肥胖控制劑的評價方法

2023-06-01 01:41:46 2

專利名稱：：肥胖控制劑的評價方法
技術領域：
：本發明涉及一種評價或篩選肥胖控制劑、血胰島素調節劑、或血糖調節劑的方法。
背景技術：
：肥胖症是脂肪組織非正常增加的病症，據信可導致與生活方式有關的疾病，如糖尿病、心臟病和動脈硬化。在現代社會中，由於高脂飲食、過量運動或缺乏運動，肥胖已成為嚴重的問題，而尋找對肥胖症有預防/改善作用的物質也已成為重要的課題。作為選擇肥胖改善劑的方法，已報導如下方法測定成熟脂肪細胞表達的脂聯素(adiponectin)的量的方法(專利文獻1);測定作為解偶聯蛋白之一的UCP-2的活性、或轉錄/mRNA的方法(專利文獻2);測定SPARC基因或SPARC蛋白質的表達水平或活性的方法(專利文獻3)等。另外，作為選擇體重增加抑制劑的方法，己報導一種對刺激鬆弛素-3(relaxin-3)受體的物質進行評價的方法(專利文獻4)。此外，胰島素是主要受血液中的葡萄糖水平，即血糖水平的升高刺激的結果，由胰腺分泌的激素(非專利文獻l)，並且已知餐後胰島素分泌量的調節取決於碳水化合物的攝入量或碳水化合物的吸收率。但是，目前還不清楚攝入碳水化合物和脂類引起的胰島素分泌量的變化，以及這些變化與肥胖之間的關係。專利文獻l:JP-A-2006-249064專利文獻2:JP-A-2002-508770專利文獻3:JP-A-2004-517308專利文獻4:JP-A-2006-290826非專利文獻1:DictionaryofBiochemistry(生化辭典)，2ndEd,，TokyoKagakuDozinCo.,Ltd.,November1990,pp.141-14
發明內容本發明涉及以下1)至6)。1)評價或篩選肥胖控制劑的方法，該方法包括向動物施予碳水化合物和脂類，和對減少或增加胰島素分泌的物質進行評價或選擇；2)評價或篩選肥胖控制劑的方法，該方法包括以下步驟(1)至(4):(1)通過下述方法(a)和/或(b)向動物施予試驗物質的步驟a)在碳水化合物和脂類中添加試驗物質，和/或b)用試驗物質代替碳水化合物和脂類中至少一種的部分或全部；(2)測定血胰島素水平和確定胰島素分泌量的步驟；(3)比較步驟(2)中確定的胰島素分泌量，和只施予碳水化合物和脂類的對照組中的胰島素分泌量的步驟；禾口(4)基於步驟(3)的結果，對減少或增加胰島素分泌的試驗物質評價或選擇為肥胖控制劑的步驟；3)評價或篩選血胰島素調節劑的方法，該方法包括向動物施予碳水化合物和脂類，和對減少或增加胰島素分泌的物質進行評價或選擇；4)評價或篩選血胰島素調節劑的方法，該方法包括以下步驟(1)至(4):(1)通過下述方法(a)和/或(b)向動物施予試驗物質的步驟a)在碳水化合物和脂類中添加試驗物質，和/或b)用試驗物質代替碳水化合物和脂類中至少一種的部分或全部；(2)測定血胰島素水平和確定胰島素分泌量的步驟；(3)比較步驟(2)中確定的胰島素分泌量，和只施予碳水化合物和脂類的對照組中的胰島素分泌量的步驟；和(4)基於步驟(3)的結果，對減少或增加胰島素分泌的試驗物質評價或選擇為血胰島素調節劑的步驟；5)評價或篩選血糖調節劑的方法，該方法包括向動物施予碳水化合物和脂類，和對減少或增加胰島素分泌的物質進行評價或選擇；和6)評價或篩選血胰島素調節劑的方法，該方法包括以下步驟(1)至(4):(1)通過下述方法(a)和/或(b)向動物施予試驗物質的步驟a)在碳水化合物和脂類中添加試驗物質，和/或b)用試驗物質代替碳水化合物和脂類中至少一種的部分或全部；(2)測定血胰島素水平和確定胰島素分泌量的步驟；(3)比較步驟(2)中確定的胰島素分泌量，和只施予碳水化合物和脂類的對照組中的胰島素分泌量的步驟；和(4)基於步驟(3)的結果，對減少或增加胰島素分泌的試驗物質評價或選擇為血糖調節劑的步驟。