一種環戊甲噻嗪誘導的新型癲癇模型的製作方法

2023-07-04 06:40:21 1

專利名稱：：一種環戊甲噻嗪誘導的新型癲癇模型的製作方法
技術領域：
：本發明涉及環戊甲噻嗪(Cyclothiazide，CTZ)作為致癇劑的應用，尤其涉及通過腦內局部注射誘發大鼠癲癇發作建立一種新型的癲癇動物模型。
背景技術：
：癲癇(epilepsy)是最常見的神經系統疾病之一，其年發病率約為35/10萬，患病率約0.5%。全世界癲癇患者總數達3000萬人。我國每年有45萬新癲癇發病者，患者總數約650萬。其中大約有四分之一以上的病人在進行藥物治療後不能有效控制其發作，稱為難治性癲癇(intractableepilepsy),而大約有70%的難治性癲癇為顳葉癲癇(temporallobeepilepsy,TLE)。顳葉癲癇最顯著的臨床特徵是長期反覆出現的自發性癲癇發作(epilepticseizures),顳葉癲癇腦部出現明顯的病理改變如海馬硬化等，伴隨不同的臨床和腦電圖(electroencephalogram)的表現，而且顳葉癲癇對大部分的抗癲癇藥物耐藥。癲癇的發病機制非常複雜，迄今為止研究癲癇發病機理仍須依賴動物模型。建立的獲得性癲癇模型對於研究癲癇的病理生理學和尋找阻止癲癇的靶標以及篩選對耐藥部分性癲癇有更高效能的藥物都有重要意義。癲癇的實驗性研究始於1883年Openchowski首次採用冷凍大腦組織造成腦內致癇灶，之後陸續有不同的方法來製備癲癇模型進行科學研究。藥物誘導如戊四氮，海仁酸等的獲得性癲癇模型就屬於顳葉癲癇模型。海仁酸為穀氨酸受體激動劑，具有神經毒性作用；全身或局部給予驚厥劑量的海仁酸，會導致腦內興奮性胺基酸如穀氨酸等的水平明顯增高，因而興奮性胺基酸的堆積可能是導致癲癇發作的一個原因。戊四氮是一種中樞神經系統興奮藥，作用於GABA-GABAa受體系統，促使興奮性突觸的易化過程增強從而造成癲癇發作。癲癇的發病機制非常複雜，興奮性和抑制性神經遞質的不平衡是導致後通路癇性發放的原因之一。因而戊四氮和海仁酸以及其它單一藥物和電刺激建立的經典的癲癇模型只反映了癲癇發作機制的某一個方面，這些經典的癲癇模型來評價新型抗癲癇藥物的藥理活性和毒副作用並不能很好的體現癲癇形成的多機制特徵。環戊甲噻嗪在上世紀就曾被臨床廣泛用作利尿劑，由於環戊甲噻嗪是一個不能透過血腦屏障的化合物，近年來才有研究發現環戊甲噻嗪能同時作用於腦內興奮性(穀氨酸)與抑制性(GABA)神經遞質受體、能在增強穀氨酸受體的興奮性同時抑制GABA受體的抑制作用，從而導致中樞神經系統興奮性增強。祁金順等研究發現環戊甲噻嗪可以使培養神經元和麻醉動物海馬CA1區神經元產生癲癇樣活動，該研究可初步顯示了環戊甲噻嗪具有致癇作用(JinshunQi，YunWang，MinJiang,etal.JPhysiol,2006,605-618);但是離體實驗中得到的結果並不能直接用來推測或解釋其在完整機體中的功能或起的作用(生理學，姚泰主編，人民衛生出版社，2000，北京)；而且有學者認為單獨給予環戊甲噻嗪一種藥物不能夠誘導動物癲癇發作(FrancescoFornai，CarlaL.Busceti，AIexdKondratyevetal.EuropeanJournalofNeuroscience,2005,21:455—463)。
