一種交替單胞菌及其在抑制赤潮藻生長中的應用的製作方法
2023-07-03 20:59:06 6
專利名稱：一種交替單胞菌及其在抑制赤潮藻生長中的應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及生物技術領域，尤其涉及一種交替單胞菌及其在抑制赤潮藻生長中的應用。
背景技術：
赤潮是一種嚴重的全球性海洋自然災害，近年來赤潮發生次數增多、發生區域擴大、危害日益加劇。對赤潮(或赤潮藻)的發生進行有效防控是保護海洋環境的首要前提。 以往的研究中雖已開發出一些赤潮的控制技術，如物理方法、化學方法和一些生物治理方法，但這些方法都各自存在一定的缺陷，治理水華的效果不甚理想。例如物理方法中的黃泥漿絮凝法需要較大的劑量才能起到抑制的效果，這在一定程度上增加了操作的難度和成本的投入；一些化學方法如殺藻劑，在殺滅藻類的同時，也給其他生物帶來了直接或間接的危害，不能體現環境友好型特性；一些生物學方法如投放攝食藻類的大型生物(魚類)，也存在打破食物網結構，破壞種群穩定的生態風險。海洋環境的複雜性造就了其豐富的微生物多樣性，其獨特的遺傳特性和特殊的適應機制，成為基因庫和生物活性物質的重要來源。海洋微生物通過微食物環在海洋生態系統的物質循環和能量流動中起著極其重要的作用，並同藻類存在著錯綜複雜的關係。值得一提的是，細菌、放線菌、病毒等各種微生物可以通過直接或間接的作用專一性地抑制藻類的生長甚至裂解藻細胞，因此微生物是調節赤潮生消的重要因子之一。基於數量龐大、分布廣泛、多樣性豐富的海洋微生物及其重要作用，以微食物環為核心，探究有效調控赤潮生消的重要微生物因子，充分利用其與赤潮生物的互作特點與規律，開發和利用源自赤潮頻發海域的特殊功效微生物並以宏基因組技術獲得海洋環保功能菌與工程菌，進行赤潮的有效防治，將可能成為解決赤潮災害這一複雜而嚴峻的海洋問題的金鑰匙。近年來,溶藻細菌(algicidal bacteria)的發現給赤潮的治理帶來了新的曙光。 它作為水生生態系統生物種群結構和功能的重要組成部分，對維持藻類生物量平衡具有非常重要的作用。不少國外研究者認為赤潮的突然消亡可能與溶藻細菌的感染有關。溶藻細菌作為水華防治的可能微生物，已引起越來越多的關注。多數溶藻細菌能夠分泌細胞外物質，對宿主藻類起抑制或殺滅作用。因此，目前將赤潮的防治方法轉向微生物治理，且這一類方法已日益得到關注和認可。在這一領域中已篩選和培養了多種殺藻、溶藻的微生物，包括放線菌、變形桿菌、假單胞菌、粘細菌等。以往的研究中對溶藻細菌的篩選是沒有嚴格區分赤潮發生期和非發生期， 使得篩選的菌株缺乏針對性。
發明內容
本發明的一個目的是提供一株交替單胞菌(Alteromonas sp. ) 18#。本發明提供的交替單胞菌(Alteromonassp. ) 18#，其保藏號為CGMCC NO. 5804。本發明的另一個目的是提供一種製備上述交替單胞菌(Alteromonassp.) 18#CGMCC NO. 5804胞外提取物的方法。本發明提供的方法包括如下步驟I)發酵交替單胞菌(Alteromonas sp.) 18#CGMCC NO. 5804,離心收集上清液；2)用乙酸乙酯萃取所述上清液，收集有機相，即得到胞外提取物。上述方法中，步驟I)中，所述發酵的溫度為30°C，所述發酵的時間為24_36h ;所述離心的轉速為8000r/min,所述離心的時間為20min,所述離心半徑為13. 5cm ；步驟2)中，所述上清液和乙酸乙酯萃取體積比為I : 2，所述萃取的時間為 2h-3h。上述方法中，所述發酵的溫度為30°C，所述發酵的時間為24小時-36小時，所述發酵的培養基為2216E海水液體培養基(配方蛋白腖5. 0g，酵母膏I. 0g，磷酸鐵O. Olg,陳海水 1000mL,iI pH 至 7. 8)；上述方法中，在步驟2)中，在所述收集有機相後還依次包括去除所述有機相中的乙酸乙酯和溶解的步驟；上述去除所述有機相中的乙酸乙酯具體為旋轉蒸發所述有機相，收集產物I ;上述溶解具體為用甲醇溶解所述產物I ;在所述步驟I)和步驟2)之間還包括過濾所述上清液的步驟；上述過濾具體採用的濾膜孔徑為O. 