一種通過微生物轉化黃芪總皂苷製備黃芪甲苷的方法
2023-06-07 23:45:11 2
專利名稱：一種通過微生物轉化黃芪總皂苷製備黃芪甲苷的方法
技術領域：
本發明涉及一種微生物轉化製備黃芪甲苷的方法，尤其是一種利用含有去乙醯酶和糖苷酶的微生物水解黃芪總皂苷中的乙醯基和糖基，以提高黃芪甲苷含量的微生物轉化黃芪總皂苷製備黃芪甲苷的方法。
背景技術：
黃芪(Radix Astragali)是常用中藥之一，是豆科植物膜莢黃芪Asira^a^Asmembranaceus (Fischer) Bunge 禾口蒙古黃membranaceus (Fisch. ) Bunge var.mongholicus (Bunge)P. K. Hsiao 的乾燥f艮。黃芪甲苷(Astragalosides IV, ASI)是從黃芪中分離得到的一種具有多種藥理活性的皂苷類化合物，為黃芪製劑質量鑑定的指標成分。研究顯示了黃芪甲苷在心血管、免疫、神經、消化、泌尿、循環和內分泌系統等均具有廣泛的藥理作用，據報導，黃芪甲苷能減輕腦缺血再灌注引起的血腦屏障滲透性增加；對缺血性腦損傷具有保護作用；通過調節癌基因的表達發揮抗癌活性；對糖尿病小鼠具有降血糖作用；具有強的抗B肝病毒活性；能有效的抑制或逆轉PS誘導的小鼠模型的肝纖維化；其中藥製劑被開發為心肌保護劑用於冠心病心絞痛的治療。但實踐顯示，黃芪甲苷在黃芪中含量極低，並且受產地和季節影響較大，一般約為0. 04%，提取分離困難。黃芪總皂苷(Astragalosides，AST)是黃芪的主要有效成分，佔黃芪乾重的2_3%。AST為一系列環阿爾庭烷型三萜苷，其化學結構如下圖
權利要求
1.一種通過微生物轉化黃芪總皂苷製備黃芪甲苷的方法，其特徵在於，其包括步驟將微生物菌種製成菌懸液或孢子懸浮液，接種於種子培養基中J8°C、220 rpm培養24^48 h即得種子液，再將種子液接種於發酵培養基中，28°C、220 rpm培養M、8 h，投入黃芪總皂苷，相同條件下轉化48、6 h，得轉化液；轉化液通過有機溶劑萃取和大孔樹脂分離純化得到黃芪甲苷純品。
2.按權利要求1所述的方法，其特徵在於，所述的黃芪總皂苷，其成分包括如下全部或部分黃芪皂苷單體astragaloside I、II、VI、VL isoastragaloside I、II，acetyIastragaloside I，agroastragaloside III、IY禾口 / 5 Cycloglobiceposide A0
3.按權利要求1所述的方法，其特徵在於，所述的微生物選自細菌、黴菌或酵母菌。
4.按權利要求1所述的方法，其特徵在於，所述的微生物是傘枝犁頭黴(Absidiacorymbifera)ο
5.按權利要求1所述的方法，其特徵在於，所述的微生物轉化黃芪甲苷是通過含有去乙醯酶和糖苷酶的微生物水解黃芪總皂苷中的乙醯基和糖基，提高黃芪甲苷含量。
6.按權利要求1所述的方法，其特徵在於，所述的轉化液，通過有機溶劑萃取和大孔樹脂分離純化黃芪甲苷，或先採用乙醇浸泡，再用正丁醇提取，所得浸膏再採用DlOl大孔樹脂分離純化，經乙酸乙酯萃取後得到黃芪甲苷純品。
7.黃芪甲苷注射液，其特徵在於，由權利要求1製得的黃芪甲苷1g、乙醇200 mL、丙二醇200 mL、葡萄糖100 g、補足注射用水至1000 m製成L。
8.權利要求7的黃芪甲苷注射液在製備治療心血管疾病、腦血管疾病、抗癌、抗病毒或糖尿病藥物中的用途。
9.按權利要求8所述的用途，其特徵在於，所述的心血管疾病是病毒性心肌炎。
全文摘要
本發明公開了一種利用微生物轉化黃芪總皂苷製備黃芪甲苷的方法，其包括步驟將細菌、黴菌和酵母菌製成菌懸液或孢子懸浮液，接種於種子培養基中製成種子液，再將種子液接種於發酵培養基中培養，生長好後投入黃芪總皂苷進行轉化，TLC掃描分析其他黃芪皂苷轉化為黃芪甲苷，使黃芪甲苷的量提高3倍以上，轉化液通過有機溶劑萃取和大孔樹脂分離純化得到黃芪甲苷純品。本發明方法能克服化學法水解黃芪總皂苷存在的對皂苷破壞達、汙染嚴重、目的性差等缺點，以及酶法水解黃芪總皂苷過程中酶不穩定性問題。具有無汙染、專一性強、轉化率高的優點，製備的黃芪甲苷純度可達99.9%以上。
文檔編號A61P7/04GK102559828SQ20101061526
公開日2012年7月11日 申請日期2010年12月30日 優先權日2010年12月30日
發明者馮美卿, 劉曉會, 史訓龍, 葉麗, 周珮, 李繼楊, 鞠佃文 申請人:復旦大學