一種測定血漿或尿液中d-山梨醇濃度的方法

2023-06-01 05:47:46

專利名稱：一種測定血漿或尿液中d-山梨醇濃度的方法
技術領域：
本發明是一種藥物分析技術，涉及體內藥物的分析測定方法，具體涉及一種測定血漿或尿液中D-山梨醇濃度的方法。
背景技術：
肝功能性血流量是指流經肝血竇並發揮功能的那部分肝血流，目前只有通過清除率的方法來測定。在臨床上，D-山梨醇清除率可反映肝總血流量，其改變能可靠的反映肝血流量的變化，從而反映肝儲備功能。所以，D-山梨醇肝清除率是肝硬化疾病治療中選擇治療方式、評價的治療效果的可靠指標。通過測定D-山梨醇的血漿濃度和尿液濃度可以計算山梨醇的整體清除率和腎清除率，由於山梨醇無肝、腎外清除(以肝清除為主)，故山梨醇肝的清除率即為整體清除率與腎清除率之差。目前關於生物樣本中D-山梨醇的測定方法，主要為酶分光光度法，這種方法存在靈敏度低、定量不準確、操作繁瑣等缺陷。

發明內容
發明目的本發明的目的在於提供一種測定血漿或尿液中D-山梨醇濃度的方法。技術方案本發明的目的是通過如下的方案實現的一種測定血漿或尿液中D-山梨醇濃度的方法，採用液質聯用系統測定，包括以下步驟(I)血漿或尿液樣品預處理；(2) D-山梨醇進行液相色譜分離；(3)質譜測定；(4)計
笪上述測定血漿或尿液中D-山梨醇濃度的方法，步驟(I)血漿或尿液樣品預處理取給予過D-山梨醇的犬或人的血漿或尿液樣品，加入定量的甲醇或乙腈蛋白沉澱劑進行蛋白沉澱；步驟(2) D-山梨醇進行液相色譜分離色譜條件中色譜柱為漢邦Lichrospher NH2柱；流動相體積比為70 30的甲醇-水溶液；流速0. 6-1. OmL ^irT1,分流比I : 3 ;柱溫30-40°C ;洗脫方式為等度洗脫；步驟(3)質譜測定，條件為離子源電噴霧離子化電離源ESI ;離子檢測方式選擇性離子檢測SM ;離子極性負離子；毛細管電壓3. OKV ;離子源溫度80-120°C ;脫溶劑溫度340-36(TC ;脫溶劑氣380L/h ;錐孔氣30L/h ;脫溶劑氣和錐孔氣均為高純氮氣；檢測對象的離子選擇通道D-山梨醇，[M-H]-，m/z 180. 9, Dwell 0. 2, Cone 30;內標替硝唑，[M-H]-, m/z 246. 0, Dwell 0. 2, Cone 30;步驟⑷計算採用內標法，以D-山梨醇和內標替硝唑的峰面積比值代入標準曲線方程計算D-山梨醇濃度。上述測定血漿或尿液中D-山梨醇濃度的方法，步驟(2) D-山梨醇進行液相色譜分離色譜條件中色譜柱為漢邦Lichrospher NH2柱；流動相體積比為70 30的甲醇-水溶液；流速0. 8mL mirT1，分流比I : 3 ;柱溫35°C ;洗脫方式為等度洗脫；步驟(3)質譜測定，條件為離子源電噴霧離子化電離源ESI ;離子檢測方式選擇性離子檢測SIM ;離子極性負離子；毛細管電壓3. OKV ;離子源溫度10(TC ;脫溶劑溫度350°C ;脫溶劑氣380L/h ;錐孔氣30L/h ;脫溶劑氣和錐孔氣均為高純氮氣；檢測對象的離子選擇通道=D-山梨醇，[M-H]-, m/z 180. 9，Dwell 0. 2，Cone 30 ;內標替硝唑，[M-H]-, m/z 246. 0, Dwell 0. 2, Cone 30。上述測定血漿或尿液中D-山梨醇濃度的方法，步驟⑴中，血漿樣品取血漿100 Ii L,加入900 V- L甲醇沉澱，振蕩lmin, 12000rpm離心IOmin,取上清50 u L,加入50 u L甲醇、400 u L濃度為2. 174ug* mL—1的替硝唑甲醇內標溶液，混勻；尿樣品取尿液10 u L，加入甲醇990 y L，振蕩lmin，12000rpm離心lOmin，取上清50 y L，加入950 y L濃度為
