一種酪氨酸蛋白激酶抑制劑及其製備方法

2023-06-01 06:33:56 2

專利名稱：一種酪氨酸蛋白激酶抑制劑及其製備方法
技術領域：
本發明涉及一種酪氨酸蛋白激酶抑制劑及其製備方法。
背景技術：
臨床使用的抗腫瘤化學藥物包括細胞毒性藥物和分子靶向藥物兩大類。細胞毒性 抗腫瘤藥物(如順鉬等)都是非特異性的，它們在抑制和殺傷異常增殖的腫瘤細胞的同時， 對其它增殖較快的正常細胞也同樣產生抑制和殺傷作用，由此產生的毒副作用以及腫瘤細 胞對藥物先天或獲得性的抗藥性等問題一直是制約細胞毒性化療藥物臨床應用的瓶頸。近十年來，針對腫瘤細胞特異的增殖、分化和凋亡機制，設計和合成高選擇性的 分子靶向治療藥物得到迅速發展。酪氨酸蛋白激酶抑制劑(TKI) imatiniMGleevec )、 gefitinib(Iressa )和erlotinib等分子靶向藥物相繼進入臨床使用，使蛋白激酶成為 後基因時代最重要的藥物作用靶點之一。但是，許多對腫瘤細胞異常高表達的蛋白激酶有 很好抑制活性的小分子化合物，由於水溶性差或毒副作用大而不能在臨床被應用。另一方 面，儘管第一代TKI抗腫瘤治療藥物取得了極大的成功，但在臨床應用中，絕大部分對第一 代TKI藥物敏感的癌症病人會由於編碼靶酶的基因突變而產生抗藥性。因而，能克服第一 代TKI治療藥物獲得性抗藥性的新一代TKI抗腫瘤藥物，如Dasatinib和Sutent等相繼 問世。Sutent是一種多靶點的酪氨酸激酶抑制劑，能有效抑制血管內皮細胞生長因子受體 (VEGFR)、血小板衍生生長因子受體(PDGFR)和KIT的活化，對由於基因突變導致Imitinib 抗藥性的胃腸基質腫瘤(GIST)有很好的活性。另外，一系列被稱為Combi-molecule (組合 分子)的喹唑啉衍生物也得到藥物化學家們的關注。喹唑啉衍生物含有丙烯醯或三氮烯 類取代基，能與位於表皮生長因子受體(EGFR)ATP結合域內的半胱氨酸殘基發生烷基化反 應，不可逆地抑制EGFR的自磷酸化。與此同時，細胞內水解產生的三氮烯組分還能與DNA 反應，烷基化DNA，進一步加強TKI抗腫瘤藥物的活性，對高表達EGFR的NIH3T3HER14細胞 的增殖產生顯著抑制作用。但是，這一類組合分子化合物中細胞毒性(烷基化)單元的毒 副作用使它們的研究仍然停留在實驗室研究階段。

發明內容
本發明的目的是克服現有的酪氨酸蛋白激酶抑制劑體系不含有能與細胞毒性有 機金屬類配合物配位的系列，且細胞毒性藥物毒副作用較大、水溶性較差的缺陷而提供一 種能與細胞毒性有機金屬釕配合物配位、細胞毒性藥物毒副作用小、水溶性好的酪氨酸蛋 白激酶抑制劑。本發明提供了一種酪氨酸蛋白激酶抑制劑，其中，該酪氨酸蛋白激酶抑制劑為由 通式⑴表示的化合物 其中，R為由具有配位功能的基團取代的芳氨基、六元芳雜環氨基、五元雜環氨基、 稠雜環氨基中的一種或幾種。本發明還提供了上述酪氨酸蛋白激酶抑制劑的製備方法，其中，該方法包括將第 一反應物與第二反應物在有機溶劑中接觸，所述第一反應物為4-滷-6，7-二甲氧基喹唑 啉，所述第二反應物為由具有配位功能的基團取代的芳香胺、氨基吡啶、氨基嘧啶、氨基噻 唑和氨基稠雜環化合物中的一種或幾種，接觸反應的條件使得第一反應物中4位的滷素與 第二反應物中的氨基發生縮合反應。本發明提供的酪氨酸蛋白激酶抑制劑具有較高的選擇性、較低的毒副作用和較強 的水溶性，此外，該酪氨酸蛋白激酶抑制劑還能夠用於取代細胞毒性有機金屬釕配合物中 的一個或多個配體，所製得的配合物既能作用於蛋白激酶(或蛋白磷酸酶)和也能作用於 DNA的多靶點組合分子抗腫瘤化合物。本發明提供的蛋白激酶抑制劑還有助於降低腫瘤細 胞對藥物產生抗藥性的可能性。本發明提供的蛋白激酶抑制劑由於含有潛在金屬配位位點，因此能夠用於合成含 金屬配位中心的組合分子抗腫瘤化合物。與此同時，酶聯免疫吸附分析(ELISA)測定結果 表明，所合成的化合物對酪氨酸蛋白激酶EGFR有很好的抑制活性。


圖1-5為本發明提供的酪氨酸蛋白激酶抑制劑的X射線衍射晶體結構圖。
具體實施例方式根據本發明提供的酪氨蛋白酸激酶抑制劑，其中，該酪氨酸蛋白激酶抑制劑為由 通式⑴表示的化合物 其中，R為由具有配位功能的基團取代的芳氨基、六元芳雜環氨基、五元雜環氨基、 稠雜環氨基中的一種或幾種。按照本發明，所述具有配位功能的基團可以是各種能與金屬特別是釕形成配位體 的基團。所述具有配位功能的基團取代的芳氨基可以為下述通式(2)所示 其中，在通式(2)中，Rl、R2、R3、R4和R5各自獨立地為氫原子、氟原子、氯原子、 氨基、苯基、氨苯基、苯氨基、-SCH3> -SH、-C00H、碳原子數為1-3的烷基中的一種，且R1-R5 中至少有一個基團選自-SCH3、-SH、-COOH、苯基、氨基、氨苯基和苯氨基中的一種；優選情況 下，所述具有配位功能的基團取代的芳氨基可以為由如下通式(14)_(17)所示基團中的一 種 其中，在通式(14)中，R15和R16可以各自獨立地為氫原子、氟原子、氯原子、氨 基、苯基、氨苯基、苯氨基、-SCH3> -SH、-C00H、碳原子數為1-3的烷基中的一種，且R15和 R16中至少有一個基團選自_SCH3、-SH、-C00H、苯基、氨基、氨苯基和苯氨基中的一種；更優 選情況下，R15為F、H、-NH2、苯氨基、氨苯基和碳原子數為1-3的烷基中的一種，R16為Cl、 H、-SCH3> -SH 和-COOH 中的一種。按照本發明，所述具有配位功能的基團取代的芳氨基還可以為由結構式(13)所
