一種潔白度好的靈芝菌種復壯方法與流程
2023-07-04 04:16:36 2
本發明涉及一種靈芝菌種復壯方法，特別是一種潔白度好的靈芝菌種復壯方法。
背景技術：
：靈芝為多孔菌科真菌赤芝或紫芝的乾燥子實體。靈芝是一種珍貴的藥用真菌，屬於擔子菌綱多孔菌科靈芝屬，在我國有兩千多年的藥用史。靈芝首載於《神農本草經》，歷代醫家都認為靈芝能治療多種疾病，是滋補強壯扶正固本的珍貴藥物。靈芝多糖是靈芝中最有效的成分之一，存在於靈芝的子實體、孢子粉和菌絲體中，具有抑制腫瘤、增強機體對自由基清除的能力，故能減少自由基對機體的損傷、有延緩衰老之功效，還可以提高免疫力、抗炎症、降血脂、降血糖等作用。隨著靈芝的保健功效被人們廣泛的認識和接受，野生靈芝已遠遠不能滿足人們的需求。培養基是靈芝賴以生存的條件，不同的培養原料和配方可對靈芝的菌絲生長、產量和活性成分等產生重要的影響。其中，復壯用培養基對後期的成品靈芝的質量影響很大。現有復壯方法中所用的培養基大多數只含有葡萄糖、土豆、蛋白腖等。這樣製成的培養基營養不充足，使得復壯過程中菌絲生長狀態不好，得到的菌絲潔白度、緊密度和長勢不好。技術實現要素：本發明的目的，是提供一種潔白度好的靈芝菌種復壯方法。本發明方法進行復壯，菌絲生長狀態好，得到的菌絲潔白度、緊密度和長勢好。本發明是這樣實現的。一種潔白度好的靈芝菌種復壯方法，包括組織分裂、靈芝母種製備和培養。前述的潔白度好的靈芝菌種復壯方法，具體包括以下步驟：(1)組織分裂：取野生靈芝的子實體，用水衝洗乾淨，切去菌柄，再消毒、洗淨後吸乾水分，菌蓋切成兩半，在菌蓋和菌柄連接中央處割成1-3mm的菌肉組織片，置於無菌培養皿內，再將組織片接種於試管斜面培養基上，培養，在26℃～28℃條件下培養5-7d，得組織分裂後的菌絲；(2)靈芝母種製備：試管用70-80％的酒精消毒後，擦拭乾淨，置於100萬級超淨工作檯，用紫外燈消毒25-35min，裝入培養基，培養基的裝入量為試管體積的2/3，取組織分裂後的菌絲生長最前端1-2cm內的菌絲小塊，放入培養基中，用培養基覆蓋菌絲小塊，覆蓋厚度為1-1.5cm，塞入試管塞，放入25-28℃的恆溫箱中進行培養5-7天，得靈芝母種；(3)靈芝菌種的製備：靈芝母種繼續培養10-15天，得靈芝菌種；(4)培養：取玉米粉，加水拌溼使得玉米粉的含水量為50-60％的玉米粉培養基，將靈芝菌種置於裝有小米粉培養基的試管中，塞入試管塞，於25-28℃培養，待菌絲生長滿試管時停止培養，即可。前述的潔白度好的靈芝菌種復壯方法，所述培養基按重量份計算，主要由葡萄糖15-25份、酵母膏3-5份、土豆180-220份、蛋白腖1.5-2.5份、海藻粉15-25份、大蒜粉0.3-0.5份、苦蕎10-20份、黃連1-10份、蒼耳子1-10份和白朮5-15份製成。前述的潔白度好的靈芝菌種復壯方法，所述培養基按重量份計算，主要由葡萄糖18-22份、酵母膏3-5份、土豆190-210份、蛋白腖1.8-2.2份、海藻粉18-22份、大蒜粉0.3-0.5份、苦蕎13-17份、黃連3-7份、蒼耳子3-7份和白朮8-12份製成。前述的潔白度好的靈芝菌種復壯方法，所述培養基按重量份計算，主要由葡萄糖20份、酵母膏4份、土豆200份、蛋白腖2.0份、海藻粉20份、大蒜粉0.4份、苦蕎15份、黃連5份、蒼耳子5份和白朮10份製成。前述的潔白度好的靈芝菌種復壯方法，所述培養基按下述步驟製備：(1)取苦蕎、黃連、蒼耳子和白朮，加6-8倍量水，煎煮2-3h，過濾，取濾渣烘乾後，粉碎成細顆粒，得a品；(2)土豆切片，加5-7倍量水煮沸20-30分鐘，過濾，濾渣加5-7倍量水繼續，加熱至50-60℃，得b品；(3)b品中依次加入葡萄糖、蛋白腖、酵母膏、大蒜粉、a品和海藻粉，邊加邊攪拌，攪勻後，得c品；(4)c品分裝至180ml試管的1/5，矽膠塞密封，6-8支用報紙包好，120-122℃下滅菌20-30min後，冷卻至50-60℃，傾斜5-15度放置於20-35℃的烘箱中，放置24-48小時後，取出，即得。