用於分離和檢測陰溝腸桿菌的顯色培養基的製作方法

2023-06-13 21:32:56 1

用於分離和檢測陰溝腸桿菌的顯色培養基的製作方法
【專利摘要】本發明涉及用於分離和檢測陰溝腸桿菌的顯色培養基。具體而言，本發明涉及利用β-木糖苷酶和相應的底物特異性分離和檢測陰溝腸桿菌的培養基和方法，其中β-木糖苷酶顯色底物在細菌酶作用下分解，游離出發色基團，使菌落呈現出發色基團的色澤，從而使陰溝腸桿菌與其他腸桿菌科細菌相區分。本發明的培養基用於陰溝腸桿菌的分離和檢測，具有特異性強、靈敏度高、易於操作、結果判斷簡單等優點，適合醫學臨床微生物檢驗、食品安全微生物檢測、環境保護等領域。
【專利說明】用於分離和檢測陰溝腸桿菌的顯色培養基
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種分離和檢測腸桿菌的顯色培養基，尤其涉及一種用於分離和檢測陰溝腸桿菌的顯色培養基。
【背景技術】
[0002]陰溝腸桿菌(Enterobacter cloacae)屬於腸桿菌科腸桿菌屬，廣泛存在於自然界中，是在人和動物的糞便、水、泥土、植物中均可檢出的常見菌種之一。作為條件性致病菌，陰溝腸桿菌可引起多種細菌感染性疾病，如皮膚軟組織感染、泌尿道感染、呼吸道感染以及敗血症等。隨著頭孢菌素的廣泛使用，由於陰溝腸桿菌能產生超廣譜β_內醯胺酶(extended-spectrum β -lactamases, ESBLs)和Amp C酶，使極易產生耐藥的陰溝腸桿菌對人類的危害越來越大。此外，《科技日報》(2012-12-21—版)還報導了我國學者認為陰溝腸桿菌可能是導致人類肥胖的「致胖細菌」。因此，如何快速、準確、特異地從臨床標本以及含有大量其他細菌的食品等樣品、環境樣品中分離且鑑別出陰溝腸桿菌對於醫學治療、保障人類健康具有重要現實意義。
[0003]目前對陰溝腸桿菌的檢測以選擇性培養基為主，如EMB、麥康凱瓊脂、葡萄糖膽鹽瓊脂等，其原理是利用腸桿菌科細菌對糖類物質的產酸特性相區別，但是由於陰溝腸桿菌的生物學特性與其他腸桿菌科細菌如阪崎腸桿菌等非常相似，因此無法在現有傳統培養基上直接將其與其他腸桿菌科細菌相區分。由於沒有針對陰溝腸桿菌的專用培養基，現階段需要使用2-3種選擇性培養基，使得分離過程繁瑣。同時，過多的疑似菌增加了後期工作量和鑑定成本。雖然近年來基於分子生物學和免疫學的快速檢測方法已經出現，但一方面這些方法不能直接用於目 標菌檢測，另一方面，操作這些方法需要專用設備和專業技術人員，使這些方法的應用受到限制。相比較而言，利用酶活性檢測和鑑別細菌是一種有效方法，該技術可以定量性或半定量和初步鑑定目標菌，無需特別專業技能和儀器，大幅度提高了工作效率。
[0004]利用細菌酶特異性分離和檢測腸桿菌科細菌的顯色培養基已開發出多種，如利用β -半乳糖苷酶和β -葡萄糖醛酸苷酶分離和檢測大腸菌群、大腸桿菌及致病性大腸桿菌0157的顯色培養基；利用辛酯酸酶分離和檢測沙門氏菌的顯色培養基；利用α-葡萄糖苷酶分離和檢測阪崎腸桿菌的顯色培養基等。通過添加專用酶底物和優化營養組分使目標菌在平板上呈現特徵性菌落，從而使其得到辨別。也有利用非目標菌具有的幾種特異性酶，通過添加幾種底物使非目標菌的菌落出現不同顏色而目標菌無色而使其得以辨別，如分離和檢測志賀氏菌的顯色培養基。然而，上述培養基都不能將陰溝腸桿菌與其他腸桿菌科細菌相區分。
