一種超濾膜膜包的完整性檢測方法

2023-06-13 16:01:21

專利名稱：一種超濾膜膜包的完整性檢測方法
技術領域：
本發明涉及一種膜包的完整性檢測方法，尤其是一種超濾膜膜包的完整性檢測方法。
背景技術：
膜分離技術依據藥效活性與其分子結構及分子量水平密切相關的特性，通過選用不同截留特性的膜組件構成膜分離系統對有效成分進行分離、濃縮、純化。操作通常以壓力為推動力，可在常溫下完成，無需添加其它物質，具有高選擇性的優點。膜分離包括微濾，超濾與納濾，都是以壓強差為推動力的過程，其分離機理是膜孔對流體中微粒進行篩分。微濾膜是(MF)指孔徑在0. I-IOum間，超濾膜(UF)孔徑 0. 01-0. Ium間，納濾膜(NF)孔徑一般在0. 001-0. 05um間。通常病毒的粒徑一般介於 0. 01-0. 08um,菌液、病毒具有較小的相對分子量，因此使用超濾膜濃縮抗原，效果好，穩定性強，適於一定規模的生產使用。超濾膜篩分過程，以膜兩側的壓力差為驅動力，以超濾膜為過濾介質，在一定的壓力下，當原液流過膜表面時，超濾膜表面密布的許多細小的微孔只允許水及小分子物質通過而成為透過液，而原液中體積大於膜表面微孔徑的物質則被截留在膜的進液側，成為濃縮液，因而實現對原液的淨化、分離和濃縮的目的。在使用超濾膜膜包對抗原進行濃縮時，完整的膜包能將水分子滲透出去，富集抗原微粒達到濃縮目的。超濾膜分離技術有著產品收率高、效率高、能耗低、操作簡單、環境友好等優勢，在傳統藥品生產中呈現顯著的技術優勢，但是由於膜特殊的高分子結構，再生、清洗、利用頻率較高，會出現膜滲漏現象。事實上，由於構成膜分離系統的膜組件安裝管路複雜，連接點較多，因此為膜工作過程中出現異常時，對分離系統的查漏工作比較困難。膜包的完整性是保證分離效果的前提，而膜包纖維的完整性檢測大都依賴於膜包廠家的檢測方法，而實際應用中發現廠家檢測方法檢測合格的膜包，對病毒分離效果仍然不好。事實上用於病毒分離，對膜包的要求較高，膜纖維細微的破損會造成病毒洩露，從而造成抗原損失和對環境的汙染。目前膜完整性檢測，一般按照設備廠家提供的方法進行泡點試驗法檢測。打開完整性測試裝置的氣源，對系統加壓。在系統加壓過程中，完整性測試裝置上顯示的空氣流速首先將提高，然後下降至一個穩定的流速。測量到的這個穩定的流速就是空氣前進流(擴散流)，如果這個穩定的流速，降低到了可接受規範之下，並且與先前的量值一致，那麼說明通過了膜完整性測試。設備廠家提供的具體檢測方法如下在對膜堆進行完整性檢測之前，系統應該經過充分的清洗和衝洗，殘留的清潔劑會對結果有很大的影響。確定系統清洗好，膜已經完全溼透後，將系統內的水排空，將壓力可調的氣源接在膜堆的進口或回流口，將沒有接氣源的進口或回流口封閉，透過液口是開放的。慢慢加壓到指定氣壓，然後穩定5分鐘讓殘留水排出。測量並記錄氣壓、溫度和從透過口出來的氣體流量，氣體流量可用氣體流量劑測量，比較檢測的流量和規定的指標，如果超濾膜不完整，其所測得空氣流量將大大超過表中流速指標的上限。也有的報導用噪音檢測法，但由於切向流過濾的壓力和流速較大，噪音檢測的方法不可取。

發明內容
本發明所要解決的技術問題是，提供一種在線檢測方法，能檢測膜包是否破損的超濾膜膜包的完整性檢測方法。為了解決上述技術問題，本發明採用的技術方案是一種超濾膜膜包的完整性檢測方法，包括以下步驟(1)首先對新膜包按照廠家標準操作方法正確安裝，開啟機器，待運轉穩定後，進行檢測；(2)進行檢測時，將含有作為標示抗原的新城疫病毒和需要分離的抗原的抗原液經過超濾膜膜包，取膜包滲出液，對取出的滲透液做HA檢測(紅細胞凝集試驗)，測血凝價 HA,如果HA > 31og2,說明超濾膜膜包不完整，檢測結束；如果HA彡31og2,繼續進行下面步驟⑶檢測；(3)取十日齡無特定抗體的雞胚10個，其中8個胚每胚尿囊內接種膜包滲出液 0. 