具體實施例方式本發明涉及提供一種有效地評價或選擇肥胖控制物質、血胰島素調節物質或血糖調節物質的方法。本發明人對餐後胰島素的分泌進行了研究，結果發現，與只攝入碳水化合物的情況相比較，在攝入碳水化合物和脂類的情況下，血胰島素水平會升得更高。此外，發明人還對餐後胰島素分泌量和肥胖症之間的相關性進行了研究，並且發現，攝入碳水化合物和脂類後的血胰島素水平升高，與飲食性肥胖的進展極其相關，因此該升高可以作為評價/選擇肥胖控制劑的一個指標。根據本發明，無須進行長期的進食試驗，可以對具有控制肥胖、調節血胰島素水平和血糖水平效果的物質或組合物進行有效地評價或選擇。眾所周知，作為主要受血糖水平升高的刺激的結果，胰島素由胰腺分泌，其分泌量取決於碳水化合物攝入量或碳水化合物的吸收率而調節。然而，現有發明都是基於如下發現與只攝入碳水化合物的情況相比較，在攝入碳水化合物和脂類的情況下，餐後胰島素分泌(血液中水平，分泌量)增加。此外，還發現，攝入碳水化合物和脂類後的胰島素分泌，與在進食期間每克攝入的食物量所增加的體重(g)有很高的正相關性，並且胰島素分泌量是與肥胖高度相關的因素。因此，根據本發明評價或篩選肥胖控制劑、血胰島素調節劑或血糖調節劑，是通過向實驗動物施予碳水化合物和脂類引起的胰島素分泌量作為指標而進行的，具體包括以下步驟(1)至(4):(1)通過下述方法(a)和/或(b)向動物施予試驗物質的步驟a)在碳水化合物和脂類中添加試驗物質，和/或b)用試驗物質代替碳水化合物和脂類中至少一種的部分或全部；(2)測定血胰島素水平和確定胰島素分泌量的步驟；(3)比較步驟(2)中確定的胰島素分泌量，和只施予碳水化合物和脂類的對照組中的胰島素分泌量的步驟；和(4)基於步驟(3)的結果，對減少或增加胰島素分泌的試驗物質評價或選擇為肥胖控制劑、血胰島素調節劑或血糖調節劑的步驟。根據本發明，碳水化合物可以是促進胰島素分泌的任何碳水化合物，且可以是單糖、寡糖或多糖。單糖的例子包括例如葡萄糖、甘露糖、果糖和半乳糖的糖類，或甘油醛、葡糖胺和乙醯葡糖胺的糖衍生物。寡糖的例子包括蔗糖、麥芽糖、乳糖等；多糖的例子包括澱粉、糊精、糖原等。這些可以單獨使用或者作為其兩種或多種的混合物使用。此外，也可以使用含有這些糖的糊化大米或小麥。其中，從增加胰島素分泌量的觀點考慮，優選使用葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、澱粉和糖原中的一種或多種，更優選葡萄糖。脂類的例子是使胰島素分泌增加的脂類，例如，三醯甘油、1,3-二醯甘油和1,2-二醯甘油之類的脂肪酸甘油酯，或游離脂肪酸，或含有它們的油脂。具體而言，可以舉出三棕櫚酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯、三油酸甘油酯、1,3-二棕櫚酸甘油酯、1,3-二硬脂酸甘油酯、1,3-二油酸甘油酯、1，2-二棕櫚酸甘油酯、1，2-二硬脂酸甘油酯、1，2-二油酸甘油酯、棕櫚酸、硬脂酸、油酸、牛油、豬油、可可脂、黃油、玉米油、豆油、葵花籽油、芝麻油、菜籽油、米糠油、橄欖油、紅花油、椰子油、棕櫚油等。這些可以單獨使用或作為其兩種或多種的混合物使用。其中，從增加胰島素分泌量的觀點考慮，優選使用三油酸甘油酯、1,3-二油酸甘油酯、玉米油、菜籽油、米糠油、橄欖油、芝麻油和棕櫚油中的一種或多種，更優選三油酸甘油酯、玉米油、菜籽油和橄欖油。這些碳水化合物和脂類可以同時施予，或以一定的時間間隔分別施予。此外，也可以使用乳化組合物，該乳化組合物通過混合碳水化合物和脂類，並使用例如卵磷脂的乳化劑將其乳化而製備。