一種用於養血益氣、調經溫寒的中藥組合物及其製備方法

2023-06-01 05:57:26

專利名稱：：一種用於養血益氣、調經溫寒的中藥組合物及其製備方法
技術領域：
：本發明涉及一種用於養血益氣、調經溫寒的中藥組合物及其製備方法，屬於中藥製藥
技術領域：
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背景技術：
：由腎虛，氣血兩虧，經血不調，經期腹痛引起的功能性子宮出血、內分泌性不孕及痛經等婦科疾病，是嚴重危害婦女健康的常見病和多發病，該病有多種致病病因，病程長，身復發，目前尚無很好的根治性藥物。部頒標準《中藥成方製劑》第11冊WS3-B-2076-96項下"八珍鹿胎膏"是一種純中藥製劑，該藥經多年臨床應用，在治療腎虛，氣血兩虧，經血不調，經期腹痛引起的功能性子宮出血、內分泌性不孕及痛經等婦科疾病方面有一定效果，但是由於膏劑的分計量不準確，其不良嗅味患者難以接受，且易受汙染，療效不穩定，此製劑己經被淘汰；八珍鹿胎顆粒《地標升國標》婦科WS-11089(ZD-1089)-2002提供的工藝比較粗，有效成分的提取率低，得到的產品療效尚不夠理想，藥物穩定性差，且其不良嗅味患者難以接受。
發明內容本發明的目的是提供一種工藝合理，生物利用度高，服用方便，療效更好的治療腎虛，氣血兩虧，經血不調，經期腹痛引起的功能性子宮出血、內分泌性不孕及痛經等婦科疾病的中藥組合物及其製備方法，以解決現有技術存在的缺陷。本發明是這樣實現的按照重量組分計算，本發明中藥組合物主要是由如下重量配比的原料加工製成的膠囊劑，其中鹿胎450份、鹿角膠150份、熟地黃303份、人參38份、當歸38份、川芎38份、白芍38份、白朮38份、茯苓114份、甘草38份；鹿胎洗淨；切成小塊，加水煎煮3次，第一次加8倍量水煎2h，第二、三次各加7倍量水煎lh，趁熱過濾，合併濾液，濃縮成清膏，減壓乾燥，冷凍粉碎，過成80目細粉，備用。鹿角膠冷凍.粉碎，過80目細粉，取處方量細粉備用。將茯苓粉碎，過成100目篩，取l/3處方量細粉，60>輻照，備用。取人參粗粉、當歸、川芎、白朮用70%乙醇回流提取2次，加溶劑倍數分別為5倍、4倍，回流時間依次為1.5h，1.5h。合併兩次濾液(藥渣另器保存)，減壓回收乙醇，溶液濃縮成清膏。取熟地黃、白芍、2/3茯苓、甘草與上渣混合，加水煎煮3次，加水量分別為9倍、9倍、8倍，煎煮時間依次為1.5h、1.5h、lh。合併三次濾液(藥渣棄)，減壓濃縮，放涼，加入乙醇，使含醇量達60%，冷藏24h,過濾，濾液回收乙醇，所得溶液減壓濃縮，再與茯苓細粉、醇提清膏混勻，減壓乾燥(6(TC)，粉碎並過成100目細粉，與鹿胎粉、鹿角膠粉混勻後用乙醇制軟材，20目篩制粒，5(TC以下乾燥，14目整粒，裝膠囊，即得本發明膠囊劑。本發明膠囊劑最佳的製備方法為取原料鹿胎450份、鹿角膠150份、熟地黃303份、人參38份、當歸38份、川芎38份、白芍38份、白朮38份、茯苓114份、甘草38份；鹿胎洗淨，切成小塊，加水煎煮3次，第一次加8倍量水煎2h，第二、三次各加7倍量水煎lh，趁熱過濾，合併濾液，濃縮至相對密度為1.321.35(60°C)的清膏，減壓乾燥，冷凍粉碎，過成80目細粉，備用。鹿角膠冷凍粉碎，過80目細粉，取處方量細粉備用。將茯苓粉碎，過成100目篩，取l/3處方量細粉，6aCo輻照，備用。取人參粗粉、當歸、川芎、白朮用70%乙醇回流提取2次，加溶劑倍數分別為5倍、4倍，回流時間依次為1.5h，1.5h。合併兩次濾液(藥渣另器保存)，減壓回收乙醇，溶液濃縮至相對密度為1.321.35(6(TC)的清膏。取熟地黃、白芍、2/3茯苓、甘草與上渣混合，加水煎煮3次，加水量分別為9倍、9倍、8倍，煎煮時間依次為1.5h、1.5h、lh。合併三次濾液(藥渣棄)，減壓濃縮至相對密度1.15(60'C)，放涼，加入乙醇，使含醇量達60%,冷藏24h，過濾，濾液回收乙醇，所得溶液減壓濃縮至相對密度1.321.35(60°C),再與茯苓細粉、醇提清膏混勻，減壓乾燥(6(TC),粉碎並過成IOO目細粉，與鹿胎粉、鹿角膠粉混勻後用乙醇制軟材，20目篩制粒，5(TC以下乾燥，14目整粒，裝膠囊，即得本發明膠囊劑。本發明膠囊劑為中藥複方製劑，本方系以四君子湯(人參、白朮、茯苓、甘草)四物湯(當歸、川芎、白芍、熟地黃)合為八珍湯又加鹿胎、鹿角膠二味藥材而成，以人參、白朮、茯苓、甘草益氣健脾，當歸、白芍、川芎、熟地黃補血養血，而為氣血雙補之良方。鹿胎甘鹹、性溫，能益腎壯陽、補虛生精，治虛損勞瘀、精血不足、婦女虛寒，崩漏帶下。鹿角膠亦擅溫腎填精，合而用之，共奏氣血雙補、溫養肝腎、養血益氣，調經溼寒之功；用於腎虛，氣血兩虧，經血不調，經期腹痛。有文獻報導用其治療不孕症及再生障礙性貧血均有較好療效，其毒副作用小，適於長期用藥。人參、當歸、川芎、白朮中的人參皂苷、內酯、生物鹼等成分醇溶性好，用70%乙醇回流提取，其渣與其餘藥材共煎，使水溶性成分被提出，這些成分具有調節免疫、鎮痛、調經、強壯機體等作用，使其藥物有效成分得到充分發揮。