銀耳雜多糖或其提取物的新用途的製作方法
2023-06-20 19:23:16 1
專利名稱：銀耳雜多糖或其提取物的新用途的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種雜多糖的用途，尤其涉及一種銀耳雜多糖或其提取物在保護或修復胃黏膜中的用途。
背景技術：
銀耳(Tremella faciformis Berk)，又稱白木耳、桑鵝、《清異錄》。屬銀耳目(Tremellales)，銀耳科(Tremellacease)，銀耳屬(Tremella)。具有滋陰潤肺、益氣和血之功效。銀耳雜多糖是從銀耳子實體(或其微生物發酵液)中提取分離的一種酸性雜多糖。中國自古以來將銀耳稱之為高級補品和藥品，藥食兩用之佳品是宮廷上等進補食品。
隨著科學的不斷發展以及技術手段的不斷提升，人們對銀耳有了重新的認識，國內外對銀耳的主要成分——銀耳雜多糖進行了大量的研究，表明銀耳雜多糖具有提高免疫力、抗腫瘤、抗衰老、降血糖、血脂、促進蛋白質核酸合成、抗血栓等藥理作用。日本已經把它廣泛地運用於保健品、化妝品、藥品中。銀耳的開發應用，引起了科學界的極大興趣，受到國際醫藥界和化妝品領域的廣泛重視，成為當今研究開發的熱門話題。
但是至今為止，銀耳雜多糖的組成和結構以及對應的功能卻很少有報導。本申請人運用特殊分離純化工藝將銀耳中活性多糖加以提煉，經現代分析技術檢測鑑定，該銀耳雜多糖的結構以α-(1-3)甘露糖為主鏈，主要由重量百分比為70-93％的中性總糖、6-28％的葡萄糖醛酸、0.1-3％的結合蛋白組成；該銀耳雜多糖的平均分子量為85-160萬道爾頓，其中分子量大於6000道爾頓的佔90％(重量)以上，具體參見本申請人於2005年1月18日申請的申請號為200510023427.4的專利申請，並將其商品名命名為WSK；該專利申請還公開了銀耳雜多糖及其提取物具有保溼滑潤皮膚和黏膜、增強潤滑感、抗氧化衰老、抗過敏、增稠穩定等功能。到目前為止，還沒有銀耳雜多糖具有保護受損胃黏膜的相關報導。
發明內容
本發明的目的是為了提供一種申請號為200510023427.4的專利申請中的商品名為WSK的銀耳雜多糖或銀耳雜多糖提取物的新用途，該新用途是銀耳雜多糖或銀耳雜多糖提取物在製備保護或修復胃黏膜的藥品、飲食品或保健品中的用途。
本發明所述的銀耳雜多糖的結構以α-(1-3)甘露糖為主鏈，主要由重量百分比為70-93％的中性總糖、6-28％的葡萄糖醛酸、0.1-3％的結合蛋白組成；該銀耳雜多糖的平均分子量為85-160萬道爾頓，其中分子量大於6000道爾頓的佔90％(重量)以上。其中，所述的中性總糖主要包括下列含量的糖基35-60％甘露糖、10-25％巖藻糖、8-18％木糖和5-15％葡萄糖，上述含量是以銀耳雜多糖重量計。
該銀耳雜多糖的側鏈有多種不同的變化組合，其中的一種組合已通過X光衍射方法測定為如下結構式I所示的結構單元
該結構單元的分子量為2578.5或2724.7。該糖結構是以α-(1-3)甘露糖(Manp)為主鏈骨架，其2位碳原子上連有2個β-(1-2)木糖(Xylp)，3個β-葡萄糖醛酸(GlcAp)，1或2個巖藻糖(Fuc)，1個甘露糖為側鏈。
本發明所述的銀耳雜多糖提取物主要包括重量百分比為80-98％的上述銀耳雜多糖，0.1-3.3％的游離蛋白及0.5-8％的灰分；該銀耳雜多糖提取物的平均分子量為75-140萬道爾頓，其中分子量大於6000道爾頓的佔75-98％(重量)。
本發明所述的銀耳雜多糖提取物的製備方法包括如下步驟1)將銀耳子實體原料用水在80-100℃下攪拌提取得粗提液；2)將步驟1)所得的粗提液進行過濾，濾液最終通過孔徑為0.1-1μm的過濾器；3)在步驟2)所得的濾液中加入乙醇，使乙醇的最終體積濃度為50-85％，收集沉澱；4)將步驟3)所得的沉澱乾燥。
其中，該銀耳子實體原料為乾燥的銀耳子實體原料，將該乾燥的銀耳子實體原料用水浸泡、膨脹並清洗乾淨(包括去黃褐色基部)，每次用20-100倍、多次提取時不超過200倍(重量)於該乾燥的銀耳子實體原料量的水在80-100℃下攪拌提取得粗提液。