施予碳水化合物的量為0.01至100mg/g體重，優選為0.1至30mg/g體重，更優選為0.5至10mg/g體重。施予脂類的量為0.01至100mg/g體重，優選為0.1至30mg/g體重，更優選為0.5至10mg/g體重。試驗物質可以與碳水化合物和脂類同時施予，或者可以分開施予。試驗物質可以是碳水化合物或脂類中的一種、或是其組合。在後一種情況下，可以通過判斷待測的碳水化合物或脂類有否促使胰島素分泌活性降低，評價試驗物質的組合效果。另外，碳水化合物或脂類之外的試驗物質也可以與由碳水化合物或脂類組成的試驗物質組合，對比該組合進行評價。當試驗物質是碳水化合物的情況下，碳水化合物的部分或全部可被試驗物質(待測的碳水化合物)代替，並與脂類一起施予，而當試驗物質是脂類的情況下，脂類的部分或全部可被試驗物質(待測的脂類)代替，並與碳水化合物一起施予。本發明中所用的動物可以是任何種類的動物，不論性別和年齡，只要該動物是在血液中分泌胰島素的非人類的哺乳動物。例如，可以舉出小鼠、大鼠、倉鼠、豚鼠、兔、貓、狗或猴子，但是由於易於獲得且容易操作而優選例如大鼠或小鼠的嚙齒類動物，更優選小鼠系，如C57BL/6J、AKR、DBA和C3H。此外，更優選使用空腹的動物。根據本發明，作為向動物施予碳水化合物和脂類、以及試驗物質的方法，可以舉出如口服給藥、腸內給藥、腹膜內給藥、血管內給藥、皮內給藥、皮下給藥等。然而，從方便或低侵入性的觀點考慮，優選口服給藥的方法。通過在給藥前1至300分鐘、優選5至240分鐘，給藥後一定時間(例如給藥後10分鐘、30分鐘、60分鐘、120分鐘等)採取血樣，並測量各時間點的血胰島素水平，進行血胰島素水平的測定。此外，採血可以在例如眼眶靜脈或尾靜脈的通常採血部位進行。從採取的血樣中製備血清或血漿後，對胰島素進行定量，例如，通過酶聯免疫吸附試驗(ELISA)法、放射免疫測定(RIA)法、或高效液相色譜法。採用最高胰島素水平或曲線下面積(AUC)，從給藥後各時間點的血胰島素水平來確定胰島素分泌量。接著，通過在碳水化合物和脂類中添加試驗物質、或用試驗物質(碳水化合物或脂類)代替碳水化合物或脂類，引起的胰島素相關值的變化，與只施予碳水化合物和脂類的對照組中的變化進行比較。在任何情況下當變化變小時，可以將試驗物質評價為具有使血胰島素水平降低的作用、改善肥胖的作用、或使血糖水平升高的作用，並且可以選擇這種物質。此外，當上述胰島素的相關值之一增加時，可以將試驗物質評價為具有使血胰島素水平升高的作用、促進肥胖的作用、使血糖水平降低的作用、增加體重的作用、以及促進生長的作用，並且可以選擇這種物質。此外，近年來人們認為，胰島素參與了老化，或老化後的變化；即，人們認為隨著胰島素的分泌量增加，不斷老化(ParrT."Insulinexposureandagingtheory(胰島素曝光和老化原理)"Gerontology.1997;43(3):182-200)。因此，本發明的評價方法可用作評價和篩選老化控制劑的方法。實施例實施例1:由攝入碳水化合物和脂類引起的餐後胰島素分泌增加對空腹小鼠(C57BL/6J，雄性，7-8周齡)進行分組，每組十隻，使用探針(sonde)以乳液的劑型對小鼠經口施予僅2mg/g體重的葡萄糖(WakoPureChemicalIndustries,Ltd.)作為碳水化合物，或與碳水化合物一起還施予0.5、1.0或2.0mg/g體重的三油酸甘油酯(SigmaCorp.)作為脂類，該乳液用蛋黃卵磷脂乳化0,02mg/g體重的脂類而得到(分別為碳水化合物+脂類0、碳水化合物+脂類1、碳水化合物+脂類2、和碳水化合物+脂類3)。給藥物質的組成如表1所示。在給藥前和給藥10分鐘和30分鐘後，從每隻小鼠的眼眶靜脈處採取血樣，測量血胰島素的水平，並計算曲線圖的曲線下面積(AUC)。