[0005]綜上所述，目前分離和檢測陰溝腸桿菌的培養基的技術瓶頸在於:一方面，一種選擇性培養基很難準確地分離陰溝腸桿菌，易造成漏檢；另一方面，陰溝腸桿菌很難與其他腸桿菌屬細菌區分，造成假陽性結果。本領域仍然需要特異性分離和檢測陰溝腸桿菌的顯色培養基以及使用所述顯色培養基分離和檢測陰溝腸桿菌的方法。
【發明內容】

[0006]本發明的目的在於提供一種特異性分離和檢測陰溝腸桿菌的顯色培養基以及使用所述顯色培養基分離和檢測陰溝腸桿菌的方法。
[0007]本發明的第一方面涉及一種培養基，其中每1000mL該培養基包括:氮源8_16g、碳源l_3g、氯化鈉4-7g、瓊脂12-20g、β -木糖苷酶顯色底物0.05-0.5g、膽鹽2_9g、抗生素Ι-lOmg，餘量為水，其中所述氮源選自胰蛋白腖和植物蛋白腖的一種或二者，所述碳源選自葡萄糖、乳糖、蔗糖、L-阿拉伯糖、棉籽糖、木糖和纖維二糖的一種或多種，所述抗生素選自氨苄西林、慶大黴素和阿莫西林的一種或多種，優選地，所述氮源是胰蛋白腖，優選地，所述碳源是葡萄糖。
[0008]在一個實施方式中，每1000mL該培養基還包括β-半乳糖苷酶顯色底物
0.05-0.5g,如 0.05-0.4g, 0.1-0.3g 等。
[0009]在一個實施方式中，β -木糖苷酶顯色底物為5-溴-4氯-3-吲哚- β -木糖苷。
[0010]在一個實施方式中，β -半乳糖苷酶顯色底物為5-溴-6氯-3-吲哚_β -半乳糖苷。
[0011]在一個實施方式中，膽鹽為去氧膽酸鈉、豬膽鹽、混合膽鹽、牛膽鹽和三號膽鹽中的至少一種，優選地，膽鹽為三號膽鹽。
[0012]在一個實施方式中，每1000mL該培養基還包括牛肉浸出粉3_7g，如3_6g，4_5g等，或者每1000mL該培養基還包括酵母粉2-8g，如2_7g，3_6g，4_5g等。
[0013]在一個實施方式中， 該培養基的pH值為5-9，更優選地，6-8，更優選地6.5-7.5，最優選地，6.8±0.2。
[0014]在一個實施方式中，每1000mL培養基中包含胰蛋白腖12g、植物蛋白腖5g、
5-溴-4氯-3-吲哚-β -木糖苷0.08g、三號膽鹽6g、氨苄西林6mg，餘量為水。
[0015]在一個實施方式中，所述培養基選自如下組合:
[0016]培養基一:每1000mL培養基含有胰蛋白腖8g、植物蛋白腖8g、葡萄糖3g、乳糖3g、鹿糖3g、氯化鈉5g、瓊脂13g、5-溴-4氯-3- H引哚-β -木糖苷0.lg、5_溴-6氯-3- H引哚-β-半乳糖苷0.lg、膽鹽2g、氨苄西林5mg，餘量為水，pH6.8±0.2 ;
[0017]培養基二:每1000mL培養基含有胰蛋白腖8g、植物蛋白腖9g、葡萄糖2g、L_阿拉伯糖5g、棉籽糖4g、氯化鈉5g、瓊脂15g、5-溴-4氯-3- H引哚- β -木糖苷0.3g、膽鹽3g、氨苄西林10mg，餘量為水，ρΗ6.8±0.2 ;
