Oletf大鼠空腹血糖升高模型的製備方法
2023-06-13 18:06:26
專利名稱：：Oletf大鼠空腹血糖升高模型的製備方法
技術領域：
：本發明涉及動物學的醫學用模型，或專用於特定動物的飼料，具體是一種OLETF大鼠空腹血糖升高模型的製備方法。
背景技術：
：糖尿病動物模型主要分為三類自發遺傳性動物模型、實驗性動物模型、轉基因動物模型。1、自發性2型糖尿病動物模型自發性糖尿病是指動物未經過任何有意識的人工處置，在自然情況下發生的DM。OLETF大鼠就是其中一種，但其自然病程較長。2、實驗性2型糖尿病動物模型(1)特殊膳食誘導，即高脂飲食。(2)鏈脲菌素(str印tozocin，STZ)誘導。(3)STZ/四氧嘧啶加膳食誘導的模型(STZanddietinduceddiabetes):給予實驗動物少量stz，破壞一部分胰島e細胞功能，同時飼以高脂肪飼料。3、基因敲除複製2型糖尿病模型研究者按照自己的意願，藉助於實驗手段來控制實驗動物的特定基因組分及其表達等，而使動物表現特有的遺傳性狀。現在實驗室多採用餵養+藥物誘髮型(如鏈脲佐菌素，STZ)聯合居多。藥物誘導雖具有發病率高、造模時間短、病情嚴重程度較統一等特點，但由於對胰腺的破壞，故並不能完全模擬大多數自然人群的早期代謝異常狀態。0LETF(0tskuaLong—EvnasTokushimaFatty)大鼠是1982年日本大家公司從加拿大購進Long—Evnas大鼠進行遠交系雜交，選擇體重〉400g的雄性子代與體重大致正常的9一10周雌性子代交配，經過20代的傳代篩選，於1984年成功建立的一種自發性2型糖尿病鼠種。其膽囊收縮素(CCK)-A受體mRNA的表達完全缺失，攜帶的0DB1和0DB2基因與糖尿病的發病有關。多食、少動、肥胖和出現糖尿病的臨床表現為主要特徵。文獻報導？，0LETF自8周齡起餐後血糖明顯高於對照，但空腹血糖升高始終不很明顯。OLETF大鼠早期胰腺胰島素分泌功能與對照組無差異，12周齡發生胰島細胞功能損壞。24周齡時血漿胰島素代償性增加，40周齡後胰島分泌功能降低。同時血脂水平也明顯升高。尿蛋白自30周齡起明顯增多，且隨年齡增加而加重。65周以後，血糖值高達25mmol/L，而免疫反應性胰島素(IRI)水平卻低於40pmol/L。該模型早期以胰島素抵抗以及糖脂代謝紊亂為主，以後隨著病程發展，逐漸出現胰腺功能減退，合併出現糖尿病腎臟病變，其不同階段的病理生理變化，與臨床2型糖尿病患者的病理表現極為相似。高脂飲食是2型糖尿病及胰島素抵抗症候群發病的重要環境因素。高脂餵養非遺傳性2型糖尿病大鼠本身可誘發大鼠胰島素抵抗。自發性2型糖尿病大鼠0LETF由於其飼養時間長限制了其在試驗中的使用。中國專利101095958公開了一種"2型糖尿病大鼠模型的製備方法"，其其是先用鏈脲佐菌素造成新生鼠胰島e細胞對糖反應性降低，對斷乳大鼠再次小劑量注射鏈脲佐菌素，造成胰島輕度損傷，同時給予高糖高脂飲食誘導，使產生胰島素抵抗，得到2型糖尿病大鼠模型。採用本發明方法製備的大鼠模型具有高空腹血糖、高胰島素血症、糖耐量低減、胰島素抵抗等2型糖尿病的典型症狀，是理想的2型糖尿病大鼠模型，並且縮短了造模時間，模型成功率高。
發明內容本發明就是為了解決OLETF大鼠造模時間長、飼養時間長的問題，而提供一種加速造模的OLETF大鼠空腹血糖升高模型的製備方法。本發明是按照以下技術方案實現的。一種OLETF大鼠空腹血糖升高模型的製備方法，其特徵在於0LETF鼠於6-8周齡開始餵養高脂飼料，所述的高脂飼料是按以下重量百分比的原料組成的，60-65%標準飼料，10-12%蛋黃粉、10-12%豬油、8-12%無糖全脂奶粉、2-4%蔗糖、1-2%水；所述0LETF大鼠於8周齡開始餵養高脂飼料，所述高脂飼料是按以下重量百分比的原料組成的，60%標準飼料，10%蛋黃粉、12%豬油、12%無糖全脂奶粉、4%蔗糖、2%水。