一種常春藤皂苷類成分的製備方法及其抗腫瘤的用途的製作方法
2023-06-02 15:11:06
專利名稱：一種常春藤皂苷類成分的製備方法及其抗腫瘤的用途的製作方法
技術領域：
本發明屬於醫藥、獸藥技術領域，涉及一種常春藤皂苷類成分3-0-α-L-吡喃鼠李糖-(1 — 2) [ β-D-吡喃葡萄糖-(1 — 4)]-α-L-吡喃阿拉伯糖常春藤皂苷的製備方法及其該成分抗腫瘤的用途，如用於肝癌、胃癌、膠質瘤、乳腺癌、宮頸癌、白血病、結腸癌、 淋巴癌等。本發明還涉及來自白頭翁(Rilsatilla chinensis (Bunge) Regel)根莖的含有該化合物的提取物作為抗上述腫瘤的用途。
背景技術：
白頭翁藥材取自毛茛科白頭翁屬植物白頭翁的乾燥根，味苦，性寒。歸胃、大腸經， 具清熱解毒，涼血止痢之功。用於熱毒血痢，陰癢帶下，阿米巴痢。據文獻報導，白頭翁中含原白頭翁素(Protoanemonin)、白頭翁素(Anemonin)、白頭翁靈(Okinalin，C32H4602)、白頭翁英(0kinalein，C4H602)等，近年來國內外學者從白頭翁屬植物中分離鑑定出幾十種五環三萜皂苷成分，這些皂苷主要為齊墩果烷型和羽扇豆烷型兩種。白頭翁屬植物具有廣泛的藥理及生物活性，主要表現在抗腫瘤、抗炎抗菌、抗病毒、細胞凋亡、抗生物酶、殺蟲、殺精等作用。經過反覆研究發現，白頭翁的水提液、醇提液及其鹼水解產物均具有抗腫瘤活性， 尤其是鹼水解產物，活性更強，經過進一步成分分析研究，發現其中均含有一系列的常春藤皂苷類成分。韓國人金松倍申請的專利(CN 1308000C)中所涉及的抗腫瘤藥理活性均為肺癌模型。從《中國腫瘤生物治療雜誌》雜誌2005年第12卷第1期的文獻「Vl-觀膠囊輔助環磷醯胺治療荷載LLC腫瘤小鼠的實驗研究」、《第三軍醫大學學報》雜誌2007年第四卷第11 期的文獻「不同活化表型的巨噬細胞對Lewis肺癌細胞增殖和侵襲的影響」、《中國腫瘤臨床》雜誌2007年第34卷第2期的文獻「I L-I 2瘤苗聯合放療對小鼠Lewis肺癌作用研究」等文獻可以看出，LLC為Lewis lung cancer的簡寫，即為Lewis肺癌。『Increased PEA3/E1AF and decreased Net/Elk-3, both ETS proteins, characterize human NSCLC progression and regulate caveolin-1 transcription in Calu-I and NCI—H23 NSCLC cell lines」等文獻可以看出，NCI-H23為人非小細胞肺癌細胞系。因此CN 1308000C涉及的抗腫瘤專利實際上只是抗肺癌的實體瘤，並不涉及除肺癌以外的其他實體瘤。CN 1308000C也缺乏治療肺癌以外的其他實體瘤的實驗依據。另外BTW58組分、化合物I經過我們的實驗，證明對人腎癌、人鼻咽癌等體內裸鼠異體移植瘤無明顯的抗癌活性。CN 1308000C將抗肺癌的實驗數據推測為可抗所有實體瘤也缺乏實驗依據。 發明內容
