普洱茶在製備抗免疫衰老或其相關疾病的藥物中的用途的製作方法

2023-07-04 00:52:21

專利名稱：普洱茶在製備抗免疫衰老或其相關疾病的藥物中的用途的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種抗免疫衰老或其相關疾病的藥物，具體涉及普洱茶在製備抗免疫 衰老或其相關疾病的藥物或保健品中的用途。
背景技術：
普洱茶作為雲南省特有的歷史名茶，以其獨特的加工工藝和保健功能聞名於海內 外。但普洱茶的保健功能大多為長期經驗總結或民間流傳，缺乏科學依據。目前對於普洱茶 功效的研究主要是針對非衰老實驗動物進行的。而在實際應用過程中，普洱茶提取物還對 老年人群具有多方面的保健功效，而對老年人群的保健作用的原理至今還未得到確實的、 科學的闡明。免疫衰老(immunosenescence)是指伴隨衰老，機體出現進行性免疫衰退的現 象(Aw D, Silva AB, Palmer DB.2007. Immunosenescence :emerging challenges for an ageing population. Immunology. 120(4) :435_46)，其表現為老年人群易患感染、癌症等疾 病，並對預防接種反應低下等狀態。雖然免疫衰老的變化涉及體內多種細胞和因子，但最 主要的變化為獲得性免疫系統的初始T細胞(naYveT lymphocyte)隨年齡增長逐漸減 少，與此同時，記憶 T 細胞(memory T lymphocyte)卻大量積聚(Vallejo AN. 2007. Immune remodeling :lessons from repertoire alterations during chronologicalaging and in immune-mediated disease. Trends Mol Med. 13(3) :94_102)。在固有的免疫系統中，維 持日常免疫功能的免疫細胞主要為自然殺傷細胞，即NK細胞，其伴隨衰老而減少。這些變 化的後果是機體內針對新入侵病原體的保護細胞減少，即有效抗感染的「武器」減少，結果 導致老年人群的抗感染能力下降，同時導致機體炎性細胞和因子增多，即老年人群並不僅 僅表現為免疫功能低下，還表現出慢性炎症過程，如血液中的炎性因子(pro-inflammatory cytokines)，如 IL—6 等的水平增高(Gupta S, Agrawal A, Agrawal S, et al. 2006. A paradox of immunodeficiency and inflammation inhuman aging :lessons learned from apoptosis. Immun Ageing. 3 5)。這些炎症因子參與常見老年性疾病的發病機制。上述證據提示衰老機體處於免疫低下與慢性炎症並存的狀態，因此單純免疫增強 或單純抗炎手段可能並不是理想的抗衰老策略。針對衰老的雙重表現和機制，逆轉衰老的 上述病理變化可能更有助於提高抗衰老的實際效果。從抗免疫衰老與抗炎的雙重用途探討 普洱茶及其提取物的功效迄今未見報導。

發明內容
為了對普洱茶的保健功效進行科學實驗的確證，特別是研究證明其對衰老以及老 年常見病患者的保健作用，本發明針對普洱茶對老年人群的衰老免疫調節功能以及作用機 理等進行了系列研究，闡明其治療、保健功能並探討其作用機理，目的在於提供一種有效預 防和/或治療免疫衰老或其相關疾病的藥物或保健品。用於實現上述目的的技術方案如下
