一種用於構建囊泡的具有腫瘤部位酶敏感特性的高分子材料的全固相合成方法與流程
2023-06-13 20:33:26
本發明涉及高分子材料合成領域，具體涉及一種用於構建囊泡的具有腫瘤部位酶敏感特性的高分子材料的全固相合成方法。
背景技術：
近年來，世界各國腫瘤發病率比10年前已提高了近1倍。癌症嚴重威脅人類健康，成為當前醫藥領域亟待攻克的難題。目前在臨床上常用的腫瘤治療方法是化學療法，然而抗癌藥物不同於普通藥物，由於其作用缺乏選擇性，不僅對病變細胞具有殺傷作用，也會對快速增殖的正常組織細胞產生毒性(如骨髓細胞或胃腸道細胞)，給患者帶來嚴重的不良反應和副作用。因此，如何利用藥物製劑的手段有效專一地將抗癌藥物運輸到腫瘤部位，提高藥物的腫瘤靶向性，增加靶部位的藥物濃度，避免抗癌藥物對正常組織細胞產生毒性，從而達到高效低毒的治療效果是抗癌藥物製劑研究亟待解決的問題。
腫瘤組織由於其血管壁間隙較大且結構完整性差，對納米顆粒具有高通透性和滯留效應(enhanced permeability and retention effect，EPR效應)。利用腫瘤組織的EPR效應，微粒載體能夠攜帶藥物通過腫瘤血管，進入實體腫瘤並累積，實現被動靶向。然而，具有被動靶向作用的微粒載藥系統缺乏對腫瘤組織的特異性識別能力，微粒載體亦會被體內的單核-巨噬細胞系統如肝、脾等器官攝取，從而對正常組織細胞產生毒性。主動靶向利用腫瘤細胞表面高表達的受體或抗原為靶點，在藥物載體表面修飾相應的配體(或者抗體)，利用受體和配體(或抗原與抗體)之間特異性的識別作用實現對腫瘤的高效靶向作用。主動靶向的載藥系統需要將藥物遞送至腫瘤部位發揮作用，因此，藥物從載體的釋放速率是一個關鍵因素。如果載體在到達腫瘤部位之前提前釋放(洩露)藥物，不僅無法發揮載體的靶向作用，提前釋放的藥物還會對正常組織、細胞產生毒副作用；相反，如果載體在到達腫瘤部位後不能快速釋放藥物，將無法發揮藥效。因此，實現藥物載體在靶部位的可控釋藥具有非常重要的意義。
目前，已有研究利用響應型載體，將藥物的主動靶向與可控釋放相結合。由於腫瘤細胞生長失控、基因表達異常等特點，腫瘤組織微環境和正常組織相比有很多明顯的差異，比如腫瘤組織的弱酸性(pH 6.8)、厭氧環境、高表達的酶，如基質金屬蛋白酶、酯酶、組織蛋白酶B、α-澱粉酶等，高濃度的過氧化氫和穀胱甘肽等代謝物。針對腫瘤的微環境特點，可以設計具有腫瘤微環境刺激-響應的載藥系統，如pH響應性控釋系統、還原響應性控釋系統、酶響應性控釋系統等，從而有效解決藥物靶向腫瘤部位並可控釋放的問題。
基質金屬蛋白酶是在腫瘤微環境中高度表達的一類酶，能通過調節細胞相關信號通路，進而控制腫瘤細胞的生長、遷移、血管生成、腫瘤性炎症等。其中基質金屬蛋白酶-9(Matrix Metalloproteinases-9，MMP-9)因其作用底物廣泛，表達細胞眾多而備受重視。研究發現，胞外分泌型MMP-9在多種腫瘤基質中都高度表達，如腦癌、乳腺癌、胃癌、皮膚癌等。基於此，MMP-9可做為腫瘤靶向信號。Langer等將葡聚糖與氨甲喋呤通過MMP的底物——多肽連接，製備了葡聚糖-PVGLIG-氨甲喋呤共聚物，該共聚物遇到MMP-9時多肽段即被降解而釋放氨甲喋呤。
