利用隱性核不育材料進行秈稻輪迴選擇育種的方法
2023-06-28 16:48:26
專利名稱：利用隱性核不育材料進行秈稻輪迴選擇育種的方法
技術領域：
本發明屬於作物育種方法，具體涉及利用隱性核不育材料進行秈稻輪迴選擇育種
的方法。
背景技術：
水稻是自花授粉作物，長期以來水稻品種的改良主要依賴雜交育種方法，但是由於人工去雄和雜交技術的限制，通常只能利用少數親本進行雜交，親本來源範圍窄，導致品種遺傳基礎日漸狹窄，難以育成突破性的品種。水稻的主要農藝性狀多為微效多基因控制的數量性狀，輪迴選擇育種方法可以打破不利基因的連鎖，增加優良基因的積累，因而是擴大遺傳基礎，育成突破性品種的重要手段，但是由於人工去雄困難等限制，使輪迴選擇育種方法在自花授粉作物上的應用受到限制。而核不育基因的發現為自花授粉作物應用輪迴選擇育種方法提供了可能。Gilmore(Gilmore， E. C， Jr. Crop Sci， 1964，4 :323-325)提出將核不育材料應用於自花授粉作物的輪迴選擇。Fujimaki (Fujimaki. H， S等.J即an.J. Breed. 1977. 27 :70-77)提出將核不育材料用於水稻的輪迴選擇丄kehashi (Lkehashi H，Japan J Breed, 1980， 31 :205-209)詳細描述了如何將核不育用於水稻於輪迴選擇的方法。
水稻光(溫)敏核不育已經成功用於水稻群體改良，如利用光(溫)敏核不育育成的"準S"(武小金等.作物學報，2004，30(6) :589 592)，在北方粳稻中也進行了相應的研究(吳長明等.吉林農業科學，1994(3) :14-17)。在利用不受光溫影響的普通隱性雄性核不育進行輪迴選擇育種方面，國際水稻所的Khush(1979)(吳長明等.吉林農業科學.1996(1) :36-39)、趙正洪等(趙正洪等.作物研究，1994， 8 (1) :16-17)先後利用單基因控制的隱性核不育材料IR36ms，採用輪迴選擇法對水稻的品種改良進行了初步研究，但是到目前為止，還沒有成功應用的報導。 利用現有的普通隱性雄性核不育進行水稻輪迴選擇育種存在的主要問題是(1)群體的總體性狀受隱性核不育基因供體材料遺傳背景的影響大，容易導致群體的遺傳類型和性狀表現單一，難以育成優良品系；(2)帶有隱性核不育基因株系的選擇或剔除是依據後代的自然分離進行，費時且工作量大，效率低。因此，需要尋找新的用於水稻輪迴選擇的隱性核不育類型進行水稻的輪迴選擇，並結合分子生物學技術對隱性核不育基因進行早期鑑定，減少工作量。
發明內容
本發明目的在於克服目前水稻育種材料中存在的遺傳基礎狹窄的問題，提供一種利用隱性核不育材料進行秈稻輪迴選擇育種的方法，該方法藉助單隱性核不育材料，不用人工去雄，可同時進行大量雜交，從而擴大育種材料的遺傳基礎；同時結合分子標記輔助選擇進行不育基因的鑑定和淘汰，提高育種效率，從而培育出高產、優質、抗病性強和適應性好的品種。 本發明另一 目的是提供隱性核不育基因材料的分子標記和檢測方法。
4
為實現上述目的，本發明的技術方案為 利用隱性核不育材料進行秈稻輪迴選擇育種的方法，按照如下步驟進行
(1)、以帶有隱性核不育基因ms—np的材料的不育株為母本，以符合育種目標的10 30個水稻材料為父本，分別進行人工雜交，分別收取不育株上的種子，得雜交巳代；
(2)按照組合種植巳代，然後以巳代植株作母本，以步驟(1)中的父本材料為父本分別進行回交，獲得BCA代種子； (3)、按照組合種植BC^群體，自交結實；同時在抽穗期剪取葉片，提取總DNA，並以總DNA為模板、分別以下述DNA序列為引物進行PCR擴增，選取同時具有Wll和W19分子不育標記的單株，收穫所選單株的種子，然後等量混合，建立基礎群體RS。；