發明內容本發明的目的是以環戊甲噻嗪為誘導劑建立一種新的癲癇動物模型，為研究癲癇的發病機制和尋找阻止癲癇的靶標以及篩選對耐藥部分性癲癇有更高效能的藥物提供有利的工具。本發明涉及環戊甲噻嗪在製備癲癇動物模型中作為致癇藥物的應用。環戊甲噻嗪通過抑制AMPA受體的去敏化作用而提高興奮性神經遞質穀氨酸的神經傳遞作用，以及抑制抑制性祌經遞質GABA的神經傳遞而提高神經元興奮性，動物大腦局部注射環戊甲噻嗪會造成動物癲癇行為發作和大腦神經元癲癇樣放電。癲癇樣活動的電生理特徵是神經元活動的異常同步化，表現為在突然發生的去極化偏移基礎上出現反覆發生的動作電位。GABA是腦中的主要抑制性神經遞質。多種證據表明GABA在癲癇的發病中具有重要作用首先，在癲癇實驗模型及癲癇病人中GABA的釋放和GABAA受體明顯減少。其次，GABAA受體激動劑是主要的抗驚厥劑，而GABA受體拮抗劑是致驚厥劑。第三，一些缺乏個別GABAA受體亞單位的基因敲除小鼠，表現出自發性癲癇發作或癲癇發作的易感性增加。第四，GABAA受體亞單位個別胺基酸置換或缺失是多種家族性癲癇發病的原因。癲癇發作時穀氨酸釋放增加及轉運減少，海馬神經元興奮性胺基酸受體(NMDAR)上調。經典的致癇劑或電刺激其作用的最後通路都是通過減弱GABA抑制作用或增強穀氨酸興奮作用造成GABA抑制作用和穀氨酸興奮作用的失衡，誘發癲癇的發作。但是癲癇的發病機制非常複雜，經典致癇劑或電刺激製備的癲癇模型都是單機製作用模型，都不能真實反應癲癇發作的多機制特徵。如果能建立一種多機製作用的癲癇動物模型來模擬人類癲癇的發病情況，對於研究癲癇發作的病理機制和篩選、評價抗癲癇藥物以及尋找新的治療靶點都有重要意義。本發明提出的癲癇模型是將環戊甲噻嗪通過哺乳動物大腦局部注射，2d-20d內多次注射，0.01-0.5pmol/次，總安全有效劑量0.1-5Pmo1。所述哺乳動物為大鼠，最好是成年雄性Sprague-Dawley大鼠。採用側腦室注射，注射劑量和時間為0.25pmol/dX2d，0.25pmol/dX3d或0.25|umol/clX4d;注射後大鼠出現Racine分級法的II-V級癲癇行為發作，同時EEG記錄出現癲癇樣腦電發放。本發明模型是通過對清醒、自由活動大鼠側腦室注射環戊甲噻嗪，環戊甲噻嗪的注射量為每隻大鼠O.lnmol、0.25|imol、2X0.25pmol即每天注射0.25pmol，連續注射兩天、3X0.25pmol即每天注射0.25pmol，連續注射三天或4X0.25pmol即每天注射0.25^mol，連續注射四天。本發明發現了環戊甲噻嗪在腦內局部注射的情況下，可以通過同時激活興奮性穀氨酸與抑制性GABA兩種通路，造成清醒、自由活動大鼠出現癲癇樣腦電的發生和癲癇行為發作。清醒大鼠在側腦室注射環戊甲噻嗪後，會出現Racine法評分I到V級的癲癇行為發作，而且癲癇行為的發作具有劑量依賴性。在0.1pmol、0.25nmol環戊甲噻嗪劑量下，大鼠僅出現面部肌肉抽搐表現(Racine法評分法I級)，少量大鼠出現(Racine法評分法III級)。在慢性連續給藥的情況下，2X0.25pmol環戊甲噻嗪劑量(即每天注射0.25pmol，連續注射兩天，文中後同)在少量大鼠上誘導出IV級癲癇發作，而大鼠在注射3X0.25(amol和4X0.25pmol環戊甲噻嗪後，絕大多數的大鼠出現了IV和V級癲癇行為發作。而同樣容積的環戊甲噻嗪溶劑(DMSO)注射不引起任何癲癇行為的發生。環戊甲噻嗪致癇鼠在急性癇型發作後會進入潛伏期，大鼠的癲癇症狀基本消失，進食飲水等行為恢復，這一階段類似於人類顳葉癲癇發病前的無症狀期。之後，大鼠會出現自發性的癲癇發作，進入慢性發作期。此階段大鼠癲癇行為的發作比較強烈，一般都是IV級以上，在長達6個月的觀察中大鼠多次出現自發性的癲癇發作。