芍藥苷在補血作用中的應用的製作方法
2023-07-04 02:11:06
專利名稱:芍藥苷在補血作用中的應用的製作方法
技術領域:
本發明涉及一種中成藥活性部位,特別是涉及四物湯活性部位及有效成分。
背景技術:
四物湯發揮作用的物質基礎是其有效化學成分,其防病治病的功效是其多種化學成分的總體效應所致。但目前對四物湯化學成分的研究十分薄弱,要從根本上研究四物湯複方的配伍組方規律,從細胞、分子水平進行揭示、從理論高度進行闡釋四物湯組方原理的科學內涵,必須將配伍機制的研究與四物湯複方產生療效的物質基礎研究緊密結合起來。但是,四物湯作為中藥複方其有效成分極其複雜,甚至其每一味單藥均可作為一個小複方,因此,我們首先根據極性的不同及分子量的大小對四物湯水煎液進行了化學部位分離,並以外周血象、骨髓造血祖細胞集落培養等指標進行活性追蹤;同時應用高效薄層層析(HPTLC)及高效液相色譜(HPLC)技術等方法對各部位的成分進行初步分析鑑定。
發明內容
本發明的目的在於提供四物湯活性部位。
本發明四物湯活性部位,其特徵在於由B和C兩部分組成,所述有效部位是由四物湯藥材煎煮1-3次,過濾,得水煎液;水煎液於20-70℃旋轉蒸發濃縮,用15-25%乙醇沉澱,得沉澱,上清液繼續進行35-45%乙醇沉澱,得沉澱,上清液繼續進行55-65%乙醇沉澱,得沉澱上清液繼續進行75-85%乙醇沉澱,得沉澱,上清液濃縮至無乙醇味得浸膏,加溶解進行乙酸乙酯萃取,合併乙酸乙酯液,回收溶劑得提取物,餘下水液約進行丁醇萃取,合併正丁醇液,回收溶劑得提取物B,餘下水液約濃縮至發泡而不能繼續,得提取物C。
本發明公開一種四物湯活性部位,其特徵在於主要含有芍藥苷9.7%,果糖16.5%,葡萄糖10.1%,蔗糖22.3%。該有效部位的製備方法為四物湯藥材煎煮1-3次,過濾,得水煎液;水煎液於20-70℃旋轉蒸發濃縮,用15-25%乙醇沉澱,得沉澱,上清液繼續進行35-45%乙醇沉澱,得沉澱,上清液繼續進行55-65%乙醇沉澱,得沉澱上清液繼續進行75-85%乙醇沉澱,得沉澱,上清液濃縮至無乙醇味得浸膏,加溶解進行乙酸乙酯萃取,合併乙酸乙酯液,回收溶劑得提取物,餘下水液約進行丁醇萃取,合併正丁醇液,回收溶劑得該活性部位。
按藥劑學方法,可以將本發明藥物組合物製備成多種臨床藥物劑型,包括口服製劑或非腸道給藥的劑型。所說的口服製劑選自於片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑、混懸劑、滴丸、口服液體製劑當中的一種;所說的非腸道給藥劑型選自於注射劑、氣霧劑、栓劑或皮下給藥劑型當中的一種。本發明藥物還可加入常規的藥物賦形劑,如溶劑、崩解劑、矯味劑、防腐劑、著色劑等。芍藥苷具有補血作用。
以下實驗例用四物湯水煎液分離了的化學部位以外周血象、骨髓造血祖細胞集落培養等指標進行活性追蹤;同時應用高效薄層層析(HPTLC)及高效液相色譜(HPLC)技術等方法對活性部位的成分進行初步分析鑑定。
以下實驗例進一步說明本發明。
實驗例1 四物湯活性成分的分離第一次部位分離四物湯經水煎、過濾、濃縮、配製成100%藥液(即每ml藥液含生藥1g),然後逐步加乙醇至20%-80%,分別得20%醇沉物(A)、80%醇沉物(B)、80%醇沉上清提取物(C)。用A、B、C三部分進行初步活性分析(見表1)。
表1四物湯及其第一次部位分離物對血虛證小鼠外周血白細胞的影響(x±s)
注*與模型組比較,*P<0.05,**P<0.01;△與四物湯組比較,△P<0.05,△△P<0.01。
結果提示B、C兩部分與四物湯的活性相當後,進行第二次部位分離四物湯經水煎、過濾、濃縮、配製成100%藥液(即每ml藥液含生藥1g),逐步加乙醇20-80%,分別得到20-40%、40-60%、60-80%醇沉物(B1)、(B2)、(B3);醇沉上清液濃縮去乙醇,然後依次經乙酸乙酯、正丁醇萃提,回收溶劑得提取物為(C1)、(C2),剩餘水部分濃縮得提取物為(C3),進一步進行活性評價。
表2四物湯及其B部位分離物對血虛證小鼠外周血白細胞的影響(x±s,n=10)
注與模型組比較,*P<0.05,**P<0.01;△與四物湯組比較,△P<0.05,△△P<0.01
表3四物湯及其C部位分離物對血虛證小鼠外周血白細胞的影響(x±s,n=10)
注與模型組比較,*P<0.05,**P<0.01;△與四物湯組比較,△P<0.05,△△P<0.01實驗結果表明,以外周血白細胞、骨髓造血祖細胞為指標對四物湯提取物進行活性追蹤,提示80%醇沉物(B)及80%醇沉上清(C)活性較強;對二者進一步分離提取物的活性追蹤實驗提示B3、C2、C3部位活性相對較強,均能升高輻射損傷性血虛證小鼠外周血中白細胞數。但B1、B2及B3的補血作用均不及B。