其中擴增Wll分子標記的引物為 引物1:5' -CTTCAACATCCTCACACACCAGC-3' (SEQ ID No :1)
引物2:5' -GCGAATCGGATGTGATCTATGC-3' (SEQ ID No :2);
擴增W19分子標記的引物為 引物3:5' -AATCATCCCTAGAGCATCGG-3' (SEQ ID No :3)，
引物4:5' -GTCCAGCATGGGTGCAGATG-3' (SEQ ID No :4); (4)、在隔離條件下種植RS。群體10000 20000株，群體內自由授粉，收取農藝性狀優良，抗病性好的不育株上的種子，等量混合，形成第一輪群體RS工；
(5)、重複步驟(4) 2 5次，可得到群體RS3 RS6 ; (6)、在步驟(5)所得群體中選擇符合育種目標的可育單株，並利用步驟(3)所述方法進行PCR擴增，選擇沒有Wl 1和W19分子不育標記的可育單株；所選可育單株進入系譜法育種程序，按照育種目標進行選擇，培育出新的品種。 上述輪迴選擇育種的方法步驟(5)中所得不育株，可以繼續按照步驟(4)所述的方法繼續進行輪迴選擇程序；或以群體裡所得不育株為基礎材料，隨時添加新的材料，再繼續進行輪迴選擇。 對於符合育種目標的優良可育單株可利用DNA分子輔助標記Wl 1和W19剔除含有核不育基因ms—np的株系，利用可育單株育成雜交稻新品系；同時可再繼續新的輪迴選擇。
上述輪迴選擇育種的方法步驟(1)中所述的帶有隱性核不育基因ms—np的材料是H2S或以H2S為親本產生的後代，H2S(水稻秈亞種)已於2009年9月17日保藏於中國典型培養物保藏中心，簡稱為CCTCC，保藏編號為P200905。 上述輪迴選擇育種的方法步驟(1)中所述的水稻材料可以是恢復系、保持系、常規品種或雜交種。 上述輪迴選擇育種的方法步驟(4)中所述的種植的群體大小可以為10000 15000株。 上述輪迴選擇育種的方法步驟(6)中所述的新的品種可以是恢復系、保持系、常規品種等。 利用上述輪迴選擇育種的方法培育的保持系，可按照常規方法回交轉育成不育系。 利用上述輪迴選擇育種的方法培育的恢復系，可以和不育系組配成水稻雜交種。
上述輪迴選擇育種的方法中所述的育種目標是本領域技術人員熟知的概念，主要
5是指農藝性狀、品質、抗性性狀或適應性等性狀優良，具體側重哪些性狀，要根據群體的具體情況而定。 上述輪迴選擇育種的方法中所述的在隔離條件下是指群體的種植需要採取適當的隔離措施，以避免來自非本群體的花粉串粉。 上述輪迴選擇育種的方法步驟(6)中所述的系譜法育種程序屬於本領域技術人員公知的常識。 隱性核不育基因ms—np的分子輔助選擇標記，是指同時具有不育基因帶型的Wll和W19分子標記；其中Wll是以引物l(SEQ ID No:l)和引物2(SEQID No :2)為引物進行PCR擴增產生的分子標記；W19是以引物3(SEQ IDNo :3)和引物4(SEQ ID No :4)為引物進行PCR擴增產生的分子標記；Wll和W19是和隱性核不育基因ms—np緊密連鎖的分子標記，分別位於隱性核不育基因ms—np的兩側；其中Wll標記與隱性核不育基因ms—np的遺傳距離為0. 2cM ;W19標記與隱性核不育基因ms—np的遺傳距離為0. 5cM。 Wll的不育基因帶型見圖1的"P2" ;W19的不育基因帶型見圖2的"P2"。 隱性核不育基因ms—np的檢測方法，以水稻材料總DNA為模板，以SEQ IDNo :1和SEQ ID No :2所示的核苷酸序列為引物，以及以SEQ ID No:3和SEQID No :4所示的核苷酸序列為引物分別進行PCR擴增，選擇同時具有W11或W19分子標記的不育基因標記的，即為含有核不育基因ms—np的水稻材料。 隱性核不育基因ms—np分子檢測試劑盒，其特徵在於含有SEQ ID No:l和SEQ ID