普洱茶或其提取物在製備預防和/或治療免疫衰老或其相關疾病的藥物或保健 品中的用途。優選地，免疫衰老為老年人的免疫衰老。在上述用途中，免疫衰老或其相關疾病可以選自抗感染能力下降；癌症；預防接 種反應下降；慢性炎症，例如動脈粥樣硬化，慢性腸道炎性疾病，骨質疏鬆症，II型糖尿病和 慢性關節炎；以及DNA損傷誘發的衰老和疾病，例如DNA損傷誘發的癌症中的一種或多種。 其中，抗感染能力下降具體為感染發生率提高和/或感染嚴重程度增加；慢性腸道炎性疾 病具體為克羅恩氏病和/或潰瘍性結腸炎。在上述用途中，普洱茶可以為普洱茶生茶和/或普洱茶熟茶。優選地，普洱茶提取 物為普洱茶水提取物。普洱茶提取物的製備方法可以包括將普洱茶加水煮沸後過濾，取濾液。具體來說， 普洱茶提取物的製備方法可以包括以下步驟(1)將普洱茶加水煮沸20分鐘，普洱茶與水的質量比為1 20;(2)過濾，再將普洱茶加水煮沸20分鐘，普洱茶與水的質量比為1 20 ；(3)過濾，再將普洱茶加水煮沸10分鐘，普洱茶與水的質量比為1 10 ；(4)合併濾液，減壓濃縮。上述藥物還可以包含藥學上可接受的載體和/或賦形劑。本發明的實驗結果表明，普洱茶提取物具有逆轉衰老機體免疫功能低下與慢性 炎症並存的病理狀態的功效，因而可適用於抗衰老免疫以及由衰老免疫異常所導致的老 年性疾病的預防、保健或治療，其中包括預防老年人感染，降低其感染的嚴重程度，加快感 染痊癒等用途。此外，由於炎性因子，特別是IL-6等參與了許多老年慢性炎性疾病的發 病機制，如動脈粥樣硬化(atherosclerosis)、骨質疏鬆症(osteoporosis)、II型糖尿病 (Type2Diabetes)、慢性關節炎(chronic arthritis)、克羅恩(Crohn)氏病、潰瘍性結腸 炎(ulcerative colitis)，而本發明證明普洱茶或其提取物可減低衰老動物炎性因子的水 平，因而有利於上述老年疾病的預防、保健或治療。本發明的有益效果包括(1)對普洱茶的抗衰老免疫作用及其原理進行了研究分 析，拓展了普洱茶或其提取物的應用範圍；(2)證明了普洱茶或其提取物具有通過逆轉衰 老免疫細胞(降低記憶性T細胞以及增加NK細胞)的作用，增強減退的免疫功能，同時抑 制衰老機體炎症反應過亢的雙重作用，能夠實現抗免疫衰老的目的。為了觀察普洱茶或其提取物的抗衰老免疫作用，本發明採用國際上公認的衰老動 物模型 _ 快速老化亞系(Senescence accelerated mouse/prone, SAM—P8 系，8 月齡)為 實驗觀察動物。同時採用抗快速老化亞系(Senescence accelerated mouse/resistance, SAM-R1系，8月齡)為青年對照鼠。月齡的選擇依據國際上選擇P系、R系的主要標準，即 老化度評分，結果顯示SAM-P8鼠在8月齡時衰老程度表現明顯突出，而同月齡的SAM-R1鼠 處於青壯年階段。本發明通過給SAM-P8鼠(8月齡)灌餵不同劑量的普洱茶提取物。用藥一個月後， 通過用流式細胞技術方法，分析動物外周血與脾中淋巴細胞中與衰老免疫有關細胞亞群的 比例，同時分析血漿中與衰老有關的淋巴細胞因子水平的變化。實驗結果顯示，快速老化鼠 SAM-P8血液中的初始性T細胞(NaYve T)在外周血淋巴細胞中所佔的比例明顯低於抗老 化鼠SAM-R1 (青年鼠)，而記憶性T細胞(memory T)在外周血淋巴細胞中的比例則明顯高於抗老化鼠SAM-R1，P < 0. 001。不同劑量的普洱茶生茶和熟茶提取物均能顯著升高脾臟 細胞中初始T淋巴細胞(NaifveT)的比例，p < o. 05-0.001。不同劑量的普洱茶生茶和熟 茶提取物均能顯著降低血液中的記憶性T淋巴細胞的比例，P 0. 05。初始T細胞的下降與記憶T細胞的積 聚是衰老免疫最顯著的特徵之一。此外，自然殺傷細胞是機體固有免疫系統中的主要細胞。快速老化鼠SAM-P8血液 中的自然殺傷細胞(natural killer,NK)在外周血淋巴細胞中所佔的比例明顯低於抗老化 鼠SAM-R1，P < 0. 001。不同劑量的普洱茶提取物均能顯著增加血液中的NK細胞在外周血 淋巴細胞中所佔的比例，P < 0. 001。白細胞介素-6(IL_6)是機體主要的炎性因子之一，其參與許多老年疾病炎症的 病理過程。快速老化鼠SAM-P8血液中的炎性細胞因子IL-6的含量與抗老化鼠SAM-R1相 比明顯增高，P < 0. 001。普洱茶生茶的各個劑量組與普洱茶熟茶的各個劑量組的血清IL-6 含量顯著降低，P < 0. 05-0. 001。