[0018]培養基三:每1000mL培養基含有胰蛋白腖17g、葡萄糖lg、木糖lg、纖維二糖lg、氯化鈉5g、瓊脂Hg、5-溴-4氯-3-吲哚-β -木糖苷0.3g、膽鹽5g、氨苄西林6mg，餘量為水，ρΗ6.8±0.2 ；
[0019]培養基四:每1000mL培養基含有胰蛋白腖10g、植物蛋白腖7g、葡萄糖3g、乳糖3g、氯化鈉3g、瓊脂13g、5-溴-4氯-3- H引哚_β -木糖苷0.05g、膽鹽5g、慶大黴素6mg,餘量為水，pH6.8±0.2 ;
[0020]培養基五:每1000mL培養基含有胰蛋白腖13g、植物蛋白腖4g、葡萄糖3g、乳糖5g、氯化鈉5g、瓊脂13g、5-溴-4氯-3- H引哚- β -木糖苷0.lg、膽鹽3g、慶大黴素8mg,餘量為水，pH6.8±0.2 ;[0021]培養基六--每1000mL培養基含有胰蛋白腖Hg、植物蛋白腖3g、葡萄糖3g、乳糖、5g、氯化鈉5g、瓊脂13g、5-溴-4氯-3- H引哚-β -木糖苷0.1g,膽鹽3g、阿莫西林8mg,餘量為水，pH6.8±0.2 ;
[0022]培養基七:每1000mL培養基中包含胰蛋白腖12g、植物蛋白腖5g、葡萄糖3g、氯化鈉5g、5-溴-4氯-3-吲哚- β -木糖苷0.08g、三號膽鹽6g、氨苄西林9mg，餘量為水，ρΗ6.8±0.2。
[0023]本發明的第二方面涉及一種分離和檢測陰溝腸桿菌的方法，包括如下步驟:
[0024]a)按常規操作製備如上所述的培養基並製備平板；
[0025]b)依據各領域規範規定的樣品處理方法處理樣品；
[0026]c)將樣品或含樣品的增菌液劃線或塗布接種到製備好的平板上，36±1°C培養20-24h ；
[0027]d)若平板上出現藍綠色菌落為可疑陰溝腸桿菌，可將該菌落挑出進一步做生化鑑定，其他細菌為白色、無色或被抑制。
[0028]本發明的培養基用於陰溝腸桿菌的分離和檢測，具有特異性強、靈敏度高、易於操作、結果判斷簡單等優點，適合醫學臨床微生物檢驗、食品安全微生物檢測、環境保護等領域，有廣泛的應用前景，國內外沒有同類產品。
[0029]本發明培養基與傳統腸道菌選擇性培養基相比，具有針對性、專用性強的優點，能更容易、更可靠地分離和檢測陰溝腸桿菌。
【具體實施方式】
[0030]本發明的目的在於提供一種用於分離和檢測陰溝腸桿菌的顯色培養基。換言之，本發明的培養基是為了分離和檢測陰溝腸桿菌的目的。
[0031]本發明的技術方案為，在含有支持陰溝腸桿菌生長的氮源、碳源、氯化鈉、瓊脂、β -木糖苷酶顯色底物，膽鹽和抑制陰溝腸桿菌之外的其他細菌的抗生素的培養基上，陰溝腸桿菌能分解所述β_木糖苷酶顯色底物，呈現游離出的發色基團的色澤，而產生β_木糖苷酶的其他腸桿菌如阪崎腸桿菌，被添加的抗生素所抑制，不產生木糖苷酶的腸桿菌在培養基上為無色或白色菌落，從而使陰溝腸桿菌與其他腸桿菌科細菌相區分。
[0032]本發明在培養基中添加的β_木糖苷酶顯色底物在細菌酶作用下分解，游離出發色基團，使菌落呈現出發色基團的色澤，從而使陰溝腸桿菌與其他腸桿菌科細菌相區分。優選的，β -木糖苷酶顯色底物為5-溴-4氯-3-吲哚-β -木糖苷。
