一種提取富含二十碳五烯酸及二十二碳六烯酸磷脂的方法
2023-06-28 18:27:41 2
專利名稱：一種提取富含二十碳五烯酸及二十二碳六烯酸磷脂的方法
技術領域：
本發明涉及一種從海產動物原料中提取富含二十碳五烯酸及二十二碳六 烯酸磷脂的方法。
技術背景磷脂是細胞膜的重要組成成分，作為脂質體、乳化劑等在醫藥、化妝品、 食品工業中廣泛應用。磷脂的生理活性與其脂肪酸的組成和極性末端的性質 密切相關， 一些具有特定結構的磷脂有很高的藥用價值。磷脂是細胞膜主要 成分之一，在細胞膜上同時還是眾多信息分子前體的貯備形式，在身體機能 的調控中有著重要的作用，具有多種營養保健功能調節人體代謝、增強體 能、健腦、補腦、消除大腦疲勞，提高人體記憶力；可以降低人體血液膽固醇、 調節血脂、防止動脈粥樣硬化；能夠保護人體肝臟，防治脂肪肝；可以防治膽 結石、老年骨質疏鬆症、克山病；還具有對人體的健美、健體功能。目前國內外磷脂的生產主要是從大豆和蛋黃中提取，受原料天然脂肪酸 組成特點所限，不能獲得富含二十碳五烯酸(EPA)及二十二碳六烯酸(DHA) 的磷脂。有關使用超臨界二氧化碳萃取脫除海產動物原料粉中中性脂和膽固 醇，再利用乙醇水溶液提取富含EPA及DHA磷脂的文獻，尚未見有報導。發明內容本發明的目的是提供一種以海產動物的卵、生殖腺等為原料，高效、環 保、安全、大量地獲得富含EPA及DHA磷脂的可工業化的提取方法，以彌補 現有技術的上述不足。一種提取富含EPA及DHA磷脂的方法，其特徵是先將海產動物原料用膠 體磨製成勻漿液，將所得勻漿液冷凍乾燥，再用粉碎機將所得固形物粉碎後， 利用超臨界二氧化碳脫去該原料粉中的中性脂和膽固醇，然後用乙醇水溶液 提取。本發明提取的產品得率高，純度較高，提取過程對環境無汙染，對生產 人員無毒害，具有促進嬰幼兒大腦生長發育、增強記憶、促進嬰幼兒視覺神 經和視網膜發育、預防和治療心血管疾病、抗炎、抗癌、增強免疫力等生理活性。研究表明，結合有EPA及DHA的磷脂比未結合EPA及DHA的磷脂具有 更好的細胞膜穿透性，更強的抗腫瘤活性及更有效的免疫調節功能，因而具 有較高的作為保健品或醫藥原料的開發利用價值。
圖1為由鱈魚卵提取的磷脂的高效液相-蒸發光散射檢測器(HPLC-ELSD) 色譜圖。圖2為由烏賊卵提取的磷脂的HPLC-ELSD色譜圖。圖3為由海膽生殖腺提取的磷脂的HPLC-ELSD色譜圖。圖4為由扇貝卵巢提取的磷脂的HPLC-ELSD色譜圖。圖5為由扇貝精巢提取的磷脂的HPLC-ELSD色譜圖。圖1至圖5中，PE 為磷脂醯乙醇胺，PI為磷脂醯肌醇，PS為磷脂醯絲氨酸，PC為磷酯醯膽鹼， SM為鞘磷脂。圖6為由鱈魚卵提取的磷脂的氣相色譜-火焰離子檢測器(GC-FID)色譜圖。圖7為由烏賊卵提取的磷脂的GC-FID色譜圖。 圖8為由海膽生殖腺提取的磷脂的GC-FID色譜圖。 圖9為由扇貝卵巢提取的磷脂的GC-FID色譜圖。 圖IO為由扇貝精巢提取的磷脂的GOFID色譜圖。
具體實施方式
取自來水洗淨鱈魚卵，除去雜質，加入4倍重量的水之後，用膠體磨製 成勻漿液，所得勻漿液經12h真空冷凍乾燥、用粉碎機粉碎後，得到含水量 為4.0%(重量百分數，下同)的鱈魚卵粉，取其100g投入超臨界二氧化碳萃 取裝置的萃取釜中，經超臨界二氧化碳萃取和二級分離脫除卵粉中的中性脂和膽固醇，萃取釜內的壓力為30MPa，溫度為60。C;第一級分離壓力為8MPa， 分離溫度為45'C;第二級分離壓力為6MPa，分離溫度為35°C， 二氧化碳的流 量為50 ml/g，萃取時間為6h，從萃取釜中取出脫去中性脂和膽固醇的鱈魚 卵粉，加15倍重量的90%乙醇水溶液提取，提取溫度3(TC，提取10小時後 過濾得到提取液，將該提取液減壓蒸餾得到固形物10.3g，即為富含EPA及 DHA磷脂產品，其中磷脂含量為88. 