示的結構 按照本發明，所述六元芳雜環氨基可以為如下通式(3)所示
其中，在通式⑶中，R6、R7各自獨立地為碳原子或氮原子，且&和1 7中的至少-為氮原子；R8、R9和Rltl各自獨立地為氫原子、氨基、碳原子數為1-3的烷基中的一種，且R8、 Ri^PRltl中的至少一個基團為氨基；優選情況下，所述六元芳雜環氨基可以由下述通式(18) 所示 其中，氨基的位置可以位於吡啶氮的對位、間位或鄰位，如下述結構式所示
按照本發明，所述五元雜環氨基可以為如下通式(4)所示
其中，通式(8)-(9)中的R14可以為碳原子數為1-3的烷基、2-吡啶基或亞甲 基-2-吡啶基。根據本發明，所述酪氨酸蛋白激酶抑制劑的製備方法包括將第一反應物與第二反 應物在有機溶劑中接觸，所述第一反應物為4-滷-6，7-二甲氧基喹唑啉，所述第二反應物 為由具有配位功能的基團取代的芳香胺、氨基吡啶、氨基嘧啶、氨基噻唑和氨基稠雜環化合其中，在通式(4)中，Rll、R12和R13各自獨立地選自氫原子、碳原子數為1_3的 燒基、氨基中的一種，且R11、R12和R13中的至少一個基團為氨基；優選情況下，所述五元雜 環氨基可以為由下述結構式所示的五元雜環氨基 按照本發明，所述稠雜環氨基可以由下述通式(5)_(12)所示物中的一種或幾種，接觸反應的條件使得第一反應物中4位的滷素與第二反應物中的氨基 發生縮合反應。其中，所述4-滷-6，7- 二甲氧基喹唑啉優選為4-氯-6，7- 二甲氧基喹唑 啉和/或4-溴-6，7- 二甲氧基喹唑啉。所述第一反應物與第二反應物的摩爾比可以為1 (1-3)，優選為1 (1-1.5); 所述有機溶劑可以選自異丙醇、乙醇和甲苯中的一種或幾種，以第一反應物與第二反應物 的總量為100毫克為基準，所述有機溶劑的用量可以為20-50毫升，優選為20-40毫升。按照本發明提供的方法，其中，所述由具有配位功能的基團取代的芳香胺為通式 (19)所示或者為由結構式(31)所示，所述氨基吡啶為通式(20)所示，所述氨基嘧啶為通 式(21)所示，所述氨基噻唑為通式(22)所示，所述氨基稠雜環化合物為通式(23)-(30)所
示 其中，在通式(19)中，R17、R18、R19、R2(1和R21各自獨立地為氫原子、氟原子、氯原子、 氨基、苯基、氨基苯、苯氨基、-SCH3、-SH、-C00H和碳原子數為1-3的烷基中的一種，且R17-R21 中至少有一個基團選自_SCH3、-SH、-C00H、苯基、氨基、氨基苯和苯氨基中的一種；在通式 (20)中，R22、R23、R24、R25和R26各自獨立地為氫原子、氨基、碳原子數為1-3的烷基中的一種， 且R22, R23> R24、R25和R26中的至少一個基團為氨基；在通式(21)中，R27, R28, R29和R30各自 獨立地選自氫原子、碳原子數為1-3的烷基、氨基中的一種，且R27、R28、R29和R30中的至 少一個基團為氨基；在通式(22)中，R31、R32和R33各自獨立地選自氫原子、碳原子數為1-3 的烷基、氨基中的一種，且R31、R32和R33中的至少一個基團為氨基；在通式(26)-(27)中，R36 為碳原子數為1-3的烷基、2-吡啶基或亞甲基-2-吡啶基。優選情況下，所述第二反應物中通式(19)所述的化合物優選為如通式(32)至 (35)所示化合物中的一種或幾種；所述第二反應物中通式(20)所述的化合物優選為如通 式(36)所示化合物 其中，通式(32)中的R34為F、H、NH2、苯氨基、氨苯基和碳原子數為1_3的烷基 中的一種，R35為Cl、H、-SCH3> -SH和-COOH中的一種；且R34和R35中至少有一個基團選自_SCH3、-SH、-C00H、-NH2、氨苯基和苯氨基中的一種。按照本發明，所述第一反應物和第二反應物均可以商購得到，也可以按照本各種 常規的製備方法製備得到。按照本發明，當所述第二反應物為由通式(23)_(25)所述的稠雜環化合物時，所 述反應還優選在催化劑的存在下進行，所述催化劑可以選自Pd2 (dba) 3 (三(二亞苄基丙酮) 二鈀(0))、三叔丁基磷((t-Bu)3P)和叔丁醇鈉(t-BuONa)中的一種或幾種；當以所述稠雜 環胺的摩爾數為1時，所述催化劑的用量可以為(0.01-0.015) (0. 