該銀耳子實體原料也可以為新鮮銀耳子實體原料、保鮮冷藏的新鮮銀耳子實體原料或冷凍的新鮮銀耳子實體原料，將該銀耳子實體原料去黃褐色基部並清洗乾淨，每次用2-15倍、多次提取時不超過30倍(重量)於該銀耳子實體原料量的水在80-100℃下攪拌提取得粗提液。
本發明所述的銀耳雜多糖提取物的另一種製備方法包括如下步驟1)將按照常規微生物發酵方法(參考文獻①銀耳深層發酵條件的研究，吳大康等；食品科學；2002，Vol.23，No.1；64；②銀耳菌分離方法的研究，張炳熾；中國食用菌；Vol.13，No.3；22)獲得的銀耳發酵液加熱至80-100℃、保溫0.5-2小時，過濾，清液最終通過孔徑為0.1-1μm的過濾器得濾液；2)在步驟1)所得的濾液中加入乙醇，使乙醇最終體積濃度為50-85％，收集沉澱；3)將步驟2)所得的沉澱進行乾燥。
本發明所述的銀耳雜多糖的製備方法包括將採用上述製備方法製得的提取物進一步純化的步驟。
其中，該純化採用Sevag法及透析法來實現。當然，如本領域技術人員所知，其它的多糖純化方法，如色譜分離法等也能製得本發明銀耳雜多糖。
所述的藥品可以是現有技術中的各種劑型，如粉劑、片劑、膠囊劑(包括軟膠囊和硬膠囊)、液體劑、懸浮液、乳劑、口服液、果凍或衝劑。
所述的飲食品包括飲品和食品，為含有銀耳雜多糖或銀耳雜多糖提取物的濃縮液和/或乾燥物的飲品或食品，對飲食品的應用沒有限制，可以是現有技術中的各種劑型，如可以使用在粉劑、片劑、膠囊劑(包括軟膠囊和硬膠囊)、顆粒、衝劑、果凍、飲料、乳製品或小點心烘烤品等。
所述的保健品可以是現有技術中的各種劑型，如粉劑、片劑、膠囊劑(包括軟膠囊和硬膠囊)、液體劑、懸浮液、乳劑、口服液、果凍或衝劑等。
根據本發明，所述的藥品中還可以含有其他保護或修復胃黏膜的藥物，該銀耳雜多糖可以起到輔助保護或修復胃黏膜的作用。該其他保護或修復胃黏膜的藥物可以是如萘丁美酮，其可以抑制胃黏膜中性粒細胞活化。
所述的飲食品或保健品中還可以含有其他各種可食用的營養成分，以起到更佳的營養保健的作用。
所述的銀耳雜多糖可以是粗提過的含有雜質的銀耳雜多糖粗品，也可以是銀耳雜多糖純品。
所述的保護胃黏膜是指防止胃黏膜受損或者是減輕胃黏膜受損的程度。所述的修復胃黏膜是指修復受損的胃黏膜，以使受損的胃黏膜恢復到正常的健康狀態。在修復胃黏膜的過程中，胃黏膜上皮細胞再生，防禦功能得到增強，抵禦致病因子的能力得到提高，胃黏膜的屏障能力得到增強。
具體實施例方式
現根據本申請人的申請號為200510023427.4的專利申請中的製備方法製備所需的銀耳雜多糖提取物及銀耳雜多糖(WSK)，將其詳細描述如下實施例1將乾燥的銀耳子實體用水浸泡，膨脹後，去其黃褐色基部並清洗乾淨；把洗淨後的原料放入提取罐中，加100倍於乾料的水，100℃水溫下攪拌提取4h，然後過濾，清液最終通過孔徑為0.1-1μm的過濾器；均勻攪拌下，將濾清液和乙醇充分混合，使混合液體中的乙醇最終濃度為85％，收集沉澱，用純乙醇脫水，收集沉澱；-40℃冷凍乾燥，粉碎得銀耳雜多糖提取物。產品收率20％(以幹銀耳重量計)。
實施例2將保鮮冷藏的銀耳，去其黃褐色基部並清洗乾淨；把洗淨後的原料放入提取罐中，加15倍於鮮料的水，100℃水溫下攪拌提取4h，然後過濾，清液最終通過孔徑為0.1-1μm的過濾器；濾清液加熱濃縮，得濃縮液；均勻攪拌下，將濾清液和乙醇充分混合，使混合液體中的乙醇最終濃度為85％，收集沉澱，用純乙醇脫水脫色，收集沉澱；80℃熱風乾燥，粉碎得銀耳雜多糖提取物。產品收率2.1％(以鮮銀耳重量計)。
實施例3將微生物發酵獲得的銀耳發酵液，加溫100℃，0.5h，常規過濾，棄濾渣，清液最終通過孔徑為0.1-1μm的過濾器；均勻攪拌下，將濾清液和乙醇充分混合，使混合液體中的乙醇最終濃度為85％，收集沉澱，用100％乙醇脫水脫色，收集沉澱；-40℃冷凍乾燥，粉碎得銀耳雜多糖提取物。產品收率0.55％(以發酵液重量計)。
實施例4
