一種梨多酚提取方法
2023-06-07 17:05:41
專利名稱：一種梨多酚提取方法
技術領域：
本發明涉及植物活性物質提取、加工領域，涉及一種梨多酚提取方法，具體涉及一種利用溶劑法從梨幼果中提取植物多酚的方法。
背景技術：
植物多酚是廣泛存在於植物體內的重要次生代謝產物，具有抗氧化、抗腫瘤、保護肝臟等多種生理功能(2007)。植物多酚在糧食、蔬菜中含量較少，但在水果及穀物皮層中含量較高(2000)。梨是我國第三大水果，面積和產量僅次於蘋果和柑橘。由於其含有多種如熊果苷、綠原酸、香草醛等多酚類物質(2004，2011)，因此具有一定的抗氧化保健功能。研究表明雖然在成熟梨果實中這些多酚物質存在的相對濃度不是很高，但梨幼果卻含有十分豐富的多酚類物質(2004，2009)。在生產中，由於生理落果或疏花疏果等栽培管理的需要，大 量梨幼果被遺棄，在一定程度上造成了多酚類生物資源的浪費，而如何回收利用這些生物資源的關鍵在於如何高效地提取分析這些多酚類物質，但關於梨幼果中多酚類物質高效提取方法的研究還未有報導。
發明內容
本發明的目的在於提供一種以梨幼果為原料，通過溶劑法獲得梨多酚的提取工藝。本發明的目的可以通過以下技術方案實現一種梨多酚提取方法，梨幼果去皮去核，切成小於Icm3的小塊，用液氮研磨成粉末；用309^90%的乙醇溶液對梨果進行浸提，浸提樣品和溶液的質量體積比為1:2(T30，用恆溫搖床避光、50°C 70°C、10(Tl70rpm勻速浸提，每次浸提時間為2飛小時，用離心機離心分離出上清液即為梨多酚提取液。所述的梨多酚提取方法，優選用40%飛0%的乙醇溶液對梨果進行浸提。所述的梨多酚提取方法，恆溫搖床的振蕩速率優選為10(Tl50rpm。所述的梨多酚提取方法，所述的浸提時間優選2 4小時。所述的梨多酚提取方法，梨幼果指落花後廣2個月的梨果實。按照本發明方法獲得的梨多酚提取液中多酚含量為75mg/100g 147mg/100g。此外，利用高效液相色譜法對本發明獲得的多酚物質進行鑑定，以熊果苷、沒食子酸、兒茶素、綠原酸、表兒茶素、咖啡酸、香草醛、阿魏酸、蘆丁、根皮苷、槲皮素等11種色譜純對照品做標準品，以甲醇和水混合溶劑做洗脫劑，根據峰面積定性定量分析提取物中有效成分，從而評價提取多酚的品質。標準品的色譜出峰圖譜如圖I所示，熊果苷的出峰時間為6. 8分鐘左右，沒食子酸的出峰時間為7. 3分鐘左右，兒茶素的出峰時間為9. 6分鐘左右，綠原酸的出峰時間為10. I分鐘左右，表兒茶素的出峰時間為11. 0分鐘左右，咖啡酸的出峰時間為11. 5分鐘左右，香草醛的出峰時間為12. 7分鐘左右，阿魏酸的出峰時間為13. 5分鐘左右，蘆丁出峰時間為14. 4分鐘左右，根皮苷出峰時間為15. 4分鐘左右，槲皮素出峰時間為21. 8分鐘左右，樣品的色譜出峰圖譜見圖2。本發明的有益效果I、採用液氮研磨樣品，可以使樣品磨得更細、更充分，使提取率增加。2、液氮研磨使得提取過程處於低溫狀態，避免了梨多酚在研磨過程中發生氧化反應，提高多酚的活性。3、提取過程使用恆溫搖床勻速浸提，利於樣品和提取溶劑充分接觸，提取率比恆溫水浴提高5%-17%。
