檢測豬脂肪沉積能力的引物及其方法與應用的製作方法
2023-06-29 00:42:01 1
專利名稱：檢測豬脂肪沉積能力的引物及其方法與應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種檢測豬脂肪沉積能力的引物及其方法與應用。
背景技術：
隨著社會經濟和人們消費水平的提高，改善肉質已經成為適應消費需求和應對畜 禽業提高質量與尋求發展的重要議題之一。脂肪含量是影響肉質性狀的一個重要的因素， 且在動物維持正常的生理代謝和生理功能中起著非常重要的作用。脂肪是機體的主要成分 之一，是維持正常生命活動所必需的物質基礎。合理的脂肪儲備是必須的，但當所攝入的能 量超過維持身體正常需要時，多餘的能量便被轉化為體脂而沉積下來。在動物體內，脂肪蓄 積的組織主要是脂肪組織，維持適當含量的皮下脂肪，可以使胴體的外觀比較好，提高產品 等級；適當的肌間脂肪(IMF)可以提高口感，產品的風味、嫩度和多汁性。因此，如何控制 胴體脂肪沉積已經成為畜禽遺傳育種學研究的熱點之一。目前利用FSH0輔助選擇豬產仔 數、矮小基因輔助選擇雞的體型等已經取得實質性進展，獲得畜禽經濟性狀的功能基因及 其標記，並利用其來加速畜禽重要經濟性狀的育種進展是動物遺傳育種領域的重要創新。 由於豬胴體脂肪和瘦肉含量是影響豬肉品種和消費的重要因素，採用分子生物學方法獲得 低脂肪、高瘦肉率的豬育種方法沒有實質性突破。
發明內容
本發明的目的是提供一種可用於檢測豬脂肪沉積能力的弓I物及其方法與應用。本發明所提供的檢測豬脂肪沉積能力的引物，其核苷酸序列如序列表中序列1和 序列2所示。本發明所提供的檢測豬脂肪沉積能力的方法，是以待測豬基因組DNA為模板，以 序列表中序列1和序列2所示的DNA分子為引物，進行PCR擴增，Fnu4H I限制性內切酶酶 切PCR擴增產物，檢測Fnu4H I限制性內切酶酶切產物的大小；當酶切產物含有三條DNA片段，大小分別在200 300bp、100 150bp和小於 lOObp，待測豬為TP526CC基因型；當酶切產物含有三條DNA片段，大小分別在200 300bp、150 200bp和小於 lOObp，待測豬為TP526TT基因型；當酶切產物含有四條DNA片段，一條DNA片段大小在200 300bp、另一條DNA片 段大小小於lOObp，其餘兩條DNA片段的大小在100 200bp，待測豬為TP526CT基因型；所述TP526TT基因型的豬脂肪沉積能力小於所述TP526CC基因型的豬或所述 TP526CT基因型的豬。本發明的檢測豬脂肪沉積能力的方法，其中所述檢測Fnu4H I限制性內切酶酶 切產物的大小的方法為瓊脂糖凝膠電泳。本發明所提供的培育瘦肉型豬的方法，是用所述檢測豬脂肪沉積的方法方法檢測 豬，獲得TP526TT基因型的豬，以所述TP526TT基因型的豬為親本進行育種獲得瘦肉型的
3豬。本發明檢測豬脂肪沉積的方法，能通過簡單的PCR擴增和酶切確定待測豬的基因 型，TP526TT基因型豬的背膘顯著低於TP526CC基因型和TP526CT基因型(P < 0. 01)，以 TP526TT基因型的豬進行育種可獲得候選的瘦肉型的豬品系。
圖1為Fnu4H I限制性內切酶對PCR產物進行酶切的圖譜。
具體實施例方式實施例、一、鑑定 TP526T/C 基因型提取定遠豬、長白豬等豬基因組DNA。以提取的基因組DNA為模板，TPS和TPA為 引物進行PCR擴增，引物TPS和TPA的核苷酸序列如下TPS 5' -CACAGCTGGGAAATTGCAG-3『TPA 5' -CACAATTTCCACGCTGCTAT-3『卩0 擴增體系總體系25111^1011]\1/1TPS l.OuL, lOuM/L TPA, 1. Ou L 10 XPCR 緩衝液 2. 5 ii L，2mM/L dNTPs 2. 0 u L, 5U/u L Taq DNA 聚合酶 0. 5 ii L，lOOng/ii L 模板 I.OpL，其餘用超純水補齊。PCR 擴增條件 94°C預變性 5min ；94°C變性 30s，56°C退火 15s，72°C延伸 45s，35 個 循環，最後72°C延伸10min，4°C保存。 用Fnu4H I限制性內切酶對PCR產物進行酶切。