調節造血幹細胞生長的方法

2023-05-31 10:16:56 4

專利名稱：調節造血幹細胞生長的方法
技術領域：
本實施方案提供了在體外、體內和先體外後體內增加或減少造血幹細胞群體的調節齊U。背景幹細胞研究擁有於開發療法的非凡潛力，所述療法可以改變患有諸如白血病、糖尿病和貧血的疾病的那些人的未來。許多研究集中於幹細胞生物學作為關於疾病治療的關鍵的探究。通過幹細胞在正常發育中的作用的了解，研究者尋求捕獲且指導幹細胞的先天能力以治療許多狀況。研究在許多區域中同時進行檢查驅動胚胎幹細胞在各種組織中發育的遺傳和分子觸發物；學習如何推動那些細胞分裂且形成特化組織；培養胚胎幹細胞且開發起作用的新系；尋找通過消除供體需要來消除或控制移植物抗宿主病的方法；和產生可普遍移植的細胞系。造血幹細胞(HSCs)在胚胎發生期間在不同區域中衍生，其中特異性誘導事件使中胚層轉變成血液幹細胞和祖先。仍需要闡明特定生物分子、化學試劑和其他因子之間在這些誘導事件中的關聯。例如，仍需要鑑定何種生物分子或化學試劑有希望用於處理HSC群體用於所需目的，例如增加HSC群體用於研究或治療。概述本實施方案的組合物和方法提供了 HSC調節劑，其是根據具體適應症所需增加HSC數目或減少HSC數目的試劑。例如，發現增加HSC數目的HSC調節劑包括前列腺素E2 (PGE2)和刺激PGE2途徑的試劑。相反，阻止PGE2合成的HSC調節劑減少HSC數目。一個實施方案提供了用於促進受試者中的造血幹細胞生長的方法，其包括施用至少一種造血幹細胞(HSC)調節劑和藥學上可接受的載體。在另一個實施方案中，HSC調節劑通過修飾前列腺素途徑來增加HSCs。通過修飾前列腺素途徑來增強HSC群體的HSC調節劑可以是選自下述的至少一種化合物PGE2、dmPGE2、PGI2、亞油酸、13 (s)-H0DE、LY171883、Mead 酸(Mead Acid)、二十碳三烯酸、環氧二十碳三烯酸、0N0-259、Cayl039、PGE2受體激動劑、以及這些試劑中的任何一種的衍生物。在更具體的實施方案中，HSC調節劑是選自下述的PGE2衍生物16，16_ 二甲基PGE2、19 (R)-羥基PGE2、16，16- 二甲基PGE2p- (p-乙醯氨基苯甲醯氨基)苯酯、11-脫氧-16，16- 二甲基PGE2、9-脫氧-9-亞甲基-16，16- 二甲基PGE2、9_脫氧_9_亞甲基PGE2、丁環前列素、硫前列酮、PGE2絲氨醇醯胺、PGE2甲酯、16-苯基四去甲(tetranor)PGE2、15 (S)-15-甲基 PGE2 和 15 (R)-15-甲基 PGE2。在另一個實施方案 中，HSC調節劑通過修飾Wnt途徑來增加HSCs。通過修飾Wnt途徑來增強HSC群體的HSC調節劑可以是選自下述的至少一種化合物PGE2、dmPGE2、BI0、LiCl、以及這些化合物的衍生物。在另外一個實施方案中，HSC調節劑通過修飾CAMP/P13K/AKT第二信使來增加HSCs。通過修飾CAMP/P13K/AKT第二信使來增強HSC群體的HSC調節劑可以是選自下述的至少一種化合物8_溴-cAMP、毛喉素、以及這些試劑的衍生物。在另外一個實施方案中，HSC調節劑通過修飾Ca2+第二信使來增加HSC群體。通過修飾Ca2+第二信使來增強HSC群體的HSC調節劑可以是選自下述的至少一種試劑Bapta-ΑΜ,芬地林、尼卡地平、以及這些化合物的衍生物。在另一個實施方案中，HSC調節劑通過修飾NO/血管緊張素信號傳導來增加HSCs。通過修飾NO/血管緊張素信號傳導來增強HSC群體的HSC調節劑可以是選自下述的至少一種化合物L-Arg、硝普鈉、釩酸鈉、緩激肽、及其衍生物。