同時，清醒、自由活動動物急性注射環戊甲噻嗪後，動物癲癇行為發作時能同時記錄到其大腦皮層神經元癲癇樣腦電的發生。而且在注射環戊甲噻嗪6個月後，動物出現自發性癲癇發作時大腦皮層上也同樣能記錄到癲癇樣腦電的發生。環戊甲噻嗪誘導3小時後的癲癇樣放電能被LY307030(—個高選擇性的AMPA受體拮抗劑)或THIP(—個GABA受體激動劑)所阻斷。因此，腦內給予環戊甲噻嗪可以通過同時激活興奮性穀氨酸與抑制性GABA兩種通路誘發動物海馬神經元癲癇樣腦電、癲癇行為發作，從而可以作為一種強效的致癇劑建立一種雙機製作用的新型癲癇模型。本發明具有以下優點1、本發明為製備癲癇動物模型提供了一種新的致癇劑，該致癇劑可以同時通過作用於腦內二種主要的又是相反作用的神經遞質系統的雙機制來誘導癲癇的發生，優於既往單機製作用的癲癇動物模型。2、該動物模型在製備時採用大腦局部用藥，所需注射藥量小，成本較低；而且避免腹腔藥物注射造成的全身性反應的幹擾。3、本發明對實驗動物進行長時間(6個月)的觀察和腦電記錄，對該全新癲癇動物模型的特徵和發展過程進行了詳細觀察，此模型模擬了人類顳葉癲癇症的發病情況，對於研究癲癇發作的病理機制和篩選、評價抗癲癇藥物以及尋找新的藥物治療靶點都有重要意義。圖1是本發明的環戊甲噻嗪劑量依賴性誘導清醒、自由活動癲癇行為發生的統計數值；圖2是本發明的環戊甲噻嗪在清醒、自由活動大鼠上經側腦室注射後誘導癲癇行為發作時大腦皮層神經元癲癇樣腦電活動；A是實驗大鼠注射藥物前的腦電圖(EEG)。該腦電頻率主要表現為7—10Hz，波幅以20WV波形為主，主要為a波，也有少量e波，兩者構成腦電的背景活動。B是實驗大鼠注射溶劑匿SO後的腦電圖。實驗大鼠注射DMSO後其腦電活動仍然主要表現為背景活動，和注射前相似。C、D和E是實驗大鼠注射環戊甲噻嗪後急性期內的腦電圖。C圖顯示為實驗大鼠注射環戊甲噻嗪後腦電活動在背景活動的基礎上出現散發性棘波(t所示)和尖波(《所示)。D顯示實驗大鼠注射環戊甲噻嗪後腦電活動表現為棘波爆發，其頻率主要為12Hz以上，波幅為〉100yV，是在背景活動基礎上發生的陣發性高波幅高頻率節律，突然出現突然消失。E圖顯示實驗大鼠注射環戊甲噻嗪後腦電活動表現為尖波爆發，其頻率主要為5一12Hz，波幅為〉100iiV。F是實驗大鼠注射環戊甲噻嗪6個月後的腦電圖。實驗大鼠在注射環戊甲噻嗪6個月後，腦電圖表現為在背景活動基礎上出現尖波節律。圖3是本發明的環戊甲噻嗪誘導海馬CA1區神經元癲癇樣放電被AMPA受體拮抗劑和GABA受體激動劑所阻斷；A(a)是實驗大鼠注射藥物前的海馬CAl區神經元放電；(b)是實驗大鼠注射lpinol環戊甲噻嗪後180分鐘後的海馬CAl區神經元放電；(c)是實驗大鼠注射lpmol環戊甲噻嗪後240分鐘後的海馬CAl區神經元放電；B(a)是實驗大鼠注射藥物前的海馬CAl區神經元放電；(b)是實驗大鼠注射lpmol環戊甲噻嗪後180分鐘後的海馬CA1區神經元放電；(c)是實驗大鼠注射LY307030(5mg/kg)10分鐘後的海馬CAl區神經元放電；C(a)是實驗大鼠注射藥物前的海馬CAl區神經元放電；(b)是實驗大鼠注射5pmo1環戊甲噻嗪後225分鐘後的海馬CA1區神經元放電；(c)是實驗大鼠注射THIP(2mg/kg)13分鐘後的海馬CAl區神經元放電。具體實施例方式下面結合附圖對本發明做進一步說明為了更好地理解本發明的實質，以下內容在分析環戊甲噻嗪側腦室注射誘發癲癇行為發作和癲癇樣腦電的同時，對環戊甲噻嗪誘導癲癇行為發作和癲癇樣腦電的機制進行分析。