大花紅景天有效成份製劑及製備方法
2023-06-13 02:18:11
專利名稱：大花紅景天有效成份製劑及製備方法
技術領域：
本發明涉及中藥有效成份的製劑及製備方法，具體涉及大花紅景天有效成份製劑及製備方法。
有學者對大花紅景天的成份作過系統研究，目前發現有近10多個化合物存在，其中有小分子甙類如紅景天甙(Salidroside)、大花紅天素(Crenulatin)，也有黃酮類如草質素甙(rhodinin和rhodiosin)、大花紅景天甙(Crenuloside)、大花紅景天素(黃酮醇與苯丙素相結合)，以及其它如沒食子酸(gallic acid)、焦倍酸鹽、酪醇(tyrosol)等，還有不少大分子化合物如多糖類，其結構主要由阿拉伯糖和葡萄糖所組成。
由於眾多成份的存在，使得大花紅景天具有較為廣泛的生理活性，它有抗疲勞、抗輻射、抗缺氧、抗衰老、抗寒冷與高溫、降血糖與血脂、調節免疫與血壓等作用，這就明確顯示它在運動醫學、航天醫學以及老年醫學領域有著廣泛的應用前景。
對於大花紅景天的開發，目前主要以生藥粉或粗提物的膠囊劑、衝劑、口服液為主，這些製劑質量不夠穩定，口感不佳，調味後澀味難以被隱蔽或消除，且未將各有效成份分離、定量，使其功效不明確，僅作為保健品應用，使用程度受到限制。
本發明公開的大花紅景天有效成份製劑是由1.含小分子化合物提取物30～70％和70～30％藥用輔料組成的醫學上可接受的各類製劑。其中小分子化合物提取物含總黃酮25～40％，含紅景天甙4～8％。
2.含大分子化合物提取物30～70％和70～30％藥用輔料組成的醫學上可接受的各類製劑。其中大分子化合物提取物中含多糖50～90％。
本發明所述的藥用輔料為製藥業中常用的藥用輔料如固體製劑所用的輔料為澱粉、糊精、微晶纖維素、磷酸氫鈣、硫酸鈣、羧甲基纖維素、蔗糖、羥丙纖維素、硬脂酸鎂、白碳黑、滑石粉、吡咯酮、乳糖、蔗糖，HPMC等。液體製劑所用的輔料為水、蔗糖、阿斯巴糖、檸檬酸、氯化鈉、維生素C、丙二醇、丙三醇等。
本發明的另一目的是提供上述大花紅景天有效成份製劑的製備方法。
本發明的大花紅景天有效成份製劑是通過下述方法製得的1.總浸膏的製備大花紅景天根經切片，用水—醇混合劑水∶乙醇＝99∶1～1∶99回流提取1-3次，總溶媒量為原藥材的10至30倍，總提取時間2至6小時。得到的藥液可經濃縮、真空乾燥得到總提取物浸膏。
浸膏提取率為20～40％，其中含總黃酮10～20％，紅景天甙1～3％，多糖10～50％。
2.有效成份的分離、純化(1)小分子化合物的分離。
取上述總浸膏1份，加水5～10份溶解，藥液流經裝填有不帶離子交換基團的分離介質的層析柱，用水10～40份洗脫乾淨，洗脫液待處理；然後用30～90％乙醇洗脫層析柱，濃縮乙醇洗脫液，得小分子化合物提取物，其中含總黃酮25～40％，紅景天甙4～8％。
(2)大分子化合物的分離取上述小分子化合物分離中的水洗脫液20份，濃縮至1份，攪拌狀態下加入95～100％乙醇1～3份，靜止過夜，過濾，濾餅用1份水溶解，加入2％量的活性炭回流15分鐘，趁熱過濾，濾液低溫乾燥或噴霧乾燥，得淡棕色粉末即為大分子化合物，多糖含量50～90％。
3.有效成份製劑的製備(1)取上述小分子化合物提取物30～70％，加入藥用輔料70～30％，按常規製劑方法製得片劑、膠囊、顆粒劑、口服液或注射劑等。
(2)取上述大分子化合物提取物30～70％，加入藥用輔料70～30％，按常規製劑方法製得片劑、膠囊、顆粒劑、口服液或注射劑等。
本發明所述的不帶離子交換基團的分離介質是指大孔樹脂、矽膠、聚醯氨、氧化鋁、纖維素、硅藻土、活性碳等。