聚合物囊泡是由密閉雙分子層構成的具有球形或橢球型中空結構的高分子聚集體，結構與脂質體相似，一般由具有兩親性結構的嵌段共聚物、接枝共聚物或樹枝狀聚合物自組裝形成。囊泡由於其結構的仿生性，具有良好的細胞滲透性、穩定性以及可以根據需要對材料進行合成和修飾，是一類優良的載體。與磷脂構成的脂質體相比，由於聚合物囊泡的膜由兩親性聚合物構成，不會被體內的磷脂酶過氧化物酶等物質氧化水解，而脂質體在體內酶的作用下，雙層膜結構易破壞，而使藥物洩漏，因此，聚合物囊泡在體內循環中具有更好的穩定性。此外，構成聚合物囊泡的共聚物分子嵌段具有可設計的特點，可進一步功能化修飾成環境響應型共聚物。與膠束、納米粒相比，聚合物囊泡具有巨大的親水性的空腔以及疏水性的雙層膜結構，能夠同時負載親水和疏水藥物實現多藥遞送，並且對水溶性藥物的載藥量高，具有腫瘤環境響應的聚合物囊泡可以實現水溶性藥物的瞬時釋放，形成局部高濃度，從而產生較大的濃度梯度，促進藥物進入腫瘤細胞。
Jung S.Lee等製備了腫瘤部位酶敏感的聚合物，先採用固相合成法合成多肽段，切割樹脂後，在液相中將多肽分別與聚乙二醇(PEG)和外消旋聚乳酸(PDLLA)連接，合成PEG-多肽-PDLLA聚合物，將其自組裝得到囊泡。專利CN104530438A公開了一種pH響應多肽聚合物的製備方法，先採用固相合成法合成多肽，切割樹脂後，通過液相合成法在多肽兩側分別修飾膽固醇和聚乙二醇，得到兩親性聚合物材料。由於液相合成步驟中都涉及離心、反覆透析和冷凍凍幹，因此，步驟繁瑣，操作複雜，用時較長，此外，液相合成反應還存在效率低，副產物多的問題。國外專利US08314060公開了一種利用固相合成法合成蛋白酶敏感多肽，並在多肽上面偶聯藥物製備前藥在腫瘤部位發揮藥效，專利CN105148289A公開了一種利用固相合成法製備兩親性寡聚多肽藥物結合物，但均未涉及利用固相合成法在多肽兩端偶聯高分子聚合物的方法。
本發明公開了一種用於構建囊泡的具有腫瘤部位酶敏感的高分子材料是由親水鏈段、多肽及疏水鏈段依次相連形成的聚合物，在兩親性聚合物材料中引入含有腫瘤部位高表達MMP-9酶切位點的多肽序列，使材料具有腫瘤部位MMP-9酶敏感特性。本發明公開的合成高分子材料的方法為全固相合成方法，運用簡單的洗滌、過濾等分離技術來純化反應中間體和最終產物，並且所有反應及操作都在一個反應器中進行，克服液相合成由操作帶來的損失，與液相合成相比操作簡單，合成周期短，副產物少，產物收率高。此外，本發明還公開了一種聚合物囊泡，由本發明公開的具有腫瘤部位酶敏感特性的高分子材料自組裝而成，可以實現腫瘤部位主動靶向和酶響應釋藥功能。水溶性藥物包載於囊泡的內水相中，在囊泡靶向到腫瘤組織後，高分子材料能被腫瘤部位高表達的MMP-9酶降解，從而使囊泡破裂，瞬間釋放抗腫瘤藥物，避免藥物載體在非靶部位降解釋藥，減少不良反應的發生。高分子材料自組裝的囊泡具有穩定性高、載藥量大，同時負載親水和疏水藥物，在靶部位能夠快速釋放藥物等優勢，在腫瘤部位高表達的MMP-9酶的作用下即可觸發藥物釋放，無需另外賦予釋藥條件。
技術實現要素：
本發明的目的是通過全固相合成法合成能夠形成囊泡，在腫瘤部位特異釋放藥物的材料，為了實現上述發明目的，發明者採用如下技術方案：
一種用於構建囊泡的具有腫瘤部位酶敏感特性的高分子材料，其特徵在於，是由親水鏈段、多肽及疏水鏈段依次相連形成的聚合物。
所述親水鏈段可以是聚乙二醇(PEG)、聚丙烯酸(PAA)、聚乙烯醇(PVA)、聚丙烯醯胺(PAM)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)，所述多肽的序列中包括Ala-Met-Gly-Leu-Lys-Ser、Gly-Ser-Gly-Leu-Lys-Ala、Lys-Val-Gly-Leu-Arg-Thr，可根據需要增加羧基端序列，羧基端胺基酸需含有側鏈活性反應基團，且多肽仍具有酶反應活性，所述疏水鏈段可以是聚己內酯(PCL)、聚乳酸(PLA)、聚苯乙烯(PS)、聚環丙烷碳酸酯(PTMC)及其共聚物。