在另外一個實施方案中，增強HSC群體的HSC調節劑可以是選自下述的至少一種試劑美貝維林、丙酮縮氟氫羥龍、阿替洛爾、吲哚洛爾、加波沙朵(Gaboxadol)、犬尿烯酸、肼屈嗪、噻苯達唑、比枯枯靈鹼(Bicuclline)、Vesamicol、黃夾次苷、丙咪嗪、氯磺丙脲、1，5_亞戊基四唑、4-氨基吡啶、二氮嗪、苯磷硫胺、12-甲氧基十二碳烯酸、N-甲醯基-Met-Leu-Phe、加拉碘銨、IAA 94、氯烯雌醚、以及這些化合物的衍生物。另一個實施方案提供了通過使新生幹細胞群體與選自下述的至少一種化合物接觸來促進HSC生長的方法PGE2、PGI2、亞油酸、13(s)-H0DE、LY171883、Mead酸、二十碳三烯酸、環氧二十碳三烯酸、0N0-259、Cayl039、PGE2受體激動劑、16，16-二甲基PGE2、
19(R)-羥基PGE2、16，16- 二甲基PGE2p-(p-乙醯氨基苯甲醯氨基)苯酯、11_脫氧_16，16-二甲基PGE2、9-脫氧-9-亞甲基-16，16-二甲基PGE2、9-脫氧-9-亞甲基PGE2、丁環前列素、硫前列酮、PGE2絲氨醇醯胺、PGE2甲酯、16-苯基四去甲PGE2、15 (S)-15-甲基PGE2、15 (R)-15-甲基PGE2、BI0、8-溴-cAMP、毛喉素、Bapta-AM、芬地林、尼卡地平、硝苯地平、匹莫齊特、毒毛旋花子苷原、毛花苷、L-Arg、硝普鈉、釩酸鈉、緩激肽、美貝維林、丙酮縮氟氫羥龍、阿替洛爾、吲哚洛爾、加波沙朵、犬尿烯酸、肼屈嗪、噻苯達唑、比枯枯靈鹼、Vesamicol、黃夾次苷、丙咪嗪、氯磺丙脲、1，5-亞戊基四唑、4-氨基吡啶、二氮嗪、苯磷硫胺、12-甲氧基十二碳烯酸、N-甲醯基-Met-Leu-Phe、加拉碘銨、IAA 94、氯烯雌醚、及其衍生物。新生幹細胞群體可以從外周血、臍帶血、絨毛膜絨毛、羊膜液、胎盤血或骨髓中收集。本發明的另一個實施方案提供了用於促進HSC先體外後體內擴增的方法，其包括在至少一種HSC調節劑的存在下溫育HSC。本發明的另一個實施方案提供了用於促進HSC先體外後體內擴增的方法，其包括收集HSC來源樣品(例如，外周血、臍帶血、羊膜液、胎盤血、骨髓、絨毛膜絨毛)且在至少一種HSC調節劑例如PGE2的存在下貯藏其。具體實施方案提供了包含適合於HSC來源樣品貯藏的容器的試劑盒，其中所述容器預裝入增加HSCs的至少一種HSC調節劑。另外的實施方案提供了試劑盒，其包含適合於HSC來源樣品貯藏的容器和包含合適量的增加HSCs的至少一種HSC調節劑的小瓶。本發明的進一步實施方案提供了用於促進HSC先體外後體內擴增的方法，其中使新生HSC來源在最初收集時、在加工期間、在貯藏時、在解凍後、或在輸液期間與PGE2或其衍生物接觸。在本發明的另一個實施方案中，HSC調節劑通過修飾前列腺素途徑來抑制HSCs。通過修飾前列腺素途徑來抑制HSC群體的HSC調節劑可以是選自下述的至少一種化合物吲哚美辛、芬布芬、NS398、SC560、舒林酸、琥丁唑酮、阿司匹林、萘普生、布洛芬、塞來昔布、PGJ2、馬兜鈴酸、AH6809、AH23848、以及這些的衍生物。在另一個實施方案中，HSC調節劑通過修飾Wnt途徑來抑制HSCs。通過修飾Wnt途徑來抑制HSC群體的HSC調節劑可以是選自下述的至少一種試劑前列腺素抑制劑、Kenpaul lone、丙戍酸、或其衍生物 。在本發明的另外一個實施方案中，HSC調節劑通過修飾CAMP/P13K/AKT第二信使來抑制HSCs。通過修飾CAMP/P13K/AKT第二信使來抑制HSC群體的HSC調節劑可以是選自下述的一種或多種化合物Η)98059、KT5720、H89、U0126、渥曼青黴素、及其衍生物。在另一個實施方案中，HSC調節劑通過修飾Ca2+第二信使來抑制HSCs。通過修飾Ca2+第二信使來抑制HSC群體的HSC調節劑可以是選自下述的至少一種試劑=BayK 8644、硫利噠嗪、以及這些試劑的衍生物。