具有緩解體力疲勞及增強免疫力功能的保健食品組合物的製作方法

2023-05-31 14:52:21

本發明涉及保健食品領域，尤其是涉及一種具有緩解體力疲勞及增強免疫力功能的保健食品組合物。

背景技術：

隨著社會的進步，城市化進程的發展，人們的日常飲食和生活習慣發生了巨大的轉變，伴隨而來的是一些以疲勞為首，免疫力低下，三高(高血糖、高血壓、高血脂)為主的都市型疾病。發病人群的年齡範圍不斷擴大，而且朝年輕化趨勢發展；人群數量逐年增長。我國的易疲勞人群主要集中在從事科研、ti行業人事及記者、演藝人員、市場營銷者，國家中、高層公務員，企業中、高層管理者，發病率高達50％。成人糖尿病的發病率由十幾年前的1％增長到目前的2.5％，並以每年1‰的速度遞增，死亡率已上升至第3位，僅排在腫瘤、心血管疾病之後，成為嚴重危害人民健康的慢性殺手之一。目前，我國糖尿病的幹預還停留在服用藥物、注射胰島素階段。為此，開發一些緩解疲勞、增強免疫力，同時可以給糖尿病患者服用的保健食品具有重大的社會意義。目前，市場上有很多類似的產品，但是仍有不足，有些產品為了改善口感，添加了很多糖和添加劑，不適合怕糖人群，而且副作用多；有些產品功能單一，針對性差，起效慢，安全性差。

技術實現要素：

本發明的目的在於提供一種具有緩解體力疲勞及增強免疫力功能的保健食品組合物，其以傳統養生理論為產品設計的基本依據，添加了具有生物活性的天然植物為主要原料，根據現代營養學理論添加人體必需的豐富的胺基酸成分，還含有瓜拉納提取物、西洋參提取物、白芸豆提取物和維生素成分，它複合了多種營養成分，具有緩解體力疲勞和增強免疫力的功能。其中瓜拉納提取物和西洋參提取物是衛生部批准的可用於保健食品的天然植物，本配方具有配比合理，有效成分含量高，具有顯著的緩解體力疲勞及增強免疫力功能，具有很好的市場競爭力。同時，本發明為低糖配方，可減少人體對糖的攝入，功效成分白芸豆提取物可抑制人們在日常飲食中對澱粉類物質的吸收，從而降低血糖、血壓、肥胖等疾病的風險。

為解決背景技術中提到的問題，本發明的實施方式提供了一種具有緩解體力疲勞及增強免疫力功能的保健食品組合物，其配方包括：

具有緩解體力疲勞及增強免疫力功能的保健食品組合物，其配方包括：

具有緩解體力疲勞及增強免疫力功能的保健食品組合物，其配方包括：

具有緩解體力疲勞及增強免疫力功能的保健食品組合物，其配方包括：

具有緩解體力疲勞及增強免疫力功能的保健食品組合物中，該配方還包括：

維生素b10.06-0.09重量份；

維生素b60.05-0.09重量份。

例如：維生素b10.08重量份；維生素b60.08重量份。

該配方是低糖配方，以木糖醇、麥芽糖醇、赤蘚糖醇進行復配，但不局限於上述三者健康糖。

本發明的具有緩解體力疲勞及增強免疫力功能的保健食品組合物中，所述西洋參提取液的提取方法如下：

s1、西洋參前處理：將西洋參淨選後切成0.5～1.0cm的片狀物；

s2、提取：100kg西洋參投於3噸多功能提取罐，加入10倍量(w/r)50％食用乙醇，加熱回流3hr，收集提取液，殘渣加入10倍量50％實用乙醇回流3hr，收集提取液，殘渣再加入8倍量50％食用乙醇，回流1hr收集收集提取液；