在所述用於構建囊泡的具有腫瘤部位酶敏感特性的高分子材料中，親水鏈段包括但不限於聚乙二醇(PEG)、聚丙烯酸(PAA)、聚乙烯醇(PVA)、聚丙烯醯胺(PAM)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。
所述疏水鏈段包括但不限於聚己內酯(PCL)、聚乳酸(PLA)、聚苯乙烯(PS)、聚環丙烷碳酸酯(PTMC)及其共聚物中的任意一種或多種的共聚物。
所述親水鏈段、多肽、疏水鏈段的摩爾數之比為1∶1∶1。親水鏈段的分子量為1000～5000，疏水鏈段的分子量為1500～45000，親水段的相對分子質量在分子中所佔的比例為0.1～0.4。
本發明提供了一種用於構建囊泡的具有腫瘤部位酶敏感特性的高分子材料的全固相合成方法，合成過程包括如下步驟：
採用固相合成法合成目標多肽，再將疏水和親水鏈段分別鍵合在多肽兩端。2-氯三苯甲基氯樹脂在適宜溶劑中溶脹，以2-氯三苯甲基氯樹脂為起始原料，通過固相合成法，按照目標多肽序列依次連接具有氨基端Fmoc-保護且側鏈保護的胺基酸，其間依次用體積比1∶4的哌啶和N，N-二甲基甲醯胺混合液脫去Fmoc-保護基團，用縮合劑進行接肽反應，得到目標多肽，脫去目標多肽氨基端胺基酸的Fmoc-保護基，保留樹脂，將活化後的疏水鏈段溶液加入反應器中通空氣反應，使疏水鏈段與多肽氨基端胺基酸偶聯，將活化後的親水鏈段溶液加入反應器中通空氣反應，使親水鏈段與多肽羧基端胺基酸側鏈活性基團偶聯，將肽鏈從樹脂上裂解，脫除側鏈保護基，將反應產物用透析袋透析，過濾，冷凍乾燥得到所述的用於構建囊泡的具有腫瘤部位酶敏感特性的高分子材料。
所述固相合成採用的溶劑為N，N-二甲基甲醯胺、二氯甲烷、二甲亞碸中的一種或幾種。
所述合成反應的縮合劑包括N，N′-二環己基碳醯亞胺(DCC)、N-羥基琥珀醯亞胺(NHS)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC·HCl)、苯並三氮唑-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU)、1-羥基苯並三氮唑(HOBt)、N，N-二異丙基乙胺(DIEA)。
本發明提供了一種具有腫瘤部位酶敏感特性的高分子材料，是由親水鏈段、多肽及疏水鏈段依次相連形成的聚合物。本發明還提供了一種全固相合成親水鏈段、多肽和疏水鏈段相連的聚合物的方法，克服了液相合成由操作帶來的損失，並且操作簡單，合成周期短，副產物少，產物收率高。此外，本發明提供了一種囊泡，由本發明提供的全固相合成方法製備得到的具有腫瘤部位酶敏感特性的高分子材料自組裝而成。其中，親水鏈段從囊泡膜上向內和向外舒展，從而形成鬆散的親水性囊泡冠將水溶性藥物包載於巨大的內水相中。親水鏈段外殼能有效避免囊泡被體內吞噬細胞的識別和吞噬，保護囊泡在體內不被快速清除，增加囊泡在生物體內的循環時間。另外，囊泡表面親水鏈段的裂解可以實現藥物瞬時釋放形成局部高濃度，從而產生較大的濃度梯度，促進藥物進入腫瘤細胞。多肽具有相對分子質量小、結合效率高等優點，通過設計，將含有MMP-9酶切位點的多肽序列設計到材料中，使材料具有酶響應活性，從而實現腫瘤部位主動靶向和酶敏感響應釋藥功能。疏水鏈段相互聚集形成比較緻密的疏水性囊泡膜，能增大囊泡對疏水性藥物的載藥量。兩親性聚合物構建的囊泡具有雙層膜結構與細胞膜類似，能夠促進藥物內吞進入細胞。
