正、反義鏈上該位點的陽性對照。2、5分別為該位點在正、反義鏈上的野生型探針，3、6為該位點在正、反義鏈上的突變型探針。
圖3為寡核苷酸探針在玻璃基片上的分布示意圖。
其中，1為玻璃基片，2為寡核苷酸探針與對照的點塗層。圓圈內的數字與表1所列出的寡核苷酸探針序號相對應。
圖4為利用雷射共聚焦掃描儀ScanArray4000掃描(雷射強度為80，PMT增益為80)經固相PCR擴增和清洗後的寡核苷酸晶片的結果圖。寡核苷酸晶片上分布有B肝1896和1901位點的12條探針。其中，1和2列是1896位點的6條探針，3和4列是1901位點的6條探針。A1、B1、C1分別是1896位點正義鏈上的陽性對照，野生位點檢測探針和突變位點檢測探針；A2、B2、C2分別是1896位點反義鏈上的陽性對照，野生位點檢測探針和突變位點檢測探針。1901位點的探針排列如1896位點，3、4列分別為正義鏈和反義鏈上的三條探針。
寡核苷酸探針與對照的點塗層2陣列共計8行9列，針點直徑為100μm，間距為300μm，總面積為2.2mm×2.5mm。1-6、7-12、13-18、19-24、25-30、31-36、37-42、43-48、49-54、55-60、61-66、67-72分別代表B肝S區待檢測位點516、551、552、585、587；前C區待檢測位點1896、1762、1764、1858、1862、1898、1899、1901等12組72條寡核苷酸檢測探針。每一組的6條探針分左右兩排排列，左邊的一排從上到下分別是該位點正義鏈上的陽性對照、野生探針和突變探針；右邊的一排從上到下分別是該位點反義鏈上的陽性對照、野生探針和突變探針。點樣後的陣列經水合後直接用於固相PCR擴增。
固相PCR在寡核苷酸晶片上進行，寡核苷酸探針同時是固相PCR擴增的固相引物，三對液相引物包括了所有待檢測突變位點在內的區域，且保證最長的擴增片段不超過150bp。在固相PCR擴增過程中採用Cy-3-dCTP螢光摻入標記。寡核苷酸晶片的固相PCR產物經雷射共聚焦掃描儀掃描後分析各突變位點。
實施例2.如實施例1所述的寡核苷酸晶片，所不同的是在玻璃基片1是經過三甲氧基丙基-乙烯亞胺修飾、丁二酸-N-羥化丁二醯亞胺酯活化的玻璃載片。
實施例3.寡核苷酸檢測晶片用於B型肝炎病毒突變位點的檢測1.B肝突變位點檢測寡核苷酸探針的設計及合成採用Oligo5.0軟體來設計探針。檢測探針採用寡脫氧核苷酸，長度為14-19mer，每一突變位點的探針包括2條突變檢測探針、2條野生檢測探針、2條陽性對照探針，分別設計在B肝DNA的正、反義鏈。4條檢測探針的3′末端最後一個鹼基分別為正、反義鏈上待檢測突變位點，2條陽性對照探針缺少3′末端待檢測鹼基。(附圖2為S區546位點探針設計示意圖)所有探針的Tm值按GC百分比計算，在65℃-75℃間。寡核苷酸晶片中所用探針(由上海生工生物工程公司合成)信息見表1。探針的5′端連有氨基己烷NH2-(CH2)6以與活化的玻璃基片結合。氨基己烷通過polyT15與寡核苷酸探針相連，加入多聚胸腺嘧啶，以減少寡核苷酸探針與玻璃基片之間的空間阻遏，利於PCR的進行。2.玻璃基片的表面化學修飾和寡核苷酸探針的固定(1)玻璃基片的表面化學修飾1)將載玻片用1MNaOH浸泡1小時，水洗後再用1MHCI浸泡1小時。純水充分清洗後用乙醇清洗1次，甩幹。
2)室溫下將上述玻片用3％的3-氨基丙基三甲氧基矽烷(95％的乙醇溶液配製)、或是3％的三甲氧基丙基-乙烯亞胺(95％的乙醇配製)處理1小時，劇烈振蕩。
3)室溫下將玻片用95％的乙醇溶液清洗3次，每次5分鐘。
4)使用平板離心機，800rpm離心8分鐘，甩幹玻片。