[0033]本發明在培養基中添加的膽鹽可抑制大部分革蘭氏陽性菌生長。優選的，膽鹽為去氧膽酸鈉、豬膽鹽、混合膽鹽、牛膽鹽和三號膽鹽中的至少一種，如一種，兩種，三種，四種或五種。
[0034]優選的，膽鹽為三號膽鹽。
[0035]本發明在培養基中添加的氮源可例如為胰蛋白腖、植物蛋白腖，它們為細菌生長提供充足氮源，牛肉浸出粉可以補充蛋白腖的功效。另外，酵母粉可以為細菌生長提供促進生長和平衡代謝的微量元素。本發明在培養基添加的碳源可`例如為葡萄糖和/或乳糖和/或蔗糖和/或L-阿拉伯糖和/或棉籽糖和/或木糖和/或纖維二糖，其為細菌生長提供充足的碳源。本發明優選的氮源為胰蛋白腖，碳源為葡萄糖。[0036]本領域技術人員知曉，對於陰溝腸桿菌的培養而言，其碳源和氮源並不局限於上述列出的成分，任何常規應用於陰溝腸桿菌培養的碳源和氮源均適用於本發明的培養基，同時，上述列出的碳源或氮源可以單獨使用，也可以組合使用，只要它們能滿足陰溝腸桿菌的成長即可。
[0037]本發明還在培養基中添加了 β -半乳糖苷酶顯色底物如5-溴-6氯-3-吲哚-β -半乳糖苷，通過添加該顯色底物，可以將具有β -半乳糖苷酶、包括陰溝腸桿菌在內的菌株通過表現出預知菌落色澤加以區分。
[0038]本發明在培養基中添加的抗生素氨苄西林、慶大黴素或阿奇黴素能抑制某些細菌的生長，如阪崎腸桿菌，避免假陽性，本發明優選的抗生素為氨苄西林。其他能抑制某些細菌生長而不抑制陰溝腸桿菌生長的抗生素也可以使用。
[0039]本發明的一個用於分離和檢測陰溝腸桿菌的顯色培養基的配比可以舉例如下:每1000mL培養基中包含胰蛋白腖12g、植物蛋白腖5g，5-溴-4氯-3-吲哚-β -木糖苷0.08g、三號膽鹽6g、氨節西林6mg,餘量為水。
[0040]細菌在本發明培養基中呈現的特徵有:
[0041]I)產生β_木糖苷酶的陰溝腸桿菌在培養基上形成帶顏色(如綠色)的菌落；
[0042]2)產生木糖苷酶的其他腸桿菌如阪崎腸桿菌，被添加的抗生素所抑制；
[0043]3)不產生木糖苷酶的腸桿菌在培養基上為無色或白色菌落。
[0044]本發明的培養基用於分離和檢測陰溝腸桿菌的方法包括如下步驟:
[0045]I)平板製備:將上述培養基的各組分，加入到去離子水中，攪拌，加熱煮沸至完全溶解，調節pH至6.8±0.2，待冷卻至45-55°C，加入過濾除菌的氨苄西林、慶大黴素或阿莫西林，混勻，倒平板，備用:
[0046]2)樣品處理:依據各領域規範規定的樣品處理方法；
[0047]3)接種培養:將樣品或含樣品的增菌液劃線或塗布接種到製備好的平板上，36±1°C 培養 20-24h ；
[0048]4)結果分析:若平板上出現藍綠色菌落為可疑陰溝腸桿菌，可將該菌落挑出進一步做生化鑑定，其他細菌為白色、無色或被抑制。
[0049]本領域技術人員知曉，上述列出的分離和檢測方法僅是用於例舉的目的，並不意味著所述分離和檢測方法必須要進行全部上述過程或者必須嚴格按照所述條件進行。例如，本發明的培養基可以以無菌包裝的平板形式(ready-to-use )供應，則上述步驟I)可以省略。
[0050]本發明的有益效果是:
