毛形屬線蟲在防治人和動物免疫功能低下引起疾病的醫用用途及藥物製劑的製作方法
2023-06-22 11:05:16 3
專利名稱：毛形屬線蟲在防治人和動物免疫功能低下引起疾病的醫用用途及藥物製劑的製作方法
技術領域：
本發明涉及毛形屬(Trichinella)線蟲的醫用用途，尤其是公開了一種毛形屬線蟲在防治人和動物免疫功能低下引起疾病的醫用用途，同時提供了相應的藥物製劑，屬於生物製藥技術領域。
背景技術：
多年來，人們一直認為寄生蟲是一種寄生在人或動物體內的害蟲，但從辯證唯物主義觀點看，寄生蟲也應有其有益可利用的一面。在長期生物進化過程中，旋毛形線蟲(Trichinella spiralis，Owen 1835)簡稱旋毛蟲在人或動物體內生存，產生了許多有益的天然抗原物質，這些複雜的物質雖然迄今尚未搞清其結構和功能，但它確實有非特異性增強人或動物的免疫功能的作用。
發明內容
本發明公開了一種毛形屬線蟲在防治人和動物免疫功能低下引起疾病的醫用用途，同時提供了相應的藥物製劑。
本發明的技術方案如下旋毛形線蟲細胞苗製備無菌收集旋毛形線蟲500-1,000條後，放入改良的RPMI1640或MEM培養基(培養基中含動物肌肉蛋白酶消化液)中，將蟲體研碎後，離心取上清進行原代培養，待細胞基本長成單層後，倒掉上懸液加入新的培養基進行傳代培養，待細胞傳至30代，測定其生長率曲線、細胞集落形成率及傳代細胞染色體數。後用於人或動物。
旋毛形線蟲致弱苗製備其製備方法之一將旋毛形線蟲通過大白鼠、兔或馬屬動物等，連續傳代10-15代，其間每隔1個月用旋毛形線蟲(500-10000條蟲體)接種免疫，共3-5次。收集其蟲體用於人或動物。
製備方法之二直接收集感染旋毛形線蟲動物肌肉中的蟲體，放入PBS中，用10-20千倫琴(Kγ)劑量的鈷-60(Co60)照射(或採用其它物理方法致弱)，用於人或動物。
旋毛形線蟲生物活性物質製備將體外培養的旋毛形線蟲排洩分泌物或收集的旋毛形線蟲蟲體破碎後加入不同濃度的有機溶劑如乙醇、石油醚和乙酸乙酯等進行萃取或進行生化分離提取，獲得不同的生物活性物質， 經濃縮、滅菌處理後分裝，用於人或動物。
通過肌肉接種旋毛形線蟲細胞苗、經口接種旋毛形線蟲致弱苗於人或動物體內，通過注射或經口給旋毛形線蟲生物活性物質於人或動物體內，使其產生複雜的天然抗原物質，來增強人和動物免疫力，進而達到防治人和動物免疫功能低下或缺陷引起疾病之目的，同時也可作防治人和動物旋毛形線蟲病的蟲苗。
〖適應症〗主要用於腫瘤病、早期癌症、性功能低下以及愛滋病等免疫功能低下或缺陷引起疾病的預防和治療，同時也可作防治人和動物旋毛形線蟲病的蟲苗。
〖使用方法〗；旋毛形線蟲細胞苗以1×103-1×1010個細胞給動物和人一次肌肉注射，間隔3個月重複一次，其劑量和次數視人和動物的病情、年齡、性別、體質和防治目的等而定。
旋毛形線蟲致弱苗以50-10,000個蟲體給人或動物一次口服，間隔3個月重複一次，其劑量和次數視人和動物的病情、年齡、性別、體質和防治目的等而定。
旋毛形線蟲生物活性物質根據模型動物實驗結果，確定給人用藥的途徑和用量。
下述的藥理實驗證實了本發明藥物製劑在防治人和動物免疫功能低下引起疾病的醫用用途案例1將健康純系的BALB/C鼠(雌雄各半，體得18-20g)，隨機分為7組，每組10隻，除第1組注射Hanks氏液100μL外，2-4組小鼠，分別給予50、100、200個致弱的旋毛形線蟲蟲體，3周後，分別以100μL含1×106個SP2/0骨髓瘤細胞於鼠的左後肢皮下注射。5-7組小鼠分別以100μL含1×106個SP2/0骨髓瘤細胞於鼠的左後肢皮下注射，3周後分別經口給予50、100、200個致弱的旋毛形線蟲蟲體，結果在小鼠荷瘤前和荷瘤後應用旋毛形線蟲免疫的小鼠體內腫瘤體積明顯小於不用旋毛形線蟲免疫的對照組小鼠腫瘤體積，且個別小鼠未見腫瘤發生，說明旋毛形線蟲具有很強的抗腫瘤作用(見表1)。