5)將玻片置於80℃，烘烤1小時。至此得到的3-氨基丙基三甲氧基矽烷矽化的玻璃基片可以直接用於結合寡核苷酸探針，3％的三甲氧基丙基-乙烯亞胺處理的基片繼續進行以下處理6)室溫下用20mM的丁二酸-N-羥化丁二醯亞胺酯溶液(9∶1V/V的DMSODMF配製)處理5個小時。
7)用乙醇清洗玻片兩次，每次5分鐘。
8)使用平板離心機，800rpm離心8分鐘，甩幹玻片。
(2)寡核苷酸探針的固定寡核苷酸探針採用pH9.0的碳酸鹽緩衝液作為點樣液，探針濃度為50μM。利用卡塔森5500(Cartesian Pixsys5500)點樣儀把寡核苷酸探針點到活化的玻璃基片上，陣列的排列如附圖3所示，點直徑為100μm，點間距為300μm，陣列大小為2.2mm×2.5mm。點樣後而得到的寡核苷酸晶片置於含飽和NaCI溶液的溼盒中，室溫過夜。然後將玻片浸於150mM的乙醇胺(用100mM的Tris-CI配置，pH值為9.0)溶液，55℃反應20分鐘以封閉未反應的丁二酸-N-丁二醯亞胺酯。3.寡核苷酸晶片上的固相PCR(1)B肝病毒DNA的提取1)取100μlB肝病人血清，加入3倍體積的裂解液(4M硫氰酸胍、巰基乙醇、0.1MTris-CI，pH7.5)混勻。2)加入等體積的仿、異戊醇溶液(24∶1)，充分混勻。室溫下12000rpm離心15分鐘。3)小心將上清液移入另一1.5ml離心管中，加入2倍體積的無水乙醇。-20℃放置2個小時。4)4℃，12000rpm離心15分鐘。5)離心後所得沉澱用70％的乙醇清洗2次，每次在4℃，12000rpm離心10分鐘。6)沉澱自然乾燥後溶於5.55μl純水中。(2)固相PCR擴增採用MJ Research PTC-200固相PCR擴增儀。1)PCR反應體系為10μl，其中包括10×PCR緩衝液1.0μl2mM dATP dGTP dTTP 混合物1.0μl2mM dCTP 0.65μl1mM dCTP 0.7μl3對液相液相引物混合物(5μM) 1.0μlTaq DNA聚合酶(5u/μl)0.1μlB肝DNA 5.55μl10μl其中10×PCR緩衝液的成分為500mM Tris-CI(pH8.3)、20mM MgCI2、0.75％牛血清蛋白。2)PCR擴增採程序為94℃ 6分鐘 1個循環94℃ 15秒、60℃ 30秒、72℃ 45秒， 50個循環4.寡核苷酸晶片的清洗、掃描和結果分析固相PCR擴增後的寡核苷酸陣列用1×SSC，內含0.1％的SDS溶液清洗兩次，每次5分鐘。清洗後的寡核苷酸陣列經雷射共聚焦掃描儀ScanArray4000掃描並收集信號，分析檢測結果。圖4為根據本發明所提供的具體方法，使用經3-氨基丙基三甲氧基矽烷修飾的玻片固定探針，檢測一未知的B肝病毒DNA1896和1901位點突變的結果圖。該寡核苷酸晶片包含了B肝病毒1896和1901兩個位點的12條探針，所用的液相引物為上遊引物2和下遊引物2。圖中的1和2列是1896位點的6條探針，3和4列是1901位點的6條探針。A1、B1、C1分別是1896位點正義鏈上的陽性對照，野生位點檢測探針和突變位點檢測探針；A2、B2、C2分別是1896位點反義鏈上的陽性對照，野生位點檢測探針和突變位點檢測探針。1901位點的探針排列如1896位點，3、4列分別為正義鏈和反義鏈上的三條探針。根據掃描結果和陽性對照探針的螢光強度，1896位點的B1和B2的螢光信號強度均遠高於C1和C2，因此該位點為野生純合。1901位點中C3的螢光強度高於C2，證明1901位點在正義鏈上存在突變1901G-A。B4的螢光強度要強於C4，1901位點在反義鏈上不存在突變，所以該位點為野生雜合。
權利要求