本發明提供的高分子材料構建的囊泡載藥系統在腫瘤部位的酶敏感特性可以實現靶向遞送至腫瘤組織和藥物的可控釋放。將水溶性藥物包載於囊泡的內水相中，在靶向到腫瘤組織後，高分子材料能被腫瘤部位高表達的MMP-9酶降解，從而使囊泡破裂，瞬間釋放抗腫瘤藥物。避免藥物載體在非靶部位降解釋藥，從而減少不良反應的發生。
與現有技術相比，本發明具有以下優點和有益效果：
1、本發明提供的全固相合成方法運用簡單的洗滌、過濾等分離技術來純化反應中間體和最終產物，並且所有反應及操作都在一個反應器中進行，能夠克服液相合成由操作帶來的損失，並且操作簡單，合成周期短，副產物少，產物收率高。
2、本發明在兩親性聚合物材料中引入腫瘤部位MMP-9酶敏感肽，利用腫瘤部位高表達MMP-9酶的特點主動靶向腫瘤部位。
3、本發明的用於構建囊泡的具有腫瘤部位酶敏感特性的高分子材料在靶向到腫瘤組織後，腫瘤部位酶敏感肽被腫瘤部位高表達的MMP-9酶降解，從而使囊泡破裂，瞬間釋放抗腫瘤藥物，實現藥物的可控釋放。
4、本發明的具有腫瘤部位酶敏感特性的高分子材料用於構建MMP-9酶響應型囊泡，由兩親性結構的聚合物自組裝形成，與脂質體相比具有更好的穩定性。與膠束和納米粒相比，囊泡具有親水性的空腔以及疏水性的雙層膜結構，囊泡能夠同時負載親水和疏水藥物，且載藥量高，其表面親水鏈段的裂解可以實現藥物瞬時釋放形成局部高濃度，從而產生較大的濃度梯度，從而促進藥物進入腫瘤細胞。
具體實施方式
本發明公開了一種用於構建囊泡的具有腫瘤部位酶敏感特性的高分子材料的全固相合成方法。為了進一步闡述本發明，下面給出一系列實施例。這些實施例完全是例證性的，他們僅用來對本發明進行具體描述，不應當理解為對本發明的限制。
下面結合實施例，進一步闡明本發明：
說明：實施例中的PEG-COOH表示端羧基聚乙二醇，PAA-COOH表示端羧基聚丙烯酸，PVA-COOH表示端羧基聚乙烯醇，PAM-COOH表示端羧基聚丙烯醯胺，PVP-COOH表示端羧基聚乙烯吡咯烷酮，PCL-COOH表示端羧基聚己內酯，PLA-COOH表示端羧基聚乳酸，PS-COOH表示端羧基聚苯乙烯，PTMC-COOH表示端羧基聚環丙烷碳酸酯，Ala表示丙氨酸，Met表示蛋氨酸，Gly表示甘氨酸，Leu表示亮氨酸，Lys表示賴氨酸，Ser表示絲氨酸，Val表示纈氨酸，Arg表示精氨酸，Thr表示蘇氨酸，NHS表示N-羥基琥珀醯亞胺，EDC·HCl表示1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽，HBTU表示苯並三氮唑-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸酯，HOBt表示1-羥基苯並三氮唑，DIEA表示N，N-二異丙基乙胺。
實施例1：
取0.5mmol的2-氯三苯甲基氯樹脂在N，N-二甲基甲醯氨溶液中溶脹，按多肽序列Ala-Met-Gly-Leu-Lys-Ser-Lys依次連接具有氨基端Fmoc-保護且側鏈保護的胺基酸，胺基酸的用量均為2.5mmol。其間用體積比1∶4的哌啶和N，N-二甲基甲醯胺混合液脫除Fmoc保護基，用茚三酮方法檢測樹脂為深藍色。依次取縮合劑HOBt 0.46g、HBTU 1.14g、DIEA 0.87ml活化胺基酸，進行接肽反應，用茚三酮方法檢測樹脂為黃色即反應完全，得到Ala-Met-Gly-Leu-Lys-Ser-Lys-2-氯三苯甲基氯樹脂。脫去多肽氨基端胺基酸的Fmoc-保護基，保留樹脂，取3.13g疏水鏈段PCL-COOH(分子量5000)用N，N-二甲基甲醯氨溶解，並在其中加入適量HBTU以及DIEA活化，加入反應器與多肽氨基端胺基酸偶聯，得到所述高分子材料的中間產物PCL-Ala-Met-Gly-Leu-Lys-Ser-Lys-2-氯三苯甲基氯樹脂。