本發明利用現代分離技術及鑑定手段對白頭翁進行系統的化學成分分離，從中分離得到一種常春藤皂苷類成分3-0-a-L-吡喃鼠李糖-(1 — 2) [ β-D-吡喃葡萄糖-(1 — 4)]-α -L-吡喃阿拉伯糖常春藤皂苷，通過體外抗腫瘤活性篩選研究，發現該化合物具有顯著的抗腫瘤作用，然而，該成分在白頭翁藥材中的含量不高；同時研究發現， 白頭翁的水提物和醇提物均具有一定的抗腫瘤作用，而其鹼水解產物的活性明顯強於水解前，成分分析發現，鹼水解後產物中3-0-α-L-吡喃鼠李糖-(1 — 2) [ β-D-吡喃葡萄糖-(1 —4)]-a_L-吡喃阿拉伯糖常春藤皂苷的含量較水解前大大提高。白頭翁藥材資源豐富，水解產物活性明確，製備工藝簡單易行，適合工業化大量生產，可作為製備抗腫瘤藥物，具有廣闊的市場前景和開發價值。本發明的技術方案如下
1、3-0-α -L-吡喃鼠李糖- α — 2) [ β -D-吡喃葡萄糖_(1 — 4)]-α -L-吡喃阿拉伯糖常春藤皂苷在製備抗腫瘤藥物中的應用。2、含有3-0-α-L-吡喃鼠李糖-(1 — 2) [ β _D_吡喃葡萄糖-(1 — 4) ] - α-L-吡喃阿拉伯糖常春藤皂苷的白頭翁提取物在製備抗腫瘤藥物中的應用。3、3-0_a-L-吡喃鼠李糖-(1 — 2) [ β-D-吡喃葡萄糖-(1 — 4)]-a-L-吡喃阿拉伯糖常春藤皂苷在製備抗肝癌、胃癌、膠質瘤、乳腺癌、宮頸癌、白血病、結腸癌、淋巴癌藥物中的應用。4、含有3-0-a-L-吡喃鼠李糖-(1 — 2) [ β _D_吡喃葡萄糖-(1 — 4) ] - a-L-吡喃阿拉伯糖常春藤皂苷的白頭翁提取物在製備抗肝癌、胃癌、膠質瘤、乳腺癌、宮頸癌、白血病、結腸癌、淋巴癌藥物中的應用。5、3-0-a-L_吡喃鼠李糖-(1 — 2) [ β-D-吡喃葡萄糖-(1 — 4)]-a-L-吡喃阿拉伯糖常春藤皂苷的製備方法，包括以下步驟
第一步，將白頭翁藥材粉碎成粗粉，用水或0. 1-95%乙醇浸泡0. 5-池，6-12倍量加熱回流提取2-3次，每次l-3h，過濾，合併濾液。上述濾液於50-70°C減壓濃縮至0. 5-1. Og生藥材/mL，無醇味，0-4°C冷藏過夜，析膠，濾過，即得白頭翁提取物。第二步，白頭翁提取物水溶液中加入氫氧化鈉溶液調到PH10-13，加熱沸騰4-10 小時，每30-60分鐘測PH，保持在PH10-13，放冷，加鹽酸溶液，調PH 3-7,離心，去沉澱，即得白頭翁提取物水解液
第三步，白頭翁提取物水解液，經過DlOl或AB-8或ADS-17大孔樹脂吸附，依次用水、 30-40%乙醇、50-80%乙醇、95%乙醇洗脫，收集50-80%乙醇洗脫部分，即得BTW58組分。經抗腫瘤藥理實驗，證明BTW58組分為白頭翁抗腫瘤有效部位。第四步、白頭翁抗腫瘤有效部位經ODS反相矽膠柱，用甲醇和水(3 7-10 0)的混合液進行梯度洗脫，梯度洗脫液依次有五組，其體積配比分別為
第一組甲醇5份水5份； 第二組甲醇6份水4份； 第三組甲醇7份水3份； 第四組甲醇8份水2份； 第五組甲醇9份水1份；
第五步、收集甲醇8份冰2份的洗脫部分，經kphadex LH-20柱甲醇-水7 3洗脫，得到化合物I，經對照品比較及LC/MS/MS測試，該化合物為3-0-α -L-吡喃鼠李糖-(1 — 2) [β-D-吡喃葡萄糖-(1 — 4)]-α-L-吡喃阿拉伯糖常春藤皂苷。本發明所涉及的腫瘤是除肺癌以外的實體瘤。本發明所述的常春藤皂苷類成分是單一成分的化合物，其化學名稱為 3-0- α -L-吡喃鼠李糖-(1 — 2) [ β -D-吡喃葡萄糖-(1 — 4) ] - α -L-吡喃阿拉伯糖常春
藤皂苷。春藤皂苷。