2.174ug* mL—1的替硝唑甲醇內標溶液，混勻。上述測定血漿或尿液中D-山梨醇濃度的方法，步驟(2)中色譜條件中色譜柱長度為250mm,內徑為4. 6mm,粒徑為5 y m。上述測定血漿或尿液中D-山梨醇濃度的方法，步驟(I)中D-山梨醇給予和血漿或尿液樣品取樣方法為靜脈持續滴注5% D-山梨醇溶液3h,給藥量為150mg kg_S於滴注後3h採集外周靜脈血3ml，注入肝素管內，製備血漿或收集滴注後3h內尿液，計量、備測。上述測定血漿或尿液中D-山梨醇濃度的方法，所述血漿或尿液為犬或人的血漿或尿液。有益效果(I)預處理方法簡便一步有機溶媒蛋白沉澱法，適用於常規測定。(2)專屬性強採用Lichrospher NH2色譜柱作為固定相，甲醇和水的混合液作為流動相，等度洗脫，D-山梨醇保留時間為4. 83min左右，內標替硝唑保留時間為4. 13min左右，6. 5分鐘完成測定，內源性物質不幹擾二者的測定。(3)靈敏度高血漿最低定量限為I. 25 yg 尿液最低定量限為0. 125ug. mL' (4)本發明方法快速、準確、靈敏度高、操作簡便，為山梨醇的臨床血尿藥物濃度測定提供依據，具有臨床應用的前景。本方法的血漿標準曲線線性範圍為I. 25 125ii g mL—1，尿液標準曲線線性範圍為0. 125 12. g mL—1，日內和日間精密度RSD均小於5%。


圖I為犬空白血漿的質譜2為犬空白血漿加入標準品後的質譜3為犬給予D-山梨醇後血漿樣品的質譜4為甲醇的質譜5為甲醇加入標準品的質譜6為犬給予D-山梨醇後尿樣品的質譜圖注圖中離子選擇通道I為D-山梨醇，[M-H]-，m/z 180. 9，保留時間為4. 83min左右；離子選擇通道2為內標替硝唑，[M-H]-, m/z 246. 0，保留時間為4. 13min左右。
具體實施方式
根據下述實施例，可以更好地理解本發明。然而，本領域的技術人員容易理解，實施例所描述的具體內容僅用於說明本發明，而不應當也不會限制權利要求書中所詳細描述的本發明。實施例I :犬血漿中D-山梨醇濃度的測定一、實驗材料與儀器D-山梨醇對照品 購於中國藥品生物製品檢定所；批號100555-200306替硝唑對照品(內標)購於中國藥品生物製品檢定所；批號100336-200402試驗用水超純水；甲醇色譜純(Merck Company)。ZQ2000LC/MS液質聯用儀(美國Waters公司，所配高效液相儀為Waters 2695)；Masslynx 4. 0數據處理系統；WH_2微型旋渦混合儀(上海滬西分析儀器廠);AE240電子天平(上海梅特勒-託利多有限公司)；Millipore Drict_Q5純水機(法國Millipore公司);Biofuge PrimoR冷凍高速離心機(德國Heraeus公司)。二、液質條件I.液相色譜條件色譜柱漢邦LichrospherNH2 柱(dp 5mm, 250mm ID X 4. 