肌變性疾病的檢測方法以及治療效果判定方法

2023-06-15 16:34:41 1

專利名稱：肌變性疾病的檢測方法以及治療效果判定方法
技術領域：
本發明涉及肌變性疾病的早期檢測方法，以及治療藥和/或治療方法的預測和/ 或判定方法。
背景技術：
伴隨有肌肉障礙或肌壞死的疾病組被稱為肌病。代表性的肌病有肌營養不良症、 肌肉萎縮症。肌營養不良是以肌肉變弱進而萎縮為特徵的遺傳性疾病的總稱。其中，進行性肌肉營養不良症的患者數最多，並引起遺傳性的進行性肌無力。此外，肌肉萎縮症是由運動神經障礙引起的神經原性疾病。肌營養不良中患者數最多的迪謝內型肌營養不良，是僅在男性中發病的性染色體隱性遺傳性疾病，據說每10萬人中有3-5人、每2000-3000個新生男孩中有1人患病。通常在3-5歲時，發現跑步困難、容易跌倒等與步行、站立相關的異常，在10歲前後變得無法步行。之後，脊柱的變形和關節彎曲快速進行，多引起呼吸衰竭，並且有時引起心力衰竭、肺炎。用於肌營養不良診斷的檢查有血液檢查、神經傳導檢查、肌電圖、肌肉活組織檢查、DNA分析等。神經傳導檢查查明運動障礙、感知障礙是否是由末梢神經障礙引起，尋找障礙部位或障礙程度，對神經進行電刺激進而測量刺激傳導的速度。在檢查的特性方面，其需要特殊的裝置，由於對神經直接進行電刺激，因此會感覺到麻刺感、疼痛、不適感，並伴隨
一些痛苦。肌電圖檢查查明運動障礙是否是由肌肉引起或由神經引起，尋找障礙部位或程度，需要特殊的裝置，伴有向肌肉中刺入針而產生的疼痛。雖然也存在不伴有疼痛的體表面肌電圖檢查，但必須在檢查設備上進行測定。由於肌肉活組織檢查需要採集肌肉組織，因此是創傷性的，不能說是簡便的檢查。 此外，DNA分析是迪謝內型或貝克型肌營養不良的診斷所必須的，但並不適用於肌變性疾病，缺乏通用性。血液檢查通常利用肌酸激酶。肌酸激酶是主要存在於骨骼肌和心肌的可溶性部分的酶，由於細胞的損傷而漏入血液中。在肌營養不良的情況下，骨骼肌發生障礙以及壞死， 血液中肌酸激酶顯示出明顯的高值，從而由此進行肌營養不良的診斷，但血液中的肌酸激酶也可能因其他的疾病而顯示出高值，因此難以僅基於肌酸激酶的濃度來鑑別診斷，需要同時進行其他的檢查。在其他的進行性肌營養不良症、因神經異常而導致肌肉發生障礙或壞死的疾病中，也進行測定血液中肌酸激酶的血液檢查，但由於在肌障礙和肌壞死以外的疾病中中血液肌酸激酶水平也顯示出高值，因此需要其他的肌障礙或肌壞死的標誌物。因此，期望能夠在早期簡便地對諸如肌營養不良的肌變性疾病進行診斷的方法或診斷試劑盒。11，15- 二氧-9α -羥基_2，3，4，5_四正前列-1，20_ 二酸(以下稱為Tetranor-PGDM)作為前列腺素D2 (以下稱為POT2)的代謝物而已知，報告稱Tetranor-PGDM 在尿中的排洩量隨人或小鼠的炎症反應而增加，而且是反映PGD2的生成的標誌物(非專利文獻1)。 另一方面，有報告稱，在諸如肌營養不良的肌變性疾病的變性部位，對PGD2的產生進行催化的造血前列腺素D合酶(以下稱為HPOTQ的表達增強，而且POT2與疾病發展的防止和改善相關(專利文獻1，非專利文獻2)。但是，完全不知道Tetranor-PGDM作為肌變性疾病的患者的尿中排洩物以高濃度被檢出，且上述Tetranor-PGDM的濃度由於HP⑶S抑制劑的給藥而顯著降低。專利文獻1 日本國專利申請公開公報「特開2005-119984號公報」非專利文獻1 :J. Biol. Chem, Vol. 283, No. 2,1179-1188(2008)非專利文獻2 =Acta Neuropatho 1,104，377-384 (2002)