圖1是3-0- α -L-吡喃鼠李糖-(1 — 2) [ β -D-吡喃葡萄糖-(1 — 4) ] - α -L-吡喃阿拉伯糖常春藤皂苷的分子結構式； 圖2是BTW58組分的HPLC分析圖3是3-0- α -L-吡喃鼠李糖-(1 — 2) [ β -D-吡喃葡萄糖-(1 — 4) ] - α -L-吡喃阿拉伯糖常春藤皂苷的核磁共振碳譜圖。具體實施例
3-0- α -L-吡喃鼠李糖-(1 — 2) [ β -D-吡喃葡萄糖-(1 — 4) ] - α -L-吡喃阿拉伯糖常春藤皂苷的製備方法為 實施案例1
第一步，將白頭翁藥材粉碎成粗粉，用水浸泡0. 5-2h,6-12倍量加熱回流提取2-3次， 每次l_3h，過濾，合併濾液。上述濾液於50-70°C減壓濃縮至0. 5-1. Og生藥材/mL，0_4°C冷藏過夜，析膠，濾過，即得白頭翁提取物。第二步，白頭翁提取物水溶液中加入氫氧化鈉溶液調到PH10-13，加熱沸騰4-10 小時，每30-60分鐘測PH，保持在PH10-13，放冷，加鹽酸溶液，調PH 3-7,離心，去沉澱，即得白頭翁提取物水解液
第三步，白頭翁提取物水解液，經過DlOl或AB-8或ADS-17大孔樹脂吸附，依次用水、 30-40%乙醇、50-80%乙醇、95%乙醇洗脫，收集50-80%乙醇洗脫部分，即得BTW58組分。經抗腫瘤藥理實驗，證明BTW58組分為白頭翁抗腫瘤有效部位。第四步、白頭翁抗腫瘤有效部位經ODS反相矽膠柱，用甲醇和水(3:7-10:0)的混合液進行梯度洗脫，梯度洗脫液依次有五組，其體積配比分別為
第一組甲醇5份水5份； 第二組甲醇6份水4份； 第三組甲醇7份水3份； 第四組甲醇8份水2份； 第五組甲醇9份水1份；
第五步、收集甲醇8份冰2份的洗脫部分，經kphadex LH-20柱甲醇-水7 3洗脫， 得到化合物I，經對照品比較及LC/MS/MS測試，該化合物為3-0- α -L-吡喃鼠李糖-(1 — 2) [β-D-吡喃葡萄糖-(1 — 4)]-α-L-吡喃阿拉伯糖常春藤皂苷。實施案例2
第一步，將白頭翁藥材粉碎成粗粉，用10-45%乙醇浸泡0. 5-2h,6-12倍量加熱回流提取2-3次，每次l-3h，過濾，合併濾液。上述濾液於50-70°C減壓濃縮至0. 5-1. Og生藥材/mL，無醇味，0-4°C冷藏過夜，析膠，濾過，即得白頭翁提取物。第二步，白頭翁提取物水溶液中加入氫氧化鈉溶液調到PH10-13，加熱沸騰4-10 小時，每30-60分鐘測PH，保持在PH10-13，放冷，加鹽酸溶液，調PH 3-7,離心，去沉澱，即得白頭翁提取物水解液
第三步，白頭翁提取物水解液，經過DlOl或AB-8或ADS-17大孔樹脂吸附，依次用水、 30-40%乙醇、50-80%乙醇、95%乙醇洗脫，收集50-80%乙醇洗脫部分，即得BTW58組分。經抗腫瘤藥理實驗，證明BTW58組分為白頭翁抗腫瘤有效部位。第四步、白頭翁抗腫瘤有效部位經ODS反相矽膠柱，用甲醇和水(3 7-10 0)的混合液進行梯度洗脫，梯度洗脫液依次有五組，其體積配比分別為
第一組甲醇5份水5份； 第二組甲醇6份水4份； 第三組甲醇7份水3份； 第四組甲醇8份水2份； 第五組甲醇9份水1份；
第五步、收集甲醇8份冰2份的洗脫部分，經kphadex LH-20柱甲醇-水7 3洗脫， 得到化合物I，經對照品比較及LC/MS/MS測試，該化合物為3-0- α -L-吡喃鼠李糖-(1 — 2) [β-D-吡喃葡萄糖-(1 — 4)]-α-L-吡喃阿拉伯糖常春藤皂苷。
實施案例3