熟地黃、白芍、茯苳、甘草中的梓醇、多糖、胺基酸、苷類、有機酸等水溶性好，採用水煎煮法提取，但一些水溶性非活性成分，如粗蛋白、澱粉、粘液質等被煎出，為減少服用量用醇沉法除去；藥物的粘度降低，所得製劑不易吸潮，穩定性好。本發明將現有技術通過提取有效成分，除去其中大量非活性成分，其臨床效果顯著提高，藥物穩定性更高，安全性更好，由於鹿胎和鹿角膠藥材存在腥味大，口感差問題，特別是鹿胎經煎煮後，其不良嗅味患者難以接受。本發明採用膠囊劑，掩蓋了藥物的不良嗅味，患者易於接受；膠囊劑的內容物為乾燥粉粒，不但增加了藥物的穩定性，同時在製備過程中不受粘合劑與壓力影響，崩解釋藥迅速，生物利用度高，膠囊劑服用、攜帶方便，可為臨床用藥增添一個新劑型、新品種。在本發明中，我們對原有工藝進行了較大改進，最大限度的保留了其有效成份，我們對工藝做了大量的實驗研究一、鹿胎提取與粉碎①取鹿胎洗淨，剃除膜與脂肪，切成小塊，分成兩份。方法l:釆用原八珍鹿胎膏製法(加水煎煮三次，第一次加8倍量水煎2h，第二、三次各7倍量水煎lh);方法2:加水煎煮二次，每次8倍量水煎2h。各次煎煮液趁熱過濾，合併濾液，濃縮成稠膏，減壓乾燥，測定，結果見表l。表l鹿胎提取結果比較tableseeoriginaldocumentpage5結果表明，鹿胎水煎3次的幹膏量及胺基酸含量均高於水煎2次，因此可以採用原製法提取鹿胎。②出粉率考察稱取幹膏100g,共3份，分別粉碎並過成80目細粉，稱重，計算出粉率，結果見表2。表2鹿胎幹膏出粉結果tableseeoriginaldocumentpage5鹿胎幹膏平均出粉率為92.7%，製劑中以淨粉投料。二、乙醇回流提取人參等藥材按處方比例稱取人參12.5g、當歸12.5g、川芎12.5g、白朮12.5g(共50g)，9份，以加溶劑倍數、乙醇濃度、回流時間、回流次數的不同，設計為4因素3水平，並以幹膏量及人參皂甙Rgi+Re為指標，採用L9(34)正交表進行試驗，結果見表3，表4，表5。表3因素水平表水平因素溶劑倍數(倍)乙醇濃度(％)回流時間(h)回流次數13600.5i24701.023801.53表4正交試驗結果[U(34)]《撒溶劑倍數(倍)乙醇濃度回流時間(%)(h)回流次數幹膏量(g)人參皂苷含量(mg/100g藥材)試驗號\ABCD1231(3)1(3)1(3)1(60)2(70)3(80)1(0.5)2(1.0)3(1.5)1(1)2(2)3(3)6.513.014.592.08166.05170.95462(4)2(4)2(4)1(60)2(70)3(80)2(1.0)3(1.5)1(0.5)3(3)1(1)2(2)13.513.012.7173.04168.43196.567893(5)3(5)3(5)1(60)2(70)3(80)3(1.5)1(0.5)2(1.0)2(2)3(3)1(1)13.714.59.5202.93191.75147.96幹K！K2K334.039,237.733.740.536.733.736.041.229.039.442.5同量KjK2K311.313.112.611.213.512.211.236.041.29.713.114.2產110.9R1.82.32.54.5人參&K2K3429.08538.03542.64468.05526.23515.47480.39487.05542.31408.47565.54535.74皂苷含K2K3143.03179.34180.88156.02175.41171.82160.13162.35180.77136.16188.51178.58Ki+K2+K3=:1509.75曰.裡R37.8519.3920.6452.35表5方差分析表(SAS)tableseeoriginaldocumentpage7結果分析由表4，表5看出，影響幹膏量多少的主次因素排序為回流次數>回流時間〉乙醇濃度〉溶劑倍數，搭配為A2B2C3D3;影響人參皂苷含量高低的主次因素排序為回流次數>溶劑倍數>回流時間>乙醇濃度，搭配為A3B2C3D2,二者BC一致，考慮含量的重要性，並結合試驗號4及生產實際，選擇最佳搭配為A3B2C3D2，即藥材用70%乙醇回流提取2次，加溶劑倍數分別為5倍，4倍，回流時間依次為1.5h,1.5h。驗證試驗在正交試驗結果中，幹膏量與人參皂苷搭配組合不完全一致，經參照試驗號4並結合生產實際確定了以上最佳搭配，此搭配究竟是否為最優提取條件，需要進一步驗證，方法按處方量比例稱取人參12.5g、當歸12.5g、川芎12.5g、白朮12.5g，共3份，用上述最優條件進行提取，濾液經濃縮，乾燥，測定，結果見表6。表6驗證試驗結果乾膏中人參皂苷含量人參皂苷含量編號藥材量(g)幹膏量(g)，(mg'g")(mg/100g藥材)15013.41.8756201.042，5013.81.8353202.6235014.01.8423206.34人參皂苷含量測定方法照高效液相色譜法(中華人民共和國藥典2000年版一部附錄VID)測定。