用於三聚氰胺分析的核酸傳感器、分析裝置和分析方法

2023-06-28 20:17:51

用於三聚氰胺分析的核酸傳感器、分析裝置和分析方法
【專利摘要】本發明提供一種用於檢測三聚氰胺的新傳感器。本發明的用於該三聚氰胺分析的核酸傳感器的特徵在於含有：下述多核苷酸(x1)，其具有產生催化功能的催化核酸分子(D)和結合三聚氰胺的結合核酸分子(A)。上述多核苷酸(x1)包含來自序列號1至14中的一個鹼基序列，並且n和m為正整數。由於催化核酸分子(D)的催化功能在不存在三聚氰胺時被抑制，而催化核酸分子(D)的催化功能在存在三聚氰胺時產生，所述核酸傳感器可以通過檢測所述催化功能來分析三聚氰胺。
【專利說明】用於三聚氰胺分析的核酸傳感器、分析裝置和分析方法

【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種用於三聚氰胺分析的核酸傳感器、用於三聚氰胺分析的裝置、和 用於三聚氰胺分析的方法。

【背景技術】
[0002] 三聚氰胺是具有高氮含量的有機氮化合物。近年來，出現為了提高表觀蛋白量而 在例如牛奶、奶粉等的加工產品中混入三聚氰胺的問題，這導致嬰兒腎衰竭的高發生率。為 了防止攝取和散布這種含三聚氰胺的食物，非常重要的是分析食物中的三聚氰胺。儘管根 據日本衛生部的三聚氰胺濃度的指導值為0. 5ppm，實際上，如果約500ppm的三聚氰胺濃度 可被檢測出，則對人體等的影響而言是可接受的。
[0003]目前，傅立葉變換紅外光譜（FTIR)用於分析三聚氰胺。但是，由於FTIR分析儀是 非常昂貴的大型設備，例如，存在的問題是對於食品的進口商、經銷商、零售商和消費者而 言不容易使用該分析儀，且他們不得不求助於擁有該分析儀的檢驗機構來進行所述分析。
[0004] 因此，作為一種新的檢測方法，正在開發使用結合三聚氰胺的核酸分子（所謂的 適配子）的方法（非專利文獻1)。具體地，提出了這樣一種方法，其使用其上固定了核酸分 子的膠體金納米顆粒來分析催化共振散射光譜。根據這種方法，當三聚氰胺結合到固定在 膠體顆粒上的核酸分子之間時，膠體顆粒的催化能力被去活化。因此，認為通過催化共振散 射光譜來分析催化能力的存在或不存在和降低，可以分析樣品中三聚氰胺的存在或不存在 和其量。但是，這種方法同樣需要專用設備，因此絕不是簡單的分析。
[0005] 引文列表
[0006] 非專利文獻
[0007]非專利文獻 1:AHighlySensitiveAptamer-NanogoldCatalytic ResonanceScatteringSpectralAssayforMelamine.AihuiLiang,J Fluoresc(2011)21:1907-1912
[0008] 發明簡述
[0009] 本發明需要解決的問題
[0010] 因此，本發明旨在提供一種用於三聚氰胺分析的新傳感器。
[0011] 解決問題的手段
[0012] 本發明提供一種用於三聚氰胺分析的核酸傳感器，其包括下列多核苷酸（XI)、 (x2)、（x3)或（x4)，所述多核苷酸包含激活催化功能的催化核酸分子（D)和結合三聚氰胺 的結合核酸分子（A):
[0013] (xl)具有SEQIDNO: 1至14的鹼基序列中的任一個的多核苷酸，其中，n和m為 正整數；
[0014] (x2)具有通過在多核苷酸（xl)的鹼基序列中替換、刪除、添加和/或插入一個或 多個鹼基而獲得的鹼基序列的多核苷酸，其中，催化核酸分子（D)的催化功能在不存在三 聚氰胺時被抑制，並且催化核酸分子0)的催化功能在存在三聚氰胺時被激活；
[0015] (x3)具有與多核苷酸（xl)的任意鹼基序列具有至少80%同一性的鹼基序列的多 核苷酸，其中，催化核酸分子（D)的催化功能在不存在三聚氰胺時被抑制，並且催化核酸分 子（D)的催化功能在存在三聚氰胺時被激活；以及