發明內容
技術問題本發明的目的在於，提供通過測定尿中的Tetranor-PGDM來有效地診斷肌變性疾病的方法，以及對這些疾病的治療藥和/或治療方法的治療效果進行判定的方法。本發明的另一目的在於，提供肌變性疾病的診斷試劑盒，所述診斷試劑盒靶向 Tetranor-PGDM0技術方案本發明人為了實現上述目的而進行了深入研究，並基於所得的如下見解完成本發明。1)與正常動物相比，作為尿中POT2代謝物的Tetranor-PGDM的水平在肌營養不良模型動物中增加。2)通過向肌營養不良模型動物給予公知的POT2合酶抑制劑，Tetranor-PGDM的尿中排洩量減少。本發明提供以下的肌變性疾病的檢出方法，肌變性疾病的診斷測定用試劑盒以及肌變性疾病的治療藥和/或治療方法的效果預測和/或判定用試劑盒。項1.肌變性疾病的檢測方法，包括對從受試體分離出的樣品中的Tetranor-PGDM 含量進行測定的步驟。項2.肌變性疾病的治療藥和/或治療方法的效果判定方法，包括對從肌變性疾病的患者分離出的樣品中的Tetranor-PGDM含量進行測定的步驟。項3.如項1或2所述的方法，其中所述樣品為尿。項4.如項1-3中任一項所述的方法，其中通過高效液相色譜-串聯質譜 (HPLC-MS/MQ、酶免疫測定法(EIA)、放射性免疫測定法(RIA)、螢光免疫測定法(FIA)、酶聯免疫吸附測定法(ELISA)或酶法進行Tetranor-PGDM的測定。項5.如項1或2所述的方法，其中所述肌變性疾病為進行性肌營養不良症、先天性肌營養不良症、肢帶型肌營養不良症、面肩肱型肌營養不良症、肌強直性肌營養不良症、 肌萎縮側索硬化症或肌病。項6.肌變性疾病的診斷測定用試劑盒，其特徵在於，包括Tetranor-PGDM的抗體。
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項7.肌變性疾病的治療藥和/或治療方法的效果預測和/或判定用試劑盒，其特徵在於，包括iTetranor-PGDM的抗體。項8.如項6或7所述的試劑盒，包括Tetranor-PGDM的抗體、被標記的 Tetranor-PGDM,以及根據需要選自抗免疫球蛋白抗體、樣品稀釋液、抗體和被標記的 Tetranor-PGDM的稀釋液、已知濃度的標準!"etranor-PGDM、EIA用的底物、EIA用的終止液的至少1種。有益效果根據本發明，通過對從受試體分離出的樣品中的Tetranor-PGDM進行測定，能夠簡便地且在早期診斷肌變性疾病，而且能夠有效地對這些疾病的治療藥和/或治療方法的治療效果進行判定。而且根據本發明，通過將尿中增加的Tetranor-PGDM作為標誌物來使用，能夠製成能夠簡便地診斷肌變性疾病的診斷用試劑盒來進行利用。


圖1是表示mdx小鼠中的HP⑶S抑制劑給藥後的尿中Tetranor-PGDM濃度以及前肢握力的變化的圖。圖2的左圖是表示給予HPGDS抑制劑約1年後，變更為溶劑給藥時的尿中 Tetranor-PGDM濃度的變化的圖；右圖是表示給予溶劑約1年後，變更為抑制劑給藥時的肌營養不良犬(CXMDJ)的尿中Tetranor-PGDM濃度的變化的圖。