色譜條件與系統適用性試驗用十八垸基矽烷鍵合矽膠為填充劑；乙腈-0.05%磷酸溶液(99:400)為流動相，檢測波長為203nm。理論板數按人參皂苷Re峰計算應不低於2500。對照品溶液的製備精密稱取人參皂苷Rgl對照品12.5mg、人參皂苷Re對照品10mg，加甲醇分別製成每lml含人參皂苷Rgi0.4mg、人參皂苷Re0.25mg的溶液，即得。供試品溶液的製備取本品粉末(過四號篩)2g,精密稱定，置索氏提取器中，加氯仿40ml,加熱回流3小時，棄去氯仿液，藥渣揮去氯仿，連同濾紙筒移入具塞錐形瓶中，精密加入水飽和的正丁醇50ml，密塞，放置過夜，超聲處理(功率250w，頻率50KHz)30分鐘，濾過，精密量取續濾液25ml，置蒸發皿中蒸乾，殘渣加甲醇溶解並轉移至5ml容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。測定法分別精密吸取上述兩種對照品溶液各10ul與供試品溶液1020ul，注入液相色譜儀，測定，即得。驗證結果表明，3批樣品中人參皂苷含量相當於或略高於正交表中最高含量，可以認為由試驗所確定的最佳提取條件可行。三、熟地黃、白芍等藥材水煎醇沉試驗(1)水煎藥材按處方比例稱取熟地黃20g，白芍15g，茯苓5g，甘草2.5g與醇提藥渣(人參2.5g，當歸2.5g，川芎2.5g，白朮2.5g)混合，共40g，9份。以加水倍數、煎煮時間、煎煮次數的不同，設計為3因素3水平，採用L9(34)正交表進行試驗，以幹膏量和芍藥苷含量為指標，結果見表7，表8，表9。表7因素水平表tableseeoriginaldocumentpage8表8正交試驗結果[L9(34)]是素、列數加水倍數(倍)煎煮時間(h)回流次數幹膏量(g)芍藥苷含量試驗號\EFG(%藥材)1231(8)1(8)1(8)1(1.0)2(1.5)3(2.0)1(1)2(2)3(3)8.013.015.00.3240.5110.486462(9)2(9)2(9)1(1.0)2(1.5)3(2.0)2(2)3(3)1(1)10.514.59.50.5580.6300.396893(10)3(10)3(10)1(1.0)2(1.5)3(2.0)3(3)1(1)2(2)14.28.514.00.5850.3780.603幹K！K2K336.034.536.732.736.038.526.037.543.7膏量&K2K312.011.512.210.912.012.88.712.514.6IQ+K2+K3=107.2R0.71.95.9芍藥苷含且裡K2K31.3211.5841.5661.4671.5191.485l扁1.6721.701K2K30.4400.5280.5220.4890.5060.4950.3660.5570.567K!+K2+K3=4.471R0.0880.0170.201表9差分析表(SAS)項目SoureDFAnovaSSMeanSquareFValuePr〉F幹E20.84220.42110.560.6418罔F25.64222.82113.740.2110量G253.775526.887835.640.0273芍藥E20.01440.00724.740.1744苷含F20.00050細20.150.8673旦裡G20.07710扁525.370.0379結果分析由表8表9出，影響幹膏量多少的主次因素排序為煎煮次數>煎煮時間〉加水倍數，搭配為E3F3G3;影響芍藥苷含量的主次因素排序為煎煮次數>加水倍數〉煎煮時間，搭配為E2F2G3。考慮到含量的重要性，並結合5號結果，確定最佳搭配為E2F2G3，即藥材加水煎煮3次，加水量分別為9倍，9倍，8倍，煎煮時間依次為1.5h，L5h，lh。驗證試驗稱取人參2.5g，當歸2.5g，川芎2.5g，白朮2.5g，2份，按2.3.4最優條件提取後，藥渣備用；另取熟地黃20g，白芍2,5g，茯苓5g，甘草2.5g，分別與上渣混合，按三(1)最優條件提取，濃縮，乾燥，檢測，結果見表IOtableseeoriginaldocumentpage10結果分析按所確定的最佳水煎條件製備三批樣品，其中芍藥苷含量比正交表中最高含量略高或相當，表明此最佳條件可行。(2)醇沉試驗藥材水煎過程中，除可以浸出其中活性水溶性成分外，同時也使大量非活性成分，如粗蛋白、澱粉、粘液質等浸出，必然增大服用劑量。因此，在保證有效成分提取的前提下，應對水煎溶液進行醇沉。方法按處方比例稱取人參22.5g，當歸22.5g，川芎22.5g，白朮22.5g，按2.3.4最優條件提取後，藥渣備用。另取熟地黃180g，白芍22.5g，茯苳45g，甘草22.5g，與上渣混合(藥材為360g)，以三(1)最優條件提取，合併濾液，濃縮約360ml，等分為3份。第1份濃縮至相對密度1.15(60'C),第2份濃縮至相對密度1.20(60°C)，第3份濃縮至相對密度1.25(60°C)，再分別等分後(每份藥材為40g),各加入乙醇使含醇量達一定濃度，冷藏，濾過，回收乙醇，濃縮，乾燥，測定。因素水平表及結果見表ll,表12,表13。