No :2所示的核苷酸序列，及SEQ ID No :3和SEQ ID No :4所示的核苷酸序列。 本發明是基於四川農業大學發現的隱性核不育材料4S。 1988年春，四川農業大
學水稻研究所在海南省陵水縣種植的保持系育種材料(親本組合為HA-7X297B)F3代的
C469株系的60個單株中發現16個不育株，其花葯畸型、白色，無花粉，柱頭外露好，異交率
高。即選4個不育株分別與2個姊妹可育株、2個保持系、6個保持系材料和5個恢復系雜
交。1988年夏，在四川雅安種植，結果與2個姊妹交組合分離出1 : l的可育株和不育株，
其餘13個組合全部結實正常。據此，初步確認C469株系中的不育株為隱性核不育，且不育
基因的表達不受環境條件的影響，初步定名為四川隱性核不育水稻H^。 2001年從H2S作隱性核不育基因供體的選保持系的輪迴群體中，收取隱性核不育
株的種子種植，選農藝性狀相似的不育株和可育株雜交，在雜交後代中又選農藝性狀與可
育株相似的不育株作母本進行回交，連續回交7代以上，得到本發明所用的隱性核不育材
料，並命名為H2S。 用H2S與珍汕97B、花B、明恢63、測64、9311、綠黃粘、江南香糯等秈稻材料雜交，^的育性都為正常可育，在&群體中可育與不育表現為3 : l的分離比例。表明H2S中的不育性狀為單隱性核不育基因所控制。 用H2S X珍汕97B構建F2群體，利用SSR標記將ms—np初步定位於水稻第6染色體上，位於SSR標記RM3、RM454與RM528之間，遺傳圖距分別為16. 09cM， 7. 47cM， 9. 19cM。用測序親本9311的組合H2SX9311構建的定位群體，把隱性核不育基因ms—np進一步定位到分子標記W19和Wll之間，遺傳圖距分別為0. 5cM和0. 2cM，實現了基因的精細定位，W19和Wll這兩個和ms—np緊密連鎖的分子標記可用於該隱性核不育基因ms—np的分子標記輔助選擇。
本發明的優點和積極效果(1)、本發明方法克服了人工去雄和授粉的困難，使進行大規模的雜交成為可能，從而大大豐富了育種材料的遺傳基礎，有利於選出突破性的品種。水稻作為自花授粉作物，人工去雄和授粉都受到很大的限制，而用隱性核不育材料作為橋梁親本，可以使群體內材料充分異交，打破不利基因的連鎖，增加優良基因的重組和積累，從而培育出農藝性狀優良、配合力高的自交系，進而組配出優良的雜交種；(2)、利用本發明方法可以對水稻材料不斷地進行改良，即可以在不同時期靈活的加入所需要的資源，從而充分利用各種優異的水稻種質資源，不斷地改良群體性狀，並可不斷選育出新的品種；
(3) 、本發明利用隱性核不育材料，不必進行人工去雄和授粉工作，節省大量人力和物力；
(4) 本發明所用隱性核不育材料，不受光溫條件影響，因而不受時間和地點的限制，也不受材料的限制，易於進行選擇和淘汰；(5)、本發明利用DNA分子標記輔助選擇，選擇或剔除含不育基因的株系，提高了輪迴選擇的育種效率，大大縮短了育種進程和時間，顯著降低了育種成本。
圖1為分子標記Wll的PCR擴增檢測圖譜；其中"P1"表示純合顯性正常可育材料，"P2"表示隱性核不育材料，標註"*"條帶表示攜帶有不育基因的雜合可育株，其他條帶表示純合顯性正常可育單株。 圖2為分子標記W19的PCR擴增檢測圖譜；其中"P1"表示純合顯性正常可育材料，"P2"表示隱性核不育材料，標註"*"條帶表示攜帶有不育基因的雜合可育株，其他條帶表示純合顯性正常可育單株。
具體實施例方式
實施例1 :利用隱性核不育材料H2S選育三系恢復系