具體實施例方式在本發明中，能夠以Tetranor-PGDM作為指標來進行肌變性疾病的診斷，且能夠有效地對這些疾病的治療藥和/或治療方法的治療效果進行判定。而且，通過將 Tetranor-PGDM作為標誌物來使用，能夠提供這些疾病的診斷用試劑盒以及肌變性疾病的治療藥和/或治療方法的效果預測和/或判定用試劑盒。根據本發明的實施方式，通過對從患有或可能患有肌變性疾病的受試體分離出的樣品中的Tetranor-PGDM進行測定，能夠檢出或診斷伴隨肌障礙或肌壞死的疾病。具體而言，在樣品中的Tetranor-PGDM的濃度或含量高於預定值時，該受試體能夠被診斷為患有肌變性疾病。從受試體分離出的樣品中的Tetranor-PGDM的預定值，能夠通過對健康人的樣品和肌變性疾病患者的樣品中的Tetranor-PGDM進行測定來確定。此外，治療藥和/或治療方法的效果判定方法如下對治療開始前/治療藥給藥開始前肌變性疾病的患者的樣品中的Tetranor-PGDM與治療開始後/治療藥給藥開始後的Tetranor-PGDM的測定值進行比較，治療開始後/治療藥給藥開始後的樣品中的 Tetranor-PGDM的測定值顯著或具有顯著傾向地降低時，判定治療或治療藥給藥有效，樣品中的Tetranor-PGDM的測定值在治療開始/治療藥給藥開始前後沒有顯著或顯著傾向的差異時，判定該治療藥/治療方法無效。根據本發明的另一方面，能夠提供使用抗體來檢測樣品中的Tetranor-PGDM的診斷用試劑盒。本文中的術語「受試體」是指哺乳動物，包括例如人、猴、牛、馬、大鼠、小鼠、豚鼠、兔、犬、貓、綿羊、山羊。優選地，受試者是人。根據本發明的方法測定的Tetranor-PGDM，作為尿中PGD2的代謝物而被發現。此外，Tetranor-PGDM還在血液和糞便中被發現。本發明的從受試體分離出的樣品優選為尿、糞便、血液、血漿、血清，更優選為尿。本文中的術語「測定」包括檢出、定量和半定量中的任一個。因此，「對 Tetranor-PGDM進行測定」，包括檢出樣品中的Tetranor-PGDM和測定其表達量的兩種情況，而且，包括判別表達量是否在預定值以上的情況，換言之，即表達量為預定值以上時檢出該表達的情況。作為測定Tetranor-PGDM的方法，例示出GC-MS、HPLC、高效液相色譜-串聯質譜法(HPLC-MS/MQ、酶免疫測定法(EIA)、放射性免疫測定法(RIA)、螢光免疫測定法(FIA)、 酶聯免疫吸附測定法(ELISA)和酶法，優選高效液相色譜-串聯質譜法(HPLC-MS/MQ，或從操作的簡便性出發，優選使用抗Tetranor-PGDM抗體的免疫測定法，特別是酶免疫測定法 (EIA)、放射性免疫測定法(RIA)、螢光免疫測定法(FIA)和酶聯免疫吸附測定法(ELISA)， 特別優選酶免疫測定法(EIA)和酶聯免疫吸附測定法(ELISA)。作為肌變性疾病，例示出進行性肌營養不良症、先天性肌營養不良症、肢帶型肌營養不良症、面肩肱型肌營養不良症、肌強直性肌營養不良症、肌萎縮側索硬化症、肌病、肌肉拉傷、心肌病(心肌梗塞)、糖尿病性末梢血管障礙(血管平滑肌障礙)，優選為諸如進行性肌營養不良症、先天性肌營養不良症、肢帶型肌營養不良症、面肩肱型肌營養不良症、肌強直性肌營養不良症的肌營養不良症和肌萎縮側索硬化症。能夠用於判定肌變性疾病的治療效果的治療藥不受特別限定，可以使用任何治療藥，例如造血前列腺素D合酶(HPGDQ抑制劑、前列腺素D受體拮抗劑，優選造血前列腺素 D合酶(HP⑶S)抑制劑。優選通過免疫測定法來測定樣品中Tetranor-PGDM的濃度，因為該方法能夠簡便地對大量的樣品進行同時測定。能夠用於免疫測定法或試劑盒的抗Tetranor-PGDM抗體可以是例如多克隆抗體或單克隆抗體。製造抗體時，可以向動物(大鼠、小鼠、豚鼠、兔、犬、貓、綿羊、山羊等)給予Tetranor-PGDM來進行免疫接種，從而製備多克隆抗體和單克隆抗體。