tableseeoriginaldocumentpage11芍藥苷含量測定法照高效液相色譜法(中華人民共和國藥典2000年版一部附錄VID)測定。色譜條件與系統適應性試驗用十八烷基矽垸鍵合矽膠為填充劑；甲醇-0.05md/L，磷酸二氫甲-36%醋酸-異丙醇(67:173:4:4)為流動相；檢測波長為230nm。理論板數按芍藥苷峰計算應不低於2000。對照品溶液的製備精密稱取在五氧化二磷減壓乾燥器中乾燥36小時的芍藥苷對照品5mg，置25ml容量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，精密吸取2ml，置10ml量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，即得(每ml中含芍藥苷0.04mg)。供試品溶液的製備取供試品，研細，混勻，取1.0g，精密稱定，加入甲醇50ml，超聲處理30分鐘，放冷，濾過，藥渣加甲醇洗滌3次，每次3ml，合併洗滌液，水浴蒸乾，殘渣加50n/。甲醇溶解並移入50ml量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5ul，分別注入液相色譜儀，測定，即得。結果分析有表12，表13看出，影響出膏量的主次因素為相對密度>醇沉濃度>冷藏時間，搭配為H3l3J3(以幹膏量少為好)，影響芍藥苷含量的主次因素為醇沉濃度>相對密度>冷藏時間，搭配為H山J2。幹膏量與含量之間無一致之處，參照試驗號5,4，並結合生產實際，選擇最優搭配為H山J2，即藥液濃縮至相對密度為1.15(60°C),含醇達60%，冷藏24h。主要藥效學實驗實驗目的通過對本發明膠囊劑、八珍鹿胎膏及八珍鹿胎顆粒的補血作用，對子宮平滑肌收縮作用，鎮痛作用以及活血化瘀作用等藥理實驗研究，將本發明膠囊劑、八珍鹿胎膏及八珍鹿胎顆粒進行對比，觀察其藥理作用的強弱，為臨床用藥提供實驗依據。試驗方法本發明膠囊劑、八珍鹿胎膏(按部頒標準《中藥成方製劑》第11冊WS3-B-2076-96項下"八珍鹿胎膏"處方工藝製備)及八珍鹿胎顆粒(市場購買)對失血性血虛小鼠的補血作用；對大鼠正常子宮以及使用催產素後子宮平滑肌收縮功能的影響；對冰醋酸致小鼠扭體的鎮痛作用；對血瘀證大鼠血液流變學的影響。實驗結果本發明膠囊劑、八珍鹿胎膏及八珍鹿胎顆粒能明顯增加失血小鼠血中紅細胞(RBC)數目和血紅蛋白(Hb)含量；能抑制大鼠正常子宮收縮頻率、幅度和活動力；亦能明顯降低催產素對子宮的興奮作用；對冰醋酸致小鼠疼痛有明顯的對抗作用；能明顯改善血瘀證大鼠血液流變性，有活血化瘀作用。結論本發明膠囊劑與八珍鹿胎膏及八珍鹿胎顆粒相比，在相同生藥劑量(3.0g原生藥/kg)下的補血作用，對子宮平滑肌收縮作用，鎮痛作用以及活血化瘀作用等藥理實驗顯示出較強的趨勢。一、對失血性血虛小鼠的補血作用實驗材料1、動物昆明種小鼠，雌雄兼有，體重1822g。2、藥物八珍鹿胎膏lg藥膏相當於0.74g原生藥；八珍鹿胎顆粒lg藥粉相當於0.295g原生藥；本發明膠囊劑大、中、小三個劑量組lg藥粉相當於原生藥3.11g。藥物在實驗前用蒸餾水配置，灌胃給藥。實驗方法昆明小鼠72隻，雌雄各半，體重1822g，隨機分成6組，每組12隻。實驗第ld，各組小鼠眼眶取血0.5ml，並檢測紅細胞(RBC)和血紅蛋白(Hb)。失血24h後再取血測RBC和Hb，並隨即灌胃給藥，對照組灌胃同體積的生理鹽水;本發明膠囊劑組分別灌胃給藥3.0、1.5、0.75g生藥/kg;八珍鹿胎膏組灌胃給藥3.Og生藥/kg;八珍鹿胎顆粒組灌胃給藥3.Og生藥/kg。連續給藥5d，每天一次，末次給藥後lh採血測定RBC和Hb。實驗結果見表l、2'表1本發明膠囊劑對失血性血虛小鼠RBC的影響(X±s)動物數劑量rbc(xio'7l)組別--(n)(g原生藥/kg)失血前給藥前給藥後對照組12'-7.34±0.714.62±0.77**5.02±0.68八珍鹿胎膏組123.07.20±0.844.37±0.54**6.18±0.48;八珍鹿胎顆粒組123.07.25±0.624.54±0.72**6.20士0.37'抑++本發明膠囊劑組123.0121.5120.75與失血前比較**代0.01，與給藥前比較抑代O.Ol，*代0.05與對照組比較++風01，+線05;與八珍鹿胎膏劑、顆粒劑比較，0.057.33±0.737.31±0.637.42±0.854.65±0.79—4.31±0.82神4.56±0.66"6.59±0.39**'6.38±0.45"5.78±0.85**表2本發明膠囊劑對失血性血虛小鼠Hb的影響(X±s)組別動物數劑量Hb(X10'7L)(n)(g原生藥/kg)失血前給藥前給藥後對照組12-116.3±7.4264,5±12.02"75.4±10.11"八珍鹿胎膏組123.0114.3±6.6760.1±7.17"102.2±6.60**—八珍鹿胎顆粒組123.0115.0±8.1465.0±9.91神102.8±5.38抑—本發明膠囊劑組123.0115.4±6.9065.l士ll.25神107.4±5.02抑—△121.5114.7±8.7060.4±13.71**104.1±7.01冊+'120.75117.6±8.9166.4±12.62"98.3±9.52助—與失血前比較**代0.01;與給藥前比較'*代0.01，8代0.05與對照組比較++代0.01;與八珍鹿胎膏劑、顆粒劑比較A/<0.05結果表明小鼠失血後RBC和Hb均顯著降低，同失血前比較均P〈0.01，說明模型製造成功。