6mm);流動相甲醇-水溶液(70 30, v/v);流速0. SmLiirT1 (分流比 I 3);柱溫35°C。2.質譜條件離子源電噴霧離子化電離源ESI ;離子檢測方式選擇性離子檢測SIM ;離子極性負離子；毛細管電壓3. OKV ;離子源溫度100°C ;脫溶劑溫度350°C ;脫溶劑氣380L/h ;錐孔氣30L/h ;脫溶劑氣和錐孔氣均為高純氮氣；檢測對象的離子選擇通道D-山梨醇，[M-H]-, m/z 180. 9, Dwell 0. 2，Cone 30;內標替硝唑，[M-H]-, m/z246. 0, Dwell 0.2，Cone 30o三、實驗過程I. D-山梨醇標準溶液的配製精密稱取D-山梨醇13. 96mg，置於IOmL容量瓶中，加入甲醇溶解並定容至刻度，搖勻，即得I. 396mg HiL-1D-山梨醇的儲備液。精密量取適量儲備液以甲醇依次稀釋，配成濃度分別為2. 5、5、10、25、50、100、250 ii g m^1的D-山梨醇標準溶液。 2.犬血漿樣品的處理取3隻犬靜脈持續滴注5% D-山梨醇溶液3h,給藥量為150mg kg'於滴注後3h採集外周靜脈血3ml，注入肝素管內備測，製備血漿，取犬血漿100 y L，處理方法為加入900 V- L甲醇沉澱，振蕩lmin, 12000rpm離心IOmin,取上清50 u L,加入50 u L甲醇、400 u L替硝唑甲醇溶液(內標，2. 174 u g -mr1)，混勻，5 U L進樣(見圖3)，計算D-山梨醇和內標峰面積的比值fl，代入標準曲線計算濃度，再乘以相應的稀釋倍數(10)，得血漿中D-山梨醇的濃度。若濃度超出標準曲線範圍，則樣品再稀釋一定倍數進樣。3.專屬性取沒有給予過D-山梨醇的犬空白血漿100 U L,加入900 U L甲醇沉澱，振蕩lmin，12000rpm離心lOmin,取上清液備用。取本上清液50 y L,加入甲醇450 y L,混勻，5ii L進樣(見圖I)。另取本上清液50 iiL，加入D-山梨醇標準溶液50 iiL，加入400 ii L替硝唑甲醇溶液(內標，2. 174ug* mr1)，混勻，5 ii L進樣(見圖2)。
結果顯示，在本實驗所採用的LC-MS條件下，血漿樣品無雜峰對檢測組分造成幹擾，D-山梨醇保留時間在4. 83min左右，內標替硝唑保留時間在4. 13min左右。D-山梨醇和內標互不幹擾，峰形良好，基線平穩。4.線性試驗犬血漿標準曲線取沒有給予過D-山梨醇的犬空白血漿適量，按體積比I : 9加入甲醇沉澱，振蕩lmin, 12000rpm離心IOmin,取上清液備用。分別取不同濃度的D-山梨醇標準溶液50 u L，加入空白血漿處理後的上清液50 u L，配成含D-山梨醇的濃度分別為
I.25、2. 5、5、12. 5、25、50、125 ii g 的含藥血漿樣品，加入400 y L替硝唑甲醇溶液(內標，2. 174 u g -mr1)，混勻，5 L進樣。計算D-山梨醇和內標峰面積的比值f I，以峰面積比值H對血藥濃度C作回歸計算，得回歸方程fl = 0. 9646XC+0. 1192 (r = 0. 9994), D-山梨醇血漿濃度在I. 25 ~ 125 ug .mL—1範圍內線性關係良好。最低定量限為I. 25 Ug .mL—1。5.準確度和精密度按照犬血漿標準曲線方法配製含D-山梨醇濃度為2. 