22 μ m。由上述方法製備的所述交替單胞菌(Alteromonas sp. ) 18#CGMCC NO. 5804胞外提取物也是本發明保護的範圍。上述的交替單胞菌(Alteromonas sp. ) 18#CGMCC NO. 5804或上述的胞外提取物在防治赤潮中的應用也是本發明保護的範圍。上述應用中，所述防治赤潮通過抑制赤潮藻生長實現。上述抑制赤潮藻生長體現在如下I) -4)中4種或者其中任意一種I)降低赤潮藻密度；2)降低赤潮藻的葉綠素含量；3)降低赤潮藻的光合效率；4)改變了赤潮藻中蛋白表達譜。上述蛋白具體為功能蛋白上述應用為向赤潮藻的生長體系中加入上述的交替單胞菌(Alteromonas sp.) 18#CGMCC NO. 5804或上述的胞外提取物，以抑制赤潮藻生長；所述赤潮藻具體為亞歷山大藻。在本發明的實施例中，具體抑制赤潮藻生長的方法為向赤潮藻的生長體系中加入上述的交替單胞菌(Alteromonas sp.) 18#CGMCC NO. 5804的胞外提取物，以抑制赤潮藻生長。上述赤潮藻的生長體系為人工培育體系；上述人工培育體系為將赤潮藻在培養液中培養，得到人工培育體系；上述人工培育體系中的培養液為f/2培養液；上述胞外提取物在所述人工培育體系中的終濃度具體為10ppb-100ppb。上述方法中，所述赤潮藻為亞歷山大藻。本發明的第三個目的是提供一種赤潮藻抑制劑。
本發明提供的赤潮藻抑制劑，其活性成分為上述的交替單胞菌(Alteromonas sp.) 18#CGMCC NO. 5804或其胞外產物；所述赤潮藻具體為亞歷山大藻。上述菌株18#為Y -變形桿菌綱(Gammaproeobacterium),交替單胞菌目 (Alteromonadales),交替單胞菌科(Alteromonadaceae),交替單胞菌屬(Alteromonas)菌株，已於2012年2月24日保藏於中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱 CGMCC，地址為北京市朝陽區北辰西路I號院3號，中國科學院微生物研究所)，保藏登記號為CGMCC NO. 5804，其分類命名為交替單胞菌(Alteromonas sp.)。本發明的實驗證明，本發明發現了一種交替單胞菌(Alteromonas sp.)18#,該細菌及其胞外產物具有抑藻的功能，可以用來抑制赤潮；該細菌其胞外產物具體具有如下優點1)篩選的抑藻細菌來自赤潮發生的海域，利於重新投放到自然環境中使用；2)胞外產物的殺藻效果明顯且該物質可規模化發酵製備，具有很強的可操作性；3)藻類抑制赤潮的方法，遵循了生物「生生相剋」的原理，不會產生二次汙染，是一種環境友好型方法。
圖I 為彎角藻(Eucampia zoodiacus Ehrenberg)的形態特徵圖2為編號為18#細菌對藻類抑制的結果其中，*表不差異顯著(P < O. 05) 表不差異極顯著(P < O. 01)圖3為編號為18#細菌16S_rRNA的編碼基因的PCR電泳圖譜圖4為胞外產物的提取示意5為6天時不同劑量胞外產物對藻細胞的生存狀態的影響圖6為不同劑量胞外產物對藻密度影響的效果曲線圖7為胞外產物對亞歷山大藻葉綠素含量的影響圖8為胞外產物對亞歷山大藻光合效率的影響圖9為胞外產物對藻細胞功能蛋白的影響
具體實施例方式下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規方法。下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業途徑得到。f/2培養液具體配方如下(每升海水中含無機鹽質量)=NaNO3 37. 5mg, NaH2PO4 2. 5mg, Fe-EDTA 2. 5mg (FeCl3 I. 6g+EDTA 0. 9g)，鹽酸硫銨素 5 μ g, Biotin VH O. 025 μ g, VB12 O. 025 μ g, CuSO4. 5Η20 O. 0098 μ g, ZnSO4. 