圖I為標準品的色譜出峰圖譜 I為熊果苷，出峰時間約為6. 8分鐘；2為沒食子酸，出峰時間約為7. 3分鐘；3為兒茶素，出峰時間約為9. 6分鐘；4為綠原酸，出峰時間約為10. I分鐘；5為表兒茶素，出峰時間約為11. 0分鐘；6為咖啡酸，出峰時間約為11. 5分鐘；7為香草醛，出峰時間約為12. 7分鐘；8為阿魏酸，出峰時間約為13. 5分鐘；9為蘆丁，出峰時間約為14. 4分鐘；10為根皮苷，出峰時間約為15. 4分鐘；11為槲皮素，出峰時間約為21. 8分鐘。圖2為樣品的色譜出峰圖譜I為熊果苷,2為沒食子酸,3為兒茶素,4為綠原酸,5為表兒茶素,6為咖啡酸,7為香草醛，8為阿魏酸，9為蘆丁。
具體實施例方式實施例I :選取健康的梨幼果，去皮，去核，切成小於Icm3小塊，用液氮速凍研磨成粉末，加入40%的乙醇溶液，樣品和溶液質量體積比為1:20，用恆溫搖床IOOrpm 50°C浸提2小時(避光)，離心機離心分離出梨多酚提取液，FC法測定多酚含量為75mg/100g。對比例I :其他條件同實施例1，僅將恆溫搖床浸提改為相同溫度下的恆溫水浴浸提，所獲得的梨多酚提取液多酚含量為71mg/100g。實施例2 選取健康的梨幼果，去皮，去核，切成小於Icm3小塊，用液氮速凍研磨成粉末，加入50%的乙醇溶液，樣品和溶液質量體積比為1:30，用恆溫搖床120rpm 50°C浸提3小時(避光)，離心機離心分離出梨多酚提取液，FC法測定多酚含量為90mg/100g。對比例2 其他條件同實施例2，僅將恆溫搖床浸提改為相同溫度下的恆溫水浴浸提，所獲得的梨多酚提取液多酚含量為77mg/100g。實施例3 選取健康的梨幼果，去皮，去核，切成小於Icm3小塊，用液氮速凍研磨成粉末，加入50%的乙醇溶液，樣品和溶液質量體積比為1:20，用恆溫搖床150rpm 60°C浸提4小時(避光)，離心機離心分離出梨多酚提取液，FC法測定多酚含量為104mg/100g。對比例3
其他條件同實施例3，僅將恆溫搖床浸提改為相同溫度下的恆溫水浴浸提，所獲得的梨多酚提取液多酚含量為83mg/100g。實施例4 選取健康的梨幼果，去皮，去核，切成小於Icm3小塊，用液氮速凍研磨成粉末，加入60%的乙醇溶液，樣品和溶液質量體積比為1:30，用恆溫搖床130rpm 60°C浸提2小時(避光)，離心機離心分離出梨多酚提取液，FC法測定多酚含量為124mg/100g。對比例4:其他條件同實施例4，僅將恆溫搖床浸提改為相同溫度下的恆溫水浴浸提，所獲得的梨多酚提取液多酚含量為105mg/100g。實施例5
選取健康的梨幼果，去皮，去核，切成小於Icm3小塊，用液氮速凍研磨成粉末，力口A 60%的乙醇溶液，樣品和溶液質量體積比為1:30，用恆溫搖床150rpm70°C浸提2小時(避光)，離心機離心分離出梨多酚提取液，FC法測定多酚含量為147mg/100g。對比例5 其他條件同實施例5，僅將恆溫搖床浸提改為相同溫度下的恆溫水浴浸提，所獲得的梨多酚提取液多酚含量為122mg/100g。實施例6 :梨多酚提取物的定量定性分析本實驗採用的儀器高效液相色譜儀Watersl525。高效液相色譜分析條件色譜柱，C18柱150mmX4. 6mm, 05 u m ;流動相，甲醇和水;柱溫，30°C ;流速，0. 6mL mirT1 ;進樣量，51^;紫外檢測器，波長28011111。流動相A:水，用磷酸調pH3.2;B:甲醇。線性梯度淋洗程序，時間(min) /B (%) :0/2，3/2，4/25，11/50，16/80，26/80，30/2，35/2。標樣熊果苷、沒食子酸、兒茶素、綠原酸、表兒茶素、咖啡酸、香草醛、阿魏酸、蘆丁、根皮苷、槲皮素11種標準品購自Sigma公司，均為色譜純。標準品製備精確稱取標準品，用50%甲醇溶液配置為0. 005mg/ml、0. 025mg/ml、