s3、沉降i：合併三次提取液，置沉降桶內，沉降24小時，取上清液過濾；

s4、濃縮i：上述過濾液置於回收塔中在90℃以下中減壓，回收至無醇味；

s5、沉降ii：在上述過濾液中加入適量95％乙醇，並攪拌1小時，在沉降桶內沉降24小時後將上清液過濾；

s6濃縮ii：將上述過濾於回收塔中，在90℃以下，減壓回收。濃縮至相對密度為1.10～1.20浸稠膏。

s7、乾燥：將上述稠浸膏放入潔淨不繡鋼盤中，在真空乾燥箱中，在90℃以下，減壓真空乾燥；

s8、粉碎：將乾燥物用粉碎機粉碎，過100目篩即得西洋參提取物固體粉末。

本發明的具有緩解體力疲勞及增強免疫力功能的保健食品組合物中，所述瓜拉納提取工藝的提取工藝為：

s1、按比例稱取瓜拉納籽，用6～10倍量90％濃度的乙醇回流提取3次，每次提取3小時，此處按比例的含義為：1份瓜拉納籽，用6-10倍量90％乙醇處理；

s2、過濾，合併濾液，減壓回收乙醇後，減壓濃縮至60℃，得到浸膏；

s3、將浸膏進行噴霧乾燥，其中，進風溫度為150-180℃，出風溫度為60-90℃，從而得到噴霧乾燥細粉，即得瓜拉納提取。

含前文所述的保健食品組合物的製劑可以是飲料、膠囊劑、片劑、咀嚼片、顆粒劑、口服液、軟膠囊、膏狀物、流汁及半流汁。

製備前文所述的製劑的方法為該劑型的常規工藝。

所述的緩解體力疲勞及增強免疫力功能的保健食品的配方依據：

1.西洋參:為五加科植物西洋參panaxquinquefoliuml.的乾燥根。西洋參提取物主要有功效成分為西洋參皂甙等化合物和微量元素。其中主要生理活性物質為西洋參皂苷。十八世紀初期我國開始使用西洋參，至今已有200多年的歷史。

西洋參具有增強免疫力、增強體質、抗缺氧、緩解體力疲勞等作用，是衛生部確定的可用於保健食品的物品，日常生活中有為數不少的人隨身攜帶西洋參或其製劑以緩解體力疲勞。研究報導西洋參能促進某些細胞因子的分泌來進一步發揮免疫調節作用。它對免疫抑制造成的免疫低下有明顯的保護作用。西洋參具有滋補強壯，養血養陰，健脾益氣之功效，並具有廣泛的生物學活性，主要有效成分為西洋參多糖、皂甙等化合物和微量元素，可作用於多種免疫活性細胞，促進某些細胞因子的分泌來進一步發揮免疫調節作用。它對免疫抑制劑造成的免疫低下有明顯的保護作用，因而對臨床腫瘤放療患者，慢性放射病患者及各種原因造成免疫低下患者可以起到很有效的輔助治療作用。

2.功效成分瓜拉納是源自於亞馬遜流域的天然植物，含有咖啡因、茶鹼、可可鹼、單寧、皂角鹼、多種兒茶酚和其他微量物質，千百年來被亞馬孫流域的印第安人視為賜予他們青春、美麗和健康長壽的源泉。研究表面，瓜拉納是作為一種緩解體力疲勞的成分，可用於減肥，神經系統的刺激品，記憶力的提高，行血、收斂、阻止脂肪形成及分解脂肪、壯陽、細胞保護修復(由亞硝酸鹽引起的dna破壞)和抗氧化作用。研究表面瓜拉納在很低的劑量(1.2mg/l)也能抑制細胞膜脂過氧化過程，而在高的劑量下(2％)也不產生明顯的毒性作用，這對保持生命活力和延長壽命有著十分重要的意義。瓜拉納中含有的天然咖啡因是中樞興奮藥中的清醒藥，能提高細胞內camp的含量，低、中攝入量時其作用有：興奮大腦皮質，振奮精神，提高其注意力、自信心以及工作效率和積極性；增強警覺性和減少疲乏感，提高警惕性和維持持久的工作能力；增強識別能力，縮短快速與選擇反應時間，並能提高瞬時記憶力