7Η20 O. 022 μ g, CaCl2. 6Η20 O. 01 μ g, MgCl2. 4Η20 O. 180 μ g，Na2MoO4. 2Η20，O. 0063 μ g。亞歷山大藻(Alexandrium catenella)(香港株，中國科學院海洋研究所提供，產品目錄號Algae20060309)實施例I、交替單胞菌(Alteromonas sp.) 18#的篩選及鑑定一、交替單胞菌(Alteromonas sp.) 18# 的篩選2011年4月21日，南中國海近岸(深圳蛇口港)發生局域赤潮(深圳蛇口港赤潮發生區表層)，此次赤潮的原因藻為彎角藻(Eucampia zoodiacus Ehrenberg)(圖I)，屬於娃藻門 BaciIIariophyceae，脆杆藻科Fragilariaceae Schroder,海線藻屬 ThalassionemaGrunow。從該區域取回水樣,水樣帶回實驗室後經紗布過濾,除掉水中雜質和大型顆粒物； 隨後經100 μ m金屬網格過濾，除掉水中的有機碎屑；最後經10 μ m濾膜過濾除取藻細胞，濾液進行塗布和篩菌。將上述準備好的濾液進行倍比稀釋，取30 μ L塗布於2216Ε海水固體培養基上 (配方:蛋白腖5. 0g，酵母膏1.(^，磷酸鐵0.018，陳海水1000ml，瓊脂20g，調pH至7. 8)， 過夜培養，直至長出清晰的單克隆。共挑選出100株可培養細菌。隨後挑取單克隆在2216E液體培養基中(ImL)，搖床上30°C培養12小時，備用。將挑選的單克隆菌株以IX IO6個/mL的量加入亞歷山大藻培養液(將亞歷山大藻在f/2培養液中培養得到的培養液)中作為實驗組，連續監測I周內對藻類生長的抑制情況，以不加入單克隆菌株為對照組，在雙筒顯微鏡下計數(4X10倍)檢測藻密度，每個樣品計數3次， 結果取平均值。其中編號為18#細菌對藻類抑制的結果如圖2所示，可以看出，添加菌液一天後即能抑制藻類的生長，兩天後實驗組的藻細胞密度下降為對照組的52. 6%，至三天時， 實驗組的藻類基本停止生長與分裂，90%的藻類生長被抑制，藻類生物量與對照組相比顯示極顯著差異(P <0.01)。因此，認為初步篩選得到菌株18#。二、18#菌株的鑑定I、生理生化特徵鑑定I. I形態觀察採用2216E固體培養基，將純化後的18#單克隆菌株於30°C下培養24h，並進行革蘭氏染色及菌體形態的顯微鏡觀察(油鏡，放大倍數1000倍)。染色方法參照《微生物學檢驗實驗指導》的方法進行(作者桂芳，出版社中國醫藥科技出版社，出版時間2009年 8月，ISBN =9787506742238)。實驗結果表明菌株為革蘭氏陰性菌；形態為兩端鈍圓的小桿菌，具鞭毛，菌體大小為(O. 4 O. 5) X (I. O 2. O) μ m。I. 2生理生化特徵生理生化特徵的檢測採用變形桿菌套裝生化鑑定試劑盒進行(上海麗臣ELISA試劑盒廠，產品編號20214)。實驗結果顯示硫化氫陽性，苯丙氨酸脫氫酶陽性，脲酶陽性。2、分子鑑定提取菌株18#的DNA，利用16SrRNA通用引物(正向引物AGAGTTTGATCCTGGCTCAG ； 反向引物CTGAGCCAGGATCAAACTCT) PCR擴增出PCR產物即為16S_rRNA的編碼基因，將PCR 產物進行電泳檢測，結果如圖3所示，1-8泳道為8個平行，將得到條帶大小為1300bp的產物送去測序，結果該PCR產物(16S-rRNA的編碼基因)具有序列表中序列I所示的核苷酸。經序列比對後證明，菌株18#的16S_rRNA的編碼基因與Y -變形桿菌綱(Gammaproteobacterium),交替單胞菌目(Alteromonadales),交替單胞菌科 (Alteromonadaceae),交替單胞菌(Alteromonas sp.)的 16S_rRNA 的編碼基因有 98% 的相似性(Genbank AF529061)。