實驗材料和儀器設備戊巴比妥鈉Fluka分裝環戊甲噻嗪(cyclothiazide，CTZ):TocrisCooksonLtd,英國二甲基亞碸(DMSO):重慶醫藥股份有限公司化玻分公司立體定位儀TSEsystem,德國生物電信號放大器英國Digitimer數字採樣器英國CambridgeElectronicDesign腦電記錄軟體Spike2(version6.0)，英國CambridgeElectronicDesign紅外視頻採集攝像頭深圳深旭鷹科技有限公司視頻記錄系統深圳深旭鷹科技有限公司套管美國Plastics公司微量注射器HamiltonBonaduzAG，瑞士1、頭部手術和藥物注射動物手術與套管的埋置成年雄性Sprague-Dawley大鼠用戊巴比妥鈉(60mg/kg)腹腔注射麻醉後固定於立體定位儀上，頭部皮膚消毒後，剪除頭部皮膚暴露顱骨。少量雙氧水腐蝕顱骨骨膜，暴露前囟及冠狀縫。參照Paxinos和Watson鼠腦立體定位圖譜確定左側側腦室位置，鑽孔後在側腦室內埋置套管(位置同前)；同時在顳葉和額葉顱骨分別埋置兩顆螺絲作為記錄電極、參考電極與地線，醫用牙託粉將套管和螺絲進行固定。大鼠恢復一周後實驗。動物手術恢復一周後，用微量注射器通過預埋置套管緩慢、勻速地注射(注射時間至少2min)環戊甲噻嗪或溶劑至左側側腦室；微量注射器留置5min促進藥物完全進入側腦室。1、清醒、自由活動大鼠側腦室注射環戊甲噻嗪後的行為學觀察大鼠置於透明飼養籠內，通過攝像頭對實驗大鼠進行24小時連續攝像，給藥過程及給藥後的發作行為均在監控下進行。大鼠注射藥物前攝像24小時；給藥後，在CTZ成功誘導出RacineIV和V級癲癇行為以及DMSO溶劑對照的大鼠中選擇一定數量的大鼠進行連續24小時X6個月的行為與腦電記錄，而其餘大鼠只記錄行為。行為學數據通過攝像頭採集，經視頻採集卡輸入電腦，以QX2006監控軟體進行數據存儲和回放，對大鼠的行為活動進行分析。2、清醒、自由活動大鼠側腦室注射環戊甲噻嗪後的癲癇樣腦電的記錄清醒、自由活動狀態大鼠顱骨的記錄電極與Neurolog系統前置放大器相連，經Neurolog系統放大(X1K)、濾波(低頻DC;高頻50Hz;50Hz陷波)後，放大的信號輸入CEDMicro1401進行數字採樣，採樣率為400Hz，腦電以Spike2(Version6.0)程序記錄和保存數據，用於實時監測和後續數據分析處理。動物腦電與行為在同一計算機控制下同步採集數據，腦電的記錄也為24小時連續記錄。實驗結果1、環戊甲噻嗪劑量依賴性誘發清醒、自由活動大鼠癲癇行為的發作在環戊甲噻嗪誘導癲癇行為的前期試驗中，我們通過大量實驗摸索出了實驗用環戊甲噻嗪在O.l-ltaiol的安全有效劑量以及多次給藥步驟的有效癲癇誘導實驗方案。這是因為在高劑量(單次給藥大於0.5taiol)側腦室注射環戊甲噻嗪後，大鼠出現尖叫、頸部肌肉陣攣、四肢陣攣、跳躍等比較劇烈的行為，最後出現全身性陣攣，在藥物注射後短期內死亡；而低劑量(單次給藥小於0.1Mmol)側腦室注射環戊甲噻嗪後大鼠不出現明顯癲癇行為.所有大鼠在注射藥物前，清醒安靜，無異常行為。28隻實驗組大鼠在側腦室注射環戊甲噻嗪後，所有大鼠均先出現咀嚼運動等面部肌肉痙攣的行為；大部分大鼠會先出現凝視、眨眼睛、流涎、溼狗樣抖動，旋轉、尾巴上翹等症狀。部份大鼠會出現呼吸急促、腹肌收縮加強，部份大鼠甚至會在旋轉中奔跑，並發出叫聲。在注射環戊甲噻嗪後的急性期內G小時)，實驗組大鼠在側腦室注射環戊甲噻嗪O.lWnol後，4隻大鼠僅出現咀嚼運動等面部肌肉痙攣的表現，癲癇行為級別較低。