05-0. 1) (2-4) 0例如，由通式(26)-(27)表示的化合物的製備方法可以包括(1)將硝基取代的1，2-二氨基苯與碳原子數為1-3的飽和脂肪酸、2-吡啶基甲酸 和2-吡啶基乙酸中的一種在鹽酸水溶液、磷酸和多聚磷酸中的一種或幾種溶液中，在回流 條件下，回流3-5小時，冷卻，並調節反應得到的混合物的pH值為9-10，過濾，洗滌後重結 晶得到硝基取代的苯並咪唑；所述硝基取代的1，2_二氨基苯與碳原子數為1-3的飽和脂肪 酸、2-吡啶基甲酸和2吡啶基乙酸中的一種的摩爾比可以為1 1-1 3，以1克硝基取代 1,2- 二氨基苯的量為基準，所述酸或酸的水溶液的體積為8-20毫升，鹽酸水溶液的濃度一 般為5摩爾/升的鹽酸水溶液。(2)在貴金屬催化劑的存在下，將步驟⑴得到的硝基取代的苯並咪唑與水合胼 在有機溶劑中接觸，然後冷卻，除去溶劑，過濾，洗滌，得到氨基取代的苯並咪唑；所述接觸 的條件包括，接觸的時間為1-5小時，接觸的溫度為60-80°C，以0. 1克所述硝基取代的苯並 咪唑的量計，水合胼的用量為0. 3-0. 5毫升，催化劑的用量為0. 1-0. 5克，所述有機溶劑可 以為乙醇，有機溶劑的用量為5-15毫升，所述貴金屬催化劑通常為鈀/碳催化劑。在步驟(1)中，所述調節反應得到的混合物的pH值的方法可以為各種常規的方 法，例如，採用各種鹼性溶液調節PH值，如氫氧化鈉或氫氧化鉀溶液等；所述洗滌的方法可 以採用常規的水洗的方法，洗滌的次數使無氫氧根離子被檢出即可；所述重結晶的方法可 以為各種常規的方法，例如，將反應產物溶於水和乙醇的混合溶液中，蒸發，析出，而進行重 結晶。在步驟(2)中，所述除去溶劑的方法可以採用常規的方法，例如蒸發的方法；所述 洗滌的方法可以採用反應用溶劑進行洗滌，以除去未反應的原料，例如，乙醇和/或乙醚。具體而言，如果反應產物為由通式(26)所述的化合物，則反應原料為3-硝基-1， 2-二氨基苯；如果反應產物為由通式(27)所述的化合物，則反應原料為4-硝基-1，2-二
氨基苯。例如，由通式(28)_(30)所示的化合物的製備方法可以包括在貴金屬催化劑 的存在下，將硝基取代的-8-羥基喹啉與水合胼在有機溶劑中接觸，過濾，除去溶劑，洗滌 並乾燥；所述接觸的條件包括接觸的溫度為80-85°C，接觸的時間為2-5小時；以每克硝 基取代的-8-羥基喹啉的重量計，水合胼的用量可以為0. 5-1毫升，催化劑的用量可以為 0. 1-0. 3克，溶劑的用量可以為30-50毫升。所述有機溶劑可以選自異丙醇、丙酮和乙醇中的一種或幾種。所述催化劑可以為各種貴金屬催化劑，例如，鈀/碳催化劑。所述除去溶劑的方法可以採用各種方法，例如減壓蒸餾的方法。所述洗滌的方法可以採用各種常規的方法，例如用異丙醇和/或乙醚洗滌，以除去部分未反應的原料。所述乾燥的方法和條件為本領域技術人員所公知，例如，所述乾燥的溫度可以為 40-80°C，優選為60-70°C ；乾燥的時間可以為2_12小時，優選為5_8小時。具體而言，如果反應產物為由通式(28)所述的化合物，則反應原料為5-硝 基-8-羥基喹啉；如果反應產物為由通式(29)所述的化合物，則反應原料為6-硝基-8-羥 基喹啉；反應產物為由通式(30)所述的化合物，則反應原料為7-硝基-8-羥基喹啉。按照本發明，所述R為通式(13)所述基團的酪氨酸蛋白激酶抑制劑的製備方法優 選為包括下述步驟的方法(1)將4-滷-6，7-二甲氧基喹唑啉與1，4-苯二胺在第一有機溶劑中接觸，過濾， 得到第一反應物；接觸的條件包括接觸的溫度為70-90°C，接觸的時間為2-5小時；所述 4-滷-6，7-二甲氧基喹唑啉與1，4_苯二胺的摩爾比為1 1-1. 2;所述第一有機溶劑選自 異丙醇、丙酮和乙醇中的一種或幾種，以100毫克所述反應物的總重量為基準，所述溶劑的 用量為20-50毫升；(2)將中性紅與三聚氰氯和鹼金屬的碳酸鹽在第二有機溶劑中接觸，分離，得到第 二反應物；所述接觸的條件包括接觸的溫度為0-5°C，接觸的時間為1-5小時；所述中性紅 與三聚氰氯和鹼金屬的碳酸鹽的摩爾比為2 (2.5-3) (3-3. 5)；所述第二有機溶劑選 自異丙醇、丙酮和乙醇中的一種或幾種，以中性紅和三聚氰氯的總量為100毫克為基準，所 述溶劑的用量可以為20-50毫升；所述分離得到第二反應物的方法可以採用常規的方法， 例如將該反應混合物與冰水或冰塊混合，將反應物析出，冰水或冰塊的用量只要使反應物 能夠析出即可；(3)將步驟(1)得到的第一反應物與步驟(2)得到的第二反應物在第三有機溶劑 中接觸，接觸的條件包括接觸的溫度為10-25°C，接觸的時間為1-5小時；所述第一反應物 與第二反應物的摩爾比為1 (1-2)，所述第三有機溶劑選自四氫呋喃和/或丙酮；以所述 第一反應物和第二反應物的總量為100毫克為基準，所述溶劑的用量可以為20-50毫升， 將得到的產物分離純化的方法可以採用常規的方法，例如將該反應混合物與冰水或冰塊混 合，將反應物析出，冰水或冰塊的用量只要使反應物能夠析出即可。實施例1本實施例用於說明本發明提供的酪氨酸蛋白激酶抑制劑的製備。