3.功效成分牛磺酸不僅參與維持機體內環境穩態，而且在中樞、消化、生殖和內分泌等系統生理功能正常發揮具有重要的調節作用，機體內幾乎所有正常生理功能的維持和調節都需要牛磺酸的參與，其作用可與水分子的作用相提並論。《中藥全書》中提到，牛磺酸具有抗驚厥作用以及鎮痛作用。牛磺酸可調節中樞神經遞質的釋放和活性、可提高機體抗自由基損傷的能力、可影響甲狀腺激素代謝、對心肌細胞鈣離子的調節、能提高或穩定機體內骨骼肌組織的功能胺基酸的濃度，因此牛磺酸在抗運動疲勞、增強免疫力方面有著廣闊的前景。

4.功效成分白芸豆提取物提取自白芸豆，採用特殊萃取技術從白芸豆中提取的一種活性原料，也被稱為「澱粉阻斷劑」或「碳水化合物阻斷劑」，因為它能抑制α-澱粉酶對澱粉的消化作用，從而減少人體對碳水化合物熱量的吸收，當結合適當的飲食和運動計劃時，它能促進體重控制。而且，根據初步的研究表明，它能調節血糖維持正常水平。

5.功效成分複合維生素(維生素b1、b6)，調節體內代謝。維生素是維持身體健康所必需的一類有機化合物。這類物質在體內既不是構成身體組織的原料，也不是能量的來源，而是一類調節物質，在物質代謝中其重要作用。這類物質由於體內不能合成或合成量不足，所以雖然需要量很少，但必須經常由食物供給。

–維生素b1鹽酸鹽，是最早被人們提純的維生素，作為許多酶的輔酶參與物質代謝，是參與體內代謝最多的一種維生素，與蛋白質、脂肪、碳水化合物的代謝有密切關係。維持人體的正常新陳代謝，以及神經系統的正常生理功能。

–維生素b6鹽酸鹽，是一種與體內蛋白的合成、胺基酸的代謝密切相關的營養物質，它可以促進人體對維生素b2、b12和鐵、鋅的吸收。

本發明具有如下有益效果：

本發明保健品以咖啡因和總皂苷、牛磺酸、總胺基酸為功效成分，經安全性毒理試驗、增強免疫力及緩解體力疲勞的功能試驗、衛生學和質量穩定性試驗表明，該保健品安全無毒，具有顯著的增強免疫力及緩解體力疲勞保健功能。此外，由於本發明為低糖配方，同時可抑制人們在日常飲食中對澱粉類物質的吸收，從而降低血糖、血壓、肥胖等疾病的風險。

具體實施方式

為了使本發明實現的技術手段、創作特徵、達成目的與功效易於明白了解，下面結合具體實施例，進一步闡述本發明。

本發明提供了一種具有緩解體力疲勞及增強免疫力功能的保健食品組合物，其配方包括：瓜拉納提取物8-13重量份；西洋參提取物1.5-3.6重量份；牛磺酸80-86重量份；l-異亮氨酸4-6重量份；l-亮氨酸0.8-2重量份；l-纈氨酸1-3重量份；l-色氨酸0.01-0.06重量份；l-苯丙氨酸0.01-0.05重量份；l-蘇氨酸0.01-0.04重量份；l-蛋氨酸0.01-0.07重量份；l-賴氨酸鹽酸鹽0.5-1.9重量份；l-天門冬氨酸0.3-1.6重量份；甘氨酸8-14重量份；l-丙氨酸9-13重量份；白芸豆提取物76-83重量份。

作為對上述配方的優化配方為：具有緩解體力疲勞及增強免疫力功能的保健食品組合物，其配方包括：瓜拉納提取物8.5-12.8重量份；西洋參提取物1.6-3.4重量份；牛磺酸80.5-85重量份；l-異亮氨酸4.3-5.9重量份；l-亮氨酸0.9-1.9重量份；l-纈氨酸1.2-2.8重量份；l-色氨酸0.01-0.05重量份；l-苯丙氨酸0.01-0.04重量份；l-蘇氨酸0.01-0.03重量份；l-蛋氨酸0.01-0.06重量份；l-賴氨酸鹽酸鹽0.55-1.8重量份；l-天門冬氨酸0.4-1.6重量份；甘氨酸8.6-13重量份；l-丙氨酸9.5-12.9重量份；白芸豆提取物75-82.5重量份。