第一步，將白頭翁藥材粉碎成粗粉，用45-95%乙醇浸泡0. 5-2h,6-12倍量加熱回流提取2-3次，每次l-3h，過濾，合併濾液。上述濾液於50-70°C減壓濃縮至0. 5-1. Og生藥材/ mL，無醇味，0-4°C冷藏過夜，析膠，濾過，即得白頭翁提取物。第二步，白頭翁提取物水溶液中加入氫氧化鈉溶液調到PH10-13，加熱沸騰4-10 小時，每30-60分鐘測PH，保持在PH10-13，放冷，加鹽酸溶液，調PH 3-7,離心，去沉澱，即得白頭翁提取物水解液
第三步，白頭翁提取物水解液，經過DlOl或AB-8或ADS-17大孔樹脂吸附，依次用水、 30-40%乙醇、50-80%乙醇、95%乙醇洗脫，收集50-80%乙醇洗脫部分，即得BTW58組分。經抗腫瘤藥理實驗，證明BTW58組分為白頭翁抗腫瘤有效部位。第四步、白頭翁抗腫瘤有效部位經ODS反相矽膠柱，用甲醇和水(3:7-10:0)的混合液進行梯度洗脫，梯度洗脫液依次有五組，其體積配比分別為
第一組甲醇5份水5份； 第二組甲醇6份水4份； 第三組甲醇7份水3份； 第四組甲醇8份水2份； 第五組甲醇9份水1份；
第五步、收集甲醇8份冰2份的洗脫部分，經kphadex LH-20柱甲醇-水7 3洗脫， 得到化合物I，經對照品比較及LC/MS/MS測試，該化合物為3-0- α -L-吡喃鼠李糖-(1 — 2) [β-D-吡喃葡萄糖-(1 — 4)]-α-L-吡喃阿拉伯糖常春藤皂苷。實施例4、第一步，將白頭翁藥材粉碎成粗粉，用0. 1%乙醇浸泡0. 5-2h,6-12倍量加熱回流提取 2-3次，每次l-3h，過濾，合併濾液。上述濾液於50-70°C減壓濃縮至0. 5-1. Og生藥材/mL， 無醇味，0-4°C冷藏過夜，析膠，濾過，即得白頭翁提取物。第二步，白頭翁提取物水溶液中加入氫氧化鈉溶液調到PH10-13，加熱沸騰4-10 小時，每30-60分鐘測PH，保持在PH10-13，放冷，加鹽酸溶液，調PH 3-7,離心，去沉澱，即得白頭翁提取物水解液
第三步，白頭翁提取物水解液，經過DlOl或AB-8或ADS-17大孔樹脂吸附，依次用水、 30-40%乙醇、50-80%乙醇、95%乙醇洗脫，收集50-80%乙醇洗脫部分，即得BTW58組分。經抗腫瘤藥理實驗，證明BTW58組分為白頭翁抗腫瘤有效部位。第四步、白頭翁抗腫瘤有效部位經ODS反相矽膠柱，用甲醇和水(3 7-10 0)的混合液進行梯度洗脫，梯度洗脫液依次有五組，其體積配比分別為
第一組甲醇5份水5份； 第二組甲醇6份水4份； 第三組甲醇7份水3份； 第四組甲醇8份水2份； 第五組甲醇9份水1份；
第五步、收集甲醇8份冰2份的洗脫部分，經kphadex LH-20柱甲醇-水7 3洗脫， 得到化合物I，經對照品比較及LC/MS/MS測試，該化合物為3-0-α -L-吡喃鼠李糖-(1 — 2) [β-D-吡喃葡萄糖-(1 — 4)]-α-L-吡喃阿拉伯糖常春藤皂苷。實施例5、
第一步，將白頭翁藥材粉碎成粗粉，用20%乙醇浸泡0. 5-2h,6-12倍量加熱回流提取 2-3次，每次l-3h，過濾，合併濾液。上述濾液於50-70°C減壓濃縮至0. 5-1. Og生藥材/mL， 無醇味，0-4°C冷藏過夜，析膠，濾過，即得白頭翁提取物。第二步，白頭翁提取物水溶液中加入氫氧化鈉溶液調到PH10-13，加熱沸騰4-10 小時，每30-60分鐘測PH，保持在PH10-13，放冷，加鹽酸溶液，調PH 3-7,離心，去沉澱，即得白頭翁提取物水解液