因此上述菌株18#為Y-變形桿菌綱(Gammaproteobacterium),交替單胞菌目 (Alteromonadales),交替單胞菌科(Alteromonadaceae),交替單胞菌屬(Alteromonas)菌株，已於2012年2月24日保藏於中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱 06110，地址為北京市朝陽區北辰西路I號院3號，中國科學院微生物研究所)，保藏登記號為CGMCC NO. 5804，其分類命名為交替單胞菌(Alteromonas sp.)。實施例2、交替單胞菌(Alteromonas sp. ) 18#在抑藻中的應用一、交替單胞菌(Alteromonas sp.) 18#抑藻的方法I、交替單胞菌(Alteromonas sp. ) 18#的發酵培養及胞外產物的獲得將由實施例I 得到的交替單胞菌(Alteromonas sp.) 18#CGMCC NO. 5804 在 200mL 三角瓶中進行一級培養(2216E液體培養基，配方蛋白腖5.0g，酵母膏l.Og，磷酸鐵 0. Olg,陳海水IOOOmL,調ph至7. 8)，培養條件為30°C，轉速200r/min,時間14h，待菌株密度接近OD6tltl = 2時，將培養液轉入2000mL的三角瓶中進行二級培養(2216E液體培養基， 配方:蛋白腖5. 0g，酵母膏1.(^，磷酸鐵0.018，陳海水IOOOmL,調pH至7. 8)，培養條件為 30°C，轉速200r/min，時間36小時，直至培養基基本耗盡，細胞密度不在增加為止。收集發酵培養液，離心(4°C，8000r/min, 20min,離心半徑13. 5cm)，取上清液。將上清液進一步用0. 22 μ m的濾膜進行過濾，以除掉期間未能離心去除的菌液和少量雜質。 將濾液收集到乾淨的玻璃容器中，按照I : 2的體積比例加入乙酸乙酯進行萃取，用磁力攪拌器充分混勻，持續混合萃取3h。之後用分液漏鬥將水相和有機相分開，收集水相進行第二次萃取。將兩次萃取的有機相合併，裝入IL容量的蒸餾燒瓶中，進行旋轉蒸發(55°C)，待液體蒸發完畢用甲醇將蒸餾物進行溶解，所得溶液即為胞外產物(圖4)。2、實驗用藻細胞的培養實驗所用藻種為亞歷山大藻(Alexandrium catenella)(香港株)。取實驗室傳代培養的藻種(初始密度為0. 3X IO4個/mL)，分裝於15個IOOOmL的三角瓶中(每瓶裝液500mL)，分裝後培養連續監測，待藻處於對數生長期的前期時，即藻密度在0. 6 X IO4個/ mL(藻在藻培養液中的密度)時，進行如下分組試驗，試驗設五個實驗組，每組3個平行。藻的培養條件如下溫度為21±1°C，光照時間L D = 12h 12h，光照強度 3000Lxo五個實驗組分別如下空白組(不含甲醇溶劑，不含細菌胞外產物)，繼續培養；對照組(含甲醇溶劑，不含細菌胞外產物)，再向三角瓶中加入無水甲醇，甲醇的終濃度為0. 05% (v/v)，繼續培養；胞外產物Ippb (含甲醇溶劑，含細菌胞外產物)再向三角瓶中加由上述I得到的胞外產物，使胞外產物的終濃度為lppb (m/v)，繼續培養；胞外產物IOppb (含甲醇溶劑，含細菌胞外產物)再向三角瓶中加由上述I得到的胞外產物，使胞外產物的終濃度為IOppb (m/v)，繼續培養；胞外產物IOOppb (含甲醇溶劑，含細菌胞外產物)再向三角瓶中加由上述I得到的胞外產物，使胞外產物的終濃度為IOOppb (m/v)，繼續培養。將上述各組加入各種物質記作繼續培養的第O天。二、檢測I、胞外產物對藻的殺滅效果將上述5組的培養產物在雙筒顯微鏡下(4X 10倍)進行藻細胞計數，每個樣品計數3次，結果取平均值。結果如圖5和圖6所示，圖5為6天時不同劑量胞外產物對藻細胞的生存狀態的影響，可以看出Ippb時，藻細胞均勻分布，藻培養液呈淺黃色；100ppb時，藻細胞碎裂、溶解， 部分細胞沉底，藻培養呈白色。圖6為不同劑量胞外產物對藻密度影響的效果曲線，可以看出，空白組在0、2、4、6、8、10 天的藻密度(個/mL)分別為 6000、6100、6300、6800、 8600、12000。對照組在0、2、4、6、8、10 天的藻密度(個/mL)分別為 6100、6150、6200、6700、 8300、11000。