R17
(1) (2)
將由上述反應式中的第一反應物(1)(購自上海氟德化工有限公司)與第二反應 物(2)(購自Sigma公司)在異丁醇中加熱回流，所述第一反應物為4-氯-6，7-二甲氧基
Ν Z-^Nn所述第一反應物與第
二反應物的摩爾比均為1 1，以第一反應物和第二反應物的總量為100毫克為基準，異丁 醇的用量為15毫升；所述加熱回流的條件包括回流的溫度為80°c，回流的時間為4小時， 分別得到化合物 LQ1001、LQ1002、LQ1003、LQ1004、LQ1005、LQ1006、LQ1007、LQ1008、LQ1009、 LQ10010。分別通過核磁共振和質譜對上述製得的化合物進行表徵LQ1001 =C16H13N3O2 FCl，calc. MW = 333. 5，ESI-MS (m/z) [M+H]+334. 21H NMR:(氖代 DMS0) δ (ppm) 11. 502 (s，1H，2-H)，8. 874 (s，1H，8-H)，8. 348 (s， 1H，5-H) ,8. 026 (dd, 1H，5，-H) , 7. 737 (m，1Η，2，-H) 7. 531 (t，1Η，6，-H) 7. 347 (s，1Η, Ν-Η)4· 002(s，6H，-CH3)；LQ1002 C16H15N3O2, cal. MW = 281. 1，ESI-MS (m/z) [Μ+Η]+ :282· 2. 21H NMR:(氘代 DMS0) δ (ppm) :11. 370 (s，1H，2_H)，8. 812 (s，1H，8_H)，8. 313 (s，1H， 5-H), 7. 677(m，2H，3，-H)，7. 476(m，2H，4，-H, N-H) 7. 312(m，2H，2，-H) 4. 000(d，6H，-CH3)LQ1003 C22H20N4O2, cal. MW = 372. 1，ESI-MS (m/z) [M+H]+ :373. 31H NMR:(氘代 DMSO) δ (ppm) :11. 107 (s，1H，2_H)，8. 774 (s，1H，8_H)，8. 364 (s，1H， N-H)，8. 182 (s，1H，5-H)7. 491 (dd，2H，3」-H)，7. 250 (m，3H，2」-H，N-H) 7. 110(m，4H，2，-H, 3，-H), 6. 847 (t，1H，4」-H)，3. 996(d，6H，-CH3)LQ1004 C22H20N4O2, cal. MW = 372. 1，ESI-MS (m/z) [M+H]+ :373. 31H NMR:(氘代 DMSO) δ (ppm) :9. 459 (s，1H，2_H)，8. 446 (s，1H，8_H)，7. 854 (s， 1H，5-H)，7. 786(d，2H，2」-H)，7. 565(d，2H，3，-H) 7. 372(d，2H，2，-H)，7. 176 (s，1H, N-H)，
6.645(d，2H，3」-H)，5· 166(s，2H，-NH2)，3. 926(d，6H，-CH3)LQ1005 C16H16N4O2, cal. MW = 296. 3， ESI-MS (m/z) [M+H]+ -.297. 01H NMR (氘代 DMSO) δ (ppm) 10. 852 (s, 1H, )，8. 690 (s, 1H, )，8. 106 (s, 1H,)，
7.320 (d, 2H)，7. 253 (s, 1H, ) 6. 723 (d, 2H)，3. 979 (d, 6H)，1. 236 (s, 2H)LQ1006 =C17H17N3O2S, cal. MW = 327. 4，ESI-MS (m/z) [M+H]+ 328. 0
18
1H NMR (氘代 DMS0) δ (ppm) 11. 223 (s，1H, )，8· 843 (s，1H, )，8· 243 (s，1Η,)， 7. 615 (s 1H)，7. 497 (m, 2H, ) 7. 320 (s, 1H)，7. 223 (d, 1H) ,4. 018 (d, 6H)，2. 520 (s, 3H)LQ1007 C22H19N3O2, cal. MW = 357. 4，ESI-MS (m/z) [M+H]+ 358. 01H NMR (氘代 DMS0) δ (ppm) 9. 269 (s, 1H, )，8. 197 (s, 1H, )，7. 598 (s, 1H,)， 7. 473 (m, 6H)，7. 250 (d, 3H, ) 7. 