[0016] (x4)具有與具有多核苷酸（xl)的任意鹼基序列的多核苷酸在嚴格條件下雜交的 多核苷酸互補的鹼基序列的多核苷酸，其中，催化核酸分子（D)的催化功能在不存在三聚 氰胺時被抑制，並且催化核酸分子0)的催化功能在存在三聚氰胺時被激活。
[0017] 本發明還提供一種用於三聚氰胺分析的裝置，其包括：基質材料；核酸傳感器；和 檢測單元，其中，將所述核酸傳感器和所述檢測單元布置在所述基質材料上，所述核酸傳感 器為根據本發明的核酸傳感器，以及所述檢測單元為檢測所述核酸傳感器中催化核酸分子 (D)的催化功能的檢測單元。
[0018] 本發明還提供一種用於分析的試劑盒，其包括：容器；以及核酸傳感器，其中，所 述核酸傳感器為根據本發明的核酸傳感器。
[0019] 本發明還提供一種用於三聚氰胺分析的方法，其包括：使樣品與根據本發明的用 於三聚氰胺分析的核酸傳感器接觸的接觸步驟；以及檢測所述核酸傳感器中催化核酸分子 (D)的催化功能從而檢測所述樣品中三聚氰胺的檢測步驟。
[0020] 本發明還提供一種用於三聚氰胺分析的方法，其包括：使樣品與根據本發明的用 於分析的裝置接觸的接觸步驟；以及檢測所述用於分析的裝置中核酸傳感器的催化核酸分 子（D)的催化功能從而檢測所述樣品中三聚氰胺的檢測步驟。
[0021] 本發明效果
[0022] 根據本發明的核酸傳感器，可以根據結合核酸分子（A)是否結合三聚氰胺而開 啟-關閉催化核酸分子0)的催化功能。因此，通過檢測催化核酸分子（D)的催化功能，能 夠毫無困難地檢測三聚氰胺是否存在或者三聚氰胺的量。此外，由於本發明的分析裝置使 用如上所述的核酸傳感器，例如，可以實現裝置的小型化和裝置的精簡化，並且即使對於多 個試樣也能夠實現簡便分析。因此，本發明可以是在例如三聚氰胺分析中非常有用的技術。 在本發明中，"分析"是包括例如定量分析、半定量分析和定性分析的概念。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0023] [圖1]圖1顯示本發明實施例1中核酸傳感器的結構的示意圖。
[0024] [圖2]圖2為顯示本發明實施例1中吸光度測量結果的圖。
[0025] [圖3]圖3顯示本發明實施例2中核酸傳感器的結構的示意圖。
[0026] [圖4]圖4為顯示本發明實施例2中吸光度測量結果的圖。
[0027] [圖5]圖5為顯示本發明實施例3中RLU測量結果的圖。
[0028] [圖6]圖6顯示本發明實施例4中核酸傳感器的結構的示意圖。
[0029] [圖7]圖7為顯示本發明實施例4中RLU測量結果的圖。
[0030] [圖8]圖8顯示本發明實施例5中核酸傳感器的結構的示意圖。
[0031] [圖9]圖9為顯示本發明實施例5中RLU測量結果的圖。
[0032] [圖10]圖10顯示本發明實施例6中核酸傳感器的結構的示意圖。
[0033] [圖11]圖11為顯示本發明實施例6中RLU測量結果的圖。
[0034] [圖12]圖12顯示本發明實施例7中核酸傳感器的結構的示意圖。
[0035][圖13]圖13為顯示本發明實施例7中RLU測量結果的圖。
[0036][圖14]圖14顯示本發明實施例8中核酸傳感器的結構的示意圖。
[0037][圖15]圖15為顯示本發明實施例8中RLU測量結果的圖。
[0038][圖16]圖16為顯示本發明實施例9中比色法結果的照片。

【具體實施方式】
[0039](核酸傳感器和使用該核酸傳感器的分析方法）
[0040] 如上所述，根據本發明的用於三聚氰胺分析的核酸傳感器包括下列多核苷酸 (xl)、（x2)、（x3)或（x4)，所述多核苷酸包含激活催化功能的催化核酸分子（D)和結合三聚 氰胺的結合核酸分子（A):
[0041] (xl)具有SEQIDNO: 1至14的鹼基序列中的任一個的多核苷酸，其中，n和m為 正整數；