通過ELISA法(胰島素測定試劑盒，MorinagaBiochemicalLab,Inc.)進行胰島素的測量。給藥10分鐘後的血胰島素的水平值，和給藥後30分鐘內的胰島素分泌量(AUC)，如表2所示。9表ltableseeoriginaldocumentpage10表2tableseeoriginaldocumentpage10從表2的結果可知，與只攝入碳水化合物(葡萄糖)的情況相比較，攝入脂類(三油酸甘油酯)時，餐後胰島素分泌(血液中水平，分泌量)增加。實施例2:餐後胰島素分泌與肥胖的相關性(1)餐後胰島素分泌的測定使用三油酸甘油酯(SigmaCorp.)作為脂類，使用獲自甘薯、木薯、馬鈴薯、野葛、西米、蠟質種玉米、糯米、玉米、小麥和普通大米的澱粉(糊化，得自NipponStarchChemicalCo.,Ltd.)作為碳水化合物。對空腹小鼠(C57BL/6J，雄性，10至11周齡)進行分組，每組4至5隻，使用探針對小鼠經口施予2mg/g體重的碳水化合物，或與碳水化合物一起還施予2mg/g體重的三油酸甘油酯加0.08mg/g體重。給藥10分鐘後，從每隻小鼠的眼眶靜脈處採血，測定血糖水平和血胰島素水平。採用小型血糖儀(葡萄糖脫氫酶/電位差測量法，RocheDiagnostics,Inc.)測定血糖水平。通過ELISA法(胰島素測定試劑盒，MorinagaBiochemicalLab,Inc.)領!j定胰島素7K平。(2)進食試驗試驗飼料中使用的試驗澱粉為上述材料，而豬油、酪蛋白、纖維素、AIN76礦物質混合物、AIN76維生素混合物和糊化馬鈴薯澱粉得自OrientalYeastCo"Ltd.,且使用由WakoPureChemicalIndustries,Ltd.製造的蔗糖細粒(特級)作為蔗糖。另外，所用的脂肪(TG)是高亞油酸紅花油、菜籽油和紫蘇子油，脂肪酸的主要組成是油酸、亞油酸、a-亞油酸和棕櫚酸。試驗飼料的組成是28.5%的澱粉、25%的TG、5%的豬油、13%的蔗糖、20%的酪蛋白、3.5%的AIN76礦物質混合物，和1%的AIN76維生素混合物。用普通飼料(CRF-1:OrientalYeastCo.，Ltd.)餵養七周齡的雄性小鼠C57BL/6JJcl(CREAJapan,Inc.)—周，然後將小鼠分組，使在8周齡時小鼠的初體重幾乎一致，並開始試驗。每個籠子餵養5隻小鼠，每個試驗飼料組指定兩隻籠子(N=10)。通過使用RodenCa促(OrientalYeastCo.，Ltd.)自由餵養來進行餵養，每2天或3天更換新鮮的試驗飼料。預先將所用的試驗飼料分份成供2至3天，並儲存在4"C冰箱中直至使用。餵水通過使用專用的飲水器自由地給予自來水而實現。在試驗餵養期，每周測定食物的攝入量和體重。(3)餐後胰島素分泌與肥胖之間的相關性分析對只攝入碳水化合物、或同時攝入碳水化合物和脂類後的最高血糖水平、最高血胰島素水平，與在餵養期間增加的體重之間的關係進行分析。結果如表3所示。證明在10周餵養期內，每克攝入量增加的體重(g)，與血糖水平的升高有很高的正相關性，並且較之只攝入碳水化合物(試驗澱粉)後的胰島素分泌的情況，與攝入碳水化合物(試驗澱粉)和脂類後的胰島素分泌有很高的正相關性。因此，發現攝入碳水化合物和脂類後的胰島素分泌是與肥胖高度相關的因素。表3體重增加的相關係數tableseeoriginaldocumentpage11tableseeoriginaldocumentpage12實施例3:糖原的低胰島素分泌誘導性使用三油酸甘油酯(SigmaCorp.)作為脂類，而使用葡萄糖(WakoPureChemicalIndustries,Ltd.)或糖原(來自甜玉米，QPCorp.)作為碳水化合物。