[0051]本發明的培養基用於陰溝腸桿菌的分離和檢測，具有特異性強、靈敏度高、易於操作、結果判斷簡單等優點，適合醫學臨床微生物檢驗、食品安全微生物檢測、環境保護等領域，有廣泛的應用前景，國內外沒有同類產品。
[0052]本發明培養基與傳統腸道菌選擇性培養基相比，具有針對性、專用性強的優點，能更容易、更可靠地分離和檢測陰溝腸桿菌。
[0053]下面結合 具體的實施例對本發明作進一步說明，但並不局限如此。
[0054]實施例
[0055]實施例1[0056]固體平板製備:下述實施例2-8所述顯色培養基一~七，分別按照其中所述組分名稱及含量稱取，將上述培養基的各組分，加入到去離子水中，攪拌，加熱煮沸至完全溶解，調節pH至6.8 ±0.2，待冷卻至45-55°C，傾注平板，待冷至室溫，完全凝固後即可使用。
[0057]實驗菌株的製備及培養基應用:將下述表1中的實驗菌株分別接種於TSB肉湯，35土1°C培養24h，然後取用接種針分別接種到上述製備好的培養基中，分別於35土TC培養 24-48h。
[0058]實施例2
[0059]用於分離和檢測陰溝腸桿菌的顯色培養基一。每1000mL培養基含有胰蛋白腖8g、植物蛋白腖8g、葡萄糖3g、乳糖3g、鹿糖3g、氯化鈉5g、瓊脂13g、5-溴-4氯-3- 口引哚-β -木糖苷0.lg、5_溴-6氯-3-吲哚-β -半乳糖苷0.lg、膽鹽2g、氨苄西林5mg，餘量為水，ρΗ6.8±0.2。
[0060]按照實施例1所述方法進行製備與使用，所有陰溝腸桿菌實驗菌株生長成藍綠色菌株，克羅諾桿菌和革蘭氏陽性菌被抑制，克雷伯氏菌、檸檬酸桿菌、大腸桿菌、產氣腸桿菌呈粉紅色菌落，其他菌落為白色，陰溝腸桿菌在顯色培養基一上比顯色培養基二~七對比更明顯。
[0061]實施例3
[0062]用於分離和檢測陰溝腸桿菌的顯色培養基二。每1000mL培養基含有胰蛋白腖8g、植物蛋白腖9g、葡萄糖2g、L-阿拉伯糖5g、棉籽糖4g、氯化鈉5g、瓊脂158、5-溴-4氯-3-!1引哚-β -木糖苷0.3g，膽鹽3g 、氨苄西林IOmg,餘量為水，ρΗ6.8 ±0.2。
[0063]按照實施例1所述方法進行製備與使用，所有陰溝腸桿菌實驗菌株生長成藍綠色菌株，克羅諾桿菌和革蘭氏陽性菌被抑制，其他菌落為白色，陰溝腸桿菌在顯色培養基二上易於識別。
[0064]實施例4
[0065]用於分離和檢測陰溝腸桿菌的顯色培養基三。每1000mL培養基含有胰蛋白腖17g、葡萄糖lg、木糖lg、纖維二糖lg、氯化鈉5g、瓊脂14g、5-溴-4氯-3- 1?丨哚- β -木糖苷0.3g，膽鹽5g、氨苄西林6mg，餘量為水，ρΗ6.8±0.2。
[0066]按照實施例1所述方法進行製備與使用，所有陰溝腸桿菌實驗菌株生長成藍綠色菌株，克羅諾桿菌和革蘭氏陽性菌被抑制，其他菌落為白色，菌落較大，陰溝腸桿菌在顯色培養基三上易於識別。
[0067]實施例5
[0068]用於分離和檢測陰溝腸桿菌的顯色培養基四。每1000mL培養基含有胰蛋白腖10g、植物蛋白腖7g、葡萄糖3g、乳糖3g、氯化鈉3g、瓊脂13g、5-溴-4氯-3- H引哚- β -木糖苷0.05g，膽鹽5g、慶大黴素6mg，餘量為水，ρΗ6.8±0.2。