[0042] (x2)具有通過在多核苷酸（xl)的鹼基序列中替換、刪除、添加和/或插入一個或 多個鹼基而獲得的鹼基序列的多核苷酸，其中，催化核酸分子（D)的催化功能在不存在三 聚氰胺時被抑制，並且催化核酸分子0)的催化功能在存在三聚氰胺時被激活；
[0043] (x3)具有與多核苷酸（xl)的任意鹼基序列具有至少80%同一性的鹼基序列的多 核苷酸，其中，催化核酸分子（D)的催化功能在不存在三聚氰胺時被抑制，並且催化核酸分 子（D)的催化功能在存在三聚氰胺時被激活；以及
[0044] (x4)具有與具有多核苷酸（xl)的任意鹼基序列的多核苷酸在嚴格條件下雜交的 多核苷酸互補的鹼基序列的多核苷酸，其中，催化核酸分子（D)的催化功能在不存在三聚 氰胺時被抑制，並且催化核酸分子0)的催化功能在存在三聚氰胺時被激活。
[0045]SEQIDNO:lGGGTGGGAGGGTCGGGccctCGC(T)"GCG
[0046]SEQIDNO:2GGGTGGGAGGGTCGGGccctcCGC(T)"GCG
[0047]SEQIDNO:3GGGTGGGAGGGTCGGGccctttCGC(T)"GCG
[0048]SEQIDNO:4GGGTGGGAGGGTCGGGcaccctCGC(T)"GCG
[0049]SEQIDNO:5GGGTGGGAGGGTCGGGccctccCGC(T)"GCG
[0050]SEQIDNO:6GGGTGGGAGGGTCGGGccctccCGC(T)"GCGg
[0051]SEQIDNO:7GGGTGGGAGGGTCGGGcccGCGCG(T)XGCGC
[0052]SEQIDNO: 8GGGTGGGAGGGTCGGGacccGCGCG(T)XGCGC
[0053]SEQIDNO: 9GGGTGGGAGGGTCGGGcacccGCGCG(T)XGCGC
[0054]SEQIDNO: 10GCGCG(T)XGCGCcgcgcGGGTGGGAGGGTCGGG
[0055]SEQIDNO: 11GCGCG(T)XGCGCacgcgcGGGTGGGAGGGTCGGG
[0056]SEQIDNO:12GGGTGGGAGGGTCGGGccctcCGC(T)mGGC(T)nGCC(T)mGCG
[0057]SEQIDNO: 13GGGTGGGAGGGTCGGGccctcCGC(T)JVGGC(T)"GCC(T)』CG
[0058]SEQIDNO: 14AGGGACGGGAAGAACGC(T)XCGAAAATGTGGAGGGT
[0059] 在SEQIDNO: 1至13的鹼基序列中，帶下劃線的部分是指結合核酸分子（A)和 催化核酸分子0>)。具體地，在SEQIDNO: 1至9、12和13的鹼基序列中，例如，5'側的下 劃線部分是指催化核酸分子（D)，和3'側的下劃線部分是指結合核酸分子（A)。在SEQID NO: 10和11中，例如，5'側的下劃線部分是指結合核酸分子（A)，和3'側的下劃線部分是指 催化核酸分子（D)。在SEQIDNO: 14的鹼基序列中，下劃線部分是指結合核酸分子（A)，和 在下劃線部分兩側上的序列是指雙鏈催化核酸分子（D)。
[0060] 本發明的核酸傳感器可進一步包括，例如，連接結合核酸分子（A)與催化核酸分 子（D)的接頭序列（L)。接頭序列（L)的長度為例如0至14個鹼基，優選0至10個鹼基， 更優選0至7個鹼基。在SEQIDNO: 1至13的各個鹼基序列中，例如，下劃線區域之間的 序列為接頭序列（U，並且SEQIDNO: 1至13的鹼基序列中的每一個均可具有另外的接頭 序列（L)。
[0061] 結合核酸分子（A)可為任意核酸分子，只要它結合三聚氰胺。優選地，結合核酸分 子（A)在其分子內結合三聚氰胺。在下文中，結合核酸分子（A)也被稱作三聚氰胺適配子。 結合核酸分子（A)由例如莖形成（stem-forming)區域SA、環區域（loopregion)和莖形成 區域SA，形成。莖形成區域SA和莖形成區域SA，具有彼此互補的序列，並且例如，在三聚氰胺 的存在下通過自退火來形成莖。