086 (s, 1H)，，4. 003 (d, 6H)LQ1008 C22H19N3O2, cal. MW = 357. 4，ESI-MS (m/z) [M+H]+ 358. 01H NMR (氘代 DMS0) δ (ppm) 11. 269 (s，1H, )，8· 828 (s，1H, )，8· 243 (s，1Η,)， 7. 991 (s，1H)，7· 696(s，3H，) 7. 610(m，2H)，7· 494(m，2H) 7. 406(s, 1H)，7. 298(s, 1H)， 4. 012(d，6H)LQ1009 C22H19N3O2, cal. MW = 357. 4，ESI-MS (m/z) [M+H]+ :358. 01H NMR (氘代 DMSO) δ (ppm) :11· 234 (s，1H, )，8· 836 (s，1H, )，8· 246 (s，1H,)， 7. 798 (s，4H)，7. 722 (d, 2H, ) 7. 488 (s, 2H)，7. 382 (s, 1H) ,7. 310 (d, 1H) ,4. 021 (d, 6H)LQ1010 C15H14N4O2, calc. MW = 282. 2，ESI-MS (m/z) [Μ+Η]+283· 11H NMR (氘代 DMS0) δ (ppm) 9. 160 (s, 1H, 2-H)，9. 006 (s, 1H, N-H)，8. 634 (d, 2H, 3，-H)，7. 604 (s，1H, 8—H)，7. 151 (s，1H，5—H)，4. 058 (s, 3H, -CH3)，3. 938 (s,3H, -CH3)LQ1007、LQ1008和LQ1009的X射線衍射晶體結構分別如圖1_3所示。實施例2本實施例用於說明本發明提供的酪氨酸蛋白激酶抑制劑的製備。 將摩爾比為1 1的上述反應式中的第一反應物(1)4-氯-6，7_ 二甲氧基喹唑 啉與第二反應物⑶5-氨基菲洛林(由Sigma公司購得)，在催化劑Pd2 (dba) 3、t (Bu) 3P和 t-BuONa的存在下(所述催化劑Pd2 (dba) 3、t (Bu) 3P和t_BuONa與第一反應物(1)的摩爾比 為0.0125 0.075 3 1)，在甲苯中加熱回流28小時後冷卻至室溫，過濾，用甲苯和乙 醚洗滌至將未反應的原料除去，在乙醇中重結晶，得淡黃色固體。通過核磁共振和質譜表徵 為目標產物LS1001。LS1001 C22H17N5O2 Calc. MW = 383. 3，ESI-MS (m/z) [Μ+Η]+384· 1。1H NMR:(氘代 DMS0) δ (ppm) :10· 1197 (s，1H)，9. 1047 (d，1H)，9. 0564 (s，1H)， 8. 4577(m，2H)，8· 1917 (s，1Η)，8· 0957 (s，1Η)，8· 0312 (s，1H)，7· 7149 (m，2H)，7· 1858 (s， 1Η), 3. 9501 (d,6H)LSlOOl的X射線衍射晶體結構如圖4所示。實施例3
本實施例用於說明本發明提供的酪氨酸蛋白激酶抑制劑的製備 (4)(5)將由上述反應式中的第一反應物(4)與第二反應物(5)在四氫呋喃溶劑中，在室 溫(20°C)下攪拌反應約3小時，將反應液倒入冰塊中，攪拌至冰塊融化，析出紅色產物，用 甲醇重結晶純化產物，得到化合物LQ1011，以第一反應物(4)與第二反應物(5)的總量為 100毫克為基準，所述溶劑的用量為20毫升。分別通過核磁共振和質譜對上述製得的化合物進行表徵LQlOll =C34H30ClN11O2 Calc. MW = 660. 127，ESI-MS(m/z) 661. 5。1H NMR (氘代 DMS0) δ (ppm) 10. 333 (s，1H)，10. 018 (s，1H)，9. 405 (m，1H)， 8. 267 (m, 1H)，7. 968 (d, 2H)，7. 744 (m, 4H)，7. 505 (m, 2H)，7. 160 (s,2H)，6. 832 (s, 1H)， 3. 934 (d, 6H)，3. 934 (d, 6H)，2. 956 (s,6H)，2. 535 (s, 3H,)。其中所述第一反應物(4)和第二反應物(5)分別通過下面兩個反應自合成得到 所述第一反應物(4)的製備方法包括將摩爾比為1 1的4-氯-6，7_ 二甲氧基 喹唑啉與1，4-苯二胺在80°C下，在異丙醇中攪拌反應約4小時，過濾，分別用乙醇和乙醚洗 滌將未反應的原料除去，將濾餅粗產品在DMF中進行重結晶，得橙紅色純品。經核磁及質譜檢測為目標產物。LQ1005=C16H16N4O2, cal. MW = 296. 3，ESI-MS (m/ z) :[M+H]+ 297. O0 1H NMR (氘代 DMS0) δ (ppm) 10. 