對空腹小鼠(C57BL/6J，雄性，10至11周齡)進行分組，每組9至10隻，並使用探針對小鼠經口施予2mg/g體重的葡萄糖；以乳液劑型與葡萄糖一起還施予2mg/g體重的三油酸甘油酯，該乳液通過用蛋黃卵磷脂乳化0.02mg/g體重的脂類而得到(分別為葡萄糖、和葡萄糖+脂類)；施予2mg/g體重的糖原；或以乳液劑型與糖原一起還施予2mg/g體重的三油酸甘油酯(TAG)，該乳液通過用蛋黃卵磷脂乳化0.02mg/g體重的脂類而得到(分別為糖原、和糖原+脂類)。給藥物質的組成如表4所示。在給藥前、和給藥10分鐘和30分鐘後，從每隻小鼠的眼眶靜脈處採取血樣，測定血胰島素水平，並計算曲線圖的曲線下面積(AUC)。通過ELISA法(胰島素測定試劑盒，MorinagaBiochemicalLab，Inc.)測定胰島素水平。tableseeoriginaldocumentpage12給藥後30分鐘內，分泌的胰島素量(AUC)的值如表5所示。tableseeoriginaldocumentpage12從表5的結果可知，在只攝入葡萄糖或只攝入糖原的情況下，餐後胰島素分泌量相當，但是當同時攝入脂類時，與葡萄糖相比較，糖原導致餐後胰島素分泌量較低。因此，在與脂類共存時，可以看到糖原具有低胰島素分泌誘導性。實施例4:糖原的抗肥胖作用(1)試驗飼料試驗飼料(粉狀飼料)的組成如表6所示。低脂飼料含有5%的脂類(甘油三酯)，而高脂飼料含有30%的脂類(5%的豬油+25%的丁0)。通過在高脂飼料中搭配5%、10%或28.5%的糖原，製備糖原混合飼料。試驗飼料中所用的糖原是來自甜玉米的糖原(QPCorp.)，而豬油、酪蛋白、纖維素、AIN76礦物質混合物、AIN76維生素混合物和糊化馬鈴薯澱粉得自OrientalYeastCo.,Ltd.，使用由WakoPureChemicalIndustries,Ltd.製造的蔗糖細粒(特級)作為蔗糖。此外，所用的油脂(TG)是高亞油酸紅花油、菜籽油和紫蘇子油的混合物，且脂肪酸的主要組成是油酸、亞油酸、a-亞油酸和棕櫚酸。表6試驗詞料組成表tableseeoriginaldocumentpage13(2)試驗動物及其餵養用普通飼料(CRF-1:OrientalYeastCo.,Lted.)餵養七周齡的雄性小鼠C57BL/6JJcl(CREAJapan,Inc.)—周，然後將小鼠分組，使在8周齡時，小鼠的初體重幾乎一致，並開始試驗。每個籠子餵養5隻小鼠，為每個試驗飼料組指定兩隻籠子(N=10)。通過用RodenCa伝(OrientalYeastCo.,Ltd.)自由餵養來進行餵養，每2天或3天更換新鮮的試驗飼料。預先將所用的試驗詞料分份成供2至3天，並儲存在4t冰箱中直至使用。餵水通過使用專用的飲水器自由地給予自來水而實現。(2)體重測量和內臟脂肪的收集在試驗餵養期，每周測量體重。在最後一天的實驗中，自由餵養小鼠直至立刻解剖，這樣在非空腹條件下收集內臟脂肪，如下所述。麻醉的小鼠立即進行剖腹術，從腹主動脈收集血液，並讓小鼠流血致死。收集更多的內臟脂肪(附睪周圍的脂肪、腎臟周圍的脂肪、腹膜後脂肪、和腸脂)，稱重，計算總量作為內臟脂肪量。(4)結果由於每隻籠子中集體餵養5隻小鼠，在15周的餵養期內有打架的小鼠。因此，2隻被認為會突然和快速減肥的動物被排除。結果如表7所示。可以看出，與低脂飼料相比，在15周餵養期內，高脂飼料(對照)造成體重和內臟脂肪量增加，從而導致肥胖。隨著糖原搭配量增加，體重和內臟脂肪量下降。表7餵養15周後小鼠的體重和內臟脂肪量(平均)低脂飼料高脂飼料糖原的搭配量(％)對照(0%)5%10%28.5%體重(g)33.736.636.434.432.0內臟脂肪量(g)2.022.882.832.431.77實施例5:l-MAG的降低胰島素分泌的作用使用三油酸甘油酯(獲自SigmaCorp.)