5,12. 5,50ug mL—1的低、中、高的含D-山梨醇血漿樣品，按「犬血漿樣品的處理」處理方法分別處理。連續做3天，每天每個濃度各做5份樣品，計算D-山梨醇峰面積As和內標峰面積Ai的比值f，代入當天的血漿標準曲線中求得D-山梨醇實測濃度，由實測濃度計算日內、日間精密度和相對標準偏差(RSD)，實測濃度與加入濃度的比值即為準確度。結果顯示，日內和日間精密度RSD均小於5%，準確度符合要求。6.測定結果上述3隻給予過D-山梨醇的犬血漿中D-山梨醇含量分別為70. 0,60. 2、65.4ug* mL'實施例2 :犬尿液中D-山梨醇濃度的測定一、實驗材料與儀器D-山梨醇對照品購於中國藥品生物製品檢定所公司；批號100555-200306替硝唑對照品(內標)購於中國藥品生物製品檢定所；批號100336-200402試驗用水超純水；甲醇色譜純(Merck Company)。ZQ2000LC/MS液質聯用儀(美國Waters公司，所配高效液相儀為Waters 2695)；Masslynx 4. 0數據處理系統；WH_2微型旋渦混合儀(上海滬西分析儀器廠)；AE240電子天平(上海梅特勒-託利多有限公司)；Millipore Drict_Q5純水機(法國Millipore公司);Biofuge PrimoR冷凍高速離心機(德國Heraeus公司)。二、液質條件1.液相色譜條件色譜柱漢邦LichrospherNH2 柱(dp 5mm, 250mm ID X 4. 6mm);流動相甲醇-水溶液(70 30, v/v);流速0. SmLiirT1 (分流比 I 3);柱溫35°C。2.質譜條件離子源電噴霧離子化電離源ESI ;離子檢測方式選擇性離子檢測SIM ;離子極性負離子；毛細管電壓3. OKV ;離子源溫度100°C ;脫溶劑溫度350°C ;脫溶劑氣380L/h ;錐孔氣30L/h ;脫溶劑氣和錐孔氣均為高純氮氣；檢測對象的離子選擇通道D-山梨醇，[M-H]-, m/z 180. 9, Dwell 0. 2，Cone 30;內標替硝唑，[M-H]-, m/z246. 0, Dwell 0.2，Cone 30o
三、實驗過程I. D-山梨醇標準溶液的配製精密稱取D-山梨醇13. 96mg，置於IOmL容量瓶中，加入甲醇溶解並定容至刻度，搖勻，即得I. 396mg HiL-1D-山梨醇的儲備液。精密量取適量儲備液以以甲醇依次稀釋，配成濃度分別為2. 5、5、10、25、50、100、250 ii g mL_1的D-山梨醇標準溶液。2.犬尿樣品的處理取3隻犬靜脈持續滴注5% D-山梨醇溶液3h，給藥量為150mg kg'收集滴注後3h內尿液，計量、備測，取給予過D-山梨醇的犬尿液lOyL，處理方法為加入甲醇990 V- L,振蕩lmin, 12000rpm離心IOmin,取上清50 u L,加入950 u L替硝唑甲醇溶液(內標，2. 174ug* mr1)，混勻，5 u L進樣，計算D-山梨醇和內標峰面積的比值f2，代入標準曲線計算濃度，再乘以相應的稀釋倍數(100)，得尿樣品中D-山梨醇的濃度(見圖6)。若濃 度超出標準曲線範圍，則樣品再稀釋一定倍數進樣。3.線性試驗犬尿液標準曲線分別取不同濃度的D-山梨醇標準溶液50ii L，加入950 ii L替硝唑甲醇溶液(內標，2. nAiig.mr1)，配成含D-山梨醇的濃度分別為0. 125,0. 25、