表4四物湯及其提取物對血虛證小鼠造血祖細胞增殖的影響(x±s,n=10)
注*與模型對照比較*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001體外造血祖細胞集落培養結果進一步追蹤驗證了四物湯分離提取物的補血活性,而且首次發現芍藥苷具有補血作用。
實驗例2 四物湯複方活性部位的初步分析鑑定一、HPTLC表明四物湯B活性部分主要由芍藥苷、單糖、二糖(很可能是蔗糖)組成 見圖1、2。
二、H PLC表明四物湯正丁醇部分含有芍藥苷 見圖3三、ESIMS表明四物湯正丁醇部分含有芍藥苷 見圖4、5、6四、TLC表明四物湯正丁醇部分的單糖主要為果糖和葡萄糖 見圖7實驗例3 四物湯正丁醇部分芍藥苷、果糖、葡萄糖、蔗糖的含量測定經HPLC測定(方法略),四物湯正丁醇部分浸膏中,含有芍藥苷9.7%,果糖16.5%,葡萄糖10.1%,蔗糖22.3%。
圖1、2四物湯B活性部分HPTLC3四物湯正丁醇部分HPLC4、5、6四物湯正丁醇部分ESIMS7四物湯正丁醇部分TLC圖下列實施例均能實現上述實驗例的效果。
具體實施例方式
實施例1四物湯正丁醇提取物(B)及活性部位C的製備方法四物湯藥材600g,第一煎加水3000ml,浸泡1h,煎30min,三層紗布過濾,第二煎加水2100ml,煎20min三層紗布過濾,得水煎液3700ml。水煎液≤60℃旋轉蒸發濃縮至600ml,20%乙醇沉澱,得沉澱(G部分,14.91g),上清液685ml繼續進行40%乙醇沉澱得沉澱(F部分,58.5g),上清液500ml,繼續進行60%乙醇沉澱,得沉澱(E,15.47g),上清液725ml繼續進行80%乙醇沉澱,得沉澱(D,59.33g),上清液1320ml,濃縮至無乙醇味得浸膏(86.2g),加水300ml溶解得水液約500ml,進行乙酸乙酯萃取(500ml、500ml、300ml),合併乙酸乙酯液,回收溶劑得提取物A(1.934g),餘下水液約500ml,進行正丁醇萃取(500ml、400ml,300ml),合併正丁醇液,回收溶劑得提取物B(11.5g),餘下水液約500ml濃縮至發泡而不能繼續,得提取物C(74.8g)。
實驗例2膠囊劑的製備本發明有效部位B 500g、C 500g,藥用澱粉1000g,混合均勻,裝入1號膠囊,每粒0.2g,每次口服2-3粒,每日兩次。
實施例3片劑的製備本發明有效部位B 200g、C 800g,藥用澱粉400g,糊精100g,混合均勻,用適量乙醇制粒,經整粒機整粒,壓片,每片0.25g,口服,每次2片,每日兩次。
實施例4顆粒劑的製備本發明有效部位B 15g、C 85g,,糖粉100g,混合均勻,用適量乙醇制粒,乾燥、整粒、分裝即得。口服,一次5g,一日兩次。
實施例5四物湯藥材600g,第一煎加水3000ml,浸泡1h,煎30min,三層紗布過濾,第二煎加水2100ml,煎20min三層紗布過濾,得水煎液3700ml;水煎液≤60℃旋轉蒸發濃縮至600ml,20%乙醇沉澱,得沉澱14.91g,上清液685ml繼續進行40%乙醇沉澱得沉澱58.5g,上清液500ml,繼續進行60%乙醇沉澱,得沉澱15.47g,上清液725ml繼續進行80%乙醇沉澱,得沉澱59.33g,上清液1320ml,濃縮至無乙醇味得浸膏86.2g,加水300ml溶解得水液約500ml,分別用500ml、500ml、300ml乙酸乙酯進行萃取,合併乙酸乙酯液,回收溶劑得提取物1.934g,餘下水液約500ml,分別用500ml、400ml,300ml正丁醇進行萃取,合併正丁醇液,回收溶劑得該活性部位,主要含有芍藥苷9.7%,果糖16.5%,葡萄糖10.1%,蔗糖22.3%。所得有效部位加入糖粉適量,混合均勻,用適量乙醇制粒,乾燥、整粒、分裝即得。口服,一次5g,一日兩次。
權利要求
1.芍藥甙在製備具有補血作用的藥物中的應用。
全文摘要
本發明公開四物湯活性部位,尤其公開了芍藥甙在製備具有補血作用的藥物中的應用。
文檔編號A61P7/06GK101040864SQ20061016181
公開日2007年9月26日 申請日期2003年5月9日 優先權日2003年5月9日
發明者高月, 王升啟, 馬百平, 梁乾德, 邱成斌, 馬增春, 陳鵬, 譚洪玲, 肖成榮, 趙永紅 申請人:中國人民解放軍軍事醫學科學院放射與輻射醫學研究所