按照如下方法進行 (1)、1996年在四川溫江，以無花粉的隱性核不育材料H2S(保藏單位中國典型培養物保藏中心，保藏號為P200905)為母本，以恢復系蜀恢527、明恢63、密陽46、蜀恢881、蜀恢885、明恢86、明恢78、綿恢725、CDR22、成恢047、宜恢1577、多系1號、輻恢802、輻恢838、6078、9308、 IRBB60、江恢151、綿恢501、圭630等20多個親本分別做父本進行人工雜交，分別收穫不育株上的籽粒，得巳代種子； (2) 、1996年冬季在海南陵水按照組合種植巳代，以巳植株為母本，用(1)中所述
的恢復系材料作父本分別進行回交，收穫回交的種子，得BC^代種子。 (3)、1997年夏季在四川溫江按照組合種植BC^群體，在抽穗期取葉片提取總
DNA，以總DNA為模板，以下述DNA序列為引物分別進行PCR擴增，選擇具有分子標記Wll和
W19不育帶型的且農藝性狀優良的單株(雜合帶型)，分單株收取種子，等量混合均勻，得恢
復系輪迴選擇的基礎群體RS。； 其中所述的Wll分子標記的引物為 引物1:5' -CTTCAACATCCTCACACACCAGC-3' (SEQ ID No :1)
引物2:5' -GCGAATCGGATGTGATCTATGC-3' (SEQ ID No :2):
所述的W19分子標記的引物為
7
引物3:5' -AATCATCCCTAGAGCATCGG-3' (SEQ ID No :3)，
引物4:5' -GTCCAGCATGGGTGCAGATG-3' (SEQ ID No :4); 上述PCR反應體系為DNA模板3. 0 ii 1， 10XPCR buffer 2.5iU，
20XdNTPsl. OiU，引物1. OiU， Taq酶1U，超純水加至總體積25 iU。反應條件為
94°C 5min ;94。C 45s， 55 58°C 45s， 72°C 45s，共35個循環；72。C lOmin。 (4) 、 1997年冬在海南陵水，在隔離條件下種植基礎群體RS。10000 20000株，群
體內自由授粉，選擇群體中農藝性狀優良、稻米外觀品質好、抗稻瘟病、生育期適當等符合
育種目標的不育株，收取不育株上的種子；等量混合均勻，得輪迴群體RS工； (5)、1998年夏在四川溫江，在隔離條件下種植第一輪輪迴群體RSJ0000 20000
株，自然異交(可人工輔助授粉)，按照育種目標，選擇群體中農藝性狀優良、稻米外觀品質
好、抗稻瘟病、生育期適當的符合育種目標的不育株上的種子，等量混合均勻，得輪迴選擇
群體RS2 ; (6) 、1998年冬在海南陵水，在隔離條件下種植第二輪的輪迴群體1 2 ;重複上季的操作，得RS3群體。 (7)、1999年夏在四川溫江，種植第三輪的輪迴群體RS3，重複上季的操作；在群體
中農藝性狀優良、稻米外觀品質好、抗稻瘟病、生育期適當的可育株，收取種子； (8)、系譜選擇，進入三系雜交稻親本恢復系的選育程序(F2);同時按照(3)所述
PCR方法鑑定不育基因的分子標記W11和W19，檢測入選單株的不育基因的基因型，淘汰含
有該隱性核不育基因分子標記W11和W19的單株(W11的不育、可育和雜合植株的帶型見圖
1 ;W19的不育、可育和雜合植株的帶型見圖2)。 1999年冬在海南陵水種植選取的優良單株，若已檢測到是含有不育基因植株的株系，則繼續用不育基因的W11和W19分子標記檢測該株系種植小區中的單株，留選農藝性狀優良，符合育種目標且沒有不育基因的單株，系譜選擇，加代自交純合穩定。然後在四川溫江和海南陵水兩地連續進行選擇，至2002年，經加代和測交的雜種優勢鑑定，編號498的株系表現出莖杆粗壯、恢復力強、配合力高等特點，定名為蜀恢498 (F8代)。並且與通常的育種程序相比，本發明利用分子標記輔助選擇將育種周期縮短了 3-5代，加快了育種進程，減少了人力物力的投入，降低了育種成本。利用蜀恢498和不育系II-32A所配雜交組合II優498 (II-32A/蜀恢498)。