本發明所述的小分子化合物是指大花紅景天粗提物中分子量小於2000的各類甙及甙元，主要為酪醇、紅景天甙、黃酮甙、沒食子酸、原兒茶酸、(一)表沒食子兒茶酸3-0-倍酸鹽及其衍生物等。
根據現代研究發現，阿耳茨海默病(早老年痴呆)患者腦組織中脯氨醯內肽酶(PEP)活性增加，而該酶參與阿耳茨海默病特有的澱粉樣蛋白生成，因此期待PEP抑制劑能夠成為該病的治療藥。大花紅景天中含有的沒食子酸、陪酸鹽、原兒茶酸等，對PEP具有顯著抑制作用，其中倍酸類活性可與已報導的呈最強活性的天然非肽性抑制劑星形孢菌素相匹敵。紅景天中PEP抑制活性成分與該品的提高學習記憶力作用有密切關係。
大花紅景天中黃酮類化合物具有提高大白鼠紅細胞，肝臟SOD的活性，並有增加心肌超氧化岐化酶(SOD)活性的趨勢，降低大白鼠血漿、心肌、腦組織中過氧化脂質(LPO)含量。近年研究認為，LPO通過直接損傷血管內皮和使前列腺素代謝失平衡等參與動脈硬化的發生、發展過程，提高SOD活性，降低LPO水平對治療冠心病有一定作用。
紅景天中酪醇、紅景天甙等具有抗缺氧作用，能明顯延長小鼠低壓缺氧環境條件下存活時間。具有抗疲勞作用，它能顯著延長小鼠負重遊泳時間並使抓棒摔落時間顯著延長，另外還能增加血液中含氧量，消除血中、肌肉中乳酸堆積，達到消除疲勞的目的。
本發明所述的大分子化合物是指大花紅景天總提物中分子量在3000至30000之間的多糖與丹寧，多糖主要是由阿拉伯糖和葡萄糖所組成。
紅景天多糖對正常和免疫低下小鼠的淋巴細胞轉化反應及自然殺傷(NK)活性均顯示較好的促進和恢復作用，提示它為-種新的生物反應調節劑，在免疫功能低下疾病(如腫瘤)的治療中有重要意義。
紅景天多糖顯著降低小鼠正常血糖及腎上腺素、葡萄糖等所致的各種實驗性高血糖，作用有劑量依賴性，同時它對血脂也有降低作用。
紅景天多糖具有抗輻射作用，能顯著提高受照小鼠的存活率，對生物體的造血系統也有明顯保護作用，其有效程度可與陽性藥物鹽酸胱胺相比，這在中藥及天然藥物中是極少見的。
用本發明大花紅景天有效成分製劑按GB15193-94有關規定進行安全性毒理學評價試驗，結果顯示1.急性毒性試驗樣品對雌雄小白鼠的急性經口LD50均大於21500mg/kg，以急性毒性半數致死量毒性分級，屬無毒級物質。
2.微核試驗結果陰性。
3.精子畸形試驗結果陰性。
4.Ames試驗結果陰性。
5. 30天餵養試驗實驗動物生長情況良好，血液學檢查，生化學檢查，主要髒體比及組織學檢查結果與對照組相比，均無明顯差異。
用本發明大花紅景天有效成分製劑進行功能試驗，結果顯示具有抗疲勞作用和抗輻射作用。
1.抗疲勞作用1.1.樣品樣品以蒸餾水調製成各濃度供試。
1.2.劑量設計本品人體推薦劑量為每日2.2g/60kg。本實驗設低、中、高三個劑量組，分別為0.19、0.37、1.1g/kg，另設空白對照組(給予蒸餾水)。
1.3.實驗動物昆明種小白鼠，雄性，20-22克，由上海醫科大學動物房提供的清潔級動物，合格證號02--22-1。
1.4.給樣途徑灌胃。
1.5.實驗方法與結果1.5.1負重遊泳試驗取昆明種小白鼠40隻，隨機分為四組，每組10隻。按劑量設計連續餵養28天，於末次灌胃後30分鐘，將小鼠放入水中遊泳，水深30cm，水溫25±0.5℃，鼠尾根部負荷5％體重的鉛皮，記錄小鼠自遊泳開始至死亡的時間。
表1樣品對小鼠負重遊泳時間的影響(X±SD)組別 動物數(只)負重遊泳時間(秒)空白對照10 370±1172低劑量 10 408±255中劑量 10 448±225高劑量 10 666±183**P＜0.05與空白對照組相比(經方差分析)由上表可見，樣品高劑量組與空白對照組相比，有顯著性差異。