將1.25g親水鏈段PEG-COOH(分子量2000)用N，N-二甲基甲醯氨溶解，並在其中加入適量HBTU和DIEA活化，HBTU與PEG-COOH摩爾數之比為1∶1.13。加入反應器中通空氣與多肽羧基端胺基酸的側鏈活性反應基團偶聯，將肽鏈用三氟乙酸從樹脂上裂解，脫除側鏈保護基後，得到用於構建囊泡的具有腫瘤部位酶敏感特性的高分子材料PCL-Ala-Met-Gly-Leu-Lys-Ser-Lys-PEG。其中按摩爾比樹脂∶胺基酸單體∶PCL-COOH∶PEG-COOH＝1∶5∶1.25∶1.25加料。
將反應液用純水稀釋，將得到的溶液置於透析袋中進行透析處理，將純水透析處理後所得的混懸液過濾，冷凍乾燥，得到所述用於構建囊泡的具有腫瘤部位酶敏感特性的高分子材料PCL-Ala-Met-Gly-Leu-Lys-Ser-Lys-PEG。
實施例2：
取0.8mmol的2-氯三苯甲基氯樹脂在N，N-二甲基甲醯氨溶液中溶脹，按多肽序列Gly-Ser-Gly-Leu-Lys-Ala-Lys依次連接具有氨基端Fmoc-保護且側鏈保護的胺基酸，胺基酸的用量均為4mmol。其間用體積比1∶4的哌啶和N，N-二甲基甲醯胺混合液脫除Fmoc保護基，用茚三酮方法檢測樹脂為深藍色。依次加入縮合劑HOBt 0.74g、HBTU 1.82g和DIEA 1.4ml活化胺基酸後，進行接肽反應，用茚三酮方法檢測樹脂為黃色即反應完全，得到Gly-Ser-Gly-Leu-Lys-Ala-Lys-2-氯三苯甲基氯樹脂。脫去多肽氨基端胺基酸的Fmoc-保護基，保留樹脂，取6g疏水鏈段PLA-COOH(分子量6000)用N，N-二甲基甲醯氨溶解後，在其中加入適量HBTU和DIEA活化，加入反應器與氨基端胺基酸偶聯，得所述高分子材料的中間產物PLA-Gly-Ser-Gly-Leu-Lys-Ala-Lys-2-氯三苯甲基氯樹脂。
將2.5g親水鏈段PAA-COOH(分子量2500)用N，N-二甲基甲醯氨溶解，並在其中加入適量HBTU和DIEA活化，HBTU與PAA-COOH摩爾數之比為1∶1.13。加入反應器中通空氣與多肽羧基端胺基酸的側鏈活性反應基團偶聯，將肽鏈用三氟乙酸從樹脂上裂解，脫除側鏈保護基後得到用於構建囊泡的具有腫瘤部位酶敏感特性的高分子材料PLA-Gly-Ser-Gly-Leu-Lys-Ala-Lys-PAA。其中，按摩爾比樹脂∶胺基酸單體∶PLA-COOH∶PAA-COOH＝1∶5∶1.25∶1.25加料。
將反應液用純水稀釋，將得到的溶液置於透析袋中進行透析處理，將純水透析處理後所得的混懸液過濾，冷凍乾燥，得到所述用於構建囊泡的具有腫瘤部位酶敏感特性的高分子材料PLA-Gly-Ser-Gly-Leu-Lys-Ala-Lys-PAA。
實施例3：