前述的潔白度好的靈芝菌種復壯方法，所述培養基按下述步驟製備：(1)取苦蕎、黃連、蒼耳子和白朮，加7倍量水，煎煮2.5h，過濾，取濾渣烘乾後，粉碎成細顆粒，得a品；(2)土豆切片，加6倍量水煮沸25分鐘，過濾，濾渣加6倍量水繼續，加熱至50-60℃，得b品；(3)b品中依次加入葡萄糖、蛋白腖、酵母膏、大蒜粉、a品和海藻粉，邊加邊攪拌，攪勻後，得c品；(4)c品分裝至180ml試管的1/5，矽膠塞密封，7支用報紙包好，120-122℃下滅菌25min後，冷卻至50-60℃，傾斜10度放置於20-35℃的烘箱中，放置36小時後，取出，即得。申請人對靈芝復壯方法進行了大量的研究，部分實驗如下：實驗例.菌絲生長情況考察1材料1.1靈芝：由山東省壽光市食用菌研究所提供。1.2對比培養基：原料：葡萄糖20kg、酵母膏4kg、土豆200kg、蛋白腖2.0kg、海藻粉20kg和大蒜粉0.4kg。製作工藝：(1)土豆切片，加6倍量水煮沸25分鐘，過濾，濾渣加6倍量水繼續，加熱至50-60℃，得a品；(2)a品中依次加入葡萄糖、蛋白腖、酵母膏、大蒜粉和海藻粉，邊加邊攪拌，攪勻後，得b品；(3)b品分裝至180ml試管的1/5，矽膠塞密封，7支用報紙包好，120-122℃下滅菌25min後，冷卻至50-60℃，傾斜10度放置於20-35℃的烘箱中，放置36小時後，取出，即得。2試驗方法和結果將靈芝分成2組，本發明組和對照組，本發明組按實施例1進行復壯。對照組復壯方法同實施例1，但靈芝菌種的製備和二次培養時，所用的培養基為上述對比培養基。過程中觀察菌絲的生長情況，並作記錄。結果見表1和表2。表1不同復壯培養基上菌絲爬壁情況表2生長形狀觀察結果組別菌絲潔白度緊密度菌絲長勢本發明組潔白緊密很旺盛對照組暗輝緊密旺盛由表可知，本發明方法進行復壯後的靈芝菌絲長勢好，生長形狀優於對照組進行復壯得到的菌絲。與現有技術相比，用本發明方法進行復壯，菌絲生長狀態好，得到的菌絲潔白度、緊密度和長勢好。具體實施方式實施例1。培養基原料：葡萄糖20kg、酵母膏4kg、土豆200kg、蛋白腖2.0kg、海藻粉20kg、大蒜粉0.4kg、苦蕎15kg、黃連5kg、蒼耳子5kg和白朮10kg。培養基的製作方法：具體包括以下步驟：(1)取苦蕎、黃連、蒼耳子和白朮，加7倍量水，煎煮2.5h，過濾，取濾渣烘乾後，粉碎成細顆粒，得a品；(2)土豆切片，加6倍量水煮沸25分鐘，過濾，濾渣加6倍量水繼續，加熱至50-60℃，得b品；(3)b品中依次加入葡萄糖、蛋白腖、酵母膏、大蒜粉、a品和海藻粉，邊加邊攪拌，攪勻後，得c品；(4)c品分裝至180ml試管的1/5，矽膠塞密封，7支用報紙包好，120-122℃下滅菌25min後，冷卻至50-60℃，傾斜10度放置於20-35℃的烘箱中，放置36小時後，取出，即得。菌種復壯方法：具體包括以下步驟：(1)組織分裂：取野生靈芝的子實體，用水衝洗乾淨，切去菌柄，再消毒、洗淨後吸乾水分，菌蓋切成兩半，在菌蓋和菌柄連接中央處割成1-3mm的菌肉組織片，置於無菌培養皿內，再將組織片接種於試管斜面培養基上，培養，在26℃～28℃條件下培養6d，得組織分裂後的菌絲；(2)靈芝母種製備：試管用75％的酒精消毒後，擦拭乾淨，置於100萬級超淨工作檯，用紫外燈消毒30min，裝入培養基，培養基的裝入量為試管體積的2/3，取組織分裂後的菌絲生長最前端1-2cm內的菌絲小塊，放入培養基中，用培養基覆蓋菌絲小塊，覆蓋厚度為1-1.5cm，塞入試管塞，放入25-28℃的恆溫箱中進行培養6天，得靈芝母種；(3)靈芝菌種的製備：靈芝母種繼續培養13天，得靈芝菌種；(4)培養：取玉米粉，加水拌溼使得玉米粉的含水量為55％的玉米粉培養基，將靈芝菌種置於裝有小米粉培養基的試管中，塞入試管塞，於25-28℃培養，待菌絲生長滿試管時停止培養，即可。