2ml,留2枚作對照，接種後37°C培養120小時，每日照雞胚，觀察2次，如果胚非特異性死亡不超過1個，期間發現死亡的胚立刻置於2-8°C保存，120小時後進行下面步驟(4)檢測；(4)對所有雞胚取胚液測定血凝價HA，如果HA ( 31og2,說明超濾膜膜包的完整， 如果HA > 31og2，說明超濾膜膜包的不完整。所述抗原液中新城疫病毒抗原液按體積比計佔0. 5_1%。所述需要分離的抗原為禽流感病毒或雞新城疫病毒。本發明的有益效果是利用病毒的敏感性，以及病毒對紅細胞的凝集作用，通過檢測凝集價，判定膜包的完整性，方法簡單易行，相比廠家的方法更精確，可用於單個膜包的檢測，多個膜包以及系統的檢測。用病毒的效價檢測膜的完整性，檢測方法簡便易行，並且不用停止生產。
具體實施例方式
下面結合具體實施方式
對本發明作進一步詳細說明本發明的超濾膜膜包的完整性檢測方法，包括以下步驟(1)首先對新膜包按照廠家標準操作方法正確安裝，開啟機器，待運轉穩定後，進行檢測；(2)進行檢測時，將含有作為標示抗原的新城疫病毒和需要分離的抗原的抗原液經過超濾膜膜包，取膜包滲出液，對取出的滲透液做HA檢測(紅細胞凝集試驗)，測血凝價 HA,如果HA > 31og2,說明超濾膜膜包不完整，檢測結束；如果HA彡31og2,繼續進行下面步驟⑶檢測；
(3)取十日齡無特定抗體的雞胚10個，其中8個胚每胚尿囊內接種膜包滲出液 0. 2ml,留2枚作對照，接種後37°C培養120小時，每日照雞胚，觀察2次，如果胚非特異性死亡不超過1個，期間發現死亡的胚立刻置於2-8°C保存，120小時後進行下面步驟(4)檢測；(4)對所有雞胚取胚液測定血凝價HA，如果HA ( 31og2,說明超濾膜膜包的完整， 如果HA > 31og2，說明超濾膜膜包的不完整。所述抗原液中新城疫病毒抗原液按體積比計佔0. 5_1%。所述需要分離的抗原為禽流感病毒或雞新城疫病毒。雞新城疫病毒病毒(NDV)屬於副粘病毒科，副粘病毒屬，核酸為單鏈RNA。成熟的病毒粒子呈球形，直徑為120-300nm。由螺旋形對稱盤繞的核衣殼和囊膜組成。囊膜表面有放射狀排列的纖突，其中含有神經氨酸酶，因此病毒能吸附在禽類的紅血球表面，引起紅血球的凝集。新城疫病毒的半數感染量EID5tl 每0.1ml病毒含量> IO8EID5tlt5雞新城疫病毒的粒徑較小，據有凝血性，稀釋較高滴度時仍有靈敏的凝血現象，同時由於檢測方法簡單易行，可作為靈敏的指示劑。而對抗原含量測定時以通過紅細胞凝集試驗，檢測HA效價為主。並且測定簡便、 快捷、易行，在生產中便於實行。下面具體進行說明測定血凝價HA的方法，又稱紅細胞凝集試驗法，詳見《中華人民共和國獸用生物製品規程》2000年版紅細胞凝集試驗。所採用膜包購於頗爾公司，膜包的截留分子量lOOkd，本超濾膜堆，截留分子量10 萬分子量，有效過濾面積為0. 5m2，壓力0. 6MPa。另外，可以對新膜包按照標準操作方法正確安裝，開啟機器，待運轉穩定後，取下流滲出液，分別測血凝價HA，作為完整性的參照值。下述實施例中的百分比為體積百分比。實施例1(1)首先對新膜包按照廠家標準操作方法正確安裝，開啟機器，待運轉穩定後，進行檢測；(2)進行檢測時，將含有0. 5%作為標示抗原的新城疫病毒和99. 5%需要分離的禽流感病毒的抗原液經過超濾膜膜包，取膜包滲出液10ml，對取出的滲透液做HA檢測(紅細胞凝集試驗)，測血凝價HA，如果HA > 31og2,說明超濾膜膜包不完整，檢測結束；如果 HA ( 31og2，繼續進行下面步驟(3)檢測；(3)取十日齡無特定抗體的雞胚10個，其中8個胚每胚尿囊內接種膜包滲出液 0. 2ml,留2枚作對照，接種後37°C培養120小時，每日照雞胚，觀察2次，如果胚非特異性死亡不超過1個，期間發現死亡的胚立刻置於2-8°C保存，120小時後進行下面步驟(4)檢測；(4)對所有雞胚取胚液(尿囊液和羊水)測定血凝價HA，如果HA ^ 31og2,說明超濾膜膜包的完整，如果HA > 31og2，說明超濾膜膜包的不完整。實施例2(1)首先對新膜包按照廠家標準操作方法正確安裝，開啟機器，待運轉穩定後，進行檢測；