第三步，白頭翁提取物水解液，經過DlOl或AB-8或ADS-17大孔樹脂吸附，依次用水、 30-40%乙醇、50-80%乙醇、95%乙醇洗脫，收集50-80%乙醇洗脫部分，即得BTW58組分。經抗腫瘤藥理實驗，證明BTW58組分為白頭翁抗腫瘤有效部位。第四步、白頭翁抗腫瘤有效部位經ODS反相矽膠柱，用甲醇和水(3:7-10:0)的混合液進行梯度洗脫，梯度洗脫液依次有五組，其體積配比分別為
第一組甲醇5份水5份； 第二組甲醇6份水4份； 第三組甲醇7份水3份； 第四組甲醇8份水2份； 第五組甲醇9份水1份；
第五步、收集甲醇8份冰2份的洗脫部分，經kphadex LH-20柱甲醇-水7 3洗脫， 得到化合物I，經對照品比較及LC/MS/MS測試，該化合物為3-0-α -L-吡喃鼠李糖-(1 — 2) [β-D-吡喃葡萄糖-(1 — 4)]-α-L-吡喃阿拉伯糖常春藤皂苷。
實施例6、
第一步，將白頭翁藥材粉碎成粗粉，用65%乙醇浸泡0. 5-2h,6-12倍量加熱回流提取 2-3次，每次l-3h，過濾，合併濾液。上述濾液於50-70°C減壓濃縮至0. 5-1. Og生藥材/mL， 無醇味，0-4°C冷藏過夜，析膠，濾過，即得白頭翁提取物。第二步，白頭翁提取物水溶液中加入氫氧化鈉溶液調到PH10-13，加熱沸騰4-10 小時，每30-60分鐘測PH，保持在PH10-13，放冷，加鹽酸溶液，調PH 3-7,離心，去沉澱，即得白頭翁提取物水解液
第三步，白頭翁提取物水解液，經過DlOl或AB-8或ADS-17大孔樹脂吸附，依次用水、 30-40%乙醇、50-80%乙醇、95%乙醇洗脫，收集50-80%乙醇洗脫部分，即得BTW58組分。經抗腫瘤藥理實驗，證明BTW58組分為白頭翁抗腫瘤有效部位。第四步、白頭翁抗腫瘤有效部位經ODS反相矽膠柱，用甲醇和水(3:7-10:0)的混合液進行梯度洗脫，梯度洗脫液依次有五組，其體積配比分別為
第一組甲醇5份水5份； 第二組甲醇6份水4份； 第三組甲醇7份水3份； 第四組甲醇8份水2份； 第五組甲醇9份水1份；
第五步、收集甲醇8份冰2份的洗脫部分，經kphadex LH-20柱甲醇-水7 3洗脫， 得到化合物I，經對照品比較及LC/MS/MS測試，該化合物為3-0- α -L-吡喃鼠李糖-(1 — 2) [β-D-吡喃葡萄糖-(1 — 4)]-α-L-吡喃阿拉伯糖常春藤皂苷。實施例7、
第一步，將白頭翁藥材粉碎成粗粉，用95%乙醇浸泡0. 5-2h,6-12倍量加熱回流提取 2-3次，每次l-3h，過濾，合併濾液。上述濾液於50-70°C減壓濃縮至0. 5-1. Og生藥材/mL， 無醇味，0-4°C冷藏過夜，析膠，濾過，即得白頭翁提取物。第二步，白頭翁提取物水溶液中加入氫氧化鈉溶液調到PH10-13，加熱沸騰4-10 小時，每30-60分鐘測PH，保持在PH10-13，放冷，加鹽酸溶液，調PH 3-7,離心，去沉澱，即得白頭翁提取物水解液
第三步，白頭翁提取物水解液，經過DlOl或AB-8或ADS-17大孔樹脂吸附，依次用水、 30-40%乙醇、50-80%乙醇、95%乙醇洗脫，收集50-80%乙醇洗脫部分，即得BTW58組分。經抗腫瘤藥理實驗，證明BTW58組分為白頭翁抗腫瘤有效部位。第四步、白頭翁抗腫瘤有效部位經ODS反相矽膠柱，用甲醇和水(3:7-10:0)的混合液進行梯度洗脫，梯度洗脫液依次有五組，其體積配比分別為