[0062] 莖形成區域SA和莖形成區域SA，各自具有如下的長度，例如，1至10個鹼基、優選 2至7個鹼基，更優選3至5個鹼基。莖形成區域SA的長度可以與莖形成區域SA，的長度相 同或不同，優選的是兩者相同。更優選地，這些區域具有彼此完全互補的序列。
[0063] 環區域為，例如，脫氧胸苷三磷酸（dTTP)的多核苷酸（下文稱為：多聚dT)，並且 可由（^^來表示。n為正整數。n為例如，3至100,優選6至70,更優選6至60或10至 60,並且更加優選6至48或12至48。
[0064] 結合核酸分子（A)除了具有例如包含多聚dT的環區域之外也可以具有包含多聚 dT的內部環區域。這種類型的結合核酸分子（A)也被稱為，例如，串聯型。
[0065] 不特別限定結合核酸分子（A)的長度，並且所述長度，例如為9至120個鹼基，優 選20至70個鹼基，並且更優選18至54個鹼基。
[0066] 結合核酸分子（A)的序列的具體實例如下：
[0067]CGC(T)nGCG(SEQIDNO:57)
[0068] MelOln = 7
[0069]Mel02n = 8
[0070]Mel03n = 9
[0071]Mel04n = 10
[0072]Mel05n = 11
[0073]Mel06n = 12
[0074]GCGCG(T)nCGCGCG(SEQIDNO:58)
[0075]Mel07n = 7
[0076]Mel08n = 8
[0077]Mel09n = 9
[0078]MellOn = 10
[0079]Mellln = 11
[0080]Mell2n = 12
[0081] 催化核酸分子（D)可為任意核酸分子，只要其激活催化功能。所述催化功能為，例 如，氧化還原反應的催化功能。所述氧化還原反應可為例如任意反應，只要其在從底物製備 產物的過程中引起兩種底物之間的電子轉移。不特別限制氧化還原反應的類型。所述氧化 還原反應的催化功能的實例包括與酶的那些催化功能類似的活性，其具體實例包括與過氧 化物酶的催化功能類似的活性（下文稱為"過氧化物酶樣活性"）。所述過氧化物酶樣活性 的實例包括辣根過氧化物酶（HRP)活性。催化核酸分子（D)在下文將描述的DNA中可被稱 為DNA酶或DNAzyme，而在下文將描述的RNA中可被稱為RNA酶或RNAzyme。
[0082] 催化核酸分子（D)優選為形成G-四分體（G-quartet)(或者也被稱為G-四聯體 (G-tetrad))結構的核酸，並且更優選的是形成鳥嘌呤四鏈體（或者也被稱為G-四鏈體 (G-quadruplex))結構的核酸。G-四聯體為，例如，由四個鳥嘌呤鹼基形成的平面結構，而 G-四鏈體為，例如，其中多個G-四聯體在彼此的頂部堆疊的結構。G-四聯體和G-四鏈體 在重複地包括例如G-富含的結構基序的核酸中形成。G-四聯體包括，例如，平行類型和反 平行類型，優選的是平行類型。
[0083] 催化核酸分子（D)優選為可結合卟啉的核酸。具體地，催化核酸分子（D)優選為 形成G-四聯體並且可結合卟啉的核酸。已知形成G-四聯體的核酸通過例如結合卟啉而形 成複合物從而激活上述氧化還原反應的催化功能。在核酸傳感器中，優選的是，當在三聚氰 胺未與結合核酸分子（A)結合的狀態下催化核酸分子（D)與接頭序列（L)或結合核酸分子 (A)之間形成莖時，抑制催化核酸分子（D)與卟啉結合；而當例如三聚氰胺與結合核酸分子 (A)結合併因此莖的形成被解除時，允許催化核酸分子（D)結合卟啉。具體地，在核酸傳感 器中，優選的是，在三聚氰胺未與結合核酸分子（A)結合的情況下，抑制催化核酸分子（D) 形成G-四聯體並因此抑制其結合卟啉，而當例如三聚氰胺與結合核酸分子（A)結合時，允 許催化核酸分子（D)形成G-四聯體並結合卟啉。