側腦室注射lX0.25Mmo1環戊甲噻嗪後，5隻大鼠中僅有1隻出現前肢陣攣的III級行為，其餘4隻僅出現I級的低級別癲癇行為。隨著注射環戊甲噻嗪劑量的增加，大鼠出現高級別癲癇行為的比例也在增加。側腦室注射2X0.25Wno1的4隻大鼠中，有2隻III級和1隻IV級癲癇行為。當環戊甲噻嗪注射劑量增加到3X0.25Pmo1時，6隻大鼠均出現了癇性行為，其中4隻大鼠出現雙前肢站立時身體失去平衡，跌倒，行為達到V級。大鼠在側腦室注射環戊甲噻嗪4X0.25tool時，9隻大鼠中有8隻出現了癇性行為，其中5隻大鼠癇性行為達到V級。在整個實驗組中，一共有15個大鼠達到了RacineIV級以上的癇性發作。而且在高劑量組(3X0.25和4X0.25toioD的15隻大鼠中有12隻(80%)達到了RacineIV級以上的癇性發作，更有9隻(60%)有RacineV級的癲癇行為。在整個實驗組中的癲癇行為表現及其分布如下18個大鼠在低級別癲癇行為的基礎上出現癇性發作，其中5隻為m級發作，大鼠表現為前肢的陣攣伴有其它面部或頸部肌肉痙攣行為；4隻大鼠出現IV級發作，大鼠在低級別行為的基礎上出現站立伴有雙前肢陣攣；9隻大鼠在IV級發作的基礎上身體失去平衡出現跌倒表現為為V級發作。所有癇性發作大鼠在出現Racine標準所表述的行為之前，大部分大鼠會先出現注射藥物對側後肢(右後肢)陣攣。作為陽性對照，4隻大鼠在側腦室注射KA溶液後，l只大鼠出現II級癇性行為，即出現點頭運動等頸部肌肉痙攣行為；另外各有l只大鼠分別出現III級、IV級、V級的行為。環戊甲噻嗪注射大鼠癇性行為和KA注射大鼠基本相似。陰性對照組(DMSO組)的8隻大鼠在側腦室注射DMSO後沒有任何癲癇行為發生，有4隻大鼠出現少量的咀嚼運動，和覓食運動類似；其餘4隻大鼠無異常行為。2、環戊甲噻嗪誘發的慢性癲癇行為的發作所有癇性發作大鼠在癇性行為發作後會逐漸恢復到正常狀態，進入潛伏期。大約3個月後，實驗組連續觀察6個月的6隻大鼠中有3隻出現自發性癲癇發作，大鼠會在凝視幾秒鐘之後出現站立伴雙前肢陣攣的行為，有時大鼠身體失去平衡出現跌倒的V級行為發作，進入慢性發作期。實驗組大鼠在慢性發作期的癲癇行為發作比較強烈，級別較高，基本上為IV級以上；慢性發作期觀察到大鼠多次出現自發性癲癇發作，即便在第6個月的時候，3隻大鼠依然會出現明顯的自發性癲癇行為。但在每次自發性癲癇行為發作之間，大鼠行為正常，飲食沒有影響，體重隨著鼠齡的增長出現增加，在大鼠側腦室注射環戊甲噻嗪6個月後大鼠的體重在500600g之間與同齡對照組沒有差異。4、環戊甲噻嗪誘導清醒、自由活動大鼠大腦神經元癲癇樣放電所有實驗大鼠在注射注射環戊甲噻嗪之前，其腦電圖主要表現為a波，頻率主要表現為7—10Hz，波幅以20uv波形為主。腦電圖中也存在少量e波，a波和e波為基礎波，兩者構成腦電的背景活動(圖2A)。6隻大鼠在注射DMSO後其腦電活動仍然主要表現為背景活動，和注射前相似，未見癇性電活動(圖2B)。12隻實驗大鼠在注射總劑量為lpmol環戊甲噻嗪後環戊甲噻嗪後的急性期內，腦電圖在背景活動基礎上出現大量的棘波和尖波，兩者為特徵性癲癇腦電活動。棘波頻率較高，主要為12Hz以上，波幅在100pV以上。尖波的頻率主要為5—12Hz，波幅為10(VV—200pV(圖2C)。腦電圖顯示還會出現棘波爆發和尖波爆發，是在背景活動基礎上發生的陣發性高波幅高頻率節律，突然出現突然消失(圖2D)。除此之外，大鼠腦電還出現一些棘慢綜合波和尖慢綜合波以及小棘波。急性期內，大鼠的腦電出現多次棘波爆發和尖波爆發，有些爆發波發生後出現爆發後抑制。