或者，使 Tetranor-PGDM與諸如牛血清白蛋白(BSA)、球蛋白、甲狀腺球蛋白、血清蛋白的適當的蛋白結合，之後，與適當的佐劑形成懸浮混合物，並以一定的時間間隔對動物(大鼠、小鼠、豚鼠、兔、犬、貓、綿羊、山羊等)進行給藥，經過預定時間後採集動物的血清並通過公知的方法進行處理，由此能夠得到多克隆抗體和單克隆抗體。具體而言，可以如下製備單克隆抗體根據需要使多克隆抗體製備時所使用的 Tetranor-PGDM與適當的蛋白結合，並作為免疫原使用從而使動物免疫，再利用雜交瘤來製備單克隆抗體，其中，上述雜交瘤是通過將由脾臟得到的單克隆抗體形成細胞與骨髓瘤細胞融合而得到的。雜交瘤能夠通過如下方法得到。分數次、每隔2-3周，將按照如上操作得到的 Tetranor-PGDM單獨或其蛋白結合體與弗氏完全佐劑一起腹腔內給藥、靜脈內給藥或皮下給藥至諸如小鼠、大鼠、兔的適當的哺乳動物從而進行免疫。然後，使來自脾臟或其它器官
6的抗體形成細胞與諸如骨髓瘤細胞的能夠在試管內增殖的腫瘤細胞融合。作為融合方法， 可以按照 Kohler and Milstein 的常用方法(Nature, vol. 256，495 (1975))利用聚乙二醇來進行，或者利用仙臺病毒等進行。使用由上述方法得到的抗Tetranor-PGDM抗體，實施Tetranor-PGDM的免疫測定法。作為上述免疫測定法，優選通過靶向所測定的物質Tetranor-PGDM的周知的競爭性免疫測定法來進行，可以列舉通過標記物質進行分類的酶免疫測定法(EIA)、螢光免疫測定法 (FIA)、發光免疫測定法、放射性免疫測定法(RIA)等。特別優選EIA法。通常，競爭法中可以使用標記抗原。標記物質包括例如酶、螢光物質、發光物質、放射性同位素等。標記物質與抗原的結合可以利用公知的形成共價鍵或非共價鍵的方法來進行製備。結合的方法中，可以列舉例如使用例如縮合劑來形成共價鍵的方法、使用各種交聯劑的方法等(例如，參照「蛋白質核酸酶」增刊31號，37-45頁(198幻)。利用共價鍵的方法中，除了可以使用抗原中存在的官能團之外，還可以在利用通常方法導入諸如硫醇基、 氨基、羧基、羥基的官能團後，通過結合這些官能團來製造標記抗原。此外，作為利用非共價鍵的方法，可以列舉物理吸附法。Tetranor-PGDM的測定，優選通過例如以下記載的免疫測定法來實施。使預定量的被標記的Tetranor-PGDM、抗Tetranor-PGDM抗體與含有Tetranor-PGDM的樣品(特別是尿樣品)競爭地反應，根據與抗體結合的或沒有結合的標記抗原的量，對樣品中的 Tetranor-PGDM 進行定量。可以如下進行與抗體結合的標記抗原和未結合的標記抗原的分離添加抗免疫球蛋白抗體，分離沉澱的(標記抗原)_(抗Tetranor-PGDM抗體)-(抗免疫球蛋白抗體)複合體，測定與複合體結合或沒有結合的標記物質。上述方法被稱為雙抗體法，還可以通過使用木炭過濾器的方法來進行。還能夠通過對與固相結合的抗免疫球蛋白抗體、與固相結合或沒有結合的標記物質進行測定來實施抗免疫球蛋白抗體測定。抗免疫球蛋白抗體，能夠通過公知的方法，例如物理吸附法、利用交聯劑或共價鍵的化學結合法、利用抗生物素-生物素結合的結合法等與固相結合。不用說，標記物質的測定應根據所用的標記物質的類型來進行選擇。本發明的試劑盒包括抗Tetranor-PGDM抗體，而且在更優選的實施方式中，還包括標記的iTetranor-PGDM和抗Tetranor-PGDM抗體。