將實施例1～3的銀耳雜多糖提取物用600倍(重量)去離子水溶解，溶解後，加入200mL的氯仿∶正丁醇＝4∶1(體積比)的混合溶液，充分混合後，用離心機離心(4000r/min，30分鐘)，收集上清液。將離心後的上清液與上述氯仿正丁醇混合溶液按3∶1(體積比)混合，並用離心機離心(4000r/min，30分鐘)，收集上清液。重複以上操作，反覆處理至水相在280nm處的OD值(使用752紫外光柵分光光度計，上海精密科學儀器廠)不再下降為止。水相減壓濃縮至三分之一，濃縮液與水相3倍量(體積比)的95％乙醇充分混合，4000r/min離心30分鐘，得沉澱物。沉澱物用100倍(重量)去離子水溶解後，離心，去不溶物，將清液裝入30cm長的透析袋內(透析袋可以通過5000分子量以下物質)進行透析(兩頭紮好吊裝入有去離子水的瓶內，並使用去離子水流水衝洗12小時)，收集5000分子量以上物質。經透析後的清液與3倍量(體積)純乙醇充分混合，再次4000r/min離心30分鐘，得沉澱物，沉澱物用無水乙醇脫水後，60℃真空乾燥，獲得純銀耳雜多糖(WSK)。
效果實施例1銀耳雜多糖(WSK)保護胃黏膜損傷樣品實施例4得到的銀耳雜多糖(WSK)，按體重60公斤的成人計，推薦日服量為0.8％(w/w)銀耳雜多糖溶液，200mL/人，每天2次。大鼠按照0.8％(w/w)銀耳雜多糖10倍於人的劑量，即6.6mL/200克，每天兩次。
動物清潔級雄性大鼠9周齡，體重200±10克，由復旦大學實驗動物科學部提供，合格證書SCXR(滬)2000-0002。
動物實驗室清潔級屏障單元，合格證書02-1-2，室溫23℃±0.5℃，溼度70％±5％。
儀器和試劑解剖器械，遊標卡尺，酒精。
動物受試物給藥途徑每次劑量為6.6mL/大鼠，分兩次灌胃。
實驗方法銀耳雜多糖對胃黏膜急性酒精損傷的大鼠胃黏膜保護的影響實驗組的10隻大鼠連續10天給予0.8％(w/w)銀耳雜多糖溶液(每日灌胃2次)，用灌胃器通過口腔往胃裡灌；另外對照組的10隻大鼠正常飼養10天(每日灌胃2次等量蒸餾水)，解剖前大鼠禁食(不禁水)24小時。當天實驗組灌胃0.8％(w/w)銀耳雜多糖5倍劑量(3.3mL)，對照組當天灌胃等量蒸餾水；1小時後，再灌胃無水乙醇(劑量為1.0mL/鼠)；再過1小時後，處死動物；取胃於10％甲醛中固定浸泡；20分鐘後，沿胃大彎剪開，去除胃內容物，將胃黏膜展開，用遊標卡尺出測量出充血或瀰漫性出血帶的面積(精確到0.01mm)。以充血帶和瀰漫性出血帶的總面積作為損傷程度的評價指標。
數據處理所有數據均以x±S表示，組間採用t檢驗分析顯著性。實驗結果見表1。
表1大鼠胃黏膜充血帶和瀰漫性出血帶的總面積表
給藥10天後，實驗組大鼠胃黏膜充血帶和瀰漫性出血帶的總面積小於對照組，實驗組大鼠的充血帶和瀰漫性出血帶的總面積為3.23±1.49mm2，相對於對照組大鼠(5.41±1.53mm2)具有顯著性差異，P＜0.05(t檢驗)。
結論銀耳雜多糖提取物及銀耳雜多糖(WSK)對胃黏膜受損具有預防和保護功能，如對胃黏膜急性受損具有保護功能，尤其是對胃黏膜急性酒精損傷有較好的輔助保護功能。
權利要求
1.一種銀耳雜多糖或銀耳雜多糖提取物在製備保護或修復胃黏膜的藥品、飲食品或保健品中的用途。
2.根據權利要求1所述的用途，其特徵在於所述的藥品為粉劑、片劑、膠囊劑(包括軟膠囊和硬膠囊)、液體劑、懸浮液、乳劑、口服液、果凍或衝劑；所述的飲食品為含有銀耳雜多糖或銀耳雜多糖提取物的濃縮液和/或乾燥物的飲品或食品，對飲食品的應用沒有限制，可以使用在粉劑、片劑、膠囊劑(包括軟膠囊和硬膠囊)、顆粒、衝劑、果凍、飲料、乳製品或小點心烘烤品等；所述的保健品為粉劑、片劑、膠囊劑(包括軟膠囊和硬膠囊)、液體劑、懸浮液、乳劑、口服液、果凍或衝劑。
全文摘要
本發明公開了一種銀耳雜多糖或銀耳雜多糖提取物在製備保護或修復胃黏膜的藥品、飲食品或保健品中的用途。
文檔編號A61P1/04GK1931181SQ20051002974
公開日2007年3月21日 申請日期2005年9月16日 優先權日2005年9月16日
發明者劉桂雲, 駱峰, 駱濱 申請人:上海市新文達生物科技有限公司