第一組甲醇5份水5份； 第二組甲醇6份水4份； 第三組甲醇7份水3份； 第四組甲醇8份水2份； 第五組甲醇9份水1份；
第五步、收集甲醇8份冰2份的洗脫部分，經kphadex LH-20柱甲醇-水7 3洗脫， 得到化合物I，經對照品比較及LC/MS/MS測試，該化合物為3-0-α -L-吡喃鼠李糖-(1 — 2)[β-D-吡喃葡萄糖-(1 — 4)]-α-L-吡喃阿拉伯糖常春藤皂苷。研究發現，在白頭翁的乙醇提取物中，含有3-0- α -L-吡喃鼠李糖-(1 — 2)[ β -D-吡喃葡萄糖-(1 — 4)]-α -L-吡喃阿拉伯糖常春藤皂苷，但含量明顯低於經鹼水解後的BTW58組分。實施案例3中的BTW58組分和化合物I的得率及含量均高於實施案例1和2，同時，與韓國人金松倍申請的專利(CN 1308000C)及金松培申請的專利(CN 101010093Α)中的製備工藝不同，我們鹼水解工藝簡單可行，生產成本低，收率較高，適合工業化大生產。BTW58 組分 HPLC 分析
色譜柱，未加預柱，壓力偏大=Kromasil (C18, 250*4. 6mm，5um);流速:lml/min ；柱溫 350C ；進樣量20ul ；洗脫系統甲醇-水系統
ELSD :SHIMADZU ELSD-LT II ；柱溫40°C ；Press :350Kpa
梯度條件時間(min)甲醇(％)
0.0165
1070
3070
50100
55100
55.01STOP 化合物I結構解析
白色無定形粉末，硫酸乙醇顯紫紅色斑點，醋酐-濃硫酸反應陽性，Molish反應陽性， 提示該化合物可能為皂苷類化合物。化合物I用2N TFA完全酸水解得到常春藤皂苷元和單糖，糖經衍生化後進行GC分析，檢測到L-阿拉伯糖、L-鼠李糖和D-葡萄糖的存在。13C NMR譜共顯示47個碳信號，包括30個苷元碳信號。其中苷元碳信號與常春藤苷元基本一致。3位碳向低場位移至δ 81.2二8位羰基碳信號在δ 180. 2，說明該化合物的糖是連在苷元的3位上。13C NMR譜中出現了 3個糖信號，結合NMR數據和水解衍生化後的GC分析結果，證明其分別為L-阿拉伯糖、L-鼠李糖和D-葡萄糖。另外，13C NMR譜中顯示，在δ 106. 9，104. 5和101. 8位置出現3個糖對應的端基碳信號。經過上述分析，並禾口公開的文獻[Opinya A. Ekabo, Norman R. Farnsworth, Henderson Τ. , et al. J Nat Prod, 1996，59:431-434]中的數據進行比較，證明化合物I的結構為3_0_ α -L-吡喃鼠李糖-(1 —2)[ β-D-吡喃葡萄糖-(1 — 4)]-α-L-吡喃阿拉伯糖常春藤皂苷。13C NMR譜數據歸屬見表1。表1 化合物I的碳譜數據(Pyridine-(I6)
權利要求
1.3-0- α -L-吡喃鼠李糖-(1 — 2) [ β -D-吡喃葡萄糖-(1 — 4) ] - α -L-吡喃阿拉伯糖常春藤皂苷在製備抗腫瘤藥物中的應用。
2.含有3-0-α -L-吡喃鼠李糖-(1 — 2) [ β -D-吡喃葡萄糖-(1 — 4) ] - α -L-吡喃阿拉伯糖常春藤皂苷的白頭翁提取物在製備抗腫瘤藥物中的應用。
3.3-0- α -L-吡喃鼠李糖-(1 — 2) [ β -D-吡喃葡萄糖-(1 — 4) ] - α -L-吡喃阿拉伯糖常春藤皂苷在製備抗肝癌、胃癌、膠質瘤、乳腺癌、宮頸癌、白血病、結腸癌、淋巴癌藥物中的應用。