0.5,1. 25,2. 5,5,12. 5u g m^1的含藥尿液樣品，混勻，5 y L進樣。計算D-山梨醇和內標峰面積的比值f2，以峰面積比值f2對尿藥濃度C作回歸計算，得回歸方程f2 =
0.4395 X C-0. 07559 (r = 0. 9992)，D-山梨醇尿液濃度在 0. 125 12. g .mL-1 範圍內線性關係良好。最低定量限為0. 125 ii g mL'4.專屬性由於尿樣品是稀釋了 1000倍進行測定的，基質效應可以忽略，因此尿樣品專屬性試驗用甲醇作介質進行檢測(見圖4，圖5)。結果顯示，在本實驗所採用的LC-MS條件下，尿樣品無雜峰對檢測組分造成幹擾，D-山梨醇保留時間在4. 83min左右，內標替硝唑保留時間在4. 13min左右。D-山梨醇和內標互不幹擾，峰形良好，基線平穩。5.準確度和精密度按照犬尿液標準曲線方法配製含D-山梨醇濃度為0. 25,1. 25、5y g mL—1的低、中、高含D-山梨醇尿樣，按「犬尿樣品的處理」處理方法分別處理。連續做3天，每天每個濃度各做5份樣品，計算D-山梨醇峰面積As和內標峰面積Ai的比值f，代入當天的尿液標準曲線中求得D-山梨醇實測濃度，由實測濃度計算日內、日間精密度和相對標準偏差(RSD)，實測濃度與加入濃度的比值即為準確度。結果顯示，日內和日間精密度RSD均小於5%，準確度符合要求。6.測定結果上述3隻給予過D-山梨醇的犬尿液中D-山梨醇的含量分別為3. 60,4. 98、5. 39 u g mL 1O實施例3 :犬血漿中D-山梨醇濃度的測定參照實施例I,取3隻犬靜脈持續滴注5 % D-山梨醇溶液3h,給藥量為150mg kg'於滴注後3h採集外周靜脈血3ml,注入肝素管內備測,製備血眾,樣品處理中採用乙腈蛋白沉澱劑進行蛋白沉澱，其餘條件相同，進行測定，結果犬血漿中D-山梨醇的含量分別為 53. 1、88. 2、54. 4ii g mL'實施例4 :犬尿液中D-山梨醇濃度的測定參照實施例2,取3隻犬靜脈持續滴注5 % D-山梨醇溶液3h,給藥量為150mg * kg-1.,收集滴注後3h內尿液，計量、備測，樣品處理中採用乙腈蛋白沉澱劑進行蛋白沉澱，其餘條件相同，進行測定，結果犬尿液中D-山梨醇的含量分別為3. 87,4. 96、
5.96 u g mL、實施例5 :人血漿中D-山梨醇濃度的測定
參照實施例1，3個人靜脈持續滴注5% D-山梨醇溶液3h，給藥量為150mg kg'於滴注後3h採集外周靜脈血3ml，注入肝素管內備測，製備血漿，樣品處理中採用甲醇蛋白沉澱劑進行蛋白沉澱，其餘條件相同，進行測定，結果人血漿中D-山梨醇的含量分別為74. 1、61. 5、64. I u g mL、實施例6 :人尿液中D-山梨醇濃度的測定參照實施例2，3個人靜脈持續滴注5% D-山梨醇溶液3h，給藥量為150mg kg'收集滴注後3h內尿液，計量、備測，樣品處理中採用甲醇蛋白沉澱劑進行蛋白沉澱，其餘條件相同，進行測定，結果人尿液中D-山梨醇的含量分別為3. 68,4. 96,5. 59 u g mL'實施例7 :人血漿中D-山梨醇濃度的測定參照實施例1，3個人靜脈持續滴注5% D-山梨醇溶液3h，給藥量為150mg kg'於滴注後3h採集外周靜脈血3ml，注入肝素管內備測，製備血漿，樣品處理中採用乙腈蛋白沉澱劑進行蛋白沉澱，其餘條件相同，進行測定，結果人血漿中D-山梨醇的含量分別為62. 