0.0625mg/ml、0. 125mg/ml、0. 25mg/ml、0. 5mg/ml 濃度梯度，過 0. 45 ii m 濾膜，待上機用。樣品製備取實施例5中離心分離出的提取液30ml用旋轉蒸發儀蒸乾，用50%甲醇定容至2ml，過0. 45 ii m濾膜，待上機用。將標準品和樣品分別進樣，標準品的色譜出峰圖見圖1，熊果苷的出峰時間為6. 8分鐘左右，沒食子酸的出峰時間為7. 3分鐘左右，兒茶素的出峰時間為9. 6分鐘左右，綠原酸的出峰時間為10. I分鐘左右，表兒茶素的出峰時間為11.0分鐘左右，咖啡酸的出峰時間為11. 5分鐘左右，香草醛的出峰時間為12. 7分鐘左右，阿魏酸的出峰時間為13. 5分鐘左右，蘆丁出峰時間為14. 4分鐘左右，根皮苷出峰時間為15. 4分鐘左右，槲皮素出峰時間為21. 8分鐘左右。樣品的色譜出峰圖見圖2。通過計算可知，樣品中熊果苷含量為96. 66mg/100g,沒食子酸含量為0. 79mg/100g,兒茶素含量為11. 65mg/100g,綠原酸含量為7. 84mg/100g，表兒茶素含量為2. 79mg/100g，咖啡酸含量為2. 64mg/100g，香草醛含量為
4.45mg/100g,阿魏酸含量為I. 90mg/100g,蘆丁含量為I. 64mg/100g,未檢測到根皮苷和槲皮素。熊果苷在待測樣品中的含量最高，為74. 1%，說明幼果可作為提取熊果苷的天然資源，實施例5梨多酚提取液的多酚純度為88. 7%「(液相測得的的酚類物質的總和/FC法測得的酚類物質含量)，說明該梨多酚提取液樣品品質較好。
權利要求
1.一種梨多酚提取方法，其特徵在於梨幼果去皮去核，切成小於Icm3的小塊，用液氮研磨成粉末；用309^90%的乙醇溶液對梨果進行浸提，浸提樣品和溶液的質量體積比為I 20 30，用恆溫搖床避光、50°C "70°C、10(Tl70rpm勻速浸提，每次浸提時間為2 6小時，用離心機離心分離出上清液即為梨多酚提取液。
2.根據權利要求I所述的梨多酚提取方法，其特徵在於用40%飛0%的乙醇溶液對梨果進行浸提。
3.根據權利要求I所述的梨多酚提取方法，其特徵在於所述的恆溫搖床的振蕩速率為100 150rpm。
4.根據權利要求I所述的梨多酚提取方法，其特徵在於所述的浸提時間為2 4小時。
5.根據權利要求I所述的梨多酚提取方法，其特徵在於所述的梨幼果指落花後r2個月的梨果實。
全文摘要
本發明涉及植物活性物質提取、加工領域，涉及一種梨多酚提取方法。該方法是將梨幼果去皮去核，切成小於1cm3的小塊，用液氮研磨成粉末；用30%~90%的乙醇溶液對梨果進行浸提，浸提樣品和溶液的質量體積比為1:20~30，用恆溫搖床避光、50℃~70℃、100~170rpm勻速浸提，每次浸提時間為2~6小時，用離心機離心分離出上清液即為梨多酚提取液。本發明使用液氮研磨使得提取過程處於低溫狀態，避免了梨多酚在研磨過程中發生氧化反應，提高多酚的活性。本發明在提取過程中使用恆溫搖床勻速浸提，利於樣品和提取溶劑充分接觸，提取率比恆溫水浴提高5%-17%。
文檔編號A61K131/00GK102727609SQ20121022921
公開日2012年10月17日 申請日期2012年7月2日 優先權日2012年7月2日
發明者張紹鈴, 趙梅, 陶書田, 齊開傑 申請人:南京農業大學