給藥5d後，各組RBC和Hb均明顯增加，但給藥各組的增加顯著高於對照組(代0.05或代O.Ol)。給藥各組在相同生藥劑量下，本發明膠囊劑組對RBC和Hb有較大的增強，統汁學上有顯著性意義(代0.05)。說明本發明膠囊劑有明顯的抗小鼠血虛作用，其作用較膏劑和顆粒劑強(代0.05)。二、本發明膠囊劑對離體子宮平滑肌的作用實驗材料1、動物SD雌性未孕大白鼠，體重250300g。2、藥物八珍鹿胎膏lg藥膏相當於0.74g原生藥；八珍鹿胎顆粒lg藥粉相當於0.295g原生藥；本發明膠囊劑大、小兩個劑量組lg藥粉相當於原生藥3.11g。藥物在實驗前用蒸餾水配置，灌胃給藥。實驗方法SD雌性未孕大白鼠40隻，體重250300g，隨機分成5組，每組8隻。即對照組；本發明膠囊劑大、小劑量組；八珍鹿胎膏組和八珍鹿胎顆粒組。動物於實驗前48h灌胃給於0.4mg/100g己烯雌酚。實驗時頸椎脫臼處死動物，剖腹，取出子宮，放入盛有樂氏液的玻璃皿中修理，小心清除殘留的脂肪組織，剪取2cm長，用針線結紮兩端，一端固定於麥氏管浴槽的通氣管的小鉤上，另一端固定和換能器相連，用平衡記錄儀記錄子宮收縮曲線。恆溫水浴保持溫度37土0.5'C，麥氏管內盛50ml樂氏液，充氧(7090個氣泡/min)。調節儀器，定標(負荷lg)。標本穩定30rain後，記錄正常收縮曲線並將不同濃度受試藥物(15%、7.5%本發明膠囊劑組；15%八珍鹿胎膏組和15VV珍鹿胎顆粒組)水溶液(靜置12h)的上清液調pH值後，取0.5ml滴入麥氏管內，觀察給藥前後子宮收縮的頻率、幅度和子宮活動力(頻率X幅度)的變化。.1.對正常狀態下離體子宮平滑肌的作用由表2、表3、表4可見，對照組子宮收縮頻率在30min內變化無明顯差異，八珍鹿胎膏、八珍鹿胎顆粒均可減慢子宮收縮頻率、降低其幅度和活動力，20rain內作用明顯(p<0.05)。本發明膠囊劑大、小劑量組均可顯著減慢頻率、降低幅度和活動力，同八珍鹿胎膏、八珍鹿胎顆粒組比較無明顯差異，但從其變化趨勢可見，在相同的生藥劑量下，以本發明膠囊劑對子宮收縮幅度和活動力影響比八珍鹿胎膏、八珍鹿胎顆粒的作用強。表2對正常狀態下離體子宮平滑肌收縮頻率的作用(X±s,n=8)tableseeoriginaldocumentpage15表3對正常狀態下離體子宮平滑肌收縮幅度的影響(X±s,n=8)tableseeoriginaldocumentpage16與對照組比較*代0.05，**代0.012.對催產素作用下離體子宮平滑肌的作用另取大鼠40隻，按上述方法分組及製備離體子宮標本。標本穩定後，記錄正常收縮曲線(為藥前)，然後加入催產素(浴槽濃度為2X10—2單位/ml)，作用10rain後再分別加入八珍鹿胎膏、顆粒、膠囊等受試藥的上清液，記錄給約後IO、20min子宮收縮。實驗結果見表5、表6、表7表5對正常狀態下離體於宮平滑肌收縮活力的影響(X土s,n=8)tableseeoriginaldocumentpage16(6a2土lR3)(6L1士2L6)八珍鹿胎81.57.4±L111.4±1,9.2±L9膏組(5d肚35^)八珍鹿胎81.57.2±'L17.8±1.0顆粒組(6a4土忍6)(19.2±17.8)w八珍鹿胎81.59.0±1.39.0±1.5膠囊組(5a9土30t2)(R7±21.1)w80.75&2士1.0ll.吐l.輛9.7±1.19.4±1.0(5&6±19.9)與藥前比較**代0.01，與催產素組比較助代O.Ol，"代0.05表6對催產素作用下離體於宮平滑肌收縮幅度的作用(X±S,n=8)組別動物數(n〉浴漕濃度(X10—3g生藥/ml)子宮平滑肌收縮幅度(g)及變化百分率a)離催產素後(min)藥後(min)101020對照組80.2u/ml5^31士a546.82±0.67林6.15±0l83**(19,&1±13.46)a513土17.3G)八珍鹿胎81.56l87土1-31林5.27土L27499±a68膏組(3a54士ia33)(—231士5^5)"八珍鹿胎81.5550±L98顆粒組(3L25土1L70)(427±^85)K八珍鹿胎81.57.86±a,膠囊組(3a35士37.40)(444±21.98)w80.755w76土0l98&44±CL63(3L02土1456)ai8±9L54)w與藥前比較*代0.05，科代0.01;與催產素組比較**代0.01表7對催產素作用下離體子宮平滑肌收縮活力的作用a±s，n=8)組別動物數(n)浴漕濃度(X10—3