在另外一個實施方案中，HSC調節劑通過修飾NO/血管緊張素信號傳導來抑制HSCs。通過修飾NO/血管緊張素信號傳導來抑制HSC群體的HSC調節劑可以是選自下述的至少一種化合物L-NAME、依那普利、卡託普利、AcSDKP、氯沙坦、AcSDKP、氯沙坦、Telimasartan、組胺、氨溴索、白楊黃素、環己醯亞胺、亞甲藍、腎上腺素、地塞米松(Dexamethazone)、普羅地芬、異硫氰酸節酯、麻黃鹼、及其衍生物。在本發明的一個另外實施方案中，抑制HSC群體的HSC調節劑是選自下述的至少一種化合物P ar a g y I i n e、普萘洛爾、依他硝唑、甲巰咪唑、西諾沙星、青黴胺、呋塞米、Eburnamininone、阿柔比星、華法林、Y -氨基丁酸、炔諾酮、鷹爪豆鹼、二氫奎尼丁、乙肼苯噠嗪、甲氧明、羥基脲、雙氫麥角胺、安他唑林、3-硝基丙酸、N-苯氨茴酸、非那吡啶、二氯犬尿烯酸、3-雌二醇、L-Leu、酚苄明、美芬丁胺、四氫煙酸、愈創蘭油烴、咪唑、β-胡蘿蔔素、氯苯丁酯、以及這些化合物的衍生物。另一個實施方案提供了用於抑制受試者中的HSC生長的方法，其包括施用至少一種HSC調節劑和藥學上可接受的載體。在具體實施方案中，HSC調節劑是選自下述的一種或多種化合物吲哚美辛、塞來昔布、芬布芬、前列腺素(Prosteglandin) J2、琥丁唑酮、舒林酸、及其衍生物。另一個實施方案提供了通過使新生幹細胞群體與選自下述的至少一種化合物接觸用於減少HSC生長的方法吲哚美辛、芬布芬、NS398、SC560、舒林酸、琥丁唑酮、阿司匹林、萘普生、布洛芬、塞來昔布、PGJ2、馬兜鈴酸、ΑΗ6809、ΑΗ23848、Kenpaullone、丙戊酸、PD98059、KT5720、H89、U0126、渥曼青黴素、BayK 8644、硫利噠嗪(Thiridazine)、L-NAME、依那普利、卡託普利、AcSDKP、氯沙坦、AcSDKP、氯沙坦、Telimasartan、組胺、氨溴索、白楊黃素、環己醯亞胺、亞甲藍、腎上腺素、地塞米松、普羅地芬、異硫氰酸苄酯、麻黃鹼、Paragyline、普萘洛爾、依他硝唑、甲巰咪唑、西諾沙星、青黴胺、呋塞米、Eburnamininone、阿柔比星、華法林、Y -氨基丁酸、炔諾酮、鷹爪豆鹼、二氫奎尼丁、乙肼苯噠嗪、甲氧明、羥基脲、雙氫麥角胺、安他唑林、3-硝基丙酸、N-苯氨茴酸、非那吡啶、二氯犬尿烯酸、3-雌二醇、L-Leu、酚苄明、美芬丁胺、四氫煙酸、愈創蘭油烴、咪唑、β-胡蘿蔔素、氯苯丁酯、PGE2受體拮抗劑、以及這些化合物的衍生物。


圖I表示關於使用斑馬魚胚胎影響AGM中的幹細胞的化學藥品的篩選示意。圖2Α和2Β涉及前列腺素激動劑和拮抗劑,其改變runxl/cmyb表達而不影響血管發育。圖2A顯示在原始(gatal和lmo2)和永久(lmo2和cd41)血細胞生成期間分離的FACS分選細胞群體的微陣列表達概況。顯示了與GFP-細胞相比較，每個GFP+分選級分中的coxl (淡灰色)和cox-2 (深灰色)的相對表達。圖2B顯示與對照相比較(每個三重峰中的第I條)，在暴露於長效dmPGE2 (10 μ Μ,每個三重峰中的第2條，深灰色)或非特異性cox抑制劑吲哚美辛(10 μ Μ，每個三重峰中的第3條)後的內皮和HSC特異性基因表達的qPCR概況。2種處理都導致與關於檢查的每種基因的對照相比較統計學上顯著的差異(AN0VA, P < O. 05，η = 8)。圖3描述了指出前列腺素激動劑和拮抗劑改變runxl/cmyb表達的數據，其通過經由共焦顯微鏡術檢測到的雙基因(bigenic)斑馬魚胚胎中的HSC數目的定量分析DMSO 23. 3±5. 0(平均值土SD)，dmPGE2 (10 μ Μ) 38. 0±2. 2，吲哚美辛(10 μ M) (ANOVA, p