以下，結合附圖來詳細說明本發明的實施方案，其中圖1 不同濃度的普洱茶生茶和熟茶提取物對衰老小鼠SAM脾淋巴細胞初始 T(Naive T lymphocytes)細胞比例的影響。數值均以均值士標準誤表示。###P < 0. 001， SAM-P8 與 SAM-R1 比較；< 0. 001，*P < 0. 05，各治療組與 SAM-P8 比較。P8 :SAM_P8 快 速老化鼠；R1 :SAM-R1抗老化青年鼠；生茶-低生茶低劑量組125mg/kg ；生茶-中生茶中 劑量組250mg/kg ；生茶-高生茶高劑量組500mg/kg ；熟茶-低熟茶低劑量組125mg/kg ； 熟茶_中熟茶中劑量組250mg/kg ；熟茶-高熟茶高劑量組500mg/kg。圖2 不同濃度的普洱茶生茶和熟茶提取物對衰老小鼠SAM外周血淋巴細胞記憶 T(Memory T lymphocytes)細胞比例的影響。數值均以均值士標準誤表示。###P < 0. 001， SAM-P8 與 SAM-R1 比較；***P < 0. 001，**P < 0. 01，*P < 0. 05，各治療組與 SAM-P8 比較。 P8 :SAM-P8快速老化鼠；R1 :SAM-R1抗老化青年鼠；生茶-低生茶低劑量組125mg/kg ；生 茶-中生茶中劑量組250mg/kg ；生茶-高生茶高劑量組500mg/kg ；熟茶-低熟茶低劑 量組125mg/kg ；熟茶-中熟茶中劑量組250mg/kg ；熟茶-高熟茶高劑量組500mg/kg。圖3 不同濃度的普洱茶生茶和熟茶提取物對衰老小鼠SAM脾臟自然殺傷細胞 (Natural Killer,NK)陽性細胞數目的作用。數值均以均值士標準誤表示。##P<0.01， SAM-P8 與 SAM-R1 比較。*P < 0. 05，**P < 0. 01，各治療組與 SAM-P8 比較。P8 :SAM_P8 快 速老化鼠；R1 :SAM-R1抗老化青年鼠；生茶-低生茶低劑量組125mg/kg ；生茶-中生茶中 劑量組250mg/kg ；生茶-高生茶高劑量組500mg/kg ；熟茶-低熟茶低劑量組125mg/kg ； 熟茶_中熟茶中劑量組250mg/kg ；熟茶-高熟茶高劑量組500mg/kg。圖4 不同濃度的普洱茶生茶和熟茶提取物對衰老小鼠SAM外周血自然殺傷細胞 (Natural Killer, NK)細胞數目的作用。數值均以均值士標準誤表示。###P < 0.001， SAM-P8與SAM-R1比較。***P < 0. 001，各治療組與SAM-P8比較。P8 :SAM_P8快速老化 鼠；R1 :SAM-R1抗老化青年鼠；生茶-低生茶低劑量組125mg/kg ；生茶-中生茶中劑量 組250mg/kg ；生茶-高生茶高劑量組500mg/kg ；熟茶-低熟茶低劑量組125mg/kg ；熟
5茶-中熟茶中劑量組250mg/kg ；熟茶-高熟茶高劑量組500mg/kg。圖5 不同濃度的普洱茶生茶與熟茶提取物對衰老小鼠SAM血中炎性因子IL-6 水平的作用。數值均以均值士標準差表示。###P < 0. 001，SAM-P8與SAM-R1比較。*P < 0. 05，_P < 0. 001，各治療組與 SAM-P8 比較。P8 :SAM_P8 快速老化鼠；R1 :SAM_R1 抗 老化青年鼠；生茶-低生茶低劑量組125mg/kg ；生茶-中生茶中劑量組250mg/kg ；生 茶-高生茶高劑量組500mg/kg ；熟茶-低熟茶低劑量組125mg/kg ；熟茶-中熟茶中劑 量組250mg/kg ；熟茶-高熟茶高劑量組500mg/kg。