作為三醯甘油，並使用1-單油酸甘油酯(獲自SigmaCorp.)作為單醯甘油。使用葡萄糖(KantoChemicalCo.,Inc.)作為碳水化合物。將空腹小鼠(C57BL/6J，雄性，8周齡)分組，每組8隻，使用探針向小鼠經口施予僅2mg/g體重的葡萄糖；或以乳液劑型形式施予葡萄糖和2mg/g體重的三油酸甘油酯(TAG),該乳液用蛋黃卵磷脂乳化0.02mg/g體重的脂類而獲得(分別為葡萄糖和TAG/MAG0);或施予14混合物，該混合物通過在乳液中分別添加0.08、0.2和0.4mg/g體重的1-單油酸甘油酯(MAG)而得到(分別為TAG/MAG1、TAG/MAG2和TAG/MAG3)。乳液的組成如表8所示。在給藥前、給藥10分鐘和30分鐘後，從每隻小鼠的眼眶靜脈處採取血樣，測量血胰島素的水平，並計算曲線圖的曲線下面積(AUC)。通過ELISA法(胰島素測定試齊U盒，MorinagaBiochemicalLab,Inc,)領!j定胰島素水平。只攝入葡萄糖的小鼠的胰島素AUC值作為100，相對於此，給藥30分鐘後胰島素分泌量的相對值(AUC)，如表9所示。表8乳液葡萄糖(mg/g體重)三油酸甘油酯(mg/g體重)1-單油酸甘油酯(mg/g體重)葡萄糖2.00.00.0TAG/MAG02.02.00.0TAG/MAG12.02.00.08TAG/MAG22.02.00.2TAG/MAG32.02.00.4表9小鼠的餐後胰島素分泌量(AUC，相對值)乳液組成餐後胰島素分泌量(平均)葡萄糖100TAG/MAG0166.7TAG/MAG1147.0TAG/MAG2115.0TAG/MAG386,0從表9的結果可以看出，與只攝入碳水化合物(葡萄糖)的情況相比較，當攝入脂類(TAG)時，餐後胰島素分泌量增加，但是當小鼠攝入相對於TAG/MAGO量的十分之一量或五分之一量的MAG時，顯示餐後胰島素分泌量降低，從而證明血液中抑制餐後胰島素分泌的作用。實施例6:l-MAG的抗肥胖作用(1)試驗飼料試驗飼料(粉狀飼料)的組成如表IO所示。低脂飼料含有5%的脂類(TG),高脂飼料含有30%的脂類(TG)。通過在高脂飼料中搭配3%或6%的l-MAG，製備1-單醯甘油酯(l-MAG)混合飼料。試驗飼料中所用的l-MAG是Excel0-95R(KaoCorp.),而酪蛋白、纖維素、AIN76礦物質混合物、AIN76維生素混合物和糊化馬鈴薯澱粉從OrientalYeastCo.，Ltd.獲得，且使用由WakoPureChemicalIndustries,Ltd.製造的蔗糖細粒(特級)作為蔗糖。此外，使用的油脂(TG)是高亞油酸紅花油，菜籽油和紫蘇子油的混合物，脂肪酸的主要組成的是油酸、亞油酸、a-亞油酸和棕櫚酸。表10試驗飼料組成表高脂飼料搭配量(%)低脂飼料l-MAG的搭配比例對照(0%)3%6%TG303030l-MAG-036蔗糖-131313酪蛋白20202020纖維素4444AIN76礦物質混合物3.53.53.53.5AIN76維生素混合物1111糊化馬鈴薯澱粉66.528.525.522.5總量(％)100100100100(1)試驗動物及餵養用普通飼料(CE-2:CREAJapan,Inc.)餵養七周齡的雄性小鼠C57BL/6JJcl(CREAJapan,Inc.)—周，然後將小鼠分組，使在8周齡時小鼠的初體重幾乎一致，並開始試驗。每個籠子餵養4隻小鼠，為每個試驗詞料組指定兩隻籠子(N二8)。通過用RodenCafKOrientalYeastCo.,Ltd.)自由餵養而進行餵養，每2天或3天更換新鮮的試驗飼料。預先將所用的試驗飼料分份成可供2至3天，並儲存在4"C冰箱中直至使用。餵水通過使用專用的飲水器自由地給予自來水而實現。