表1.不同組小鼠接種致弱的旋毛形線蟲蟲體後荷瘤情況組別腫瘤大小(cm)無腫瘤鼠數(只)1 2.00-2.50×3.00-3.3002 1.20-1.50×1.10-1.2013 1.10-1.30×1.10-1.2014 1.10-1.30×1.00-1.1525 1.00-1.20×1.00-1.1026 0.98-1.10×0.90-1.1027 0.90-1.10×1.00-1.152案例2某男，71歲，長期體質虛弱，2001年12月15日服用旋毛形線蟲致弱苗4000個蟲體，20天後有輕微發熱反應，採用藥物校正，轉為正常，三個月後體質恢復，至今精力充沛，頭髮變黑，未發生感冒。
本發明的積極效果在於旋毛形線蟲細胞苗可達到旋毛形線蟲致弱苗免疫的效果，易大量製備，成本低，安全、療效高，作用範圍廣。旋毛形線蟲致弱苗製備容易，使用方便，成本低，效果好，作用範圍廣。旋毛形線蟲生物活性物質成份單一，作用目標明確。
具體實施例方式實施例1旋毛形線蟲細胞苗製備
無菌收集旋毛形線蟲5000條，放入研缽中將蟲體研碎，用0.25％胰酶消化30min製成細胞懸液，用PH7.2PBS離心洗滌三次，再用改良的RPMI1640培養液將細胞沉澱物製成懸液，分裝於3個容量為30ML且預先用膠原包被的細胞培養瓶內，塞上膠塞，37℃恆溫箱內培養，待細胞基本長成單層時，倒掉上懸液，用GNH(即Hanks氏液配方中去掉鈣鹽、鎂鹽和磷酸鹽)洗滌一次，用預溫的0.25％胰酶液浸泡20min使細胞脫鹽，然後離心，倒掉上清液，加入6ml新培養液，混勻，分裝兩瓶，繼續培養，連續傳代培養30代，觀察其生長率曲線，細胞集落形成率。
實施例2旋毛形線蟲致弱苗製備將人工感染旋毛形線蟲的大白鼠處死，取肌肉用攪肉機將肌肉攪碎，放入消化液(胃蛋白酶0.5g，鹽酸0.7ml，水100ml)中，消化後收集蟲體，將蟲體放入PBS中以12千倫琴劑量進行Co60照射後保存。
實施例3旋毛形線蟲生物活性物質化學提取法將100,000條蟲體破碎後稱重，放入圓底燒瓶中加適量70％乙醇浸泡過夜，後加熱回流2-3h，過濾，濃縮乙醇提取液，剩餘殘渣繼續使用70％乙醇加熱回流4-5次，合併乙醇濃縮液，剩餘殘渣再用水煮沸2次，濃縮水煮液，合併至乙醇濃縮液中，殘渣曬乾稱重備用。取部分乙醇濃縮液加適量石油醚萃取多次，剩餘殘渣繼續用乙酸乙酯萃取多次。最後獲得乙醇總提取物、乙醇總提取物殘渣、石油醚提取物、乙酸乙醚提取物和殘渣5個部分備用。
權利要求
1.毛形屬線蟲在防治人和動物免疫功能低下引起疾病的醫用用途。
2.一種旋毛形線蟲細胞苗製備方法，包括以下步驟無菌收集旋毛形線蟲500-1,000條後，放入改良的RPMI1640或MEM培養基中，培養基中含動物肌肉蛋白酶消化液，將蟲體研碎後，離心取上清進行原代培養，待細胞基本長成單層後，倒掉上懸液加入新的培養基進行傳代培養，待細胞傳至30代後，測定其生長率曲線、細胞集落形成率及傳代細胞染色體數。
3.一種旋毛形線蟲致弱苗製備方法，包括以下步驟將旋毛形線蟲通過大白鼠、兔或馬屬動物等，連續傳代10-15代，其間每隔1個月用旋毛形線蟲接種免疫，共3-5次，收集其蟲體用於人及動物。
4.一種旋毛形線蟲致弱苗製備方法，包括以下步驟直接收集感染旋毛形線蟲動物肌肉中的蟲體，放入PBS中，用10～20千倫琴劑量的鈷-60照射致弱，後用於人及動物。
5.一種旋毛形線蟲生物活性物質製備方法，包括以下步驟將體外培養的旋毛形線蟲排洩分泌物或收集的旋毛形線蟲蟲體破碎後加入不同濃度的有機溶劑如乙醇、石油醚和乙酸乙酯等進行萃取或進行生化分離提取，獲得不同的生物活性物質， 經濃縮、滅菌處理後分裝。
全文摘要
發明公開了一種毛形屬線蟲在防治人和動物免疫功能低下引起疾病的醫用用途，同時提供了相應的藥物製劑旋毛形線蟲細胞苗、旋毛形線蟲致弱苗、旋毛形線蟲生物活性物質。通過肌肉接種旋毛形線蟲細胞苗、經口接種旋毛形線蟲致弱苗於人或動物體內，通過注射或經口給旋毛形線蟲生物活性物質於人或動物體內，使其產生複雜的天然抗原物質，來增強人和動物免疫力，進而達到防治人和動物免疫功能低下或缺陷引起疾病之目的，同時也可作防治人和動物旋毛形線蟲病的蟲苗。
文檔編號A61K39/00GK1439428SQ03111080
公開日2003年9月3日 申請日期2003年2月25日 優先權日2003年2月25日
發明者張西臣, 李建華, 尹繼剛 申請人:中國人民解放軍軍需大學