胞外產物Ippb在0、2、4、6、8、10天的藻密度(個/mL)分別為6050、6160、6300、 6800、7200、8900。胞外產物IOppb 在 0、2、4、6、8、10 天的藻密度(個/mL)分別為 6200、6200、5400、 4200、3000、2500。胞外產物IOOppb 在 0、2、4、6、8、10 天的藻密度(個/mL)分別為 6250、5200、3000、 1200、1002、1002。可以看出，從O天顯微鏡檢開始,交替單胞菌(Alteromonas sp. ) 18#胞外產物對藻細胞的殺滅作用呈現劑量關係，隨著濃度的提高殺滅效果更顯著，至6天左右殺滅率達 80%以上，抑藻效果達到峰值。2、胞外產物對亞歷山大藻葉綠素和光合效率的影響檢測上述5組繼續培養的藻的葉綠素、光合效率，具體方法如下各組赤潮藻的葉綠素和光合效率測量採用浮遊植物分類螢光儀(ΡΗΥΤ0-ΡΑΜ)進行，具體操作如下，取3mL 藻液(連續培養的培養產物)裝入測量杯置於暗盒內，對藻體進行20min暗適應，打開 Phyto-PAM調製脈衝螢光儀波長為520nm強度為O. I μ mol/(m2 · s)的綠色檢測光。測量過程由Phytowin軟體控制，開啟測量光(ML)，待光信號穩定後打開飽和脈衝鍵，記下Fv/Fm 值，即為光合效率yield值。葉綠素水平的(ChI)測定也使用該儀器進行。結果如圖7和圖8所示，其中，圖7為胞外產物對亞歷山大藻葉綠素含量的影響， 圖8為胞外產物對亞歷山大藻光合效率的影響；從圖7中可以看出，空白組在0、2、4、6、8、10 天的葉綠素含量(μ g/L)分別為 21. 3、26· 3、39· 4、45· 7、 47. 7,54. 5。對照組在0、2、4、6、8、10 天的葉綠素含量(μ g/L)分別為 23. 2、27· 2、38· 7、47· 8、 49. 7,55. I。胞外產物Ippb在0、2、4、6、8、10天的葉綠素含量(μ g/L)分別為22. 2,26. 7、 38. 5、45· 6、45· 3、53· 2。胞外產物IOppb在0、2、4、6、8、10天的葉綠素含量(μ g/L)分別為21. 9、23· 4、 16. 8,15. 3,15. 9,15. 8。胞外產物IOOppb在0、2、4、6、8、10天葉綠素含量(μ g/L)分別為23. 0、22. I、
11.3,10. 6,10. 4、9· 8。可以看出，高劑量胞外產物(10和IOOppb)相比於對照組，其葉綠素水平明顯低於對照組，其值只有對照組的25-30% (P < O. 05)。從圖8中可以看出，空白組在0、2、4、6、8、10天的光合效率(Fv/Fm)分別為O. 45、O. 47,0. 46,0. 57,0. 6,0. 61。對照組在0、2、4、6、8、10 天的光合效率(Fv/Fm)分別為 O. 46、0· 48、0· 47、0· 56、 O. 63、0· 64。胞外產物Ippb 在 0、2、4、6、8、10 天的光合效率(Fv/Fm)分別為 O. 45,0. 46,0. 5、
O.58、0· 63、0· 64。胞外產物IOppb 在 0、2、4、6、8、10 天的光合效率(Fv/Fm)分別為 O. 47、0· 47、0· 48、
O.35、0· 35、0· 38。胞外產物IOOppb 在 0、2、4、6、8、10 天光合效率(Fv/Fm)分別為 O. 46、0· 4、0· 4、
O.3、0· 31、0· 31。可以看出，外源添加高劑量的胞外產物(10和IOOppb)，藻細胞光合效率水平較低，而對照組則有一個明顯的上升過程。這表明，胞外產物的存在，給藻的生理帶來了應激壓力，藻類自身的能量被用於應對環境脅迫，從而減少了其獲取光能的捕獲。3、胞外產物對藻細胞功能蛋白的影響為了進一步探討胞外產物的抑藻機理，分析了胞外產物對藻功能性蛋白的影響。取對照組和胞外產物IOOppb組的繼續培養10天後的產物，離心(4°C，8000r/min, 20min,離心半徑13. 5cm)後收集沉澱,將沉澱在液氮下進行低溫研磨。