4.含有3-0-α -L-吡喃鼠李糖-(1 — 2) [ β -D-吡喃葡萄糖-(1 — 4) ] - α -L-吡喃阿拉伯糖常春藤皂苷的白頭翁提取物在製備抗肝癌、胃癌、膠質瘤、乳腺癌、宮頸癌、白血病、 結腸癌、淋巴癌藥物中的應用。
5.3-0- α -L-吡喃鼠李糖-(1 — 2) [ β -D-吡喃葡萄糖-(1 — 4) ] - α -L-吡喃阿拉伯糖常春藤皂苷的製備方法，其特徵在於包括以下步驟第一步，將白頭翁藥材粉碎成粗粉，用水或0. 1-95%乙醇浸泡0. 5-池，6-12倍量加熱回流提取2-3次，每次l_3h，過濾，合併濾液；上述濾液於50-70°C減壓濃縮至0. 5-1. Og生藥材/mL，無醇味，0-4°C冷藏過夜，析膠，濾過，即得白頭翁提取物；第二步，白頭翁提取物水溶液中加入氫氧化鈉溶液調到PH10-13，加熱沸騰4-10小時， 每30-60分鐘測PH，保持在PH10-13，放冷，加鹽酸溶液，調PH 3_7，離心，去沉澱，即得白頭翁提取物水解液；第三步，白頭翁提取物水解液，經過DlOl或AB-8或ADS-17大孔樹脂吸附，依次用水、 30-40%乙醇、50-80%乙醇、95%乙醇洗脫，收集50-80%乙醇洗脫部分，即得BTW58組分。
6.經抗腫瘤藥理實驗，證明BTW58組分為白頭翁抗腫瘤有效部位；第四步、白頭翁抗腫瘤有效部位經ODS反相矽膠柱，用甲醇和水(3:7-10:0)的混合液進行梯度洗脫，梯度洗脫液依次有五組，其體積配比分別為第一組甲醇5份水5份；第二組甲醇6份水4份；第三組甲醇7份水3份；第四組甲醇8份水2份；第五組甲醇9份水1份；第五步、收集甲醇8份冰2份的洗脫部分，經kphadex LH-20柱甲醇-水7 3洗脫， 得到化合物I，經對照品比較及LC/MS/MS測試，該化合物為3-0- α -L-吡喃鼠李糖-(1 — 2) [β -D-吡喃葡萄糖-(1 — 4)]-α -L-吡喃阿拉伯糖常春藤皂苷。
7.根據權利要求2的所述的用途，其特徵在於通過用乙醇水溶液提取白頭翁，獲得的含3-0- α -L-吡喃鼠李糖-(1 — 2) [ β -D-吡喃葡萄糖-(1 — 4) ] - α -L-吡喃阿拉伯糖常春藤皂苷的白頭翁提取物，以及通過用乙醇水溶液提取白頭翁，並且通過鹼水解反應獲得而獲得的含3-0- α -L-吡喃鼠李糖-(1 — 2) [ β -D-吡喃葡萄糖-(1 — 4) ] - α -L-吡喃阿拉伯糖常春藤皂苷的白頭翁提取物。
全文摘要
本發明涉及一種常春藤皂苷類成分3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)[β-D-吡喃葡萄糖-(1→4)]-α-L-吡喃阿拉伯糖常春藤皂苷的製備方法及其該成分抗腫瘤的用途。本發明還涉及來自白頭翁(Pulsatillachinensis(Bunge)Regel)根莖的含有該化合物的提取物作為抗上述腫瘤的用途。上述腫瘤包括肝癌、胃癌、膠質瘤、乳腺癌、宮頸癌、白血病、結腸癌、淋巴癌等。
文檔編號C07J63/00GK102178688SQ201110085969
公開日2011年9月14日 申請日期2011年4月7日 優先權日2011年4月7日
發明者馮育林, 劉豔麗, 李俊, 李笑然, 楊世林, 簡暉, 羅曉健, 羅穎穎, 許瓊明, 陳蘭英 申請人:江西本草天工科技有限責任公司