7、64. 2、55. 7 u g mL 1 實施例8 :人尿液中D-山梨醇濃度的測定參照實施例2，3個人靜脈持續滴注5 % D-山梨醇溶液3h，給藥量為150mg kg'收集滴注後3h內尿液，計量、備測，樣品處理中採用乙腈蛋白沉澱劑進行蛋白沉澱，其餘條件相同，進行測定，結果人尿液中D-山梨醇的含量分別為3. 76,4. 43,5. 63 u g mL'實施例9 :犬血漿中D-山梨醇濃度的測定參照實施例I,取3隻犬靜脈持續滴注5 % D-山梨醇溶液3h,給藥量為150mg kg-1。於滴注後3h採集外周靜脈血3ml，注入肝素管內備測，製備血漿，樣品處理中採用乙腈蛋白沉澱劑進行蛋白沉澱，液相色譜分離條件中流速為0. 6mL mirT1，柱溫為30°C ；質譜測定，條件中離子源溫度為80°C;脫溶劑溫度340°C;其餘條件相同，進行測定，結果犬血漿中D-山梨醇的含量分別為63. 8、82. 1、59. g mL'實施例10 :犬尿液中D-山梨醇濃度的測定參照實施例2,取3隻犬靜脈持續滴注5 % D-山梨醇溶液3h,給藥量為150mg Ag'收集滴注後3h內尿液，計量、備測，樣品處理中採用乙腈蛋白沉澱劑進行蛋白沉澱，液相色譜分離條件中流速為I. OmL 柱溫為40°C;質譜測定，條件中離子源溫度為120°C ;脫溶劑溫度360°C ;其餘條件相同，進行測定，結果犬尿液中D-山梨醇的含量分別為 3. 75,4. 53,5. 62 u g mL'實施例11 :人血漿中D-山梨醇濃度的測定參照實施例1，3個人靜脈持續滴注5% D-山梨醇溶液3h，給藥量為150mg kg'於滴注後3h採集外周靜脈血3ml，注入肝素管內備測，製備血漿，樣品處理中採用乙腈蛋白沉澱劑進行蛋白沉澱，液相色譜分離條件中流速為0. 6mL iin'柱溫為30°C ;質譜測定，條件中離子源溫度為80°C;脫溶劑溫度340°C;其餘條件相同，進行測定，結果人血漿中D-山梨醇的含量分別為73. 8、89. 1、69. g mL'實施例12 :人尿液中D-山梨醇濃度的測定參照實施例2，3個人靜脈持續滴注5 % D-山梨醇溶液3h，給藥量為150mg kg'收集滴注後3h內尿液，計量、備測，樣品處理中採用乙腈蛋白沉澱劑進行蛋白沉澱，液相色譜分離條件中流速為I. OmL柱溫為40°C ;質譜測定，條件中離子源溫度為120°C ;脫 溶劑溫度360°C ;其餘條件相同，進行測定，結果人尿液中D-山梨醇的含量分別為5. 75、4. 83、5. 92 u g mL 1O
權利要求
1.一種測定血漿或尿液中D-山梨醇濃度的方法，其特徵在於採用液質聯用系統測定，包括以下步驟(I)血漿或尿液樣品預處理；(2)D-山梨醇進行液相色譜分離；(3)質譜測定；⑷計算。
2.根據權利要求I中測定血漿或尿液中D-山梨醇濃度的方法，其特徵在於 步驟(I)血漿或尿液樣品預處理取給予過D-山梨醇的犬或人的血漿或尿液樣品，力口入定量的甲醇或乙腈蛋白沉澱劑進行蛋白沉澱； 步驟(2)D-山梨醇進行液相色譜分離色譜條件中色譜柱為漢邦LichrospherNH2柱；流動相體積比為70 30的甲醇-水溶液；流速0. 