<O. 00001，η = 10/ 處理)。圖4A和4B顯示用dmPGE2處理增強亞致死照射的成年斑馬魚中的造血恢復。執行斑馬魚全KM照射恢復實驗。星號(*)指示統計學上顯著的差異* = 50 μ M對對照，#=50 μ M對10 μ M和50 μ M對對照，*** =所有顯著的變量(ANOVA，ρ < O. 05，η = 15/變量)。圖4Α顯示了在DMSO和dmPGE2處理的(50 μ Μ)斑馬魚中照射恢復的第0、4、7、10和14天時在KM中的造血細胞譜系的代表性F SC/SSC FACS概況。圖4Β顯示在對照魚(三角形)和dmPGE2處理的魚(正方形，10 μ M ;圓圈，50 μ M)中前體細胞、淋巴樣細胞和髓樣細胞的KM重構的動力學。圖5Α和5Β描述了改變亞致死照射的成年斑馬魚中的HSC相關基因表達和恢復的PG途徑的調節。圖5Α顯示如通過對於照射後第3天分離的全KM的qPCR測量的，dmPGE2處理對幹細胞和內皮標記的作用。星號(*)指出統計學上顯著的差異(雙尾t檢驗，η = 15，runxl p = O. 0001 ；lmo2 p = 0. 014 ；flil p = 0. 049)。圖 5B 描述了 coxl (SC560,10 μ Μ)和cox2 (NS398,10 μ M)抑制對於照射恢復(η = 5/處理)的作用。對於用SC560或NS398處理的魚，由於在這些處理組中的過量死亡，在第14天時無法獲得分析。圖6A和6B顯示dmPGE2調節小鼠ES細胞中的集落數目和造血分化。進行M3434和0P9ES細胞集落形成測定；計數是鋪平板的每100，000個細胞。條指出對照處理的ES細胞和用漸增劑量的dmPGE2 (10 μ Μ、20 μ Μ、100 μ Μ)的處理或吲哚美辛處理的(10 μ Μ、100 μ Μ)ES細胞。星號(*)指出統計學上顯著的差異(雙尾t檢驗，η = 5/變量)。圖6Α，顯示了漸增劑量的dmPGE2和經由吲哚美辛抑制環加氧酶活性對甲基纖維素中的造血分化的作用；終末類紅細胞(E)、混合粒細胞/單核細胞(GM)和多能(GEMM)祖先集落的數目(10 μ MdmPGE2 GM ρ = O. 005,GEMM ρ = O. 017 ；20μΜ dmPGE2 dE ρ = O. 04,GM ρ = O. 007,GEMMO. 016 ； 100 μ M吲哚美辛GM ρ = O. 024)。圖6B, dmPGE2和吲哚美辛對0P9造血集落數目的作用(20 μ M :p = O. 047)。圖7A和7B描述了 PGE2對集落數目的影響。更具體而言，圖7A和7B舉例說明了在(A)甲基纖維素和(B) 0P9測定中集落形成的吲哚美辛(100 μ M)抑制的dmPGE2介導的(10 μ M)援救。圖8Α-圖8F指出鼠BM暴露於dmPGE2增加CFU-S和再增殖HSCs的數目。星號㈩指出統計學上顯著的差異。圖8A和SB，WBM(在冰上2小時)用EtOH對照或dmPGE2 (I μ Μ/106個細胞)的先體外後體內處理對CFU-S8和CFU-S12 (60, 000個細胞/受體；CFU-S12 :雙尾t檢驗，η = 10，ρ < O. 0001)的作用。圖8C，在用吲哚美辛(I μ Μ/106個細胞)先體外後體內處理後對CFU-S12的作用(100，000個細胞/受體，雙尾t檢驗，η=10，ρ = O. 0002)。圖8D，ckit+scal+譜系-幹細胞在用dmPGE2或EtOH對照處理後的CFU-S 12 評估(雙尾 t 檢驗，100 個細胞n = 10，ρ = O. 013 ；300 個細胞ρ = O. 0003)。圖SE和8F，有限稀釋競爭再增殖測定。