一種提高那西肽產量的菌種培養方法
2023-06-02 11:59:11
專利名稱：一種提高那西肽產量的菌種培養方法
技術領域：
本發明屬於生物合成技術領域，具體地說，涉及一種可以有效提高那西肽產量的菌種培養方法。
背景技術：
那西肽(Nosih印tide)又稱諾西肽，是一種帶有5個噻唑環的多肽類抗生素，其分子式為C51H43N13O12S6,相對分子量為1222.那西肽可以促進動物生長,提聞飼料利用率,與以往抗生素類飼料添加劑相比，具有用量少、無藥物殘留，毒性小、對環境影響小等特點，是前景看好的新型綠色環保飼料添加劑，已被美國、日本、歐盟、中國等世界許多國家和地區批准使用。那西肽原料藥的生產主要採用生物合成法，目前國內只有浙江匯能公司、安徽皖北藥業和山東勝利股份公司三家生產。由於生產技術水平的限制，如菌種生產水平低，發酵液粘稠、需氧量大等因素限制，致使生產成本較大，不利於該產品的市場化。但由於那西肽獨特的優點，隨著規模做大和工藝的改進，那西肽毛利率也逐年提高，市場需求量快速增加。那西肽是多肽類抗生素，分子內含有多種胺基酸，正常斜面的那西肽產生菌孢子外觀菌落大，孢子白，現有斜面配製方法不能有效體現菌體對參與那西肽生物合成途徑的胺基酸的調控與表達。
發明內容
本發明的目的在於提供一種可以有效提高那西肽產量的菌種培養方法，通過在那西肽產生菌的斜面培養基中添加適量半光胱氨酸，改善那西肽產生菌的孢子質量，達到提高發酵水平的目的。本發明的目的是通過以下技術方案予以實現的，一種提高那西肽產量的菌種培養方法，其特徵在於，在那西肽產生菌的斜面培養基中按100 1000微克/毫升的量加入半胱氨酸，然後接種那西肽產生菌的沙土孢子進行菌種培養，孢子培養成熟後接種到搖瓶中進行發酵。所述那西肽產生菌為那西肽活躍鏈黴菌。所述那西肽產生菌的斜面培養基經過消毒後再按100 1000微克/毫升的量加入半胱氨酸。本發明的優選方案是在那西肽產生菌的斜面培養基中按1000微克/毫升的量加入半胱氨酸。所述那 西肽產生菌的斜面培養基質量比配方為:澱粉2.0%，黃豆餅粉0.5%，kN03
0.1%, NaCl 0.05%, MgSO4.7 H2O 0.05%, FeSO4 0.001%，瓊脂 1.8%，餘量為純化水。那西肽活躍鏈黴菌(S.actuous)合成那西肽的生物合成途徑中，至少有Glu、Cys、Thr, Trp等胺基酸直接參與那西肽的生物合成。在那西肽產生菌發酵過程中，微量半胱氨酸能促進那西肽生物合成，高劑量半胱氨酸明顯抑制那西肽生物合成，外源加入半胱氨酸量難以把握，易造成發酵代謝異常，發酵低產，而通過菌體自身調節，加強半胱氨酸的生成能力，解除半胱氨酸對 那西肽生物合成途徑的限制，達到提高發酵水平的目的。本發明中那西肽產生菌孢子外觀菌落中等，緊湊，突起，淡黃色，本發明通過在斜面培養基中添加適量的半胱氨酸以提高菌種對半胱氨酸的耐受性，改善菌體在生物合成途徑中對半胱氨酸的通量表達，提高生物合成強度，最終表現為放瓶效價的提高，改善那西肽產生菌的孢子質量，達到顯著提高那西肽產量的目的。
具體實施例方式選用斜面培養基的配方為(質量百分比):澱粉2.0%，黃豆餅粉0.5%，kN03 0.1%,NaCl 0.05%, MgSO4.7 H2O 0.05%, FeSO4 0.001%，瓊脂 1.8%，餘量為純化水；培養基消毒前用30%Na0H溶液調為pH值7.8 8.0,培養基消毒後pH值7.0 7.2。那西肽產生菌選擇那西肽活躍鏈黴菌。在那西肽產生菌的斜面培養基中按100 1000微克/毫升的量加入半胱氨酸，即每I毫升斜面培養基中添加100 1000微克的半胱氨酸。在本實施例中，那西肽的效價採用高效液相法進行檢測。實施例一:不同濃度半胱氨酸對那西肽生物合成的影響
向消毒後那西肽產生菌的斜面培養基中分別按照100微克/毫升、500微克/毫升、1000微克/毫升和1500微克/毫升的量加入半胱氨酸，同時以不添加半胱氨酸的培養基作為對照組，然後接種那西肽活躍鏈黴菌的沙土孢子進行菌種培養，培養110 120小時，孢子培養成熟後接種到搖瓶中進行發酵，110 120小時後，取樣測定那西肽的效價，結果如表I所示。表I 培養基中不同濃度半胱氨酸對那西肽生物合成的影響
權利要求
1.一種提高那西肽產量的菌種培養方法，包括那西肽產生菌的斜面培養基，其特徵在於，在所述那西肽產生菌的斜面培養基中按100 1000微克/毫升的量加入半胱氨酸，然後接種那西肽產生菌的沙土孢子進行菌種培養，孢子培養成熟後接種到搖瓶中進行發酵。
2.根據權利要求1所述一種提高那西肽產量的菌種培養方法，其特徵在於，所述那西肽產生菌為那西肽活躍鏈黴菌。
3.根據權利要求1所述一種提高那西肽產量的菌種培養方法，其特徵在於，所述那西肽產生菌的斜面培養基經過消毒後再按100 1000微克/毫升的量加入半胱氨酸。
4.根據權利要求1或3所述一種提高那西肽產量的菌種培養方法，其特徵在於，在那西肽產生菌的斜面培養基中按1000微克/毫升的量加入半胱氨酸。
5.根據權利要求1所述一種提高那西肽產量的菌種培養方法，其特徵在於，所述那西肽產生菌的斜面培養基質量比配方為:澱粉2.0%，黃豆餅粉0.5%，kN03 0.1%，NaCl 0.05%,MgSO4.7 H2O 0.05%, FeSO4 `0.001%，瓊脂 1.8%，餘量為純化水。
全文摘要
本發明公開一種提高那西肽產量的菌種培養方法，包括那西肽產生菌的斜面培養基，其特徵在於，所述那西肽產生菌的斜面培養基經過消毒後按100～1000微克/毫升的量加入半胱氨酸，然後接種那西肽產生菌的沙土孢子進行菌種培養，孢子培養成熟後接種到搖瓶中進行發酵；本發明通過在斜面培養基添加適量的半胱氨酸，改善那西肽產生菌的孢子質量，可明顯提高那西肽的產量。
文檔編號C12P21/02GK103103240SQ20131002775
公開日2013年5月15日 申請日期2013年1月25日 優先權日2013年1月25日
發明者秦豔飛, 李為全, 劉瑞華, 陳偉 申請人:安徽省皖北藥業股份有限公司