II優498參加2005 2006年四川省水稻中秈遲熟組區試，兩年平均產量8130千克/公頃，比對照汕優63增產8. 30%，平均增產點次95. 8% ;生產試驗中單產8350千克/公頃，比對照增產9. 29% ;適宜四川平壩和丘陵地區作一季中稻種植。於2007年通過四川省品種審定。 實施例2 :利用隱性核不育材料H2S選育三系保持系 (1)、1996年在四川溫江，以無花粉的四川隱性核不育材料H2S(2009年9月17日保藏於中國典型培養物保藏中心，保藏編號為P200905)為母本，分別以保持系G46B、1I-32B、金23B、 D62B、中9B、珍汕97B、 K17B、地谷B、 D702B、香改B、優1B、紅突31、新露B、龍特浦B、IRBB23、D90B、D43B、D44B、D207B或D738B為父本進行人工雜交，按照組合收穫不育株上的種子，得雜交&代； (2) 、1996年冬季，在海南陵水按照組合種植^代，以^代植株作母本，以(1)中保持系作父本分別進行人工回交，收穫回交種子，得BC^代種子。 (3) 、1997年夏季，在四川溫江種植BC^群體，在抽穗期提取葉片總DNA，以下述DNA序列為引物進行PCR擴增，選擇具有Wll和W19分子不育標記(見圖1和圖2)且農藝性狀優良的單株(雜合型)，分單株收取種子，等量混合均勻，構建恢復系輪迴選擇的基礎群體RS。。 其中所述的Wll標記的引物為 引物1:5' -CTTCAACATCCTCACACACCAGC-3' (SEQ ID No :1)
引物2:5' -GCGAATCGGATGTGATCTATGC-3' (SEQ ID No :2);
所述的W19標記的引物為 引物3:5' -AATCATCCCTAGAGCATCGG-3' (SEQ ID No :3)，
引物4:5' -GTCCAGCATGGGTGCAGATG-3' (SEQ ID No :4); PCR反應體系DNA模板3. 0ul，10XPCR buffer 2. 5ul， 20 X dNTPs l.Oul，引物1. 0ul，Taq酶1U，超純水加至總體積25ul。反應條件94。C 5min ;94。C 45s，55 58°C 45s，72°C 45s，共35個循環；72。C 10min。 (4) 、 1997年冬，在海南陵水在隔離條件下種植基礎群體RS。10000 20000株，群體內自由授粉，收取群體中農藝性狀優良、外觀品質好、抗稻瘟病、生育期適當等符合育種目標的不育株上的種子，等量混合，得第一輪輪迴群體RS工； (5)、1998年夏，在四川溫江在隔離條件下種植第一輪輪迴群體RSJ0000 20000株，自然異交(可人工輔助趕粉)，選留群體中農藝性狀優良、外觀品質好、沒有稻瘟病發生、生育期適當等符合育種目標的不育株上的種子，等量混合，得第二輪輪迴群體RS"
(6) 、1998年冬，在海南陵水種植第二輪的輪迴群體RS2 ;重複上季的操作，得第三輪輪迴群體RSp (6)、1999年夏，在四川溫江第三輪的輪迴群體RS3，重複上季的操作；在選育群體中農藝性狀優良、外觀品質好、抗稻瘟病、生育期適當的可育株，按株單收種子；
(7)、系譜選擇，所收穫的可育株種子進入三系雜交稻親本不育系的選育程序；同時用該不育基因的Wll和W19分子標記檢測入選單株的不育基因的基因型，淘汰含有該隱性核不育基因的單株。1999年冬，在海南陵水種植(6)選取的優良單株，若已檢測到是含有不育基因植株的株系，則繼續用不育基因的分子標記W11檢測該株系種植小區中的單株，選擇農藝性狀優良，符合育種目標且沒有不育基因的單株，系譜選擇，加代自交純合穩定。