顯示了在12周時如通過FACS分析(e)測定的，與對照(正方形)或dmPGE2處理的(圓圈)細胞樣品移植的細胞總數目相關的陰性受體數目。在移植後6、12和24周時通過Poisson統計學計算的，在EtOH對dmPGE2處理的WBM的受體中的移入頻率(小圖F) (ANOVA, η = 10/變量，6周ρ = O. 005 ;12周ρ = O. 002 ；24周ρ = O. 05);在每個時間點上對分析存活的受體數目顯示於表6-表8中。圖9A-9N描述了顯示鼠BM暴露於dmPGE2增加脾重量和I次HSC移入的數據。圖9A和9B，在第(a) 8和(b) 12天時用EtOH對照或dmPGE2先體外後體內處理WBM和分離的HSCs對脾重量的作用(雙尾 t 檢驗，CFU-S8 n = 5, ρ = O. 339 ；CFU-S12 n = 9,p < O. 00001)。圖9C，與對照比較，在吲哚美辛處理(綠色)後的脾重量(雙尾t檢驗n = 10，p = O. 00026)。圖9D，在KSL細胞的dmPGE2處理後的脾集落數目(雙尾t檢驗，100個細胞n = 4，ρ =O. 0013 ；300個細胞n = 5,p = O. 009)。圖9E，舉例說明在對照和dmPGE2暴露的BM細胞的受體中的⑶45. I移入水平(左上象限)的代表性FACS圖。圖9F-9J，在dmPGE2處理的WBM(圓圈)對對照(正方形)的受體中的平均嵌合狀態(F、H、I)和計算的移入頻率(圖9G 和 9J)。圖 9K 和 9L，在 CFU-S12 測定中用 coxl (SC560,10 μ M)和 cox2 (NS398,10 μ Μ)抑制劑先體外後體內處理WBM對集落數目(配對t檢驗，η = 10，SC560p = O. 00016，NS398p
<O. 00001 和脾重量(配對 t 檢驗，n = 10，SC560p = O. 025,NS398p = O. 00075)的作用。圖9M和9N，在5-FU骨髓損傷後的外周血(處理後第14天)和骨髓(處理後第16天)WBC計數；體內暴露於SC560或NS398顯著抑制WBC恢復，而dmPGE2增強WBC計數。圖10呈現了 Wnt信號傳導途徑的圖解。圖IlA和IlB描述了 wnt活性的調節影響成體穩態的數據。圖IlA顯示了照射測定的示意圖；圖IlB呈現了在wt,hs wnt8,hs :dkk和hs dnTCF成體中在照射後第10天時整個腎髓的FACS分析。圖12顯示了在體內Top :dGFP測定中在由前列腺素信號傳導引起的發育胚胎中的wnt活性中的改變的qPCR定量。 圖13呈現了描述PG和wnt途徑的相互作用的潛在點的模型。(1)PGE2不能援救dkk、axin、dnTCF ;卩引哚美辛不能阻斷wnt8。(2)PGE2援救dkk,但不援救axin和dnTCF ;口引哚美辛可以阻斷wnt8 ；PGE2援救dkk和axin,但不援救dnTCF ;Π引哚美辛可以阻斷wnt8。
(4)PGE2援救dkk、axin和dnTCF ;卩引哚美辛可以阻斷wnt8。
圖14顯示了在照射以及用dmPGE2或吲哚美辛處理後第3天時，在Top :dGFP成體的腎髓中的GFP陽性細胞百分比。詳述除非本文另有定義，與本申請結合使用的科學和技術術語應具有由本領域普通技術人員通常理解的含義。此外，除非上下文另有要求，單數術語應包括複數，且複數術語應包括單數。應當理解本發明不限於本文描述的具體方法、規程和試劑等，並且同樣可以改變。本文使用的術語僅用於描述具體實施方案的目的，並且不意欲限制完全由權利要求限定的本發明的範圍。 除了在操作實施例中或另有說明時，表示本文使用的成分或反應條件的量的所有數目應理解為在所有情況下由術語「約」修飾。術語「約」當與百分比結合使用時可以意指± I %。