1.一種寡核苷酸晶片，包括玻璃基片和陣列式分布的寡核苷酸探針與對照的點塗層，其特徵在於所述的點塗層是在玻璃基片上均勻分布的、含有包括B肝前核心抗原區和表面抗原區已知的12個突變位點和其相對應的野生位點的72條寡核苷酸探針。
2.如權利要求1所述的寡核苷酸晶片，其特徵在於，所述的玻璃基片為矽烷化玻璃載片，或者是經過三甲氧基丙基-乙烯亞胺修飾和丁二酸-N-羥化丁二醯亞胺酯活化的玻璃載片。
3.如權利要求1或2所述的寡核苷酸晶片，其特徵在於，所述的寡核苷酸探針通過5′末端的氨基己烷連接在修飾後的玻片上。
4.如權利要求1所述的的寡核苷酸檢測晶片，其特徵在於，所述寡核苷酸探針所在陣列與對照的點塗層的大小，可以根據點的大小，點間距的變化而變化；陣列的排列和分布數量可以根據待分析樣品的數目而變化。
5.如權利要求4所述的寡核苷酸檢測晶片，其特徵在於，所述寡核苷酸探針點直徑為100μm，點間距為300μm時，寡核苷酸探針所在陣列與對照點塗層大小為2.2mm×2.5mm。
6.如權利要求1所述的寡核苷酸檢片，其特徵在於，所述的72條寡核苷酸探針包含的12個突變位點是，B肝表面抗原區已知的5個突變位點546C-T、551A-G、552T-C、585A-C、587G-A；前核心抗原區7個已知的突變位點18966-A、1762A-T與1764G-A聯合突變、1858C-T、1862G-T、1898G-A、1899G-A、1901G-A。
7.如權利要求1或6所述的寡核苷酸晶片，其特徵在於，所述的寡核苷酸探針，每一個待檢測位點包括6條探針，突變位點和野生位點的正、反義鏈探針共計4條，陽性對照探針2條，分別位於正、反義鏈，它缺少3′末端的待檢測鹼基。
8.如權利要求1或6所述的寡核苷酸晶片，其特徵在於，所述的寡核苷酸探針的長度為14-19mer，Tm值相差不超過10℃，GC百分含量為50％-70％。
9.一種權利要求1所述的寡核苷酸晶片在B型肝炎病毒突變位點檢測中的應用，包括(1)B肝突變位點檢測寡核苷酸探針的設計及合成；(2)玻璃基片的修飾和寡核苷酸探針的固定；(3)B肝樣品DNA的提取；(4)固相PCR擴增；(5)寡核苷酸晶片的洗滌和信號檢測分析。
10.如權利要求9所述的寡核苷酸晶片在B型肝炎病毒突變位點檢測中的應用，其特徵在於，所述的固相PCR是在寡核苷酸晶片上進行的；固相引物同時為寡核苷酸晶片上的探針，液相引物為上遊引物1、2、3與下遊引物1、2、3的混合物；PCR擴增之中採用Cy3-dCTP螢光摻入標記。
11.如權利要求10所述的寡核苷酸晶片在B型肝炎病毒突變位點檢測中的應用，其特徵在於，所述的固相PCR擴增中的3對液相引物，分別是用於擴增包括S區已知突變位點在內的區域的上遊引物3與下遊引物3，用於擴增前C區1762、1764位點聯合突變的上遊引物1與下遊引物1，用於擴增前C區其它突變位點的上遊引物2與下遊引物2，3對液相引物具體如下
全文摘要
寡核苷酸晶片及其在B型肝炎病毒突變位點檢測中的應用，屬於基因晶片技術領域。本發明的寡核苷酸檢測晶片，包括玻璃基片和陣列式分布的寡核苷酸探針與對照的點塗層，所述的寡核苷酸探針共72條，包含有B肝前核心抗原區和表面抗原區已知的12個突變位點和其相對應的野生位點。以玻璃基片上的寡核苷酸探針作為固相引物，B肝病毒DNA作為模板，三對液相引物混合後，通過螢光標記的Cy3－dCTP進行固相PCR擴增。根據寡核苷酸晶片上不同位點螢光信號的強弱來分析突變位點。本發明集寡核苷酸晶片和固相PCR於一體，具有快速、高效、準確、平行診斷的特點。
文檔編號C12Q1/68GK1431317SQ0213562
公開日2003年7月23日 申請日期2002年10月14日 優先權日2002年10月14日
發明者魯豔芹, 韓金祥 申請人:山東省醫藥生物技術研究中心