g生藥/ral)子宮平滑肌收縮活力(g)及變化百分率a)催產素後(min)藥後(min)^則-101020對照組8(X2u/ml32_3±1&7561.81±313457.73士3SLQ9(77.44±41.SO八珍鹿胎81.5必9土1L3385.04±16l454**54.34±17.28必.89±1&59膏組(1(E86士必86〉八珍鹿胎81.552L96土9.12顆粒組(105.54±必65)(ia76±2493)tt(7.93士27.26"八珍鹿胎81.531，9±2a3737,41土2a11膠囊組a01,56士必69)(15.79士&37〉*(&83士23,85)1880.754i96士7.405a63±l&8551,33±2L78Cl(E54士3a29)(2Z45土忍32)w(la91土3ZO)w與藥前比較'*代0.01，與催產素組比較，<0.01結果表明催產素能明顯增大大鼠子宮平滑肌收縮頻率、幅度和活動力，八珍鹿胎膏劑、顆粒劑和膠囊劑各劑量組均可對抗催產素對大鼠子宮平滑肌的興奮作用，且在相同生藥劑量下，膠囊劑作用有強於其他各劑型的趨勢。說明本發明膠囊劑比八珍鹿胎膏、八珍鹿胎顆粒對催產素作用下離體子宮平滑肌的作用強。三、止痛試驗(扭體法)實驗材料1、動物昆明種小鼠，雌雄兼有，體重1822g。2、藥物八珍鹿胎膏lg藥膏相當於0.74g原生藥；八珍鹿胎顆粒lg藥粉相當於0.295g原生藥；本發明膠囊劑大、中、小兩個劑量組lg藥粉相當於原生藥3.11g。藥物在實驗前用蒸餾水配置，灌胃給藥。實驗方法昆明小鼠60隻，雌雄各半，體重1822g，隨機分成6組，每組10隻。對照組灌胃同體積的生理鹽水；本發明膠囊劑組分別灌胃給藥3.0、1.5、0.75g生藥/kg;八珍鹿胎膏組灌胃給藥3.0g生藥/kg;八珍鹿胎顆粒組灌胃給藥3.0g生藥/kg。每天一次，連續給藥3d，給藥量0.2ml/10g，末次給藥後lh，各鼠分別腹腔注射0.6%醋酸0.2ml/只，注射後立即記錄15min內小鼠扭體數，比較給藥組和對照組扭體數的差異。實驗結果見表8。表8本發明膠囊劑的鎮痛作用(X±S,n=10)組別動物數(n)劑量(g原生藥/kg)扭體次數(15aiiii內)對照組10—49.8土10l5八珍鹿胎膏組103.036.8士ia4"八珍鹿胎顆粒組103.0本發明膠囊劑組103.0101.5100.7547.1±142與對照組比較*風05,**代0.01與八珍鹿胎膏組和八珍鹿胎顆粒組比較"代O.05結果表明本發明膠囊劑大、中劑量組以及八珍鹿胎膏組和八珍鹿胎顆粒組均能顯著的降低冰醋酸致小鼠扭體次數(P〈0.05或p<0.01)，在相同生藥劑量(3.0g原生藥/kg)下，以膠囊組作用為優。本發明膠囊劑組比八珍鹿胎膏組和八珍鹿胎顆粒組的鎮痛作用強。四、本發明膠囊劑對血瘀證大鼠血液流變學的影響實驗材料1、動物SD大白鼠，雌雄兼有，體重250300g。2、藥物八珍鹿胎膏lg藥膏相當於0.74g原生藥；八珍鹿胎顆粒lg藥粉相當於0.295g原生藥；本發明膠囊劑大、中、小三個劑量組lg藥粉相當於原生藥3.11g。藥物在實驗前用蒸餾水配置，灌胃給藥。實驗方法SD大白鼠70隻，雌雄各半，體重250300g，隨機分成7組，每組10隻。對照組、血瘀模型組、八珍鹿胎膏組、八珍鹿胎顆粒組、本發明膠囊劑大、中、小劑量組。分別灌胃同體積的生理鹽水；本發明膠囊劑組分別灌胃給藥3.0、1.5、0.75g生藥/kg;八珍鹿胎膏組灌胃給藥3.0g生藥/kg;八珍鹿胎顆粒組灌胃給藥3.0g生藥/kg。每天一次，連續給藥14d,末次給藥後lh，除對照組外，其餘7組均複製血瘀模型即大鼠皮下注射鹽酸腎上腺素(Ad)2次，劑量均為8ug/kg，2次間隔4h，在第1次注射Ad2h後，將大鼠放入冰水內5min，處置後並開始禁食。上述各組動物均於次日眼眶採血，取2ml注入肝素抗凝管(抗凝劑量為31.25單位/ml，肝素用NS配置)，搖勻備用。取l.5ml注入枸櫞酸鈉抗凝管(抗凝劑量枸櫞酸鈉用NS配成38%的溶液，取150ul加入矽化試管中)，搖勻備用。取lml肝素抗凝血加入粘度計轉筒中，樣品溫度在恆溫水浴中保持37土0.5'C轉換高、低切開關，記錄高、低切粘度標度值(高切200/s，低切40/s)，將其輸入計算機，得出全血粘度值，結果見表9。取底端平整的毛細離心管，插入剛混勻的肝素抗凝血中，待血進入毛細管內2/3處，封住上埠，下端插入橡皮泥中，垂直豎立，並記時。lh後，用血沉壓積板讀出血沉值，結果見表9。將測定完血沉的毛細離心管，用3F—3型高速微量離心機離心5min,轉速12000rpm,再用血沉壓積板讀出紅細胞壓積值，結果見表10。再將測定壓積的毛細管在溫度為56±0.5'C的水浴箱中水浴5min後，用同樣離心機離心5min,轉速12000rpm，取出後用讀數顯微鏡測定毛細管內血漿長度和纖維蛋白原長度，按下式計算纖維蛋白原含量，結果見表IO。纖維蛋白原含量(g/L)4千維蛋白原長度X100/血漿長度將做完全血粘度的血吸回抗凝管，用80-2型離心機離心血漿，轉速3000rpm，時間15min。