鑑定的所有專利和其他出版物為了描述和公開例如此種出版物中描述的方法的目的特別引入本文作為參考，所述方法可以與本發明結合使用。這些出版物僅在本申請的提交日期前提供其公開內容。在這點上任何事情不應解釋為承認本發明人由於在先發明或由於任何其他原因無權在時間上先於此種公開內容。關於日期的所有聲明或關於這些文件內容的陳述基於對於申請人可用的信息，並且不構成關於這些文件的日期或內容的正確性的任何承認。造血幹細胞(HSC)穩態受生長因子、信號傳導分子和轉錄因子的緊密控制。在主動脈-生殖腺-中腎(AGM)區中在胚胎發生期間衍生的終末HSCs隨後定居在胎兒和成體造血器官中的小生境。Dzierzak, 12Curr. Opin. Hematol. 197-202 (2004) ； Ga I Ioway & Zon,53Curr. Top. Devel. Biol. 139-58(2003)。本發明提供了用於在體外、體內或先體外後體內調節HSC生長和更新的方法。該方法包括使新生幹細胞群體與至少一種HSC調節劑接觸。這種群體可以包含在外周血、臍帶血、骨髓、羊膜液、絨毛膜絨毛、胎盤或其他造血幹細胞小生境內。在一個實施方案中，本發明提供了用於促進細胞群體中的造血幹細胞生長和更新的方法。在另一個實施方案中，本發明提供了用於抑制細胞群體中的造血幹細胞生長和更新的方法。本發明部分基於PGE2和增強PGE2合成的試劑引起HSC數目中的增加的發現。相反，阻斷PGE2合成的試劑減少HSCs。在這點上，影響PGE2合成的試劑可以視為HSC調節齊U。例如，負責PGE2合成的環加氧酶(cox)可能是HSC形成所需的。此外，血管舒張劑促進HSC擴增，相反，血管收縮劑減少HSC數目。例如，肼屈嗪——抗高血壓血管舒張劑增加HSCs,而芬布芬——非類固醇類抗炎藥血管收縮劑減少HSCs。這些試劑因此也視為HSC調節劑。如本文所使用的，HSC調節劑可以促進或抑制HSC生長和更新。HSC調節劑影響細胞群體中的HSC數目。HSC調節劑影響培養中(在體外)、在短期溫育期間(先體外後體內)或在體內的HSC擴增。參見下表I。增加HSC數目的HSC調節劑包括上調PGE2合成的試齊U。HSC數目中的增加可以是比治療前由受試者顯示出的HSC數目多約10%、約20%、約 30%、約 40%、約 50%、約 60%、約 70%、約 80%、約 90%、約 100%、約 150%、約 200%或更多的增加。
引起HSC數目中的減少的HSC調節劑下調PGE2合成和/或促進血管收縮。參見例如下表2。HSC數目中的減少可以是比治療前由受試者顯示出的HSC數目少約10%、約20%、約 30%、約 40%、約 50%、約 60%、約 70%、約 80%、約 90%、約 100%、約 150%、約200 %或更多的減少。HSC數目可以通過疾病症狀的減輕進行評估,例如增加的血小板計數、增加的血細胞比容,其中血小板計數或血細胞比容增加約10%、約20%、約30%、約40%、約50%、約60%、約70%、約80%、約90%、約100%、約150%、約200%或更多。對HSC數目的作用可以通過疾病症狀的減輕進行評估，例如增加的血小板計數、增加的血細胞比容，其中血小板計數或血細胞比容增加約10%、約20%、約30%、約40%、約50%、約60%、約70%、約 80%、約 90%、約 100%、約 150%、約 200%或更多。在一個實施方案中，PGE2或dmPGE2用作HSC調節劑以增加HSC群體。本發明的HSC調節劑還包括HSC調節劑的衍生物。如本文所使用的，衍生物包括化學修飾的化合物，其中所述修飾由熟練的化學家視為常規的，例如另外的化學部分(例如，酸的酯或醯胺，保護基團，例如用於醇或硫醇的苯基、和用於胺的叔丁氧基羰基)。