852 (s，1H，)，8. 690 (s，1H，)，8. 106 (s, 1H, )，7. 320 (d, 2H)，7. 253 (s, 1H, ) 6. 723 (d, 2H)，3. 979 (d, 6H)，1. 236 (s, 2H) 第二反應物(5)的製備方法包括將分散於丙酮中的中性紅(由國藥集團化學試 劑有限公司購得)(中性紅與丙酮的用量比例150mg 30ml)，滴加到溶於丙酮的三聚氰氯 (三聚氰氯與丙酮的用量比例IlOmg 7ml)中，中性紅與三聚氰氯的摩爾比為2 3，在冰浴(0-50C )下，攪拌反應30分鐘後，滴加入Na2CO3 (Na2CO3與中性紅的摩爾比為1 1. 25， 10分鐘滴完後，繼續反應約2小時，將反應液倒入冰塊中，攪拌至冰融化，過濾，乾燥濾餅得 粗品，柱層析分離，淋洗液為石油醚乙酸乙酯=2 1(體積比)，得純品，經質譜檢測為目 標產物。C18H15Cl2N7，cal. MW = 400. 26，ESI-MS(m/z) [M+H]+ 401. 36.實施例4本實施例用於說明本發明提供的酪氨酸蛋白激酶抑制劑的製備。
將由上述反應式中的第一反應物⑴與第二反應物(6)在異丙醇中加 熱回流，所述第一反應物為4-氯-6，7-二甲氧基喹唑啉，所述第二反應物分別為
所述第一反應物與第二反應物的摩爾
比分別為1 1、1 1，以第一反應物與第二反應的總量為100毫克為基準，溶劑的用量為 20毫升；所述加熱回流的條件包括回流的溫度為80°C，回流的時間為4小時，過濾，分別用 乙醇和乙醚洗滌將未反應的原料除去，將濾餅粗產品在DMF中進行重結晶，分別得到化合 物 LS1002、LS1003。LS1002 =C17H15N5O2 Calc. MW = 321. 3，ESI-MS (m/z) :322. 11H NMR (氘 it DMS0) δ (ppm) 11. 63 (s, 1H), 9. 38 (s, 1H), 8. 83 (s, 1H), 8. 42 (s, 1Η)，8. 24 (s，1Η)，7. 92-7. 84 (m, 2Η)，7. 37 (s, 1H)，4. 04 (s, 3H) ,4. 01(s,3H).LS1003 =C18H17N5O2 Calc. MW = 335. 4，ESI-MS (m/z) :336. 11H NMR:(氘代 DMSO) δ (ppm) 9. 87 (s，1Η)，8. 48 (s，1Η)，8. 04 (s，1Η)，7. 96 (s，1Η)， 7. 55 (s，2H)，7. 2 (s，1H)，3. 98 (s, 3H)，3. 94 (s, 3H)，2. 58 (s, 3H).其中，所述第二反應物(6)的製備方法為將摩爾比為1 3的4-硝基-1，2-二氨 基苯與甲酸或乙酸，在濃度為5摩爾/升鹽酸溶液中回流4小時，放置冷卻後，用濃度為10 重量％ NaOH溶液將pH值調至10，析出大量固體。過濾，用水洗滌，在水中進行重結晶，得到 5-硝基苯並咪唑或2-甲基-5-硝基苯並咪唑；將0. 4克鈀炭催化劑分散在12毫升乙醇溶劑中，加入2. 4毫升水合胼，加熱至回 流，加入0. 8克5-硝基苯並咪唑的乙醇溶液30ml，反應3小時後，靜止冷卻，旋蒸除去大部 分溶劑，靜置後，有固體析出，用乙醇、乙醚洗滌，得5-氨基苯並咪唑。 自製得的第二反應物如5-硝基苯並咪唑、5-氨基苯並咪唑分別通過質譜和核磁 共振表徵5-硝基苯並咪唑C7H5N3O2 cal. MW = 163. 1，ESI-MS (m/z) [M+H]+ 164. 3 ；HNMR (氘代 DMS0) 13. 088 (s，1H)，8· 544(s，2H)，8· 128 (d，1Η)，7· 764 (s，1H)5-氨基苯並咪唑C7H7N3 cal. MW = 133. 1，ESI-MS (m/z) [Μ+Η]+ :134· 3實施例5本實施例用於說明本發明提供的酪氨酸蛋白激酶抑制劑的製備。 將由上述反應式中的第一反應物(1)與第二反應物(7)在乙醇溶劑中加熱回流， 所述第一反應物為4-氯-6，7- 二甲氧基喹唑啉，所述第二反應物為5-氨基-8-羥基喹啉， 所述第一反應物與第二反應物的摩爾比為1 1，以第一反應物(1)與第二反應物(7)的總 量為100毫克為基準，溶劑的用量為20毫升；回流的時間為3小時，過濾析出物，用熱乙醇 洗滌3次，再用乙醚洗滌，乾燥即可得到純化合物JLY1001。其中，第二反應物(7) 5-氨基-8-羥基喹啉的製備方法包括將100毫升異丙醇和 2克5-硝基-8-羥基喹啉加入到250毫升三口瓶中，攪拌下加熱，升至指定溫度80°C，加入 0. 25克Pd/C催化劑和1. 5毫升水合胼並控溫80-85°C反應4小時後，趁熱過濾，濾液經減 壓蒸去異丙醇，冷卻後所得固體用異丙醇和乙醚洗滌後，將產物在室溫下真空乾燥5小時。 