研磨產物用O. IM的 Tris-Cl緩衝液(Tris鹼，12. Ilg ;蒸餾水，800mL ;HC1，49mL，三者混勻充分溶解後，滴加濃鹽酸調pH至7. 8,定溶至IOOOmL)溶解,得到研磨液,再將研磨液進行硫酸銨沉澱(20%濃度鹽溶，65%濃度鹽析沉澱)、除鹽(4°C，0. IM的Tris-Cl緩衝液，透析過夜)、除雜處理後 (10000r/min,4°C,離心30min,離心半徑13. 5cm,去除不溶顆粒)，得到蛋白提取物。將蛋白提取物進行二維電泳(蛋白上樣量，400μ g ;膠條，pH 3-10線性梯度膠條；膠條上限電流， 50A/根；等電聚焦溫度，20°C ；SDS-PAGE膠濃度，12. 5% ;儀器，Bio-Rad 二維電泳儀)，所得圖譜用F1DQuest軟體進行分析。結果如圖9所示，可以看出，胞外產物IOOppb組和對照組的全蛋白圖譜存在明顯差異，其中差異蛋白點有40個以上，佔到整個功能蛋白的32% (發生差異表達的蛋白點佔整個圖譜中蛋白點的百分比)。這表明胞外產物對藻細胞有明顯的生理影響。
權利要求
1.交替單胞菌(Alteromonassp.) 18#，其保藏號為 CGMCC NO. 5804。
2.一種製備權利要求I所述交替單胞菌(Alteromonas sp.) 18#CGMCC NO. 5804胞外提取物的方法，包括如下步驟1)發酵交替單胞菌(Alteromonassp.) 18#CGMCC NO. 5804，離心收集上清液；2)用乙酸乙酯萃取所述上清液，收集有機相，即得到胞外提取物。
3.根據權利要求2所述的方法，其特徵在於步驟I)中，所述發酵的溫度為30°C，所述發酵的時間為24-36h ;所述離心的轉速為 8000r/min,所述離心的時間為20min,所述離心半徑為13. 5cm ；步驟2)中，所述上清液和乙酸乙酯萃取體積比為I : 2，所述萃取的時間為2h-3h。
4.根據權利要求2或3所述的方法，其特徵在於在步驟2)中，在所述收集有機相後還依次包括去除所述有機相中的乙酸乙酯和溶解的步驟；在所述步驟I)和步驟2)之間還包括過濾所述上清液的步驟。
5.由權利要求2_4的方法製備的所述交替單胞菌(Alteromonassp.) 18#CGMCCN0. 5804 胞外提取物。
6.權利要求I所述的交替單胞菌(Alteromonassp.) 18#CGMCC NO. 5804或權利要求5 所述的胞外提取物在防治赤潮中的應用。
7.根據權利要求6所述的應用，其特徵在於所述防治赤潮通過抑制赤潮藻生長實現。
8.根據權利要求6或7所述的應用，其特徵在於所述抑制赤潮藻生長體現在如下 I)-4)中4種或者其中任意一種1)降低赤潮藻密度；2)降低赤潮藻的葉綠素含量；3)降低赤潮藻的光合效率；4)改變了赤潮藻中蛋白表達譜。
9.根據權利要求6-8任一所述的應用，其特徵在於所述應用為向赤潮藻的生長體系中加入權利要求I所述的交替單胞菌(Alteromonas sp.) 18#CGMCC NO. 5804或權利要求5 所述的胞外提取物，以抑制赤潮藻生長；所述赤潮藻具體為亞歷山大藻。
10.一種赤潮藻抑制劑，其活性成分為權利要求I所述的交替單胞菌(Alteromonas sp.) 18#CGMCC NO. 5804或其胞外產物；所述赤潮藻具體為亞歷山大藻。
全文摘要
本發明公開了一種交替單胞菌及其在抑制赤潮藻生長中的應用。本發明提供的交替單胞菌(Alteromonas sp.)18#，其保藏號為CGMCC NO.5804。本發明還提供了一種製備上述交替單胞菌(Alteromonas sp.)18#CGMCC NO.5804胞外提取物的方法。本發明的實驗證明，本發明發現了一種交替單胞菌(Alteromonas sp.)18#，該細菌及其胞外產物具有抑藻的功能，可以用來抑制赤潮。
文檔編號A01N63/02GK102604868SQ201210075599
公開日2012年7月25日 申請日期2012年3月21日 優先權日2012年3月21日
發明者周進, 蔡中華, 詹五根, 陳璐 申請人:清華大學深圳研究生院