5%，其中PE佔13. 4%， PI佔10. 2%， PC佔 76. 4%，脂肪酸組成中EPA佔11. 1%， DHA佔24. 0%。將上述磷脂產品真空包裝 後於-2(TC保藏。 實施例2取自來水洗淨魷魚卵，除去雜質，加入6倍重量的水之後，用膠體磨製 成勻漿液，所得勻漿液經24h真空冷凍乾燥、用粉碎機粉碎後，得到含水量 為5.0%的魷魚卵粉，取其200g投入超臨界二氧化碳萃取裝置的萃取釜中，經超臨界二氧化碳萃取和二級分離脫除卵粉中的中性脂和膽固醇，萃取釜中的 壓力為30MPa，溫度為45。C;第一級分離壓力為13MPa，分離溫度為45。C; 第二級分離壓力為8MPa，分離溫度為4(TC， 二氧化碳的流量為100 ml/g,萃 取時間為8h，從萃取釜中取出脫去中性脂和膽固醇的魷魚卵粉，加12倍重量 的95%乙醇水溶液提取，提取溫度35。C，提取20小時後，過濾得到提取液， 將該提取液減壓蒸餾得到固形物30.6g，即為富含EPA及DHA磷脂產品，磷脂 含量為85. 6%，其中PE佔18. 7%， PC佔69. 0%， SM佔12. 3%，脂肪酸組成中 EPA佔10. 1%， DHA佔32. 1%，將上述磷脂產品真空包裝後於-2(TC保藏。 實施例3取自來水洗淨海膽生殖腺，除去雜質，加入5倍重量的水之後，用膠體 磨製成勻漿液，所得勻漿液經16h真空冷凍乾燥、用粉碎機粉碎後，得到含 水量為4. 5%的海膽生殖腺粉，取其250g投入超臨界二氧化碳萃取裝置的萃取 釜中，經超臨界二氧化碳萃取和二級分離脫除海膽生殖腺粉中的中性脂和膽 固醇，萃取釜中的壓力為25MPa，溫度為55。C;第一級分離壓力為13. 5MPa， 分離溫度為5(TC;第二級分離壓力為9MPa，分離溫度為45。C， 二氧化碳的流量為150 ml/g，萃取時間為10h，從萃取釜中取出脫去中性脂和膽固醇的海 膽生殖腺粉，力n 16倍重量的85%乙醇水溶液提取，提取溫度35°C，提取20 小時後，過濾得到提取液，將該提取液減壓蒸餾得到固形物19. lg，即為富含 EPA及DHA磷脂產品，磷脂含量為87. 7%，其中PE佔16. 3%， PI佔29. 7%， PS 佔3. 1%， PC佔50. 9%，脂肪酸組成中EPA佔15. 6%， DHA佔2. 2%。將上述磷 脂產品真空包裝後於-20 °C保藏。 實施例4取自來水洗淨扇貝卵巢，除去雜質，加入4.5倍重量的水之後，用膠體 磨製成勻漿液，所得勻槳液經32h真空冷凍乾燥、用粉碎機粉碎後，得到含 水量為5. 0%的扇貝卵巢粉，取其200g投入超臨界二氧化碳萃取裝置的萃取釜 中，經超臨界二氧化碳萃取和二級分離脫除扇貝卵巢粉中的中性脂和膽固醇， 萃取釜中的壓力為20MPa，溫度為60。C;第一級分離壓力為12MPa，分離溫度 為45°C;第二級分離壓力為7.5MPa，分離溫度為45°C， 二氧化碳的流量為 200ml/g，萃取時間為15h，從萃取釜中取出脫去中性脂和膽固醇的扇貝卵巢 粉，加20倍重量的75%乙醇水溶液提取，提取溫度35'C，提取15小時後，過 濾得到提取液，將該提取液減壓蒸餾得到固形物11.2g，即為富含EPA及DHA 磷脂產品，磷脂含量為85. 7%，其中PE佔44. 2%， PI佔10. 4%， PS佔2. 0%， PC佔43. 4%，脂肪酸組成中EPA佔14. 7%， DHA佔8. 6%。將上述磷脂產品真空 包裝後於-2(TC保藏。實施例5取自來水洗淨扇貝精巢，除去雜質，加入3.5倍重量的水之後，用膠體 磨製成勻槳液，所得勻漿液經40h真空冷凍乾燥、粉碎機粉碎後得到含水量 為5.0%的扇貝精巢粉，取其200g投入超臨界二氧化碳萃取裝置的萃取釜中， 經超臨界二氧化碳萃取和二級分離脫除扇貝精巢粉中的中性脂和膽固醇，萃 取釜中的壓力為25MPa，溫度為55。