12隻大鼠在注射總劑量為ljimol環戊甲噻嗪後均可以成功記錄到癲癇樣腦電的發放。其中IO只大鼠出現腦電活動爆發，大鼠出現腦電活動爆發時都伴有RacineIII、IV和V級的癲癇行為。在對環戊甲噻嗪注射大鼠慢性期腦電的記錄中發現，在注射6個月後會出現尖波爆發活動，而且出現爆發活動的大鼠同時會伴有IV級以上的癲癇行為的發生；腦電中還會出現有少量的尖波和小棘波。5、AMPA受體和GABAA受體介導環戊甲噻嗪誘導的海馬癲癇樣放電環戊甲噻嗪是AMPA受體的去敏化抑制劑，也是GABAA受體拮抗劑。在麻醉大鼠海馬神經元電生理試驗中，在環戊甲噻嗪誘導的癲癇樣自發同步化集簇放電穩定形成後，靜脈注射AMPA受體拮抗劑LY303070(5mg/kg)顯著的抑制了環戊甲噻嗪誘導的同歩化集簇放電，但其自發放電以及剌激誘導的多峰動作電位依然存在。而當環戊甲噻嗪誘導的癲癇樣自發同步化集簇放電穩定形成後，靜脈注射GABAA受體激動劑THIP(2mg/kg)不僅顯著抑制了環戊甲噻嗪誘導的同步化集簇放電，也抑制了自發放電以及刺激誘導的多峰動作電位的發生。(見圖3)。由上述實驗結果證實，側腦室注射環戊甲噻嗪可以造成急性的癲癇樣腦電和癲癇行為發作，之後的慢性期內還可以觀察到多次自發性的癲癇行為發作，6個月後在癲癇樣腦電發放同時仍然會出現癲癇行為發作，與人類癲癇患者癲癇發作的症狀和發病過程相類似。環戊甲噻嗪是同時作用於GABAA和穀氨酸遞質系統，通過抑制AMPA受體的去敏化作用而提高興奮性神經遞質穀氨酸的神經傳遞作用，還可以同時抑制抑制性神經遞質GABA的神經傳遞而提高神經元興奮性，側腦室注射環戊甲噻嗪建立的顳葉癲癇模型是通過這兩種機製作用來誘發動物模型癲癇的發作，更加符合人類癲癇發作的多機制特徵。由此，環戊甲噻嗪腦內局部注射建立的新型癲癇模型更加優於其它經典的癲癇模型，對於探索癲癇的發生機制，篩選、評價抗癲癇藥物的作用，尋找最優化治療方案的基本工具，具有重要意義。權利要求1、環戊甲噻嗪在製備癲癇動物模型中作為致癇藥物的應用。2、一種環戊甲噻嗪誘導的癲癇動物模型，其特徵在於採用環戊甲噻嗪通過對哺乳動物大腦局部注射，2d-20d內兩次或兩次以上注射，0.01-0.5iamol/次，總安全有效劑量0.1-5Mmol。3、根據權利要求2所述的環戊甲噻嗪誘導的癲癇動物模型，其特徵在於所述哺乳動物為大鼠，側腦室注射環戊甲噻嗪，注射劑量和時間為0.25pmol/dX2d，0.25pmol/dX3d或0.25pmol/dX4d;注射後大鼠出現Racine分級法的II-V級癲癇行為發作，同時EEG記錄出現癲癇樣腦電發放。4、根據權利要求3所述的環戊甲噻嗪誘導的癲癇動物模型，其特徵在於所述大鼠採用成年雄性Sprague-Dawley大鼠。全文摘要本發明提出環戊甲噻嗪在製備癲癇動物模型中作為致癇藥物的應用，該模型採用環戊甲噻嗪通過對哺乳動物大腦局部注射，2d-20d內兩次或兩次以上注射，0.01-0.5μmol/次，總安全有效劑量0.1-5μmol。注射後大鼠出現Racine分級法的II-V級癲癇行為發作，同時EEG記錄出現癲癇樣腦電發放。本發明以環戊甲噻嗪為誘導劑建立一種新的癲癇動物模型，為研究癲癇的發病機制和尋找抑制癲癇發作的靶點以及篩選對耐藥難治性性癲癇有更高效能的藥物提供有利的工具。文檔編號A61K49/00GK101439190SQ20081023722公開日2009年5月27日申請日期2008年12月25日優先權日2008年12月25日發明者孔淑貞,樊明欣,雲王,功陳申請人:重慶工商大學