在試劑盒中，可以根據需要加入例如與抗Tetranor-PGDM抗體結合的抗免疫球蛋白抗體、樣品稀釋液、抗體和標記的 Tetranor-PGDM的稀釋液、已知濃度的標準Tetranor-PGDM等，在EIA用的試劑盒中，還可以加入例如底物、終止液等。在本發明中用於測定Tetranor-PGDM的樣品具體地為例如從人採集的尿。在肌變性疾病患者的效果判定方法中，對治療藥給藥前後的樣品(特別是尿)中的Tetranor-PGDM的測定值進行比較。樣品還可以使用累積一天量的尿，並可以直接使用採集的樣品進行測定。採集的尿可以在室溫下進行保存，但優選在低溫下進行保存直至測定使用。樣品中含有的Tetranor-PGDM的測定，可以相對於所採集的樣品總量來進行，也可以相對於所採集的樣品的一部分來進行並考慮利用諸如肌酸酐的對照物質進行校正。從操作的簡便性出發，樣品中含有的Tetranor-PGDM的測定，優選相對於所採集
7的樣品的一部分來進行並考慮利用肌酸酐進行校正。下面，對本發明所使用的預定值進行說明。用於肌變性疾病患者的治療效果判定的預定值，可以通過測定健康人和患者的樣品中的Tetranor-PGDM來確定，然後每一測定值能夠用於確定作為根據通常方法判定有無治療效果的標準的「預定值」。例如在樣品為尿的情況下，應當優選使用健康人和肌變性疾病患者的一天的累積尿或在規定時間採集的尿來確定預定值。在通過測定Tetranor-PGDM判定治療效果的方法中，在伴隨治療藥給藥的治療管理下，將給予治療藥前的患者的尿中含有的Tetranor-PGDM濃度的值設為預定值，較之於該預定值，尿中的Tetranor-PGDM濃度的值顯著或具有顯著傾向地降低時，判定治療藥和/ 或治療方法有效，該治療方法和/或治療藥給藥繼續進行。此外，尿中的Tetranor-PGDM濃度的值沒有顯著或具有顯著傾向地降低時，判斷治療方法和/或治療藥無效，並嘗試其他的治療藥和/或治療方法。實施例以下，使用實施例對本發明進行詳細說明，但本發明並不限於這些實施例。實施例11.材料和方法(1)材料和樣品使用以下的動物作為肌營養不良模型動物。肌營養不良小鼠mdx(C57Bl/10ScSn，獲得來源 JAX Laboratories)肌營養不良犬CXMDj (CXMDr獲得來源國立精神及神經中心)此外，為了比較，使用具有相同血統的動物作為對照動物。野生型小鼠(C57BL/10ScSn，獲得來源JAX Laboratories)正常比格犬(獲得來源國立精神及神經中心)(2)受試化合物使用以下受試化合物，其可以作為公知的造血前列腺素D合酶(HPGDS)抑制劑而得到受試化合物1 :4-二苯甲氧基-1-{3_(1H-四唑_5_基)-丙基}哌啶(Jpn. J. Pharmacol.，78，1-10(1998))；受試化合物2 :N-甲氧基-N-甲基-4-(5-苯甲醯基苯並咪唑-2-基-3，5-二甲基吡咯-2-甲醯胺(國際公開W02007007778號公報)。(3)小鼠尿採集向4周齡的mdx小鼠，以30mg/kg的用量口服給予溶劑(0. 5%甲基纖維素溶液) 或受試化合物15天。使用小鼠用代謝籠採集受試化合物1的給藥開始前和給藥5天後約 12小時的時間段內的尿。此外，為了比較，從同周齡的同血統野生型小鼠採集尿作為對照。 使用測定試劑盒(L type Wako CRE ·Μ，和光純藥)對尿中肌酸酐濃度進行測定。(4)犬尿採集對CXMDj 口服給予溶劑(0. 5%甲基纖維素溶液)或受試化合物2約1年後，開始向溶劑給藥犬給予受試化合物2，並向受試化合物2給藥犬給予溶劑。在由溶劑給藥向受試化合物2給藥的變更以及由受試化合物2給藥向溶劑給藥的變更之前，分別對尿進行採集。 