取1mmol的2-氯三苯甲基氯樹脂在二氯甲烷溶液中溶脹，按多肽序列Lys-Val-Gly-Leu-Arg-Thr-Lys，依次連接上具有氨基端Fmoc-保護且側鏈保護的胺基酸，胺基酸的用量均為5mmol。其間用體積比1∶4的哌啶和N，N-二甲基甲醯胺混合液脫除Fmoc保護基，用茚三酮方法檢測樹脂為深藍色。依次取縮合劑HOBt 0.92g、HBTU 2.27g和DIEA 1.75ml活化胺基酸，進行接肽反應，用茚三酮方法檢測樹脂為黃色即反應完全，得到Lys-Val-Gly-Leu-Arg-Thr-Lys-2-氯三苯甲基氯樹脂。脫去多肽氨基端胺基酸的Fmoc-保護基，保留樹脂，取12.5g疏水鏈段PS-COOH(分子量10000)用N，N-二甲基甲醯氨溶解，加入適量HBTU和DIEA活化，加入反應器與氨基端胺基酸偶聯，得所述高分子材料的中間產物PS-Lys-Val-Gly-Leu-Arg-Thr-Lys-2-氯三苯甲基氯樹脂。
取3.75g親水鏈段PVA-COOH(分子量3000)用N，N-二甲基甲醯氨溶解，在其中加入適量HBTU和DIEA活化，HBTU與PVA-COOH摩爾數之比為1∶1.13。加入反應器中通空氣與多肽羧基端胺基酸的側鏈活性反應基團偶聯，將肽鏈用三氟乙酸從樹脂上裂解，脫除側鏈保護基後，得到用於構建囊泡的具有腫瘤部位酶敏感特性的高分子材料PS-Lys-Val-Gly-Leu-Arg-Thr-Lys-PVA。其中按摩爾比樹脂∶胺基酸單體∶PS-COOH∶PVA-COOH＝1∶5∶1.25∶1.25加料。
將反應液用純水稀釋，將得到的溶液置於透析袋中進行透析處理，將純水透析處理後所得的混懸液過濾，冷凍乾燥，得到所述用於構建囊泡的具有腫瘤部位酶敏感特性的高分子材料PS-Lys-Val-Gly-Leu-Arg-Thr-Lys-PVA。
實施例4：
取0.3mmol的2-氯三苯甲基氯樹脂在二氯甲烷中溶脹，按照多肽序列Ala-Met-Gly-Leu-Lys-Ser-Lys，依次連接上具有氨基端Fmoc-保護且側鏈保護的胺基酸，胺基酸的用量均為1.5mmol。其間用體積比1∶4的哌啶和N，N-二甲基甲醯胺混合液脫除Fmoc保護基，保留樹脂，用茚三酮方法檢測樹脂為深藍色。稱縮合劑HOBt 0.27g、HBTU 0.68g和DIEA 0.52ml活化胺基酸，進行接肽反應，用茚三酮方法檢測樹脂為黃色即反應完全，得到Ala-Met-Gly-Leu-Lys-Ser-Lys-2-氯三苯甲基氯樹脂。
將1.5g親水鏈段PEG-COOH(分子量4000)用N，N-二甲基甲醯氨溶解，並在其中加入適量HBTU和DIEA活化，HBTU與PEG-COOH摩爾數之比為1∶1.13。加入反應器中通空氣與多肽羧基端胺基酸的側鏈活性反應基團偶聯，得所述高分子材料的中間產物Ala-Met-Gly-Leu-Lys-Ser-Lys-PEG(多肽羧基端的Lys仍然連在2-氯三苯甲基氯樹脂上)。
脫去多肽氨基端胺基酸的Fmoc-保護基，加入用HBTU和DIEA活化的5.63g疏水鏈段PTMC-COOH(分子量15000)與氨基端胺基酸偶聯，將肽鏈用三氟乙酸從樹脂上裂解，脫除側鏈保護基後，得到用於構建囊泡的具有腫瘤部位酶敏感特性的高分子材料PTMC-Ala-Met-Gly-Leu-Lys-Ser-Lys-PEG。其中，按摩爾比樹脂∶胺基酸單體∶PEG-COOH∶PTMC-COOH＝1∶5∶1.25∶1.25加料。
將反應液用純水稀釋，將得到的溶液置於透析袋中進行透析處理，將純水透析處理後所得的混懸液過濾，冷凍乾燥，得到所述用於構建囊泡的具有腫瘤部位酶敏感特性的高分子材料PTMC-Ala-Met-Gly-Leu-Lys-Ser-Lys-PEG。
實施例5：