通過質譜方法證明所得化合物為上述第二反應物5-氨基-8-羥基喹啉。分別通過核磁共振和質譜對上述製得的化合物進行表徵JLY1001 C19H16N4O3 Calc. MW = 348. 36，ESI-MS (m/z) :[M+H]+ 349. 1。1HWR(DMSo-CI6) δ (ppm) :11· 36 (s，1H)，10. 23 (s，1H)，8· 93 (s，1H)，8· 61 (s，1H)， 8. 24(m，2H)，7. 57 (m，2H)，7. 30 (s, 1H)，7. 20 (d, J = 4. OHz, 1H)，4. 0 (s，6H).JLY1001的X射線衍射晶體結構如圖5所示。實施例6-10該實施例用於說明體外激酶抑制的活性測定應用酶聯免疫吸附分析(Enzyme Immunosorbent Assay, ELISA)分別測定由實施 例1-5合成的化合物的激酶抑制活性(實施例1-5合成的化合物的濃度分別為40 μ M(微摩 爾 / 升)、4 μ Μ、400ηΜ (納摩爾 / 升)、40ηΜ、4ηΜ、400ρΜ (皮摩爾 / 升)、40ρΜ、4ρΜ)。使用 CST 公 司的蛋白激酶檢測試劑盒PTPlB(Tyr66)Biotinylated P印tide作為激酶EGFR(EpidermalGrowth Factor Receptor)的底物。分別加入由實施例1_5合成的化合物的激酶抑制劑， 使用Spectramax M5 (USA, Molecular Devices)型酶標儀，採用分光光度法，測定特定波長 450nm處的光吸收OD值，根據下式計算化合物對細胞的抑制生長率，通過OriginPro 7. O數 據處理軟體由上述抑制生長率的數值得到δ曲線，考察本發明實施例1-5合成的化合物的 激酶抑制劑對激酶底物的磷酸化反應的抑制程度，從而得到IC50值(即對激酶底物的磷酸 化抑制程度達到50%時的激酶抑制劑的濃度值)。實驗結果是兩次獨立的平行實驗的平均 值，變動一般為士 15%。15種EGFR抑制劑IC50的測定結果如下表1所示。 表1 上表中，易溶DMSO是指在常溫常壓下，在DMSO中的溶解度不低於1.0克，微溶於 水是指在常溫常壓下，在水中的溶解度為0. 09-0. 10克，溶於甲醇乙醇是指在常溫常壓下， 在甲醇中的溶解度為1. 0-9. 9克，在乙醇中的溶解度為1. 0-9. 9克。從上表1中的結果可以看出，本發明提供的酪氨酸蛋白激酶抑制劑，即Iressa類 有機小分子對EGFR蛋白激酶均表現出良好的抑制活性，此外，本發明提供的蛋白激酶抑制 劑能夠用於取代細胞毒性有機金屬釕配合物中的一個或多個配體，所製得的配合物既能作 用於蛋白激酶(或蛋白磷酸酶)也能作用於DNA的多靶點組合分子抗腫瘤化合物。本發明提供的蛋白激酶抑制劑還有助於降低腫瘤細胞對藥物產生抗藥性的可能性為能夠與毒性。
權利要求
一種酪氨酸蛋白激酶抑制劑，其特徵在於，該酪氨酸蛋白激酶抑制劑為由通式(1)表示的化合物其中，R為由具有配位功能的基團取代的芳氨基、六元芳雜環氨基、五元雜環氨基、稠雜環氨基中的一種或幾種。F2009100846156C0000011.tif
2.根據權利要求1所述的酪氨酸蛋白激酶抑制劑，其中，所述由具有配位功能的基團 取代的芳氨基具有通式(2)所示的結構或者具有結構式(13)所示的結構，所述六元芳雜環 氨基具有通式(3)所示的結構，所述五元雜環氨基具有通式(4)所示的結構，所述稠雜環氨 基具有式(5)-(12)所示的結構 其中，在通式(2)中，Rl、R2、R3、R4和R5各自獨立地為氫原子、氟原子、氯原子、氨基、苯基、氨苯基、苯氨基、一SC幾、一SH、一C。。H、碳原子數為卜3的烷基中的一種，且R卜R5中至少有一個基團選自一SCH，、一SH、一C。。H、苯基、氨基、氨苯基和苯氨基中的一種；在通式(3)中，凡、R，各自獨立地為碳原子或氮原子，且凡或R，中的至少一個為氮原子；L、R。和R，。各自獨立地為氫原子、氨基、碳原子數為卜3的烷基中的一種，且L、L和R、。中的至少一個基團為氨基；在通式(4)中，R11、R12和R13各自獨立地選自氫原子、碳原子數為卜3的烷基、氨基中的一種，且R11、R12和R13中的至少一個基團為氨基；在通式(8)一(9)中，R14為碳原子數為卜3的烷基、2一吡啶基或亞甲基一2一吡啶基。
3.根據權利要求2所述的酪氨酸蛋白激酶抑制劑，其中，所述R為如通式(14)一(18)表示的基團中的任意一種；(17) (18)其中，通式(14)中的R15為F、H、-NH2、苯氨基、氨苯基和碳原子數為1-3的烷基中 的一種，R16為Cl、H、-SCH3、-SH和-COOH中的一種，且R15和R16中至少有一個基團選 自-SCH3、-SH、-C00H、-NH2、氨苯基和苯氨基中的一種。