[0084] 不特別限制卟啉，其實例包括未取代的卟啉及其衍生物。所述衍生物的實例包括 取代的卟啉以及通過與金屬元素形成複合物而獲得的金屬卟啉。取代的卟啉的實例包括N-甲基內消旋卟啉。金屬卟啉的實例包括氯化血紅素，其為鐵複合物。例如，所述卟啉優選 金屬卟啉，並且更優選氯化血紅素。
[0085] 催化核酸分子（D)可為，例如，單鏈核酸分子或雙鏈核酸分子。在核酸傳感器中， 在催化核酸分子（D)為單鏈核酸分子的情況下，例如，當在三聚氰胺未與結合核酸分子（A) 結合的狀態下催化核酸分子（D)與接頭序列（L)或結合核酸分子（A)之間形成莖時，抑制 催化核酸分子（D)與形成G-四聯體；而當三聚氰胺與結合核酸分子（A)結合併因此莖的形 成被解除時，允許催化核酸分子（D)形成G-四聯體。此外，在核酸傳感器中，在催化核酸分 子（D)為雙鏈核酸分子的情況下，例如，在三聚氰胺未與結合核酸分子（A)結合的情況下， 抑制催化核酸分子（D)形成G-四聯體，這是因為結合核酸分子（A)的結構振動；而當三聚 氰胺與結合核酸分子（A)結合時，允許催化核酸分子（D)形成G-四聯體。在催化核酸分子 (D)為單鏈核酸分子的情況下，其長度為，例如，15至30個鹼基，優選15至24個鹼基，並且 更優選15至18個鹼基。在催化核酸分子（D)為雙鏈核酸分子的情況下，每條鏈的長度為， 例如，7至21個鹼基，優選7至17個鹼基，並且更優選7至14個鹼基。
[0086] 所述雙鏈催化核酸分子〇))的實例包括下列序列的組合。
[0087] 5,-AGGGACGGGAAGAA-3'（SEQIDN0:59)
[0088] 3,-TGGGAGGTGTAAAA-5，（SEQIDN0:60)
[0089] 所述單鏈催化核酸分子（D)的實例包括下列序列。
[0090]neco0584(SEQIDNO:61)
[0091] 5, -GGGTGGGAGGGTCGGG-3，
[0092] 如上所述，優選的是，當不存在三聚氰胺、三聚氰胺未與結合核酸分子（A)結合的 狀態下催化核酸分子（D)與接頭序列（L)之間形成莖時，抑制催化核酸分子（D)激活催化 功能；而當例如三聚氰胺與結合核酸分子（A)結合併因此莖的形成被解除時，允許催化核 酸分子（D)激活催化功能。因此，如上所述，優選地，所述核酸傳感器進一步包括在催化核 酸分子（D)與結合核酸分子（A)之間的接頭序列（L)以連接它們。可以根據例如所述催化 核酸分子的序列來設置接頭序列（L)的鹼基序列。
[0093] 如上所述，根據本發明的核酸傳感器包括包含催化核酸分子（D)和結合核酸分子 (A)的多核苷酸（xl)、（x2)、（x3)或（x4)。多核苷酸（xl)、（x2)、（x3)或（x4)為其中當不 存在三聚氰胺時催化核酸分子（D)的催化功能被抑制而當存在三聚氰胺時催化核酸分子 (D)的催化功能被激活的多核苷酸。
[0094] 多核苷酸（xl)具有SEQIDNO: 1至14的鹼基序列中的任一個，並且n和m為正 整數。n的例子包括上述數值並且n優選為6至48。在SEQIDN0:12和13的核苷酸中， 由於兩個（T)m形成內部環，各個m為，例如，2至31，優選2至24，更優選3至17，並且更加 優選4至10。
[0095]多核苷酸（x2)具有通過在多核苷酸（xl)的鹼基序列中替換、刪除、添加和/或 插入一個或多個鹼基而獲得的鹼基序列。在多核苷酸（x2)中，對"一個或多個"沒有限定。 在多核苷酸（xl)的鹼基序列中替換的鹼基數量為，例如，1至5個，優選1至4個，更優選1 至3個，更加優選1個或2個，並且特別優選1個。在多核苷酸（xl)的鹼基序列中添加或 插入的鹼基數量為，例如，1至5個，優選1至4個，更優選1至3個，更加優選1個或2個， 並且特別優選1個。在多核苷酸（xl)的鹼基序列中刪除的鹼基數量為，例如，1至5個，優 選1至4個，更優選1至3個，更加優選2個或1個，並且特別優選1個。