1.5.2肝糖元測定取昆明種小白鼠40隻，隨機分為四組，每組10隻。按劑量設計連續餵養28天，於末次灌胃後30分鐘，將小鼠放入30℃水中遊泳90分鐘，取出，立刻取鼠肝臟，測肝糖元。
表2樣品對小鼠運動後肝糖元的影響(X±SD)組別動物數(只) 肝糖元(mg/100g)空白對照 10 433±53低劑量10 479±88中劑量10 618±147高劑量10 746±124**P＜0.05與空白對照組相比(經方差分析)由上表可見，樣品高劑量組與空白對照組相比，有顯著性差異。
1.5.3血乳酸測定取昆明種小白鼠40隻，隨機分為四組，每組10隻。按劑量設計連續餵養28天後測血乳酸並在末次給樣後30分鐘，負重2％(體重)在溫度25-30*(2水中遊泳60分鐘，取出，測血乳酸，熱風烘乾，安靜30分鐘後，再測血乳酸。
表3樣品對小鼠運動後血乳酸的影響(X±SD)組別 動物數 血乳酸(mmol/l)(只)實驗前 實驗後0分鐘 實驗後30分鐘空白對照104.5±0.2 10.5±3.7 7.6±1.4低劑量 104.4±0.3 10.7±2.0 7.9±1.2中劑量 104.4±0.1 10.5±0.8 7.0±1.0高劑量 104.3±0.3 11.0±1.0 5.2±0.7**P＜0.05與空白對照組相比(經方差分析)由上表可見，樣品高劑量組實驗後30分鐘動物血乳酸含量與空白對照組相比，有顯著性差異。
1.5.4尿素氮測定取昆明種小白鼠40隻，隨機分為四組，每組10隻。按劑量設計連續餵養28天，於末次灌胃後30分鐘，將小鼠放入30℃水中遊泳90分鐘，取出，熱風烘乾，使安靜，取鼠血，離心，取血清測尿素氮。
表4樣品對小鼠運動後血清尿素氮的影響(X±SD)組別 動物數(只) 尿素氮(mmol/l)空白對照 10 7.8±0.6低劑量 10 7.7±1.1中劑量 10 7.1±1.7高劑量 10 5.8±1.8**P＜0.05與空白對照組相比(經方差分析)由上表可見，樣品高劑量組與空白對照組相比，有顯著性差異。
2.抗輻射作用2.1.樣品樣品以蒸餾水調製成各濃度，供試。
2.2.動物來源昆明種小白鼠，體重18-22克，雄性，由上海醫科大學實驗動物部提供的清潔級動物，合格證號02-22-1。
2.3.劑量設計本樣品人體推薦劑量為每日2.2g/60kg，本次實驗設立低、中、高三個劑量組，分別為0.19、0.37、1.1g/kg，正常對照組和輻射對照組均飲用蒸餾水。
2.4.給樣途徑灌胃2.5.實驗方法與結果動物連續給樣四周後，受試物組與輻射對照組均以60Co照射一次，劑量為8GY，照射時間為8分鐘，照射距離為2米，照射後第二天一半動物取血做白細胞計數，另一半動物觀察平均存活時間或30天存活率，正常對照組取血做白細胞計數並觀察30天存活率。
表5小鼠平均存活時間(X±SD)組別 動物數 平均存活時間 存活率(只)(天) (％)正常對照10 30.0±0*100輻射對照10 10.8±0.60低劑量 10 10.6±0.80中劑量 10 13.9±5.30高劑量 10 14.8±5.9*10*P＜O.05與輻射對照組相比(經方差分析)經統計學檢驗，樣品高劑量組與輻射對照組相比，有顯著性差異。
表6小鼠白細胞計數(X±SD)組別 動物數白細胞計數(只) (109/L)正常對照10 9.72±0.52*輻射對照10 2.25±1.79低劑量 10 2.33±1.82中劑量 10 2.03±0.95高劑量 10 3.61±1.14**P＜0.05與輻射對照組相比(經方差分析)經統計學檢驗，樣品高劑量組的白細胞計數與輻射對照組相比，有顯著性差異。