4.權利要求1所述酪氨酸蛋白激酶抑制劑的製備方法，其特徵在於，該方法包括將第 一反應物與第二反應物在有機溶劑中接觸，所述第一反應物為4-滷-6，7-二甲氧基喹唑 啉，所述第二反應物為由具有配位功能的基團取代的芳香胺、氨基吡啶、氨基嘧啶、氨基噻 唑和氨基稠雜環化合物中的一種或幾種，接觸反應的條件使得第一反應物中4位的滷素與 第二反應物中的氨基發生縮合反應。
5.根據權利要求4所示的製備方法，其中，所述由具有配位功能的基團取代的芳香 胺為通式(19)所示或者為由結構式(31)所示，所述氨基吡啶為通式(20)所示，所述氨 基嘧啶為通式(21)所示，所述氨基噻唑為通式(22)所示，所述氨基稠雜環化合物為通式 (23)-(30) 其中，在通式(19)中，R17、R18、R19、R2(1和R21各自獨II地為氫原子、氟原子、氯原子、氨 基、苯基、氨基苯、苯氨基、-SCH3、-SH、-C00H和碳原子數為1-3的烷基中的一種，且R17_R21中 至少有一個基團選自-SCH3、-SH、-C00H、苯基、氨基、氨基苯和苯氨基中的一種；在通式(20) 中，R22、R23、R24、R25和R26各自獨立地為氫原子、氨基、碳原子數為1-3的烷基中的一種，且 R22、R23、R24、R25和R26中的至少一個基團為氨基；在通式(21)中，R27、R28、R29和R3Q各自獨立 地選自氫原子、碳原子數為1-3的烷基、氨基中的一種，且R27、R28、R29和R3(1中的至少一個基 團為氨基；在通式(22)中，R31、R32和R33各自獨立地選自氫原子、碳原子數為1-3的烷基、 氨基中的一種，且R31、R32和R33中的至少一個基團為氨基；在通式(26)-(27)中，R36為碳原 子數為1-3的烷基、2-吡啶基或亞甲基-2-吡啶基。
6.根據權利要求5所示的製備方法，其中，所述第二反應物為如通式(32)至(36)所示 化合物中的一種或幾種 其中，通式(32)中的R34為F、H、_NH2、苯氨基、氨苯基和碳原子數為1-3的烷基中 的一種，R35為CI、H、-SCH3、-SH和-C00H中的一種，且R34和R35中至少有一個基團選 自-SCH3、-SH、-COOH、-NH2、氨苯基和苯氨基中的一種。
7.根據權利要求4所述的方法，其中，所述第一反應物與第二反應物的摩爾比為 1 (1-3)，所述有機溶劑選自異丙醇、乙醇和甲苯中的一種或幾種，以第一反應物與第二 反應物的總量為100毫克為基準，所述有機溶劑的用量為20-50毫升。
8.權利要求1中R為通式(13)所示基團的酪氨酸蛋白激酶抑制劑的製備方法，其特徵 在於，該方法包括(1)將4-滷-6，7-二甲氧基喹唑啉與1，4_苯二胺在第一有機溶劑中接觸，過濾， 得到第一反應物；接觸的條件包括接觸的溫度為70-90°C，接觸的時間為2-5小時；所述 4-滷-6，7-二甲氧基喹唑啉與1，4_苯二胺的摩爾比為1 (1-1.2)；所述第一有機溶劑選 自異丙醇、丙酮和乙醇中的一種或幾種，有機溶劑的用量以4-滷-6，7-二甲氧基喹唑啉和 1,4-苯二胺的總量為100毫克為基準，所述溶劑的用量為20-50毫升；(2)將中性紅與三聚氰氯和鹼金屬的碳酸鹽在第二有機溶劑中接觸，分離，得到第二反 應物；所述接觸的條件包括接觸的溫度為0-5°C，接觸的時間為1-5小時；所述中性紅與三聚氰氯和鹼金屬的碳酸鹽的摩爾比為2 (2.5-3) (3-3.5)；所述第二有機溶劑選自異 丙醇、丙酮和乙醇中的一種或幾種，以中性紅和三聚氰氯的總量為100毫克為基準，所述溶 劑的用量為20-50毫升；(3)將步驟(1)得到的第一反應物與步驟(2)得到的第二反應物在第三有機溶劑中接 觸，接觸的條件包括接觸的溫度為10-25°C，接觸的時間為1-5小時；所述步驟⑴得到的 第一反應物與步驟(2)得到的第二反應物的摩爾比為1 (1-2)，所述第三有機溶劑選自四 氫呋喃和/或丙酮；以所述第一反應物和第二反應物的總量為100毫克為基準，所述溶劑的 用量為20-50毫升。
全文摘要
一種酪氨酸蛋白激酶抑制劑，其中，該酪氨酸蛋白激酶抑制劑為由通式(1)表示的化合物，其中，R為由具有配位功能的基團取代的芳氨基、六元芳雜環氨基、五元雜環氨基、稠雜環氨基中的一種或幾種。本發明提供的酪氨酸蛋白激酶抑制劑具有較高的選擇性、較低的毒副作用和較強的水溶性，此外，該酪氨酸蛋白激酶抑制劑還能夠用於取代細胞毒性有機金屬釕配合物中的一個或多個配體，所製得的配合物既能作用於蛋白激酶(或蛋白磷酸酶)和也能作用於DNA的多靶點組合分子抗腫瘤化合物。本發明提供的蛋白激酶抑制劑還有助於降低腫瘤細胞對藥物產生抗藥性的可能性。
文檔編號A61P35/00GK101890018SQ20091008461
公開日2010年11月24日 申請日期2009年5月22日 優先權日2009年5月22日
發明者呂爽, 吳魁, 汪福意, 紀麗雲, 羅群, 胡文兵, 韓玉苗 申請人:中國科學院化學研究所