作為對上述配方的進一步優化在於，具有緩解體力疲勞及增強免疫力功能的保健食品組合物，其配方包括：瓜拉納提取物8.9-12.5重量份；西洋參提取物1.9-3.2重量份；牛磺酸81-84重量份；l-異亮氨酸4.5-5.8重量份；l-亮氨酸1-1.8重量份；l-纈氨酸1.6-2.6重量份；l-色氨酸0.01-0.04重量份；l-苯丙氨酸0.01-0.03重量份；l-蘇氨酸0.01-0.025重量份；l-蛋氨酸0.01-0.05重量份；l-賴氨酸鹽酸鹽0.6-1.5重量份；l-天門冬氨酸0.6-1.3重量份；甘氨酸9-12.5重量份；l-丙氨酸0-12.5重量份；白芸豆提取物79-81重量份。

實施例1：飲料製劑

以下是功效成分最佳配方中各功效成分的含量，以下述比例配成100ml的飲料：

本實施例中的飲料配方除上述原料外，還包括b族維生素，其中b10.8mg/100ml；b60.8mg/100ml；，以及白芸豆提物0.8g/100ml。

將瓜拉納提取物、西洋參提取物、牛磺酸、l-異亮氨酸、l-亮氨酸、l-纈氨酸、l-色氨酸、l-苯丙氨酸、l-蘇氨酸、l-蛋氨酸、l-賴氨酸鹽酸鹽、l-天門冬氨酸、甘氨酸、l-丙氨酸及其他輔料(酸味劑、香精等)混合溶解→uht135℃3～5秒殺菌→調香→碳酸化→4～10℃灌裝封蓋→貼標、打碼→包裝入庫。

根據實施例1配比得到的產品，所體現的緩解體力疲勞和增強免疫力效果更好。

按照本工藝流程生產的具有緩解體力疲勞功能的保健食品有效成分含量和質量都很穩定。經權威部門上海市疾病預防控制中心對該保健品進行的安全性和功能試驗，結果表明，該保健品安全無毒，具有顯著的緩解體力疲勞及增強免疫力作用。具體試驗內容與結果如下:

一、安全性試驗

該保健品的ⅰ和ii階段的毒理安全試驗表明:該產品安全無毒。上海市疾病預防控制中心對該保健品的ⅰ和ii階段毒理安全試驗表明:

(1)小鼠急性經口毒性試驗，雌雄小鼠經口ld50值大於20000mg/kgb.wt，表明該保健品屬無毒級。

(2)小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗:劑量達10000mg/kgb.wt，未檢出對雌雄小鼠骨髓嗜多染紅細胞的致微核作用。

(3)小鼠精子畸形試驗:劑量達10000mg/kgb.wt，未檢出對雄性小鼠精子的誘變活性。

(4)ames試驗:平板摻入法，劑量達5mg/皿.，加及不加s9，對標準測試菌ta97,ta98,ta100和ta102均未檢出明顯的誘變活性。因此，該保健品沒有致畸、致突變和致癌性。

(5)30天餵養試驗，樣品以100,200和400mg/kgb.wt劑量(相當於推薦劑量的25,50和100倍的實際攝入量時)，餵養大鼠30天，大鼠的生長發育及臟器、血液學、血紅素、紅細胞、白細胞等生化病理指標均未檢出明顯有害作用，未見明顯不良影響。該樣品30天餵養試驗的最大未觀察到有害作用劑量(noael值)為4000mg/kg/d

二、緩解體力疲勞功能試驗

根據衛生部《保健食品檢驗與評價技術規範》(2003版)對緩解體力疲勞保健食品功能學評價標準，上海市疾病預防控制中心對該保健品的功效經過動物實驗表明，本發明保健食品具有顯著的緩解體力疲勞及增強免疫力功能。

2.1實驗動物：icr種小白鼠，許可證號：scxk(滬)2007-0005，體重18-22克，雌性，由上海斯萊克實驗動物有限責任公司提供的清潔級動物(本站spf動物房飼養)。實驗動物飼養室溫度20-25℃，相對溼度40-70％，實驗動物許可證號：syxk(滬)2007-0008，動物飼養料，由蘇州雙獅實驗動物飼料科技服務有限公司提供，登記證號：蘇e飼生字(2002)006。