(2)進行檢測時，將含有作為標示抗原的新城疫病毒和99%需要分離的禽流感病毒的抗原液經過超濾膜膜包，取膜包滲出液10ml，對取出的滲透液做HA檢測(紅細胞凝集試驗)，測血凝價HA，如果HA > 31og2,說明超濾膜膜包不完整，檢測結束；如果 HA ( 31og2，繼續進行下面步驟(3)檢測；(3)取十日齡無特定抗體的雞胚10個，其中8個胚每胚尿囊內接種膜包滲出液 0. 2ml,留2枚作對照，接種後37°C培養120小時，每日照雞胚，觀察2次，如果胚非特異性死亡不超過1個，期間發現死亡的胚立刻置於2-8°C保存，120小時後進行下面步驟(4)檢測；(4)對所有雞胚取胚液(尿囊液和羊水)測定血凝價HA，如果HA ^ 31og2,說明超濾膜膜包的完整，如果HA > 31og2，說明超濾膜膜包的不完整。實施例3(1)首先對新膜包按照廠家標準操作方法正確安裝，開啟機器，待運轉穩定後，進行檢測；(2)進行檢測時，將新城疫病毒的抗原液經過超濾膜膜包，取膜包滲出液10ml，對取出的滲透液做HA檢測(紅細胞凝集試驗)，測血凝價HA，如果HA > 31og2,說明超濾膜膜包不完整，檢測結束；如果HA ( 31og2，繼續進行下面步驟(3)檢測；(3)取十日齡無特定抗體的雞胚10個，其中8個胚每胚尿囊內接種膜包滲出液 0. 2ml,留2枚作對照，接種後37°C培養120小時，每日照雞胚，觀察2次，如果胚非特異性死亡不超過1個，期間發現死亡的胚立刻置於2-8°C保存，120小時後進行下面步驟(4)檢測；(4)對所有雞胚取胚液(尿囊液和羊水)測定血凝價HA，如果HA ^ 31og2,說明超濾膜膜包的完整，如果HA > 31og2，說明超濾膜膜包的不完整。綜上所述，本發明的內容並不局限在上述的實施例中，相同領域內的有識之士可以在本發明的技術指導思想之內可以輕易提出其他的實施例，但這種實施例都包括在本發明的範圍之內。
權利要求
1.一種超濾膜膜包的完整性檢測方法，其特徵在於，包括以下步驟(1)首先對新膜包按照廠家標準操作方法正確安裝，開啟機器，待運轉穩定後，進行檢測；(2)進行檢測時，將含有作為標示抗原的新城疫病毒和需要分離的抗原的抗原液經過超濾膜膜包，取膜包滲出液，對取出的滲透液做HA檢測，測血凝價HA，如果HA > 31og2,說明超濾膜膜包不完整，檢測結束；如果HA彡31og2，繼續進行下面步驟(3)檢測；(3)取十日齡無特定抗體的雞胚10個，其中8個胚每胚尿囊內接種膜包滲出液0.2ml, 留2枚作對照，接種後37°C培養120小時，每日照雞胚，觀察2次，如果胚非特異性死亡不超過1個，期間發現死亡的胚立刻置於2-8°C保存，120小時後進行下面步驟(4)檢測；(4)對所有雞胚取胚液測定血凝價HA，如果HA^ 31og2,說明超濾膜膜包的完整，如果 HA > 31og2，說明超濾膜膜包的不完整。
2.根據權利要求1所述的超濾膜膜包的完整性檢測方法，其特徵在於，所述抗原液中新城疫病毒抗原液按體積比計佔0. 5-1%。
3.根據權利要求1所述的超濾膜膜包的完整性檢測方法，其特徵在於，所述需要分離的抗原為禽流感病毒或雞新城疫病毒。
全文摘要
本發明公開了一種超濾膜膜包的完整性檢測方法，首先對新膜包按照標準操作方法正確安裝，開啟機器，待運轉穩定後，對取出的滲透液做HA檢測，測血凝價HA，如果HA＞3log2，說明超濾膜膜包不完整，檢測結束；如果HA≤3log2，繼續進行檢測；通過選取敏感病毒、針對其透出液接種雞胚，經過培養後通過生物檢測方法，測定該病毒是否存在於透出液，說明被測超濾膜膜包是否完整。本發明方法簡單易行，可在線檢測，相比廠家的方法更精確，可用於單個膜包的檢測，多個膜包以及系統的檢測。
文檔編號B01D65/10GK102430340SQ201110360538
公開日2012年5月2日 申請日期2011年11月15日 優先權日2011年11月15日
發明者劉建, 楊旭, 範營國, 陳利紅, 韓春賀 申請人:天津瑞普高科生物藥業有限公司