取lml血漿，按測定全血粘度的方法測定血漿粘度，結果見表9。用加樣器吸取lml枸櫞酸鈉抗凝血加入容量為5ml的長頸圓球形玻璃瓶中，將其放在血小板粘附儀轉盤上，以5rpm的轉速旋轉15min後取下，取30y1旋轉前和旋轉後的抗凝血放入1%的草酸銨稀釋劑中，測定旋轉前後血中的血小板數，然後按下式計算血小板粘附率，結果見表10。血小板粘附率(％)=(旋轉前血小板數-旋轉後血小板數)X100/旋轉前血小板數表9本發明膠囊劑對血瘀證大鼠血液流變學的影響(X土s)幼則動物數劑量("g生全血高切粘度全血低切粘度血槳粘度還原粘度血沉迅力'J(n)藥/kg)(rapa.s)(即a.s)(mpa.s)(mpEus)正常對照組10一3.04±0.237.55±1.622.36±0.154.66±0.520.94±0.26模型對照組10_5.69±1.15"13.75±2.92**4.12士0.76"11.76士2.8t"2.38±0.74*"八珍鹿胎顆微103.03.91±0.52鵬8.58±1.58b2.94土0.34"7.65±1.09*1.65±0.60"八珍鹿胎膏組103.04.47±1.11"9.30±0.94"3.31±0.74"9.02±3.271.68±0.62"本發明膠囊劑組103.03.88士0.51"8.34±1.76"2.92士0.34"7.20±1.41"1.61士0.31"101.55.14±0.529.58±1.84"3.50士0.35"9.站±1.921.64±0.50'100.755.66±0.459.87±1.88"3.92±0.339.98±1.641.66±0.55'與正常對照組比較"風01;與模型對照組比較*代0.05，抑代O.Ol表IO本發明膠囊劑對血瘀證大鼠血液流變學的影響(X±s)如幼l動物數劑量紅細fiffi積纖維蛋白原血小板數血小板粘附率(n)(g生藥/kg)(%)(mg/U(X10Vl))正常對照組1043.75±2.082.38±0.38234±5621.90±7.04模型對照組10-39.88士1.023.47±0.78"247±6537.00土5.78"八珍劇臺顆粒組103.040.15±3.162.79±0.45"232±4627.43±4.15"八珍鹿胎膏組103.039.76±2.522.81士0.51"224±5528.70±5.06*本發明，劑組103.040.22±3.482.74±0.39"240±4822.28±4.75"*101.540.00±3.022.91土0.24"249±6526.54±6.02100.7539.97±2.853.01±0.26236±6229.33±5.35*與正常對照組比較"代0.01;與模型對照組比較#代0.05,**代0.01與八珍鹿胎膏組、八珍鹿胎顆粒組比較+代0.05結果表明(1)模型組與正常對照組比較，全血高、低切粘度、血槳粘度、還原粘度、血沉、纖維蛋白原、血小板粘附率均顯著升高(P<0.01)，說明模型複製成功。(2)與模型組比較，八珍鹿胎膏組、八珍鹿胎顆粒組以及本發明膠囊劑組均可使上述指標明顯降低(P<0.01或P95%。(2)顯效治療後各症狀明顯減輕，證候積分值減少》70%，<95%。，l項以上積分值降低兩個等級。，1項以上積分值降低一個等級。，積分值未降低。(3)有效治療後各症狀有所減輕，證候積分值減少》30%，<70%。(4)無效治療後各症狀無改善或有加重，證候積分值減少<30%。4、安全性評價標準一級安全，無任何不良反應。二級比較安全，如有不良反應，不需做任何處理，可繼續給藥。三級有安全性問題，有中等程度不良反應，做處理後可繼續給藥。四級因不良反應中止試驗。五、治療結果以上試驗組(本發明組)120例，剔除7例；試驗組113例經臨床治療後，用於經血不調觀察愈顯率為48.25%，總有效率為83.33%;用於經期腹痛觀察愈顯率為61.4%，總有效率為85.96%;用於中醫證候療效觀察的愈顯率為45.62%,總有效率為90.35%,觀察過程中未發現明顯不良反應。本發明具體實施例方式實施例l、取原料鹿胎450份、鹿角膠150份、熟地黃303份、人參38份、當歸38份、川芎38份、白芍38份、白朮38份、茯苓114份、甘草38份；鹿胎洗淨，切成小塊，加水煎煮3次，第一次加8倍量水煎2h，第二、三次各加7倍量水煎lh，趁熱過濾，合併濾液，濃縮成清膏，減壓乾燥，冷凍粉碎，過成80目細粉，備用。鹿角膠冷凍粉碎，過80目細粉，取處方量細粉備用。將茯苓粉碎，過成100目篩，取l/3處方量細粉，60)輻照，備用。取人參粗粉、當歸、川芎、白朮用70%乙醇回流提取2次，加溶劑倍數分別為5倍、4倍，回流時間依次為1.5h，1.5h。合併兩次濾液(藥渣另器保存)，減壓回收乙醇，溶液濃縮成清膏。取熟地黃、白芍、2/3茯苓、甘草與上渣混合，加水煎煮3次，加水量分別為9倍、9倍、8倍，煎煮時間依次為1.5h、1.5h、lh。