(2)體重測量和內臟脂肪的收集在試驗餵養期，每周測量體重。在最後一天的實驗中，自由餵養小鼠直至立刻解剖，這樣在非空腹條件下收集內臟脂肪，如下所述。麻醉的小鼠立即進行剖腹術，從腹主動脈收集血液，並讓小鼠流血致死。收集更多的內臟脂肪(附睪周圍的脂肪、腎臟周圍的脂肪、腹膜後脂肪、和腸脂)，稱重，計算總量作為內臟脂肪量。16結果如表ll所示。可以看出，與低脂詞料相比較，在9周餵養期內，高脂飼料(對照)造成體重和內臟脂肪量增加，從而導致肥胖。隨著l-MAG搭配量的增加，體重和內臟脂肪量下降。表11餵養9周後小鼠的體重和內臟脂肪量低脂飼料高脂飼料l-MAG的搭配量(％)對照(0%)3%6%體重(g)29.332.931,228.3內臟脂肪量(g)1.562.462.05.50實施例7:羥丙基化磷酸交聯澱粉的低胰島素分泌誘導性已知與高直鏈澱粉(JP-A-2004-269458)相比，加工澱粉具有肥胖改善作用。將同時攝入加工澱粉和脂類時的胰島素分泌與攝入高直鏈澱粉時的胰島素分泌相比較。使用羥丙基化磷酸交聯澱粉(以下稱為加工澱粉)(來自木薯，NationalFreejeks,獲自NationalStarchandChemicalCompany)禾口高直鏈澱粉(來自高直鏈澱粉玉米，Fibos，獲自NipponStarchChemicalCo.,Ltd.)作為碳水化合物，且使用三油酸甘油酯(SigmaCorp.)作為脂類。將空腹小鼠(C57BL/6J，雄性，8周齡)分組，每組8隻，使用探針向小鼠經口施予2mg/g體重的加工澱粉或高直鏈澱粉，或施予乳液劑型的碳水化合物和2mg/g體重的脂類，該乳液用蛋黃卵磷脂乳化0.02mg/g體重的脂類而得到(分別為加工澱粉+脂類、和高直鏈澱粉+脂類)。在給藥前、給藥10分鐘、30分鐘和60分鐘後，從每隻小鼠的眼眶靜脈處採取血樣，測定血胰島素的水平，並計算曲線圖的曲線下面積(AUC)。通過ELISA法(胰島素測定試劑盒，MorinagaBiochemicalLab，Inc.)測定胰島素水平。給藥60分鐘後胰島素分泌量的值(AUC)如表12所示。表12小鼠的餐後胰島素分泌量餐後胰島素分泌量(平均AUC)加工澱粉+脂類55.1高直鏈澱粉+脂類125從表12的結果可以看出，當同時攝入脂類時，與高直鏈澱粉相比，加工澱粉獲得低餐後胰島素分泌量，而且較之高直鏈澱粉，加工澱粉與脂類共存時具有低胰島素分泌誘導性。實施例8:DAG和魚油的低胰島素分泌誘導性當二醯甘油和魚油與碳水化合物一起攝入時的胰島素分泌，與三醯甘油的胰島素分泌相比較，其中二醯甘油已知是一種具有肥胖改善作用的脂類。將三醯甘油(TAG)、二醯甘油(DAG，KaoCorp.)和魚油(得自NOFCorp.，DHA含量47X)用作脂類。而且，所用的油脂(TAG)是高亞油酸紅花油、菜籽油和紫蘇子油的混合物，脂肪酸的主要組成與DAG相同，是油酸、亞油酸、a-亞油酸和棕櫚酸。將空腹小鼠(C57BL/6J，雄性，8周齡)分組，每組10隻，使用探針向小鼠經口僅施予2mg/g體重的葡萄糖；或施予乳液劑型的碳水化合物和2mg/g體重的三醯甘油(TAG)、二醯甘油(DAG)或魚油，該乳液用蛋黃卵磷脂乳化0.02mg/g體重的脂類而得到(分別為僅碳水化合物、碳水化合物+TAG、碳水化合物+DAG，和碳水化合物+魚油)。在給藥前，和給藥10分鐘和30分鐘後，從眼眶靜脈處採取血樣，測量血胰島素水平，並計算曲線圖的曲線下面積(AUC)。通過ELISA法(胰島素測定試劑盒，MorinagaBiochemicalLab,Inc.)測定胰島素水平。將給藥30分鐘後只攝入葡萄糖的小鼠的胰島素AUC作為100，相對於此，胰島素分泌量的相對值如表13所示。