這樣設計的本發明使高脂飲食的環境因素和遺傳性相結合，使OLETF大鼠造模更加模擬人類2型糖尿病的發病過程，更加有利於研究人員對2型糖尿病的研究；與此同時本發明還縮短了OLETF大鼠發展成為糖尿病的時間，加速造模，節省實驗時間周期，降低試驗成本。具體實施例方式一、依據根據胰腺的病理改變可將OLETF大鼠的病程分為三個階段。早期6-20周，此階段胰腺結構及功能基本正常。胰腺增生期20-40周，此階段胰島出現纖維化，並且纖維化逐漸加重。由於胰島被纖維組織分割或完全替代，此階段開始出現胰島的增生。4晚期40周以後胰島被結締組織取代更為嚴重。因此本方法決定於8周時給大鼠以高脂飼料。一、餵養時間本發明自8周開始以一種高脂飼料餵養0LETF大鼠，二、餵養飼料所述高脂飼料是採用600g標準飼料，100g蛋黃粉、120g豬油、120g無糖全脂奶粉、40g蔗糖、20ml水混合均勻，揉擠成麵團狀。即食即做；或依據飼養情況，製作後-4"C保存。由於含脂肪較高，故呈軟料狀態，而非常規飼料的硬質狀態。這樣製成的高脂飼料中脂肪含量21%，這21%的脂肪幾乎都來自豬油，其主要成分為飽和脂肪酸。所述標準飼料的組分及其配比採用的是玉米粉34%、大麥粉30%、麩皮18%、豆粕12%、骨粉4%、酵母1%、植物油0.5%、鹽0.5%。標準飼料的營養素熱量組成比例為脂肪10%、蛋白22%、碳水化合物68%。四、結果空腹血糖診斷標準空腹血糖>11.lmmol/L。按照上述方法製備的高脂飼料餵養OLETF大鼠，至40周時已有50%的大鼠空腹血糖升高達到糖尿病的診斷標準，44周時已有60%大鼠達到診斷標準，參見表1-2。2、葡萄糖耐量降低(IGT)診斷標準血糖峰值>16.8mmol/L，或120分鐘血>11.2mmol/L。餵養上述高脂飼料48周時80。/。的OLETF大鼠已發展為葡萄糖耐量降低，血糖峰值>16.8mmol/L，或120分鐘血糖〉11.2mmol/L。參見表3-4。表l糖尿病累計發病率tableseeoriginaldocumentpage5表2不同周齡空腹血糖比較平均空腹血糖濃度(mmol/L)標準差22周6.370.4840周14.137.244周13.626.2548周15.47.11表3不同周齡0GTT實驗(mmol/L)120分鐘22周48周6.37±0.486.65±0.7515.4±71121.11±9.38(0GTT:葡萄糖負荷後血漿葡萄糖水平)表4糖耐j匱減低發生率糖耐量減低糖耐量未減低22周48周010(100%)8(80%)2(20%)權利要求1.一種OLETF大鼠空腹血糖升高模型的製備方法，其特徵在於OLETF大鼠於6-8周齡開始餵養高脂飼料，所述的高脂飼料是按以下重量百分比的原料組成的，60-65％標準飼料，10-12％蛋黃粉、10-12％豬油、8-12％無糖全脂奶粉、2-4％蔗糖、1-2％水。2根據權利要求1所述0LETF大鼠空腹血糖升高模型的製備方法，其特徵在於0LETF大鼠於8周齡開始餵養高脂飼料，高脂飼料是按以下重量百分比的原料組成的，60%標準飼料，10%蛋黃粉、12%豬油、12%無糖全脂奶粉、4%蔗糖、2%水。全文摘要本發明公開了一種OLETF大鼠空腹血糖升高模型的製備方法，屬於動物學的醫學用模型，或專用於特定動物的飼料。本發明於OLETF鼠於6-8周齡開始餵養高脂飼料，所述的高脂飼料是按以下重量百分比的原料組成的，60-65％標準飼料，10-12％蛋黃粉、10-12％豬油、8-12％無糖全脂奶粉、2-4％蔗糖、水1-2％。這樣餵養的OLETF鼠更加模擬人類2型糖尿病的發病過程，更加有利於對2型糖尿病的研究，同時，本發明還縮短了OLETF大鼠發展成為糖尿病的時間，加速造模，節省實驗時間周期，降低試驗成本。文檔編號A01K67/02GK101637146SQ200910306270公開日2010年2月3日申請日期2009年8月28日優先權日2009年8月28日發明者姚瑞棟,田鳳石,趙紫琴,鄭喜蘭,榮雒申請人:天津市公安醫院