[0069]按照實施例1所述方法進行製備與使用，所有陰溝腸桿菌實驗菌株生長成藍綠色菌株，克羅諾桿菌和革蘭氏陽性菌被抑制，其他菌落為白色，菌落較適中，陰溝腸桿菌在顯色培養基四上易於識別。
[0070]實施例6
[0071]用於分離和檢測陰溝腸桿菌的顯色培養基五。每1000mL培養基含有胰蛋白腖13g、植物蛋白腖4g、葡萄糖3g、乳糖5g、氯化鈉5g、瓊脂13g、5-溴-4氯-3- H引哚- β -木糖苷0.lg，膽鹽3g、慶大黴素8mg，餘量為水，pH6.8±0.2。
[0072]按照實施例1所述方法進行製備與使用，所有陰溝腸桿菌實驗菌株生長成藍綠色菌株，克羅諾桿菌和革蘭氏陽性菌被抑制，其他菌落為白色，菌落適中，陰溝腸桿菌在顯色培養基五上易於識別。
[0073]實施例7
[0074]用於分離和檢測陰溝腸桿菌的顯色培養基六。每1000mL培養基含有胰蛋白腖14g、植物蛋白腖3g、葡萄糖3g、乳糖、5g、氯化鈉5g、瓊脂13g、5-溴-4氯-3- H引哚- β -木糖苷0.1g,膽鹽3g、阿莫西林8mg,餘量為水,pH6.8 + 0.2。
[0075]按照實施例1所述方法進行製備與使用，所有陰溝腸桿菌實驗菌株生長成藍綠色菌株，克羅諾桿菌和革蘭氏陽性菌被抑制，其他菌落為白色，菌落適中，陰溝腸桿菌在顯色培養基六上易於識別。
[0076]實施例8
[0077]用於分離和檢測陰溝腸桿菌的顯色培養基七。每1000mL培養基中包含胰蛋白腖12g、植物蛋白腖5g、葡萄糖3g、氯化鈉5g、5-溴-4氯-3-吲哚- β -木糖苷0.08g、三號膽鹽6g,氨節西林9mg,餘量為水，pH6.8±0.2。
[0078]按照實施例1所述方法進行製備與使用，所有陰溝腸桿菌實驗菌株生長成藍綠色菌株，克羅諾桿菌和革蘭氏陽性菌被抑制，其他菌落為白色，菌落較大，陰溝腸桿菌在顯色培養基其上易於識別。
[0079]實施例9
[0080]特異性實驗
[0081]表1列出了本申請實施例所使用的54株實驗菌株。
【權利要求】
1.一種培養基，其中每1000mL該培養基包括:氮源8-16g、碳源l_3g、氯化鈉4_7g、瓊脂12-20g、β -木糖苷酶顯色底物0.05-0.5g、膽鹽2-9g、抗生素1-lOmg，餘量為水，其中所述氮源選自胰蛋白腖和植物蛋白腖的一種或二者，所述碳源選自葡萄糖、乳糖、蔗糖、L-阿拉伯糖、棉籽糖、木糖和纖維二糖的一種或多種，所述抗生素選自氨苄西林、慶大黴素和阿莫西林的一種或多種，優選地，所述氮源是胰蛋白腖，優選地，所述碳源是葡萄糖。
2.根據權利要求1所述的培養基，其中每1000mL該培養基還包括β-半乳糖苷酶顯色底物 0.05-0.5g。
3.根據權利要求1或2所述的培養基，其中β-木糖苷酶顯色底物為5-溴-4氯-3-吲哚-β _木糖苷。
4.根據權利要求2或3所述的培養基，其中β-半乳糖苷酶顯色底物為5-溴-6氯-3- 引哚-β -半乳糖苷。
5.根據權利要求1至4任一項所述的培養基，其中膽鹽為去氧膽酸鈉、豬膽鹽、混合膽鹽、牛膽鹽和三號膽鹽中的至少一種，優選地，膽鹽為三號膽鹽。
6.根據權利要求1至5任一項所述的培養基，其中每1000mL該培養基還包括牛肉浸出粉3-7克或者每1000mL該培養基還包括酵母粉2_8克。