具體實施例方式下面結合具體實施方式
對本發明進行進一步的詳細描述，給出的實施例僅為了闡 明本發明，而不是為了限制本發明的範圍。實施例1普洱茶水提取物的製備分別取普洱茶生茶或熟茶，粉碎成粗粉。沸水浸提三次，茶葉與水的質量比分別為 1 20；1 20；1 10 ；浸提時間分別為20分鐘、20分鐘、10分鐘。合併濾液，60°C減壓 濃縮得茶湯濃縮液。將茶湯濃縮液裝瓶滅菌(120°C，20分鐘)，低溫冷藏(4°C)備用，或將 提取液經真空乾燥得普洱茶提取物。實施例2普洱茶提取物的藥理活性研究1.實驗藥物普洱茶提取物的製備工藝參見實施例1。2.實驗動物實驗動物選用國際上公認的衰老動物模型_快速老化亞系 (Senescenceaccelerated mouse/prone, SAM-P8，雄性，8 月齡)，採用抗快速老化亞系 (Senescence accelerated mouse/resistance, SAM-R1,雄性，8 月齡)為青年對照鼠。通 過口服灌喂，分別給予快速老化鼠SAM-P8不同劑量的普洱茶生茶提取物與普洱茶熟茶提 取物，抗快速老化亞系(青年對照組)和快速老化亞系(老年對照組)每天灌胃等量蒸餾 水，連續用藥4周。3.實驗方法用藥4周後，動物經乙醚麻醉，眼眶取血，肝素抗凝。將部分肝素抗凝血液離心 (3000rpm，30分鐘)。取血漿分裝到EP管中，分2管，每管100 yl，置於_60°C冰箱保存。 通過流式細胞儀 FACS Calibur TM(BDBiosciences, San Diego, CA, USA)採用流式細胞微 球捕獲晶片技術CBA(Cytometric Bead Array)同步檢測與衰老炎症有關的血漿淋巴因子 IFN- y，TNF- a，IL-6, MCP-1 以及抗炎因子 IL_12p70，IL-10 等。通過採用特異性螢光標記的淋巴細胞表面抗體標記外周血和脾的淋巴細胞，然後 對血和脾的淋巴細胞亞群進行流式細胞分析。將血液中的細胞搖勻，分別置於BD流式專用 試管中。每管100 iU，每一管加相應淋巴細胞表面標記的抗體。室溫避光孵育30分鐘後， 每管加紅細胞裂解液1ml，充分混勻，室溫避光5分鐘。離心1500轉/分，5分鐘，棄上清。 將沉澱細胞用PBS洗三遍。將所有沉澱的細胞懸浮起來，用美國FACS Caliber流式細胞儀 (FACS Calibur TM，BD Biosciences, San Diego, CA, USA)上機對淋巴細胞亞群進行流式檢 測和分析。
4.實驗結果不同濃度的普洱茶生茶或熟茶提取物對衰老小鼠SAM脾淋巴細胞中初始T (Naive T lymphocytes)細胞比例的影響。初始T細胞的減少是衰老免疫最顯著的特徵之一，也是 導致衰老免疫功能減退的主要原因。本實驗結果顯示快速老化鼠SAM-P8脾細胞中的初始 性T細胞(NaiVe T)在脾淋巴細胞中所佔的比例明顯低於抗老化鼠SAM-R1 (青年鼠)，P
<0. 001。不同劑量的普洱茶生茶或熟茶提取物均能顯著提高脾細胞中的NaYve T細胞的 比例，P < 0. 05-0. 001，參見圖 1。普洱茶提取物對快速老化鼠(SAM-P8)血中記憶性T細胞(MemoryT cell)的影響。 記憶T細胞積聚是衰老免疫最顯著的特徵，也是導致免疫衰老的主要原因之一。本實驗結 果顯示快速老化鼠SAM-P8血液中的記憶性T細胞(memory T)在外周血淋巴細胞中的比例 明顯高於抗老化鼠SAM-R1，P< 0.001。低、中、高劑量的普洱茶生茶提取物以及低、中、高 劑量的普洱茶熟茶提取物均能顯著降低血液中的記憶T細胞的比例，P < 0. 05-0. 