衍生物還包括放射性標記的HSC調節劑，HSC調節劑的綴合物(例如，生物素或抗生物素蛋白、使用 酶例如辣根過氧化物酶等、使用生物發光劑、化學發光劑或螢光劑)。此外，可以給HSC調節劑或其部分添加部分以增加體內半衰期。如本文所使用的,衍生物還包含類似物,例如包含化學修飾形式的特定化合物或其類別的化合物，和維持所述化合物或類別的藥學和/或藥理學活性特徵的化合物，也包含在本發明中。如本文所使用的，衍生物還包含HSC調節劑的前體藥物，這已知增強藥物的所需性質(例如，可溶性、生物利用率、製備等)。HSC調節劑的直接先體外後體內施用可以使造血幹細胞能夠顯著體內擴增，從而使得甚至更小量的造血幹細胞隨後在移植中可以是足夠的。因此，例如，臍帶血幹細胞移植現在不僅可以應用於兒童還可以應用於成年人。此種幹細胞可以從包括例如外周血、臍帶血、骨髓、羊膜液或胎盤血的來源進行收集。可替代地，包含HSC的來源樣品可以進行收穫，然後立即在HSC調節劑例如PGE2的存在下進行貯藏，並且在引入受試者內之前在HSC調節劑的存在下進行最初溫育(在分化前)。此外，一種或多種HSC調節劑可以在體內用於增加骨髓或其他來源(例如臍帶血)中的幹細胞數目。通過增加幹細胞的數目，來自受試者的幹細胞總收穫可以得到顯著改善。進一步地，通過增加由受試者收穫的幹細胞數目，可用於移植回該受試者內或另一個受試者內的幹細胞數目也可以得到顯著改善，從而有效減少移入的時間，且隨後導致受試者在其間具有不足的嗜中性粒細胞和血小板的時間中的減少，從而防止感染、出血或其他併發症。此外，本發明可以減少其否則不能轉移足夠細胞用於幹細胞收穫以繼續進行關於其最初疾病的治療的受試者比例，所述治療例如化學治療和其他骨髓切除治療。因此，還可以減少具有延遲的最初移入的受試者數目的比例。此外，本發明還可以通過增加HSC數目促進骨髓切除治療後的恢復。HSC調節劑例如表I和本文公開的那些可以在體內用於增加HSC生產和先體外後體內增加HSC數目。這通過將一種或多種化合物施用於受試者或幹細胞來完成。HSC調節劑還可以用於給受試者提供自體的HSCs。一般地，這涉及下述步驟給有此需要的受試者施用HSC調節劑，以增強骨髓內的幹細胞群體擴增和/或轉移外周循環中的幹細胞；收穫一種或多種骨髓幹細胞或外周循環中的一種或多種幹細胞；且將一種或多種收穫的幹細胞移植回受試者內。此外，得自根據上文描述的本發明方法收穫的幹細胞可以使用本領域已知用於幹細胞深低溫保藏的技術進行深低溫保藏。因此，使用深低溫保藏，幹細胞可以這樣維持，從而使得一旦確定受試者需要幹細胞移植，那麼幹細胞可以進行解凍且移植回受試者內。如前所述，在深低溫保藏技術期間一種或多種HSC調節劑例如PGE2的使用可以增強HSC群體。更具體而言，本發明的另一個實施方案提供了從臍帶血或等價新生兒或胎兒幹細胞來源收集的HSCs的增強，這可以進行深低溫保藏用於此種幹細胞在解凍後的治療用途。此種血液可以通過本領域已知的幾種方法進行收集。例如，因為臍帶血是HSCs的豐富來源(參見 Nakahata & Ogawa, 70 J. Clin. Invest. 1324-28 (1982) ;Prindull 等人，67Acta.Paediatr. Scand. 413-16 (1978) ；Tchernia 等人，97 (3) J. Lab. Clin. Med. 322-31 (1981))，所以關於新生兒血液的極佳來源是臍帶和胎盤。新生兒血液可以通過從臍帶中直接引流和/或通過在根和擴張靜脈處從分娩胎盤中針抽吸來獲得。參見例如，美國專利號7，160,714 ;5，114,672 ;5，004，681 ;美國專利申請系列號 10/076180，
發明者L·I·宗, T·E·諾思, W·戈斯林 申請人:兒童醫療中心有限公司, 通用醫療公司