2.2實驗方法：

1)劑量設計：本樣品人體推薦劑量為每日120ml/60kg，本實驗設低、中、高三個劑量組，分別為10、20、60ml/kg，相當於人體推薦劑量的5、10、30倍，另設蒸餾水空白對照組。

2)樣品處理：由於樣品推薦劑量過大，超過動物最大承受量，故直接稱取樣品配製方法中獲得的供試液0.25、0.5、1.5ml分別加蒸餾水至20ml，即為低、中、高三個劑量組的供試液。

3)給樣途徑：灌胃，灌胃容量0.4ml/20g體重。

4)受試物的給予:分別取樣品1000,2000,6000mg，加雙蒸水至200m1配製成各組受試液(存放於4℃冰箱，每3天配製一次)，溶劑對照組給子雙蒸水，各組每日以20m1/kgb.wt.的量經口灌胃，連續30d。

5)受試物對動物體重的影響：取昆明種小白鼠160隻，逐只稱重，按體重分層隨機分為16組，每組10隻。以每四組為一個實驗組，按劑量設計連續餵養30天，各組動物每周稱量體重。

6)遊泳時間測定：末次經口灌胃給予受試物30min後，置尾根部負荷5％體重鉛皮的小鼠於遊泳箱中，水深大於30cm，水溫25℃士1.0℃，記錄小鼠從遊泳開始至死亡的時間，作為小鼠遊泳時間。

7)乳酸測定：取上述按劑量設計連續餵養30天後的三劑量組及各對照組動物各一組，測血乳酸並在末次給氧後30分鐘，在溫度30℃水中遊泳10分鐘，取出，測血乳酸，熱風烘乾，安靜20分鐘後，再測血乳酸。

8)尿素氮測定：取上述按劑量設計連續餵養30天後的三劑量組及各對照組動物各一組，於末次灌胃後30分鐘，將小鼠放入30℃水中遊泳90分鐘，取出，熱風烘乾，使安靜，取鼠血，離心，取血清測尿素氮。

9)肝糖元測定：取小白鼠40隻，隨機分為五組，每組10隻。按劑量設計連續餵養30天，於末次灌胃後30分鐘，取出小鼠肝臟，測肝糖原。

2.3結果

2.3.1對體重的影響見表1

表1對小鼠體重的影響

由上表可見：樣品對動物體重無明顯影響。

2.3.2對小鼠負重遊泳時間的影響見表2

表2樣品對小鼠負重遊泳時間的影響。

●*p＜0.05與糖對照組相比(經方差分析)

由上表可見，樣品60ml/kg劑量組與對照組相比，有顯著性差異。

2.3.3對小鼠運動後血乳酸的影響見表3

表3小鼠運動後血乳酸曲線下面積的影響

●*p＜0.05與糖對照組相比(經方差分析)

由上表可見，樣品60ml/kg劑量組動物血乳酸曲線下面積與糖對照組相比，有顯著性差異。

2.3.4對小鼠運動後血清尿素氮的影響見表4

表4樣品對小鼠運動後血清尿素氮的影響

●*p＜0.05與糖對照組相比(經方差分析)

由上表可見，樣品60ml/kg劑量與對照組相比，有顯著性差異。

2.3.5對小鼠運動後肝糖原的影響見表4

表4樣品對小鼠運動後肝糖原的影響

由上表可見，樣品60ml/kg劑量組與對照組相比，有顯著性差異。

2.4總結：經口給予小鼠不同劑量樣品日加滿牌能量飲料30天後，具有緩解體力疲勞功能。

三、增強免疫力功能實驗研究

根據衛生部《保健食品檢驗與評價技術規範》(2003版)對緩解體力疲勞保健食品功能學評價標準，上海市疾病預防控制中心對該保健品的功效經過動物實驗表明，本發明保健食品具有顯著的增強免疫力功能。

