一種類芽孢桿菌新菌種及其培養方法和應用的製作方法
2023-07-03 20:38:46
一種類芽孢桿菌新菌種及其培養方法和應用的製作方法
【專利摘要】本發明公開了一種類芽孢桿菌新菌種及其培養方法和應用。該類芽孢桿菌（Paenibacillus?sp.），保藏編號為CGMCC?No.8333，是類芽孢桿菌屬的一個新種，其分類地位是Paenibacillus?sp.，依照國際細菌系統分類委員會的命名方法，欲將該種命名為Paenibacillus?damxungensis?sp.nov.。該新種的發現和利用豐富了我們的可利用微生物資源，對我們以後更好地利用類芽孢桿菌做出了一定的貢獻。該菌株屬類芽孢桿菌屬，多糖含量豐富，可作為一種微生物治療劑，也可用來製備胞外多糖。
【專利說明】一種類芽孢桿菌新菌種及其培養方法和應用
【技術領域】
[0001]本發明屬於微生物領域,具體的涉及一種類芽孢桿菌(Paenibacillus sp.)新種及其培養方法和應用。
【背景技術】
[0002]以形態學為分類基礎，早期研究將類芽孢桿菌歸入芽孢桿菌屬。1994年，Ash等通過PCR探針試驗分析了不同芽孢桿菌種的16S rRNA序列，並發現一些芽孢桿菌與其他芽孢桿菌的表型特徵差異極大，16S rRNA序列存在高度特異性。以此，Ash將多粘芽孢桿菌等11個種從芽孢桿菌屬中分離出來，獨立為類芽孢桿菌屬(Paenibacillus)。
[0003]類芽孢桿菌屬,其模式種為Paenibacillus polymyxa ATCC842T,細胞呈杆狀,最適溫度28~30°C，主要的脂肪酸為為反異式飽和脂肪酸C15:00類芽孢桿菌屬G+C含量範圍為45 ~54mol %。
[0004]一般認為G+C mol%差別大於5%，可判斷著兩株菌不屬於同一個種(甚至在其他性狀相似的情況下也可作上述判斷)。DNA同源性的分析能夠最終確定菌株的分類，也是確定新種的一個途徑。在最適的條件下，DNA同源性在70%以上是屬於同一種的，在20%以上是
屬於同一屬的。
[0005]目前研究認為，將表現性和DNA同源性結合起來劃分種和屬的效果是準確可取的。
[0006]類芽孢桿菌屬的很多微生物對植物具有防病作用和促生作用，因此在農業生產中具有很好的應用潛力。類芽孢桿菌可產生多種生物活性物質,如酶、抗菌物質、植物激素以及絮凝劑等，這些活性物質大多為蛋白質、多糖、多肽等。類芽孢桿菌產生的抗菌物質按其物質類型及分子大小可分為小分子的多肽抗生素類、大分子的拮抗蛋白(酶)類等。這些抗菌物質性質比較穩定，如耐高溫、高壓，對酸鹼穩定，對蛋白酶不敏感等。
【發明內容】
[0007]本發明的目的是提供類芽孢桿菌屬的一個新種及其培養方法和應用。本發明的目的是通過以下技術方案來實現的。
[0008]本發明的技術方案之一是:一種類芽孢桿菌(Paenibacillus sp.),保藏編號為CGMCC N0.8333。
[0009]本發明的技術方案之二是:一種培養類芽孢桿菌CGMCC N0.8333的方法，包括以下步驟，將類芽孢桿菌CGMCC N0.8333接種於培養基中，在15~40°C和pH5.5~8.5條件
下培養。
[0010]本發明所述的培養的溫度為15~40°C，優選30°C。
[0011]本發明所述的培養的pH值為5.5~8.5，優選6.0。
[0012]本發明，優選的，所述的培養的培養基中還包括不超過10%的NaCl，所述百分比為質量百分比。[0013]本發明所述的培養可以是各種微生物的培養方式，比如液體培養、固體培養、半固體培養等，可以是搖床培養，也可以是發酵罐深層發酵，優選的搖床培養。
[0014]本發明所述的培養的接種量為常規，優選2%，所述百分比為體積百分比。
[0015]本發明所述的培養基為類芽孢桿菌常規培養基，優選是TYC培養基。
[0016]本發明所述的培養是常規的類芽孢桿菌培養，較佳的在在需氧條件下進行。
[0017]本發明的技術方案之三是:類芽孢桿菌CGMCC N0.8333在製備胞外多糖中的應用。
[0018]在符合本領域常識的基礎上，上述各優選條件，可任意組合，即得本發明各較佳實例。
[0019]本發明所用試劑和原料均市售可得。
[0020]本發明的積極進步效果在於:本發明提供了類芽孢桿菌屬的一個新種，該菌株的分類地位是Paenibacillus sp.，依照國際細菌系統分類委員會的命名方法，欲將該種命名為Paenibacillus damxungensis sp.ηον.。該新種的發現和利用豐富了我們的可利用微生物資源，對我們以後更好地利用類芽孢桿菌做出了一定的貢獻。本發明的類芽孢桿菌BD3526，可作為一種微生物治療劑，也可用來製備胞外多糖。
[0021]生物材料保藏信息