C;第一級分離壓力為12MPa，分離溫度為 40。C;第二級分離壓力為7MPa，分離溫度為40。C，二氧化碳的流量為180 ml/g， 萃取時間為18h，從萃取釜中取出脫去中性脂和膽固醇的扇貝精巢粉，加18倍重量的75%乙醇水溶液提取，提取溫度45t:，提取12小時後，過濾得到提 取液，將該提取液減壓蒸餾得到固形物26. 7g，即為富含EPA及DHA磷脂產品， 磷脂含量為86. 3%，其中PE佔41. 2%， PI佔17. 5%， PS佔1. 8%， PC佔39. 4%， 脂肪酸組成中EPA佔15. 3%， DHA佔27. 3%。將上述磷脂產品真空包裝後於-20 "C保藏。用高效液相-蒸發光散射檢測器(HPLC-ELSD)對上述製備得到磷脂的組 成進行了定性和定量分析，用氣相色譜(GC)檢測了磷脂產品的脂肪酸組成， 檢測器為火焰離子檢測器(FID)。所得結果如上所述。本發明採用的超臨界二氧化碳萃取技術可以把選擇性地把中性脂和膽固 醇從海產動物原料粉中萃取出來，而磷脂因不溶於超臨界二氧化碳而留在萃餘物中，該方法對環境友好，產品中無溶劑殘留，符合當今綠色食品和綠色化 工的發展趨勢。本發明中所述的海產動物原料為鱈魚卵、魷魚卵、海膽生殖腺、扇貝卵 巢或扇貝精巢；所述的勻漿液由海產動物原料和3-6倍重量的水組成；所述 的勻漿液的真空冷凍乾燥時間為12-48h;所述的提取所用的乙醇水溶液濃度 為65%-95%，用量為原料粉重量的2 — 20倍；使用乙醇水溶液提取時，提取溫 度為30-6(TC，提取時間為6-20小時。
權利要求
1、一種提取富含二十碳五烯酸(EPA)及二十二碳六烯酸(DHA)磷脂的方法，其特徵是先將海產動物原料用膠體磨製成勻漿液，將所得勻漿液冷凍乾燥，再用粉碎機將所得固形物粉碎後，利用超臨界二氧化碳脫去該原料粉中的中性脂和膽固醇，然後用乙醇水溶液提取。
2、 根據權利要求1所述的提取富含EPA及DHA磷脂的方法，其特 徵在於所述的海產動物原料為鱈魚卵、魷魚卵、海膽生殖腺、扇貝卵巢 或扇貝精巢。
3、 根據權利要求1所述的提取富含EPA及DHA磷脂的方法，其特 徵在於所述的勻漿液由海產動物原料和3-6倍重量的水組成。
4、 根據權利要求1所述的提取富含EPA及DHA磷脂的方法，其特 徵在於所述勻漿液的真空冷凍乾燥時間為12-48h。
5、 根據權利要求1所述的提取富含EPA及DHA磷脂的方法，其特 徵在於所述的提取所用的乙醇水溶液濃度為65%-95%,用量為原料粉重 量的2 — 20倍。
6、 根據權利要求1所述的提取富含EPA及DHA磷脂的方法，其特 徵在於使用乙醇水溶液提取時，提取溫度為30-60°C，提取時間為6-20 小時。
全文摘要
一種提取富含二十碳五烯酸(EPA)及二十二碳六烯酸(DHA)磷脂的方法，其特徵是先將海產動物原料用膠體磨製成勻漿液，將所得勻漿液冷凍乾燥，再用粉碎機將所得固形物粉碎後，利用超臨界二氧化碳脫去該原料粉中的中性脂和膽固醇，然後用乙醇水溶液提取。本發明提取的產品得率高，純度較高，提取過程對環境無汙染，對生產人員無毒害，具有促進嬰幼兒大腦生長發育、增強記憶、促進嬰幼兒視覺神經和視網膜發育、預防和治療心血管疾病、抗炎、抗癌、增強免疫力等生理活性，因而具有較高的作為保健品或醫藥原料的開發利用價值。
文檔編號C07F9/10GK101333229SQ20081001622
公開日2008年12月31日 申請日期2008年5月10日 優先權日2008年5月10日
發明者唐慶娟, 傑 徐, 李兆傑, 琦 王, 王玉明, 勇 薛, 薛長湖, 趙玉然 申請人:中國海洋大學