實施例2.培養基原料：葡萄糖25kg、酵母膏5kg、土豆220kg、蛋白腖2.5kg、海藻粉25kg、大蒜粉0.5kg、苦蕎20kg、黃連10kg、蒼耳子10kg和白朮15kg。培養基製作方法：(1)取苦蕎、黃連、蒼耳子和白朮，加8倍量水，煎煮3h，過濾，取濾渣烘乾後，粉碎成細顆粒，得a品；(2)土豆切片，加7倍量水煮沸30分鐘，過濾，濾渣加7倍量水繼續，加熱至50-60℃，得b品；(3)b品中依次加入葡萄糖、蛋白腖、酵母膏、大蒜粉、a品和海藻粉，邊加邊攪拌，攪勻後，得c品；(4)c品分裝至180ml試管的1/5，矽膠塞密封，8支用報紙包好，120-122℃下滅菌30min後，冷卻至50-60℃，傾斜15度放置於20-35℃的烘箱中，放置48小時後，取出，即得。菌種復壯方法：具體包括以下步驟：(1)組織分裂：取野生靈芝的子實體，用水衝洗乾淨，切去菌柄，再消毒、洗淨後吸乾水分，菌蓋切成兩半，在菌蓋和菌柄連接中央處割成1-3mm的菌肉組織片，置於無菌培養皿內，再將組織片接種於試管斜面培養基上，培養，在26℃～28℃條件下培養7d，得組織分裂後的菌絲；(2)靈芝母種製備：試管用80％的酒精消毒後，擦拭乾淨，置於100萬級超淨工作檯，用紫外燈消毒35min，裝入培養基，培養基的裝入量為試管體積的2/3，取組織分裂後的菌絲生長最前端1-2cm內的菌絲小塊，放入培養基中，用培養基覆蓋菌絲小塊，覆蓋厚度為1-1.5cm，塞入試管塞，放入25-28℃的恆溫箱中進行培養7天，得靈芝母種；(3)靈芝菌種的製備：靈芝母種繼續培養15天，得靈芝菌種；(4)培養：取玉米粉，加水拌溼使得玉米粉的含水量為60％的玉米粉培養基，將靈芝菌種置於裝有小米粉培養基的試管中，塞入試管塞，於25-28℃培養，待菌絲生長滿試管時停止培養，即可。實施例3.培養基原料：葡萄糖15kg、酵母膏3kg、土豆180kg、蛋白腖1.5kg、海藻粉15kg、大蒜粉0.3kg、苦蕎10kg、黃連1kg、蒼耳子1kg和白朮5kg。培養基製作方法：(1)取苦蕎、黃連、蒼耳子和白朮，加6倍量水，煎煮2h，過濾，取濾渣烘乾後，粉碎成細顆粒，得a品；(2)土豆切片，加5倍量水煮沸20分鐘，過濾，濾渣加5倍量水繼續，加熱至50-60℃，得b品；(3)b品中依次加入葡萄糖、蛋白腖、酵母膏、大蒜粉、a品和海藻粉，邊加邊攪拌，攪勻後，得c品；(4)c品分裝至180ml試管的1/5，矽膠塞密封，6-8支用報紙包好，120-122℃下滅菌20min後，冷卻至50-60℃，傾斜5度放置於20-35℃的烘箱中，放置24小時後，取出，即得。菌種復壯方法：具體包括以下步驟：(1)組織分裂：取野生靈芝的子實體，用水衝洗乾淨，切去菌柄，再消毒、洗淨後吸乾水分，菌蓋切成兩半，在菌蓋和菌柄連接中央處割成1-3mm的菌肉組織片，置於無菌培養皿內，再將組織片接種於試管斜面培養基上，培養，在26℃-28℃條件下培養5d，得組織分裂後的菌絲；(2)靈芝母種製備：試管用70％的酒精消毒後，擦拭乾淨，置於100萬級超淨工作檯，用紫外燈消毒25min，裝入培養基，培養基的裝入量為試管體積的2/3，取組織分裂後的菌絲生長最前端1-2cm內的菌絲小塊，放入培養基中，用培養基覆蓋菌絲小塊，覆蓋厚度為1-1.5cm，塞入試管塞，放入25-28℃的恆溫箱中進行培養5天，得靈芝母種；(3)靈芝菌種的製備：靈芝母種繼續培養10天，得靈芝菌種；(4)培養：取玉米粉，加水拌溼使得玉米粉的含水量為50％的玉米粉培養基，將靈芝菌種置於裝有小米粉培養基的試管中，塞入試管塞，於25-28℃培養，待菌絲生長滿試管時停止培養，即可。當前第1頁12