001，參見 圖2。普洱茶提取物對快速老化鼠脾細胞中自然殺傷細胞(natural killer，NK)的影 響。自然殺傷細胞是機體固有免疫系統中的主要細胞。快速老化鼠SAM-P8脾細胞中的自 然殺傷細胞(natural killer,NK)在脾淋巴細胞中所佔的比例明顯低於抗老化鼠SAM-R1， P < 0. 01。中、高劑量的普洱茶生茶或熟茶提取物均能顯著提高脾中的NK細胞在脾淋巴細 胞中所佔的比例，P < 0. 05-0. 01，參見圖3。普洱茶提取物對快速老化鼠外周血中自然殺傷細胞(natural killer，NK)的影 響。自然殺傷細胞是機體固有免疫系統中的主要細胞。快速老化鼠SAM-P8血液中的自然殺 傷細胞(natural killer,NK)在外周血淋巴細胞中所佔的比例明顯低於抗老化鼠SAM-R1， P < 0. 001。不同劑量的普洱茶提取物均能顯著增加血液中的NK細胞在外周血淋巴細胞中 所佔的比例，P < 0. 001，參見圖4。普洱茶提取物對快速老化鼠血清白細胞介素-6(Interleukin-6，IL-6)含量的 影響。IL-6是機體主要的炎性因子之一，參與許多老年疾病炎症的病理過程。快速老 化鼠SAM-P8血液中的炎性細胞因子白細胞介素-6的含量比青年鼠SAM-R1明顯增高，P
<0. 001。不同劑量的普洱茶提取物能夠顯著降低血清IL-6的含量，P < 0. 05-0. 001，參 見圖5。
權利要求
普洱茶或其提取物在製備預防和/或治療免疫衰老或其相關疾病的藥物或保健品中的用途。
2.根據權利要求1所述的用途，其特徵在於，所述免疫衰老為老年人的免疫衰老。
3.根據權利要求1或2所述的用途，其特徵在於，所述免疫衰老或其相關疾病選自抗感 染能力下降；癌症；預防接種反應下降；慢性炎症，例如動脈粥樣硬化，慢性腸道炎性疾病， 骨質疏鬆症，II型糖尿病和慢性關節炎；以及DNA損傷誘發的衰老和疾病，例如DNA損傷誘 發的癌症中的一種或多種。
4.根據權利要求1至3中任一項所述的用途，其特徵在於，所述抗感染能力下降為感染 發生率提高和/或感染嚴重程度增加；所述慢性腸道炎性疾病為病克羅恩病和/或潰瘍性 結腸炎。
5.根據權利要求1至4中任一項所述的用途，其特徵在於，所述普洱茶為普洱茶生茶和/或普洱茶熟茶。
6.根據權利要求1至5中任一項所述的用途，其特徵在於，所述普洱茶提取物為普洱茶 水提取物。
7.根據權利要求1至6中任一項所述的用途，其特徵在於，所述普洱茶提取物的製備方 法包括將普洱茶加水煮沸後過濾，取濾液。
8.根據權利要求1至7中任一項所述的用途，其特徵在於，所述普洱茶提取物的製備方 法包括以下步驟(1)將普洱茶加水煮沸20分鐘，普洱茶與水的質量比為1 20 ；(2)過濾，再將普洱茶加水煮沸20分鐘，普洱茶與水的質量比為1 20 ；(3)過濾，再將普洱茶加水煮沸10分鐘，普洱茶與水的質量比為1 10 ；(4)合併濾液，減壓濃縮。
9.根據權利要求1至8中任一項所述的用途，其特徵在於，所述藥物包含藥學上可接受 的載體和/或賦形劑。
全文摘要
本發明提供了普洱茶在製備抗免疫衰老或其相關疾病的藥物中的用途。本發明對普洱茶的抗衰老免疫作用及其原理進行了研究分析，證明了普洱茶或其提取物具有通過逆轉衰老免疫細胞(降低記憶性T細胞以及增加NK細胞)的作用，增強減退的免疫功能同時抑制衰老機體的炎症反應過亢的雙重作用，能夠實現抗免疫衰老的目的，拓展了普洱茶或其提取物的應用範圍，提供一種有效預防和/或治療免疫衰老或其相關疾病的藥物或保健品。
文檔編號A61P39/06GK101856434SQ201010205429
公開日2010年10月13日 申請日期2010年6月22日 優先權日2010年6月22日
發明者屠鵬飛, 張可, 張梁, 袁力豐, 邵宛芳, 馬旭, 馬治中 申請人:馬治中;邵宛芳;屠鵬飛