表13小鼠的餐後胰島素分泌量(AUC，相對值)tableseeoriginaldocumentpage18從表13的結果可以看出，與只攝入碳水化合物(葡萄糖)的情況相比，當攝入三醯甘油作為脂類時，餐後胰島素分泌量增加，但是與碳水化合物+TAG的情況相比較，攝入二醯甘油或魚油作為脂類的小鼠表現出較少的餐後胰島素分泌量，從而證明血液中抑制餐後胰島素分泌的作用。眾所周知，DAG(MuraseT,etal.,J.LipidRes.2001,42:372-378)和魚油(IkemotoS，etal.，Metabolism1996,45:1539-1546)與一般脂類相比較，具有肥胖改善作用。權利要求1.一種評價或篩選肥胖控制劑的方法，所述方法包括向動物施予碳水化合物和脂類，和對減少或增加胰島素分泌的物質進行評價或選擇。2.—種評價或篩選肥胖控制劑的方法，所述方法包括以下步驟(l)至(4):(1)通過下述方法(a)和/或(b)向動物施予試驗物質的步驟a)在碳水化合物和脂類中添加試驗物質，和/或b)用試驗物質代替碳水化合物和脂類中至少一種的部分或全部；(2)測定血胰島素水平和確定胰島素分泌量的步驟；(3)將步驟(2)中確定的胰島素分泌量，與只施予碳水化合物和脂類的對照組中的胰島素分泌量進行比較的步驟；和(4)基於步驟(3)的結果，對減少或增加胰島素分泌的試驗物質評價或選擇為肥胖控制劑的步驟。3.—種評價或篩選血胰島素調節劑的方法，所述方法包括向動物施予碳水化合物和脂類，和對減少或增加胰島素分泌的物質進行評價或選擇。4.一種評價或篩選血胰島素調節劑的方法，所述方法包括以下步驟(1)至(4):(1)通過下述方法(a)和/或(b)向動物施予試驗物質的步驟a)在碳水化合物和脂類中添加試驗物質，和/或b)用試驗物質代替碳水化合物和脂類中至少一種的部分或全部；(2)測定血胰島素水平和確定胰島素分泌量的步驟；(3)將步驟(2)中確定的胰島素分泌量，與只施予碳水化合物和脂類的對照組中的胰島素分泌量進行比較的步驟；和(4)基於步驟(3)的結果，對減少或增加胰島素分泌的試驗物質評價或選擇為血胰島素調節劑的步驟。5.—種評價或篩選血糖調節劑的方法，所述方法包括向動物施予碳水化合物和脂類，和對減少或增加胰島素分泌的物質進行評價或選擇。6.—種評價或篩選血糖調節劑的方法，所述方法包括以下步驟(l)至(4):(1)通過下述方法(a)和/或(b)向動物施予試驗物質的步驟a)在碳水化合物和脂類中添加試驗物質，和/或b)用試驗物質代替碳水化合物和脂類中至少一種的部分或全部；(2)測定血胰島素水平和確定胰島素分泌量的步驟；(3)將步驟(2)中確定的胰島素分泌量，與只施予碳水化合物和脂類的對照組中的胰島素分泌量進行比較的步驟；和(4)基於步驟(3)的結果，對減少或增加胰島素分泌的試驗物質評價或選擇為血糖調節劑的步驟。7.根據權利要求1至6中任一項所述的方法，其特徵在於，所述碳水化合物是選自葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、澱粉和糖原中的至少一種，所述脂類是選自三醯甘油、l,3-二醯甘油和1，2-二醯甘油中的至少一種。8.根據權利要求1至7中任一項所述的方法，其特徵在於，所述動物是齧齒動物。全文摘要本發明提供一種有效評價或選擇肥胖控制物質、血胰島素調節物質或血糖調節物質的方法。本發明還提供一種評價或篩選肥胖控制劑、血胰島素調節劑或血糖調節劑的方法，該方法包括向動物施予碳水化合物和脂類，和對減少或增加胰島素分泌的物質進行評價或選擇。文檔編號G01N33/74GK101548189SQ20078004460公開日2009年9月30日申請日期2007年11月7日優先權日2006年12月6日發明者下豐留玲,水野智仁,目黑真一,福岡大介,竹野菜奈美,鈴木淳子申請人:花王株式會社