(8) 、2002年，經秋繁、冬繁加代和用D62A做母本進行回交轉育、測交的雜種優勢鑑定，編號4183的株系表現出千粒重高、抗稻瘟病、米質優、產量配合力高等特點，定名為川農1A(BC6F4)。其中利用分子標記輔助選擇縮短育種周期3-5代。
利用川農1A組配的水稻雜交種
川農優527 :組合為川農1A/蜀恢527。 川農優527參加四川省2006 2007年中秈遲熟區試，兩年區試平均產量8096千克/公頃，比對照品種岡優725增產4. 15%，平均增產點次74%。 2007年生產試驗平均產量7951千克/公頃，比對照品種岡優725增產0. 99% 。 川農優527參加國家稻2007 2008年長江上遊區試，兩年區試平均產量9224千克/公頃，比II優838 (CK)增產5. 54% ，平均增產點比例80. 4% 。 2008年參加長江上遊中秈遲熟D組生產試驗，平均畝產8652千克/公頃，比對照II優838增產3. 58% 。 川農優527已分別於2008和2009年通過四川省和國家區試，編號分別為川審稻
2008003和國審稻2009007。 川農優498 :組合為川農1A/蜀恢498。 川農優498於2006 2007年參加四川省水稻中秈遲熟區試，兩年平均產量7933 千克/公頃，比對照岡優725增產4. 36% 。 2007年生產試驗平均產量8608千克/公頃，比 對照岡優725增產2. 91%。兩年區試平均增產點次90. 91%。川農優498已於2008年通 過四川省區試，編號川審稻2008002。
0086]序列表
0087]〈110〉四川農業大學
0088]〈120〉利用隱性核不育材料進行秈稻輪迴選擇育種的方法0089]〈160>4
0090]〈170>PatentIn version 3. 5
0091]〈210>1
0092]〈211>23
0093]〈212>DNA
0094]〈213>Artificial Sequence
0095]〈220〉
0096]〈223〉引物1
0097]〈400>1
0098]cttcaacatc ctcacacacc age23
0099]〈210>2
0100]〈211>22
0101]〈212>DNA
0102]〈213>Artificial Sequence
0103]〈220〉
0104]〈223〉引物2
0105]〈400>2
0106]gcgaatcgga tgtgatctat gc22
0107]〈210>3
0108]〈211>20
0109]〈212>DNA
0110] 0111 ]〈213>Artificial Sequence 〈220〉
0112]〈223〉引物3
0113]〈400>3
0114]aatcatccct agagcategg20
0115]〈210>4
0116]〈211>20
〈212>DNA 〈213>A:rtificial Sequence 〈220〉 〈223〉引物4 〈400>4 gtccagcatg ggtgcagatg 20
1權利要求
利用隱性核不育材料進行秈稻輪迴選擇育種的方法，按照如下步驟進行(1)、以帶有隱性核不育基因ms-np的材料的不育株為母本，以符合育種目標的10～30個水稻材料為父本，分別進行人工雜交，分別收取不育株上的種子，得雜交F1代；(2)按照組合種植F1代，然後以F1代植株作母本，以步驟(1)中的父本材料為父本分別進行回交，獲得BC1F1代種子；(3)、按照組合種植BC1F1群體，自交結實；同時在抽穗期剪取葉片，提取總DNA，並以總DNA為模板、分別以下述DNA序列為引物進行PCR擴增，選取