試驗結果表明樣品能延長動物負重遊泳時間，降低動物運動後血乳酸和尿素氮水平，促進糖元素儲備；能延長較高劑量一次性照射後動物的平均存活時間和存活率，升高白細胞總數。說明本樣品具有抗疲勞和抗輻射作用。
本發明公開的大花紅景天有效成份製劑，有效成份含量確切，療效顯著，可根據不同的治療目的選擇使用。本發明公開的大花紅景天有效成份製劑的製備方法簡便，適用於工業化生產。
具體實施例方式實施例1 大花紅景天有效成份總浸膏的製備取大花紅景天10Kg切片，用70％醇80Kg回流提取3小時，傾出藥液，藥渣內再加70％乙醇70Kg，回流2.5小時，合併藥液，濃縮，真空乾燥得到總提取物浸膏3Kg，其中含總黃酮17％，紅景天甙2.5％，多糖48％。實施例2 大花紅景天有效成份小分子化合物提取物的製備取實施例1總提取物浸膏1份，加水10份溶解，藥液流經裝填有大孔樹脂層析柱，用水30份洗脫乾淨，洗脫液待處理；然後用90％乙醇洗脫層析柱，濃縮乙醇洗脫液，即得小分子化合物提取物，其中含總黃酮37％，紅景天甙7％；實施例3 大花紅景天有效成份大分子化合物提取物的製備取實施例2中的待處理洗脫液20份，濃縮至1份，攪拌狀態下加入98％乙醇3份，靜止過夜，過濾，濾餅用1份水溶解，加入2％量的活性炭回流15分鐘，趁熱過濾，濾液低溫乾燥或噴霧乾燥，得淡棕色粉末即為大分子化合物提取物，多糖含量75％；
權利要求
1.一種大花紅景天有效成份的製劑，其特徵在於該有效成份製劑是由含大花紅景天大分子化合物提取物30～70％和70～30％藥用輔料組成的醫學上可接受的各類製劑。
2.一種如權利要求1所述的大花紅景天有效成份的製劑，其特徵在於其中所述的紅景天大分子化合物提取物中含多糖50～90％。
3.一種如權利要求1所述的大花紅景天有效成份製劑的製備方法，其特徵在於該製劑由下述步驟製得(1)總浸膏的製備大花紅景天根經切片，用水—醇混合劑水∶乙醇＝99∶1～1∶99回流提取1-3次，總溶媒量為原藥材的10至30倍，總提取時間2至6小時。得到的藥液可經濃縮、真空乾燥得到總提取物浸膏；其中含總黃酮10～20％，紅景天甙1～3％，多糖10～50％；(2)有效成份的分離、純化取上述總浸膏1份，加水5～10份溶解，藥液流經裝填有不帶離子交換基團的分離介質的層析柱，用水10～40份洗脫；取洗脫液20份，濃縮至1份，攪拌狀態下加入95～100％乙醇1～3份，靜止過夜，過濾，濾餅用1份水溶解，加入2％量的活性炭回流15分鐘，趁熱過濾，濾液低溫乾燥或噴霧乾燥，得淡棕色粉末即為大分子化合物，多糖含量50～90％；(3)有效成份製劑的製備取上述大分子化合物提取物30～70％，加入藥用輔料70～30％，按常規製劑方法製得片劑、膠囊、顆粒劑、口服液或注射劑等。
全文摘要
本發明涉及大花紅景天有效成份的提取分離及製劑。本發明公開的大花紅景天有效成份製劑由含小分子化合物的活性成分總黃酮、紅景天甙或大分子化合物的活性成分多糖30～70％和70～30％藥用輔料組成的醫學上可接受的各類製劑。本發明公開的大花紅景天有效成份製劑，有效成份含量確切，療效顯著，可根據不同的治療目的選擇使用。本發明公開的大花紅景天有效成份製劑的製備方法簡便，適用於工業化生產。
文檔編號A61P3/10GK1446580SQ0312841
公開日2003年10月8日 申請日期2003年4月23日 優先權日2003年4月23日
發明者張國明, 胡馨 申請人:上海市中藥研究所