3.1實驗動物：清潔級icr種小白鼠，許可證號：scxk(滬)2007-0005，體重17-23克，雌性，由上海斯萊克實驗動物有限責任公司提供的清潔級動物(本中心spf動物房飼養)。實驗動物飼養室溫度20-25℃，相對溼度40-70％，實驗動物許可證號：syxk(滬)2007-0008，動物飼養料，由蘇州雙獅實驗動物飼料科技服務有限公司提供，登記證號：蘇e飼生字(2002)006。

3.2實驗方法：

劑量設計：本樣品人體推薦劑量為每日120ml/60kg，本實驗設低、中、高三個劑量組，分布為10、20、60ml/kg，分別相當於人體推薦劑量的5、10、30倍，對照組以蒸餾水灌胃。

給樣途徑：灌胃，灌胃容量0.4ml/20g體重。

3.3實驗結果

3.3.1三受試物對小鼠體重的影響:按體重隨機分層，分為16組，每組10隻，每四組為一實驗組，按劑量設計連續餵養30天，在實驗中期和實驗末分別稱重一次。

樣品(免疫一組)對動物體重(克)的影響

由上表可見，樣品各劑量組與對照組相比，均無顯著性差異。

樣品(免疫二組)對動物體重(克)的影響

由上表可見，樣品各劑量組與對照組相比，均無顯著性差異。

樣品(免疫三組)對動物體重(克)的影響

由上表可見，樣品各劑量組與對照組相比，均無顯著性差異。

樣品(免疫四組)對動物體重(克)的影響

由上表可見，樣品各劑量組與對照組相比，均無顯著性差異。

3.1.1.血清溶血素試驗：

動物連續給樣30天後，用2％(v/v)srbc免疫動物5天後，眼眶採血，頸椎脫臼處死，分離血清。在96孔微量血凝板上加25μl生理鹽水，再分別在第一排加25μl血清，以後各排作對倍稀釋，每孔加1％srbc100μl，振蕩後37℃放置3小時，當血球對照出現沉落後觀察結果。

血清溶血素試驗

●p＜0.05與對照組相比(經方差分析)

經統計學分析：樣品60ml/kg劑量組與對照組相比，有顯著性差異。

3.1.2.抗體生成檢測試驗：

連續給樣30天後，將脫纖維綿羊紅細胞免疫5天後的小鼠頸椎脫臼處死，取出脾臟放在盛有hank's液的平皿內，製成脾細胞懸液。將瓊脂糖配成1％水溶液，水浴45℃煮30min，與等量ph7.2-7.4雙倍hanks液混合，分裝小試管，每管0.5m1，再向管內加入50μl10％srbc，脾細胞懸液20u1做兩個平行樣，迅速混勻後，傾倒於瓊脂糖薄層玻片上，待瓊脂凝固後，將玻片水平扣放在片架上，放入二氧化碳培養箱中孵育1.5h，然後將補體加入到玻片架凹槽內，繼續溫育1.5h，計數溶血空斑數。結果用方差分析進行統計。

抗體生成檢測試驗

●p＜0.05與對照組相比(經方差分析)

經統計學分析：樣品60ml/kg劑量組與對照組相比，有顯著性差異。

3.1.3胸腺指數、脾指數的測定：

動物連續給樣30天後：每鼠稱重，頸椎脫臼處死，取胸腺、脾臟稱重，分別計算胸腺指數和脾指數。

胸腺指數、脾指數

●p＜0.05與對照組相比(經方差分析)

經統計學分析：樣品各劑量組與對照組相比，均無顯著性差異。

3.1.4.小鼠碳廓清試驗

小鼠尾靜脈注射1：3稀釋的印度墨汁，待墨汁注入，立即計時。注入墨汁後2、10分鐘，分別從眼靜脈叢取血20μl，並將其加到2mlna2co3溶液中，用分光光度計在600nm波長處測od值，以na2co3溶液作空白對照。根據動物體重、肝重、脾重計算吞噬指數，結果以方差分析進行統計。

碳廓清試驗

●p＜0.05與對照組相比(經方差分析)