同時具有W11和W19分子不育標記的單株，收穫所選單株的種子，然後等量混合，建立基礎群體RS0；其中W11分子標記的引物為引物15′-CTTCAACATCCTCACACACCAGC-3′引物25′-GCGAATCGGATGTGATCTATGC-3′；W19分子標記的引物為引物35′-AATCATCCCTAGAGCATCGG-3′，引物45′-GTCCAGCATGGGTGCAGATG-3′；(4)、在隔離條件下種植RS0群體10000～20000株，群體內自由授粉，收取農藝性狀優良，抗病性好的不育株上的種子，等量混合，形成第一輪群體RS1；(5)、重複步驟(4)2～5次，可得到群體RS3～RS6；(6)、在步驟(5)所得群體中選擇符合育種目標的可育單株，並利用步驟(3)所述方法進行PCR擴增，選擇沒有W11和W19分子不育標記的可育單株；所選可育單株進入系譜法育種程序，按照育種目標進行選擇，培育出新的品種。
2. 按照權利要求1所述的輪迴選擇育種的方法，其特徵在於輪迴選擇群體的不育株為基礎材料，隨時添加新的材料，再繼續進行輪迴選擇。
3. 按照權利要求l所述的輪迴選擇育種的方法，其特徵在於其步驟(1)中所述的帶有隱性核不育基因ms—np的材料是H2S或以H2S為親本雜交產生的後代，H2S已於2009年9月17日保藏於中國典型培養物保藏中心，簡稱為CCTCC，保藏編號為P200905。
4. 按照權利要求1、2或3所述的輪迴選擇育種的方法，其特徵在於其步驟(1)中所述的水稻材料可以是恢復系、保持系、常規品種或雜交種。
5. 按照權利要求4所述的輪迴選擇育種的方法，其特徵在於其步驟(4)中所述的種植的群體大小可以為10000 15000株。
6. 按照權利要求4所述的輪迴選擇育種的方法，其特徵在於其所培育的保持系，可按照常規方法回交轉育成不育系。
7. 利用權利要求1所述的輪迴選擇育種的方法培育的恢復系，其特徵在於所述的恢復系和不育系組配成水稻雜交種。
8. 隱性核不育基因ms—np的分子輔助選擇標記，是指同時具有不育基因標記的Wll和W19分子標記。
9. 隱性核不育基因ms—np的檢測方法，其特徵在於以水稻材料總DNA為模板，以SEQ IDNo :1禾P SEQ ID No :2所示的核苷酸序列為引物，以及以SEQ IDNo :3和SEQ ID No :4所示的核苷酸序列為引物分別進行PCR擴增，選擇同時具有Wll或W19分子的不育基因標記的植株，即為含有核不育基因ms—np的水稻材料。
10.隱性核不育基因ms—np分子檢測試劑盒，其特徵在於含有SEQ ID No :1和SEQ IDNo :2所示的核苷酸序列，及SEQ ID No :3和SEQ ID No :4所示的核苷酸序列。
全文摘要
本發明公開了一種利用隱性核不育材料進行秈稻輪迴選擇育種的方法，主要是以帶有隱性核不育基因ms-np的不育株為母本，以20～30種水稻材料作父本雜交，並回交一代；然後在後代中選留優良不育株上的種子，等量混合組成第一輪輪迴選擇群體；重複前述輪迴選擇過程，隨時可選擇優良可育株進入系譜法，並結合分子標記輔助選擇，育成新的品種。本發明方法利用隱性核不育可做大量雜交，豐富了育種材料的遺傳基礎；其次，本發明方法可以隨時添加新的水稻材料，從而可對群體進行不斷地改良；此外，本發明方法不用人工去雄和授粉，節省了大量人力；本發明方法還利用DNA分子標記進行輔助選擇，縮短了育種進程和時間，降低了育種成本。
文檔編號A01H1/02GK101773067SQ20091025052
公開日2010年7月14日 申請日期2009年12月14日 優先權日2009年12月14日
發明者吳先軍, 李仕貴, 王玉平, 欽鵬, 馬炳田, 高克銘 申請人:四川農業大學