7.根據權利要求1至6任一項所述的培養基，其中該培養基的pH值為5-9，更優選地，6-8，更優選地6.5-7.5，最優選地，6.8±0.2。
8.根據權利要求1至7任一項所述的培養基，其中每1000mL培養基中包含胰蛋白腖12g、植物蛋白腖5g、5-溴-4氯-3-吲哚- β -木糖苷0.08g、三號膽鹽6g、氨節西林6mg,餘量為水。
9.根據權利要求1至8任一項所述的培養基，其中所述培養基選自如下組合: 培養基一:每1000mL培養基含有胰蛋白腖8g、植物蛋白腖8g、葡萄糖3g、乳糖3g、鹿糖3g、氯化鈉5g、瓊脂138、5-溴-4氯-3-!1引哚-0 -木糖苷0.lg、5_溴-6氯_3-11引哚-0 -半乳糖苷0.lg、膽鹽2g、氨苄西林5mg，餘量為水，ρΗ6.8±0.2 ; 培養基二:每1000mL培養基含有胰蛋白腖8g、植物蛋白腖9g、葡萄糖2g、L-阿拉伯糖5g、棉籽糖4g、氯化鈉5g、瓊脂15g、5-溴-4氯-3-吲哚-β -木糖苷0.3g、膽鹽3g、氨苄西林 10mg，餘量為水，ρΗ6.8±0.2 ； 培養基三:每1000mL培養基含有胰蛋白腖17g、葡萄糖lg、木糖lg、纖維二糖lg、氯化鈉5g、瓊脂14g、5-溴-4氯-3-吲哚-β -木糖苷0.3g、膽鹽5g、氨苄西林6mg，餘量為水，ρΗ6.8±0.2 ； 培養基四:每1000mL培養基含有胰蛋白腖10g、植物蛋白腖7g、葡萄糖3g、乳糖3g、氯化鈉3g、瓊脂13g、5-溴-4氯-3-吲哚- β -木糖苷0.05g、膽鹽5g、慶大黴素6mg，餘量為水，ρΗ6.8±0.2 ； 培養基五:每1000mL培養基含有胰蛋白腖13g、植物蛋白腖4g、葡萄糖3g、乳糖5g、氯化鈉5g、瓊脂13g、5-溴-4氯-3-吲哚-β -木糖苷0.lg、膽鹽3g、慶大黴素8mg，餘量為水，ρΗ6.8±0.2 ； 培養基六:每1000mL培養基含有胰蛋白腖14g、植物蛋白腖3g、葡萄糖3g、乳糖、5g、氯化鈉5g、瓊脂13g、5-溴-4氯-3-吲哚-β -木糖苷0.1g,膽鹽3g、阿莫西林8mg，餘量為水，ρΗ6.8±0.2 ；培養基七--每1000mL培養基中包含胰蛋白腖12g、植物蛋白腖5g、葡萄糖3g、氯化鈉5g、5-溴-4氯-3-吲哚-β -木糖苷0.08g、三號膽鹽6g、氨苄西林9mg，餘量為水，ρΗ6.8±0.2。
10.一種分離和檢測陰溝腸桿菌的方法，包括如下步驟: a)按常規操作製備權利要求1-9任一項所述的培養基並製備平板； b)依據各領域規範規定的樣品處理方法處理樣品； c)將樣品或含樣品的增菌液劃線或塗布接種到製備好的平板上，36±1°C培養20-24h ； d)若平板上出現藍綠色菌落為可疑陰溝腸桿菌，可將該菌落挑出進一步做生化鑑定，其他細菌為白色、無色或被`抑制`。
【文檔編號】C12N1/20GK103820373SQ201410101820
【公開日】2014年5月28日 申請日期:2014年3月19日 優先權日:2014年3月19日
【發明者】趙貴明, 陳穎, 趙勇勝, 楊海榮, 劉洋, 王娉, 胡玥 申請人:中國檢驗檢疫科學研究院