此外，給藥液體變更後，隨時間推移對尿進行採集。此外，為了比較，從正常比格犬採集尿作為對照。(5)尿的預處理在200 μ L的採集自小鼠或犬的尿中，混合5ng作為內標的的氘標記的 Tetranor-PGDM-d6 (Cayman Chemical公司)。使用純淨水將體積調至2mL，並將pH 調整至3。然後將尿注入預先用5mL乙腈和5mL純淨水平衡後的S印-Pak Vac C18 Cartridge (Waters)中。通過用純淨水製備的5mL的10%乙腈溶液和IOmL的己烷清洗後，用5mL的乙酸乙酯進行洗脫，然後在氮氣氣流下乾燥。使殘渣溶解於用純淨水製備的 IOOyL的10%乙腈溶液中，作為測定樣品。(6) iTetranor-P⑶M 的測定使用預處理後的尿樣品測定Tetranor-PGDM水平。使用高效液相色譜-串聯質譜 (HPLC-MS/MS)裝置進行測定。在測定中，使用I^rominence System (系統控制器CBM-20A，送液單元LC-20AD 2臺、在線脫氣裝置D⑶-20A3、柱溫箱CT0-20A、帶有冷卻功能的自動進樣器SIL-20AC,島津製作所制)作為HPLC裝置，使用Inertsil0DS3 (內徑2. ImmX長50mm ； GL Science 公司制)作為保護住，使用 hertsilODS3 (內徑 2. ImmX 長 25Omm ；GL Science 公司制)作為分離柱，流動相具有0. 01%-0. 2%甲酸或0. 01%-0. 2%乙酸，以及乙腈或乙腈/甲醇(90 10)的濃度梯度。將流速設定為0.2mL/分鐘。將柱溫箱設定為37°C，將自動進樣器設定為4°C。MS/MS部使用以電噴霧電離作為離子源的三重四級杆質譜儀GOOOQ TRAP LC/MS/MS系統，Applied Biosystems公司制)。使用MRM(多反應監測)進行定量。在該方法中，從大量母離子(前體離子)和CID (碰撞誘導解離)生成的碎片離子中特異性地選擇真正的母離子，並根據母離子的面積對母離子進行精確定量。具體地，通過電噴霧電離生成目標分子的母離子，使用第一臺質量分析器Oil)分離這些母離子，在碰撞部通過 CID(碰撞誘導解離)產生這些母離子的獨特的碎片離子，然後在第二臺質量分析器0^3)中分離這些碎片離子，再通過其下遊的檢測器檢測該碎片離子。如下進行Tetranor-PGDM(質量數328)的檢測，通過CID (碰撞誘導解離)將生成的m/z (質量數+電荷)為327的離子進一步分解，使用由此生成的m/z為155、143、109中的任一種碎片離子。如下進行內標 Tetran0r-PGDM-d6(質量數334)的檢測，通過CID (碰撞誘導解離)將生成的m/z (質量數+電荷)為333的離子進一步分解，使用由此生成的m/z為161、149、109中的任一種碎片離子。使用MS/MS附帶的軟體Analyst Version 1. 4. 1來進行數據分析。對所得質譜圖中來自Tetranor-PGDM的峰面積進行計算，並根據使用標準樣品製成的標準曲線進行各峰的定量。定量時，在每次分析中，通過使用來自作為內標加入的！"etranor-PGDM-de的峰面積值校正提取效率和離子化效率來進行校正。(7)症狀評價對於mdx小鼠的症狀評價，使用小鼠用握力測定裝置(牽引計，Brair^cienceIdea 制)測定前肢的握力。在2分鐘以內進行一次測定，算出5次試驗的平均值。2.結果(l)mdx小鼠的尿中iTetranor-PGDM濃度水平高在野生型小鼠中，使用尿中肌酸酐濃度校正後的Tetranor-PGDM濃度為6. 