經統計學分析：樣品60ml/kg劑量組與對照組相比，有顯著性差異。

3.1.5.cona誘導的小鼠脾淋巴細胞轉化試驗

動物連續給樣30天後，頸椎脫臼處死，取脾臟，製成脾細胞懸液，調整細胞濃度為2*106個/ml，將細胞懸液分兩孔加入24孔培養板，每孔1ml，一孔加50μlcona液(相當於5μg/ml)，另一孔作為對照，置5％co2，37℃培養72h。培養結束前4h，每孔輕輕吸去上清液0.7ml，加入0.7ml不含小牛血清的prm1640培養液，同時加入mtt(5mg/ml)50μg/孔，繼續培養4h，培養結束後，每孔加入1ml酸性異丙醇，吸打混勻，使紫色結晶完全溶解後，以570nm波長進行比色，結果用方差分析進行分析。

cona誘導的小鼠脾淋巴細胞轉化試驗

●p＜0.05與對照組相比(經方差分析)

經統計學分析：樣品60ml/kg劑量組與對照組相比，有顯著性差異。

3.1.6.dth測定

致敏：動物連續給樣30天後，每鼠腹部去毛，範圍約3*3cm，將1％的dnfb溶液50μl均勻塗抹致敏。

dth的產生與測定：5日後，用1％dnfb溶液10μl均勻塗抹於小鼠右耳(兩面)進行攻擊。24小時後，頸椎脫臼處死小鼠，用打孔器取下直徑8mm的左右耳片，稱重並計算腫脹度。

dht測定結果

●p＜0.05與對照組相比(經方差分析)

經統計學分析：樣品60ml/kg劑量組與對照組相比，有顯著性差異。

3.1.7.nk細胞活性測定

動物連續給樣30天後：頸椎脫臼處死，取脾臟，製成脾細胞懸液(效應細胞)，取傳代後24h，yac-1細胞加1640完全培養液，調整細胞濃度為1*105個/ml(靶細胞)，取靶細胞和效應細胞各100μ效靶比50：1)，加入u型96孔培養板，靶細胞自然釋放孔加靶細胞和培養液各100μl，最大釋放孔加靶細胞和1％np40各100μl，上述各項均設三個復孔，於37℃，5％co2培養箱中培養4小時，每孔吸取上清液100μl置平底96孔培養板中，同時加入ldh基質液100μl，反應3min，每孔加入1mol/l的hcl30μl終止，用酶標儀在490mm處測定光密度值(od)。

nk細胞活性測定

●p＜0.05與對照組相比(經方差分析)

經統計學分析：樣品60ml/kg劑量組與對照組相比，有顯著性差異。

3.2.9小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞試驗

動物連續給樣30天後，每鼠腹腔注射20％雞紅細胞懸液1ml，間隔30分鐘，頸椎脫臼處死，固定於鼠板上，剪開腹壁皮膚，注射生理鹽水2ml，轉動鼠板1分鐘，吸出腹腔洗液1ml，分滴於2片玻片上，37℃孵箱溼孵30分鐘，用生理鹽水漂洗，晾乾，以1：1丙酮甲醇溶液固定，4％giemsa—磷酸緩衝溶液染色3分鐘，再用蒸餾水漂洗晾乾，用油鏡鏡檢，計算吞噬％和吞噬指數。

巨噬細胞吞噬試驗

●p＜0.05與對照組相比(經方差分析)

經統計學分析：樣品60ml/kg劑量組與對照組相比，有顯著性差異。

3.3結論

口給予樣品30天後，樣品能明顯增加nk細胞活性、提高巨噬細胞吞噬能力以及體液免疫和細胞免疫活性，因此樣品具有增強免疫力功能。

四、總結論

綜上，該樣品負重遊泳試驗陽性，尿素氮和血乳酸試驗結果陽性，樣品能明顯增加nk細胞活性、提高巨噬細胞吞噬能力以及體液免疫和細胞免疫活性，根據保健食品功能學評價標準，該樣品具有緩解體力疲勞及增強免疫力的作用。

本領域的普通技術人員可以理解，上述各實施方式是實現本發明的具體實施例，而在實際應用中，可以在形式上和細節上對其作各種改變，而不偏離本發明的精神和範圍。