6-1. OmL mirT1，分流比I : 3 ;柱溫30-40°C ;洗脫方式為等度洗脫； 步驟(3)質譜測定，條件為離子源電噴霧離子化電離源ESI ;離子檢測方式選擇性離子檢測SM ;離子極性負離子；毛細管電壓3. OKV ;離子源溫度80-120°C ;脫溶劑溫度340-36(TC ;脫溶劑氣380L/h ;錐孔氣30L/h ;脫溶劑氣和錐孔氣均為高純氮氣；檢測對象的離子選擇通道=D-山梨醇，[M-H]-, m/z 180. 9，DwellO. 2，Cone 30 ;內標替硝唑，[M-H]-, m/z 246. 0, Dwell 0. 2, Cone 30; 步驟⑷計算採用內標法，以D-山梨醇和內標替硝唑的峰面積比值代入標準曲線方程計算D-山梨醇濃度。
3.根據權利要求2中測定血漿或尿液中D-山梨醇濃度的方法，其特徵在於 步驟(2)D-山梨醇進行液相色譜分離色譜條件中色譜柱為漢邦LichrospherNH2柱；流動相體積比為70 30的甲醇-水溶液；流速0. 8mL分流比I : 3 ;柱溫35°C;洗脫方式為等度洗脫； 步驟(3)質譜測定，條件為離子源電噴霧離子化電離源ESI ;離子檢測方式選擇性離子檢測SIM ;離子極性負離子；毛細管電壓3. OKV ;離子源溫度100C ;脫溶劑溫度3500C ;脫溶劑氣380L/h ;錐孔氣30L/h ;脫溶劑氣和錐孔氣均為高純氮氣；檢測對象的離子選擇通道D-山梨醇，[M-H]-, m/z 180. 9, Dwell 0. 2，Cone 30;內標替硝唑，[M-H]-, m/z 246. 0，Dwell 0. 2，Cone 30。
4.根據權利要求2中測定血漿或尿液中D-山梨醇濃度的方法，其特徵在於步驟(I)中，血眾樣品取血眾100 V- L,加入900ii L甲醇沉澱，振蕩lmin, 12000rpm離心IOmin,取上清50iiL，加入50iiL甲醇、400iiL濃度為2. 174ug*mr1的替硝唑甲醇內標溶液，混勻；尿樣品取尿液10 V- L,加入甲醇990 V- L,振蕩lmin, 12000rpm離心IOmin,取上清50 u L,加入950 u L濃度為2. 174ug* mL—1的替硝唑甲醇內標溶液，混勻。
5.根據權利要求2中測定血漿或尿液中D-山梨醇濃度的方法，其特徵在於步驟(2)中色譜條件中色譜柱長度為250mm,內徑為4. 6mm,粒徑為5 y m。
6.根據權利要求2中測定血漿或尿液中D-山梨醇濃度的方法，其特徵在於步驟(I)中D-山梨醇給予和血漿或尿液樣品取樣方法為靜脈持續滴注5% D-山梨醇溶液3h，給藥量為150mg Ag'於滴注後3h採集外周靜脈血3ml,注入肝素管內，製備血眾或收集滴注後3h內尿液，計量、備測。
7.根據權利要求I中測定血漿或尿液中D-山梨醇濃度的方法，其特徵在於所述血漿或尿液為人或犬的血眾或尿液。
全文摘要
本發明公開了一種測定血漿或尿液中D-山梨醇濃度的方法，採用液質聯用系統測定，先取待測樣品，加入一定量的有機溶媒蛋白沉澱劑進行蛋白沉澱，預處理後，經色譜柱分離，用質譜檢測器檢測，本發明方法快速、準確、靈敏度高、操作簡便，適合於測定血漿或尿液中D-山梨醇的濃度。
文檔編號G01N30/88GK102621267SQ20121010466
公開日2012年8月1日 申請日期2012年4月9日 優先權日2012年4月9日
發明者儲繼紅, 劉史佳, 吳婷, 居文政, 張軍, 李長印, 許美娟 申請人:江蘇省中醫院