8 士 1.0ng/mg Cre (平均值士標準誤差)，但是在mdx小鼠中，濃度為17. 8 士0. 8ng/mg Cre (平均值士標準誤差，ρ < 0.0003)，顯示出約3倍的高值。上述結果表明，能夠將尿中的Tetranor-PGDM濃度用作肌營養不良中症狀發展的尿中標誌物。(2) HP⑶S抑制劑改善mdx小鼠的症狀，使尿中Tetranor-PGDM濃度降低對HPGDS抑制劑對mdx小鼠的症狀的效果進行了評價。在溶劑給藥組中，前肢握力沒有顯著的變化，但通過反覆口服給予受試化合物1，mdx小鼠的前肢握力顯著增加(圖 1右)。對相同mdx小鼠的尿中Tetranor-PGDM濃度進行測定，其結果是在受試化合物1給藥組中，尿中Tetranor-PGDM濃度顯著降低(圖1左)。上述結果表明，mdx小鼠的症狀改善與尿中Tetranor-PGDM濃度的改變具有相關性。(3) CXMDj 的尿中 Tetranor-PGDM 濃度水平高與正常犬相比，在肌營養不良模型犬CXMDj中，尿中"Tetranor-PGDM濃度水平較高，給予受試化合物2的CXMDj的尿中Tetranor-PGDM濃度降低(表1)。上述結果表明，能夠將尿中Tetranor-PGDM濃度用作肌營養不良中症狀發展的尿中標誌物。表 1肌營養不良模型犬的尿中的Tetranor-PGDM濃度
權利要求
1.肌變性疾病的檢測方法，包括對從受試體分離出的樣品中的Tetranor-PGDM含量進行測定的步驟。
2.肌變性疾病的治療藥和/或治療方法的效果判定方法，包括對從肌變性疾病的患者分離出的樣品中的Tetranor-PGDM含量進行測定的步驟。
3.如權利要求1或2所述的方法，其中所述樣品為尿。
4.如權利要求1-3中任一項所述的方法，其中通過高效液相色譜-串聯質譜法 (HPLC-MS/MQ、酶免疫測定法(EIA)、放射性免疫測定法(RIA)、螢光免疫測定法(FIA)、酶聯免疫吸附測定法(ELISA)或酶法進行Tetranor-PGDM的測定。
5.如權利要求1或2所述的方法，其中所述肌變性疾病為進行性肌營養不良症、先天性肌營養不良症、肢帶型肌營養不良症、面肩肱型肌營養不良症、肌強直性肌營養不良症、肌萎縮側索硬化症或肌病。
6.肌變性疾病的診斷測定用試劑盒，其特徵在於，包括Tetranor-PGDM的抗體。
7.肌變性疾病的治療藥和/或治療方法的效果預測和/或判定用試劑盒，其特徵在於， 包括Tetranor-PGDM的抗體。
8.如權利要求6或7所述的試劑盒，包括Tetranor-PGDM的抗體、被標記的 Tetranor-PGDM,以及根據需要選自抗免疫球蛋白抗體、樣品稀釋液、抗體和被標記的 Tetranor-PGDM的稀釋液、已知濃度的標準^Tetranor-PGDM、EIA用的底物、EIA用的終止液的至少1種。
全文摘要
通過對從受試體分離出的樣品中的11，15-二氧-9α-羥基-2，3，4，5-四正前列-1，20-二酸(以下稱為Tetranor-PGDM)進行測定，能夠在早期檢出肌變性疾病，並且能夠對這些疾病的治療藥和/或治療方法的治療效果進行判定。
文檔編號G01N30/88GK102348982SQ20108001151
公開日2012年2月8日 申請日期2010年3月8日 優先權日2009年3月9日
發明者中村昭則, 丸山敏彥, 有竹浩介, 武田伸一, 謙內慎也, 裡出良博 申請人:國立精神及神經中心, 大鵬藥品工業株式會社, 財團法人大阪生物科學研究所