取1mmol的2-氯三苯甲基氯樹脂在二氯甲烷溶液中溶脹，按多肽序列Gly-Ser-Gly-Leu-Lys-Ala-Lys，依次連接上具有氨基端Fmoc-保護且側鏈保護的胺基酸，胺基酸的用量均為5mmol。其間用體積比1∶4的哌啶和N，N-二甲基甲醯胺混合液脫除Fmoc保護基，用茚三酮方法檢測樹脂為深藍色。依次取縮合劑HOBt 0.92g、HBTU 2.27g和DIEA 1.75ml活化胺基酸，進行接肽反應，用茚三酮方法檢測樹脂為黃色即反應完全，得到Gly-Ser-Gly-Leu-Lys-Ala-Lys-2-氯三苯甲基氯樹脂。保留樹脂，在反應器中加入EDC·HCl 0.49g和NHS 0.29g活化，將2.5g親水鏈段PAM-COOH(分子量2000)用二甲亞碸溶解。加入反應器中通空氣與多肽羧基端胺基酸的側鏈活性反應基團偶聯，得到所述高分子材料的中間產物Gly-Ser-Gly-Leu-Lys-Ala-Lys-PAM(多肽羧基端的Lys仍然連在2-氯三苯甲基氯樹脂上)。
脫去多肽氨基端胺基酸的Fmoc-保護基，保留樹脂，將6.25g疏水鏈段PCL-COOH(分子量5000)用二甲亞碸溶解，加入縮合劑EDC·HCl 0.61g和NHS 0.37g活化，加入反應器中通空氣與氨基端胺基酸偶聯，將肽鏈用三氟乙酸從樹脂上裂解，脫除側鏈保護基後，得到用於構建囊泡的具有腫瘤部位酶敏感特性的高分子材料PCL-Gly-Ser-Gly-Leu-Lys-Ala-Lys-PAM。其中，按摩爾比樹脂∶胺基酸單體∶PAM-COOH∶PCL-COOH＝1∶5∶1.25∶1.25加料。
將反應液用純水稀釋，將得到的溶液置於透析袋中進行透析處理，將純水透析處理後所得的混懸液過濾，冷凍乾燥，得到所述用於構建囊泡的具有腫瘤部位酶敏感特性的高分子材料PCL-Gly-Ser-Gly-Leu-Lys-Ala-Lys-PAM。
實施例6：
取0.5mmol的2-氯三苯甲基氯樹脂在二氯甲烷溶液中溶脹，按照多肽序列Lys-Val-Gly-Leu-Arg-Thr-Lys，依次連接上具有氨基端Fmoc-保護且側鏈保護的胺基酸，胺基酸的用量均為2.5mmol。其間用體積比1∶4的哌啶和N，N-二甲基甲醯胺混合液脫除Fmoc保護基，用茚三酮方法檢測樹脂為深藍色。依次取縮合劑HOBt 0.46g、HBTU 1.14g和DIEA 0.87ml活化胺基酸，進行接肽反應後，用茚三酮方法檢測樹脂為黃色即反應完全，得到Lys-Val-Gly-Leu-Arg-Thr-Lys-2-氯三苯甲基氯樹脂。保留樹脂，在反應器中加入EDC·HCl 0.24g和NHS0.15g活化，將2.5g親水鏈段PVP-COOH(分子量4000)用二甲亞碸溶解。加入反應器中通空氣與多肽羧基端胺基酸的側鏈活性反應基團偶聯，得所述高分子材料的中間產物Lys-Val-Gly-Leu-Arg-Thr-Lys-PVP(多肽羧基端的Lys仍然連在2-氯三苯甲基氯樹脂上)。
脫去多肽氨基端胺基酸的Fmoc-保護基，保留樹脂，將5.94g疏水鏈段PLA-COOH(分子量9500)用二甲亞碸溶解，加入縮合劑EDC·HCl 0.3g和NHS 0.18g活化，加入反應器中通空氣與氨基端胺基酸偶聯，將肽鏈用三氟乙酸從樹脂上裂解，脫除側鏈保護基，得用於構建囊泡的具有腫瘤部位酶敏感特性的高分子材料PLA-Lys-Val-Gly-Leu-Arg-Thr-Lys-PVP。其中，按摩爾比樹脂∶胺基酸單體∶PVP-COOH∶PLA-COOH＝1∶5∶1.25∶1.25加料。
將反應液用純水稀釋，將得到的溶液置於透析袋中進行透析處理，將純水透析處理後所得的混懸液過濾，冷凍乾燥，得到所述用於構建囊泡的具有腫瘤部位酶敏感特性的高分子材料PLA-Lys-Val-Gly-Leu-Arg-Thr-Lys-PVP。