[0096] 多核苷酸（x3)具有與多核苷酸（xl)的任意鹼基序列具有至少80%同一'丨生的鹼基 序列。在多核苷酸（x3)中，與多核苷酸（xl)的鹼基序列的同一丨生為，例如，至少70%，優選 至少80%或至少85%，更加優選至少90%，仍更加優選至少95%、至少96%、至少97%或 者至少98%，並且特別優選至少99%。例如，可在默認條件下使用BLAST等計算同一性。
[0097] 多核苷酸（x4)具有與具有多核苷酸（xl)的任意鹼基序列的多核苷酸在嚴格條件 下雜交的多核苷酸互補的鹼基序列。在多核苷酸（x4)中，"在嚴格條件下雜交"是指例如本 領域技術人員公知的雜交實驗條件。具體地，"嚴格條件"是指其中鹼基序列可以例如通過 在0. 7至lmol/L的NaCl存在下在60至68°C下雜交然後使用0. 1至2XSSC溶液在65至 68°C下洗滌而鑑別的條件。1XSSC含有150mmol/L的NaCl和15mmol/L的檸檬酸鈉。
[0098] 所述核酸傳感器可為，例如，具有多核苷酸（xl)至（x4)中任一個的傳感器或者包 括多核苷酸（xl)至（x4)中的任一個的傳感器。在後一種情況中，例如，所述傳感器可進一 步包括與所述多核苷酸的5'端連接的5'端-附加序列、或者與所述多核苷酸的3'端連接 的3'端-附加序列、或者既包括5'端-附加序列又包括3'端-附加序列。所述5'端-附 加序列具有的長度例如為〇至22個鹼基，優選0至18個鹼基，並且更優選0至14個鹼基， 和所述3'端-附加序列具有的長度例如為0至18個鹼基，優選0至10個鹼基，並且更優 選為0至7個鹼基。如將在下文描述的，當在固定狀態下使用核酸傳感器時，例如，所述核 酸傳感器可進一步包括5'端-附加序列或3'端-附加序列作為用於固定的接頭序列。所 述用於固定的接頭序列的實例包括多聚dT。不特別限定用於固定的接頭序列的長度，該長 度為，例如，0至120個鹼基並且優選6至80個鹼基。
[0099] 核酸傳感器的具體實例包括分別包括多核苷酸（XI)、（X2)、（X3)和（X4)的傳感 器。在這些多核苷酸中，例如，當三聚氰胺不存在時，催化核酸分子（D)的催化功能被抑制， 而當存在三聚氰胺時，催化核酸分子（D)的催化功能被激活。
[0100] 多核苷酸（XI)包括多核苷酸（xl)的鹼基序列並且具有SEQIDN0:15至56的鹼 基序列中的任一個。這些序列顯示在表1至4中。
[0101] [表 1]

【權利要求】
1. 用於三聚氰胺分析的核酸傳感器，其包含： 下列多核苷酸（Xl)、（X2)、（X3)或（X4)，所述多核苷酸包含激活催化功能的催化核酸 分子（D)和結合三聚氰胺的結合核酸分子（A): (xl)由SEQ ID N0:1至14的鹼基序列中的任一個構成的多核苷酸，其中，n和m為正 整數； (x2)由通過在多核苷酸（xl)的鹼基序列中替換、刪除、添加和/或插入一個或多個鹼 基而獲得的鹼基序列構成的多核苷酸，其中，催化核酸分子（D)的催化功能在不存在三聚 氰胺時被抑制，並且催化核酸分子（D)的催化功能在存在三聚氰胺時被激活； (x3)由與多核苷酸（xl)的任意鹼基序列具有至少80%同一性的鹼基序列構成的多核 苷酸，其中，催化核酸分子（D)的催化功能在不存在三聚氰胺時被抑制，並且催化核酸分子 (D)的催化功能在存在三聚氰胺時被激活；以及 (x4)由與多核苷酸（xl)的任意鹼基序列所構成的多核苷酸在嚴格條件下雜交的多核 苷酸互補的鹼基序列構成的多核苷酸，其中，催化核酸分子（D)的催化功能在不存在三聚 氰胺時被抑制，並且催化核酸分子（D)的催化功能在存在三聚氰胺時被激活。
2. 根據權利要求1所述的核酸傳感器，其中， 在SEQ ID NO: 1至14的鹼基序列的任一個中，⑴"的n為6至48,並且⑴m為2 至31。
3. 根據權利要求1或2所述的核酸傳感器，其進一步包括： 接頭序列，其連接催化核酸分子（D)與結合核酸分子（A)。