15iiL酶切反應體系100ng PCR產物，3U的Fnu4H I限制性內切酶，1. 5 y L的 10X緩衝液，加超純水至15uL037°C過夜消化，3%的瓊脂糖凝膠電泳檢測，凝膠成像儀分析和拍照，統計基因型。凝膠成像結果如圖1所示，酶切後的PCR產物，在瓊脂糖凝膠上呈現三條帶，三條 帶的大小分別在200 300bp、100 150bp和小於100bp,該豬為TP526CC基因型(圖1的 泳道1，3，5和7) ；PCR產物經過測序與預期結果一致。酶切後的PCR產物，在瓊脂糖凝膠上呈現四條帶，一條帶的大小在200 300bp、另 一條帶的大小小於lOObp，其餘兩條帶的大小在100 200bp，該豬為TP526CT基因型(圖 1的泳道2，4，6和9) ；PCR產物經過測序與預期結果一致。酶切後的PCR產物，在瓊脂糖凝膠上呈現三條帶，三條帶的大小分別在200 300bp、150 200bp和小於100bp，該豬為TP526TT基因型(圖1的泳道8和10) ；PCR產物
經過測序與預期結果一致。二、TP526T/C基因型與豬脂肪沉積和瘦肉率的相關性脂肪型定遠豬107頭(體重為80 85kg的肥育豬)、瘦肉型長白豬、瘦肉型大白 豬和瘦肉型杜洛克豬共89頭(體重為95 100kg的肥育豬)，同一飼養標準，用步驟(一) 的方法鑑定基因型，用Piglogl05測膘器檢測三點平均背膘厚，結果見表1。表明，TP526TT基因型豬的背膘顯著低於TP526CC基因型和TP526CT基因型(P < 0. 01)，
在實際的豬育種中，選擇TP526TT基因型的豬進行育種可獲得候選的瘦肉型的豬品系。表1.不同基因型與豬背膘厚之關聯性 以上的實施例僅僅是對本發明的優選實施方式進行描述，並非對本發明的範圍進 行限定，在不脫離本發明設計精神的前提下，本領域普通工程技術人員對本發明的技術方 案作出的各種變形和改進，均應落入本發明的權利要求書確定的保護範圍內。
權利要求
一種檢測豬脂肪沉積能力的引物，其核苷酸序列如序列表中序列1和序列2所示。
2.一種檢測豬脂肪沉積能力的方法，是以待測豬基因組DNA為模板，以序列表中序列 1和序列2所示的DNA分子為引物，進行PCR擴增，Fnu4H I限制性內切酶酶切PCR擴增產 物，檢測Fnu4H I限制性內切酶酶切產物的大小；當酶切產物含有三條DNA片段，大小分別在200 300bp、100 150bp和小於lOObp， 待測豬為TP526CC基因型；當酶切產物含有三條DNA片段，大小分別在200 300bp、150 200bp和小於lOObp， 待測豬為TP526TT基因型；當酶切產物含有四條DNA片段，一條DNA片段大小在200 300bp、另一條DNA片段大 小小於lOObp，其餘兩條DNA片段的大小在100 200bp，待測豬為TP526CT基因型；所述TP526TT基因型的豬脂肪沉積能力小於所述TP526CC基因型的豬或所述TP526CT 基因型的豬。
3.根據權利要求1所述的方法，其特徵在於所述檢測Fnu4HI限制性內切酶酶切產 物的大小的方法為瓊脂糖凝膠電泳。
4.培育瘦肉型豬的方法，是用權利要求2或3所述的方法檢測豬，獲得TP526TT基因型 的豬，以所述TP526TT基因型的豬為親本進行育種獲得瘦肉型的豬。
全文摘要
本發明公開了一種檢測豬脂肪沉積能力的引物及其方法與應用。檢測豬脂肪沉積能力的引物，其核苷酸序列如序列表中序列1和序列2所示。檢測豬脂肪沉積能力的方法，是以待測豬基因組DNA為模板，以序列表中序列1和序列2所示的DNA分子為引物，進行PCR擴增，Fnu4H I限制性內切酶酶切PCR擴增產物，檢測Fnu4H I限制性內切酶酶切產物的大小；所述TP526TT基因型的豬脂肪沉積能力小於所述TP526CC基因型的豬或所述TP526CT基因型的豬。本發明檢測豬脂肪沉積能力的方法，能通過簡單的PCR擴增和酶切確定待測豬的基因型，以TP526TT基因型的豬進行育種可獲得候選的瘦肉型的豬品系。
文檔編號C12Q1/68GK101864487SQ20101019694
公開日2010年10月20日 申請日期2010年6月10日 優先權日2010年6月10日
發明者陳華, 陳宏權 申請人:安徽農業大學