合併三次濾液(藥渣棄)，減壓濃縮，放涼，加入乙醇，使含醇量達60%，冷藏24h,過濾，濾液回收乙醇，所得溶液減壓濃縮，再與茯苓細粉、醇提清膏混勻，減壓乾燥(6(TC)，粉碎並過成100目細粉，與鹿胎粉、鹿角膠粉混勻後用乙醇制軟材，20目篩制粒，5(TC以下乾燥，14目整粒，裝膠囊，即得本發明膠囊劑。實施例2、取原料鹿胎450份、鹿角膠150份、熟地黃303份、人參38份、當歸38份、川芎38份、白芍38份、白朮38份、茯苓114份、甘草38份；鹿胎洗淨，切成小塊，加水煎煮3次，第一次加8倍量水煎2h，第二、三次各加7倍量水煎lh，趁熱過濾，合併濾液，濃縮至相對密度為1.321.35(60°C)的清膏，減壓乾燥，冷凍粉碎，過成80目細粉，備用。鹿角膠冷凍粉碎，過80目細粉，取處方量細粉備用。將茯苓粉碎，過成IOO目篩，取l/3處方量細粉，60)輻照，備用。取人參粗粉、當歸、川芎、白朮用70%乙醇回流提取2次，加溶劑倍數分別為5倍、4倍，回流時間依次為1.5h，1.5h。合併兩次濾液(藥渣另器保存)，減壓回收乙醇，溶液濃縮至相對密度為1.321.35(60°C)的清膏。取熟地黃、白芍、2/3茯苓、甘草與上渣混合，加水煎煮3次，加水量分別為9倍、9倍、8倍，煎煮時間依次為1.5h、1.5h、lh。合併三次濾液(藥渣棄)，減壓濃縮至相對密度1.15(60'C)，放涼，加入乙醇，使含醇量達60%，冷藏24h，過濾，濾液回收乙醇，所得溶液減壓濃縮至相對密度1.321.35(60°C)，再與茯苓細粉、醇提清膏混勻，減壓乾燥(60°C)，粉碎並過成100目細粉，與鹿胎粉、鹿角膠粉混勻後用乙醇制軟材，20目篩制粒，5(TC以下乾燥，14目整粒，裝膠囊，即得本發明膠囊劑。權利要求1、一種用於養血益氣、調經溫寒的中藥組合物，其特徵在於它是通過以下方法製成的膠囊劑稱取原料鹿胎450g、鹿角膠150g、熟地黃303g、人參38g、當歸38g、川芎38g、白芍38g、白朮38g、茯苓114g、甘草38g；鹿胎洗淨，切成小塊，加水煎煮3次，第一次加8倍量水煎2h，第二、三次各加7倍量水煎1h，趁熱過濾，合併濾液，濃縮成清膏，減壓乾燥，冷凍粉碎，過成80目細粉，備用。鹿角膠冷凍粉碎，過80目細粉，取處方量細粉備用。將茯苓粉碎，過成100目篩，取1/3處方量細粉，60Co輻照，備用。取人參粗粉、當歸、川芎、白朮用70％乙醇回流提取2次，加溶劑倍數分別為5倍、4倍，回流時間依次為1.5h，1.5h。合併兩次濾液(藥渣另器保存)，減壓回收乙醇，溶液濃縮成清膏。取熟地黃、白芍、2/3茯苓、甘草與上渣混合，加水煎煮3次，加水量分別為9倍、9倍、8倍，煎煮時間依次為1.5h、1.5h、1h。合併三次濾液(藥渣棄)，減壓濃縮，放涼，加入乙醇，使含醇量達60％，冷藏24h，過濾，濾液回收乙醇，所得溶液減壓濃縮，再與茯苓細粉、醇提清膏混勻，減壓乾燥(60℃)，粉碎並過成100目細粉，與鹿胎粉、鹿角膠粉混勻後用乙醇制軟材，20目篩制粒，50℃以下乾燥，14目整粒，裝膠囊，即得本發明膠囊劑。2、根據權利要求l所述的一種用於養血益氣、調經溫寒的中藥組合物的製備方法,其特徵在於稱取原料鹿胎450g、鹿角膠150g、熟地黃303g、人參38g、當歸38g、川芎38g、白芍38g、白朮38g、茯苓114g、甘草38g;鹿胎洗淨，切成小塊，加水煎煮3次，第一次加8倍量水煎2h，第二、三次各加7倍量水煎lh，趁熱過濾，合併濾液，濃縮至相對密度為1.321.35(60°C)的清膏，減壓乾燥，冷凍粉碎，過成80目細粉，備用。鹿角膠冷凍粉碎，過80目細粉，取處方量細粉備用。將茯苓粉碎，過成100目篩，取l/3處方量細粉，60)輻照，備用。取人參粗粉、當歸、川芎、白朮用70%乙醇回流提取2次，加溶劑倍數分別為5倍、4倍，回流時間依次為L5h,1.5h。合併兩次濾液(藥渣另器保存)，減壓回收乙醇，溶液濃縮至相對密度為1.321.35(6(TC)的清膏。取熟地黃、白芍、2/3茯苓、甘草與上渣混合，加水煎煮3次，加水量分別為9倍、9倍、8倍，煎煮時間依次為1.5h、1.5h、lh。合併三次濾液(藥渣棄)，減壓濃縮至相對密度1.15(60°C)，放涼，加入乙醇，使含醇量達60%,冷藏24h,過濾，濾液回收乙醇，所得溶液減壓濃縮至相對密度1.321.35(6CTC)，再與茯苳細粉、醇提清膏混勻，減壓乾燥(6(TC)，粉碎並過成IOO目細粉，與鹿胎粉、鹿角膠粉混勻後用乙醇制軟材，20目篩制粒，50'C以下乾燥，14目整粒，裝膠囊，即得本發明膠囊劑。全文摘要本發明涉及一種用於養血益氣、調經溫寒的中藥組合物的製備方法，該中藥組合物是由鹿胎、鹿角膠、熟地黃、人參、當歸、川芎、白芍、白朮、茯苓、甘草製備而成的膠囊劑；該藥具有極好的養血益氣，調經溫寒之功效，與現有技術相比，本發明在治療方面較原有製劑有更顯著的效果，生產工藝精製，起效迅速，為臨床增加了新的可選擇劑型，克服了現有製劑的不良嗅味，提高了患者的順應性。文檔編號A61K9/48GK101564465SQ200910147700公開日2009年10月28日申請日期2009年6月12日優先權日2009年6月12日發明者川羅申請人:陝西東泰製藥有限公司