4. 根據權利要求1至3中任一項所述的核酸傳感器，其進一步包括： 與多核苷酸（xl)、（x2)、（x3)或（x4)的5'端連接的5'端附加序列。
5. 根據權利要求4所述的核酸傳感器，其中， 所述5'端附加序列的長度為0至22個鹼基。
6. 根據權利要求1至5中任一項所述的核酸傳感器，其進一步包括： 與多核苷酸（xl)、（x2)、（x3)或（x4)的3'端連接的3'端附加序列。
7. 根據權利要求6所述的核酸傳感器，其中， 所述3'端附加序列的長度為7至18個鹼基。
8. 根據權利要求1至7中任一項所述的核酸傳感器，其中，所述核酸傳感器包含下列多 核苷酸（XI)、（X2)、（X3)或（X4): (XI)由SEQ ID NO: 15至56的鹼基序列中的任一個構成的多核苷酸； (X2)由通過在多核苷酸（XI)的鹼基序列中替換、刪除、添加和/或插入一個或多個鹼 基而獲得的鹼基序列構成的多核苷酸，其中，催化核酸分子（D)的催化功能在不存在三聚 氰胺時被抑制，並且催化核酸分子（D)的催化功能在存在三聚氰胺時被激活； (X3)由與多核苷酸（XI)的任意鹼基序列具有至少80%同一性的鹼基序列構成的多核 苷酸，其中，催化核酸分子（D)的催化功能在不存在三聚氰胺時被抑制，並且催化核酸分子 (D)的催化功能在存在三聚氰胺時被激活；以及 (X4)由與多核苷酸（XI)的任意鹼基序列構成的多核苷酸在嚴格條件下雜交的多核苷 酸互補的鹼基序列構成的多核苷酸，其中，催化核酸分子（D)的催化功能在不存在三聚氰 胺時被抑制，並且催化核酸分子（D)的催化功能在存在三聚氰胺時被激活。
9. 一種用於三聚氰胺分析的裝置，其包含： 基質材料； 核酸傳感器；和 檢測單元，其中， 將所述核酸傳感器和所述檢測單元布置在所述基質材料上， 所述核酸傳感器為根據權利要求1至8中任一項所述的核酸傳感器，以及 所述檢測單元為檢測所述核酸傳感器中催化核酸分子（D)的催化功能的檢測單元。
10. 根據權利要求9所述的裝置，其中， 所述核酸傳感器通過接頭與所述基質材料連接。
11. 根據權利要求9或10所述的裝置，其中， 將所述核酸傳感器布置在所述檢測單元內。
12. 根據權利要求9至11中任一項所述的裝置，其中， 所述檢測單元檢測由所述催化核酸分子（D)的催化功能產生的信號。
13. 根據權利要求12所述的裝置，其中， 所述信號為光學信號或電化學信號。
14. 根據權利要求9至13中任一項所述的裝置，其進一步包含： 試劑單元，其中， 所述試劑單元包含用於所述催化核酸分子（D)的催化功能的底物。
15. 用於三聚氰胺分析的試劑，其包含： 根據權利要求1至8中任一項所述的核酸傳感器。
16. 根據權利要求15所述的試劑，其進一步包含： 用於所述催化核酸分子（D)的催化功能的底物。
17. 用於三聚氰胺分析的方法，其包括： 使樣品與根據權利要求1至8中任一項所述的用於三聚氰胺分析的核酸傳感器接觸的 接觸步驟；以及 檢測所述核酸傳感器中催化核酸分子（D)的催化功能從而檢測所述樣品中的三聚氰 胺的檢測步驟。
18. 根據權利要求17所述的方法，其中，所述檢測步驟在用於所述催化核酸分子（D)的 催化功能的底物存在下進行。
19. 用於三聚氰胺分析的方法，其包括： 使樣品與根據權利要求9至14中任一項所述的用於分析的裝置接觸的接觸步驟；以及 檢測所述檢測單元中催化核酸分子（D)的催化功能從而檢測所述樣品中三聚氰胺的 檢測步驟。
20. 根據權利要求19所述的方法，其中，所述檢測步驟在用於所述催化核酸分子（D)的 催化功能的底物存在下進行。
【文檔編號】C12N15/115GK104508148SQ201380039964
【公開日】2015年4月8日 申請日期:2013年7月23日 優先權日:2012年7月27日
【發明者】堀井克紀, 金子直人, 秋富穣, 加藤信太郎, 古市真木雄, 和賀巖 申請人:日本電氣方案創新株式會社