[0022] 本發明的類芽孢桿菌BD3526，已於2013年10月14日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址:北京市朝陽區北辰西路I號院3號，中國科學院微生物研究所，郵編:100101。該菌株的保藏編號為=CGMCC N0.8333。該菌株的分類命名是類芽孢桿菌Paenibacillus sp.，名稱為BD3526。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0023]以下結合【專利附圖】
【附圖說明】本發明的特徵和有益效果。
[0024]圖1顯示本發明類芽孢桿菌新種菌株BD3526在TYC培養基上的菌落形態
[0025]圖2顯示本發明類芽孢桿菌新種菌株BD3526的生長曲線。橫坐標為時間，縱坐標為96孔板中100 μ L培養液在600nm下的OD值。
[0026]圖3顯示本發明類芽孢桿菌新種菌株BD3526的16S rRNA系統發育進化樹。【具體實施方式】
[0027]下面通過實施例的方式進一步說明本發明，但並不因此將本發明限制在所述的實施例範圍之中。下列實施例中未註明具體條件的實驗方法，按照常規方法和條件，或按照商品說明書選擇。本發明中所述的室溫是指進行試驗的操作間的溫度，一般為25°C。
[0028]Paenibacillus hunanensis FeL05T (ACCC10718T=CGMCC N0.1.8907τ)與Paenibacillus po lymyxa ATCC842T (CGMCC N0.1.4261T)購自中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)。
[0029]實施例1本發明新微生物的獲得
[0030]從西藏自治區當雄縣採集犛牛奶，以無菌方式取1ml，用無菌生理鹽水系列稀釋，通過塗布的方式將稀釋液均勻塗布於固體TYC培養基上，30 V培養24-48小時。選取粘鼻涕狀、具有良好拉絲性的單菌落多個，分別轉接到新的固體TYC培養基上，得到純化的菌落。[0031]實施例2本發明新微生物的獲得及其特徵
[0032]Biolog微生物自動檢測儀(生產廠商:Biolog公司)鑑定實驗:
[0033]Biolog微生物自動檢測儀(生產廠商=Biolog公司)鑑定實驗,是Biolog公司獨創的碳源利用方法，利用微生物對不同碳源進行呼吸代謝的差異，篩選95種不同碳源或其他化學物質，配合顯色物質，固定於96孔板上(Al孔為陰性對照)。接種菌懸液培養一定時間，通過檢測微生物細胞利用不同碳源進行呼吸代謝過程中產生的化學還原物質欲顯色物質發生反應導致的吸光度以及由於微生物生長造成的濁度，生成特徵指紋圖譜，與標準菌株圖譜資料庫進行比對，即可得到最終鑑定結果。
[0034]I)取如上所述實施例1中的單菌落多個，分別接種到液體TYC中，30°C培養24h。
[0035]2)在10000r/min下離心20min,棄去上清液,加ImL生理鹽水,在振蕩器上振動5min使之混勻；再於10000r/min下離心20min,重複2次,除去其中的碳源；棄去上清液,加ImL生理鹽水,在振蕩器上振動5min使之混勻，於2000r/min下離心lmin。
[0036]3)取上清液倒入裝有20mL已滅菌生理鹽水(NaCl，0.85%)的試管中，並使其OD59tl維持在 0.13 ± 0.02。
[0037]4)將如上所述稀釋液加入Biolog ECO微平板中(150 μ L /孔)，然後在20°C下培養，每隔12h用Biolog細菌自動讀數儀讀取數據，連續測定2d。結果如表1所示。
[0038]表1.菌株BD3526的Biolog鑑定結果
[0039]
【權利要求】
1.一種類芽孢桿菌(Paenibacillus sp.)，其特徵在於，其保藏編號為CGMCC N0.8333。
2.一種培養類芽孢桿菌CGMCC N0.8333的方法，其特徵在於，包括以下步驟:將類芽孢桿菌CGMCC N0.8333接種於培養基中，在15~40°C和pH5.5~8.5條件下培養。
3.如權利要求2所述的方法，其特徵在於，所述的培養的溫度為30°C。
4.如權利要求2所述的方法，其特徵在於，所述的培養的pH值為6.0。
5.如權利要求2所述的方法，其特徵在於，所述的培養的培養基中還包括不超過10%的NaCl，所述百分比為質量百分比。
6.如權利要求2所述的方法，其特徵在於，所述的培養為搖床培養。
7.如權利要求2所述的方法，其特徵在於，所述的培養的接種量為2%，所述百分比為體積百分比。
8.如權利要求2所述的方法，其特徵在於，所述的培養基是TYC培養基。
9.如權利要求2所述的方法，其特徵在於，所述的培養在需氧條件下進行。
10.如權利要求1所述的類芽孢桿菌CGMCCN0.8333在製備胞外多糖中的應用。
【文檔編號】C12P19/04GK103740618SQ201310752153
【公開日】2014年4月23日 申請日期:2013年12月31日 優先權日:2013年12月31日
【發明者】吳正鈞, 高彩霞, 郭本恆, 劉振民, 杭鋒, 韓瑨 申請人:光明乳業股份有限公司