檢測和治療獲得性免疫缺陷綜合症的組合物和方法

2023-06-15 04:29:46

專利名稱：：檢測和治療獲得性免疫缺陷綜合症的組合物和方法這是一項部分繼續的專利申請，是於1995年六月七日提交的美國專利申請號為08/485,548的專利的繼續，後者依次是1995年五月一日提交的美國專利申請號為08/431,883的專利申請的部分繼續。這項發明涉及免疫學和病毒學的領域，特別與可從哺乳類動物胸腺細胞獲得的組合物有關，這種組合物可用於作為人類免疫缺陷型病毒(HIV)的感染和相關疾病，如獲得性免疫缺損綜合症(愛滋病，AIDS)和愛滋病相關綜合症(ARC)的診斷用品，疫苗，和治療用品。這項發明也公開了使用這些組合物進行診斷、接種和治療的方法和裝置。骨髓產生最終會轉變成免疫細胞的細胞。這些細胞變成淋巴細胞或吞噬細胞。淋巴細胞是小型白血細胞，它在實現免疫系統的功能中承擔主要的責任。淋巴細胞的兩大類是B細胞和T細胞。B細胞在骨髓中成熟(因此稱之為B細胞)。T細胞來自於胸腺(因此稱之為T細胞)，它們在胸腺增殖成熟成能夠進行免疫反應的細胞。一旦離開骨髓和胸腺，B細胞和T細胞廣泛地並連續地在整個身體中遷移。T細胞有兩種類型，調節型和細胞毒型T細胞，它們在兩種主要的免疫防禦途徑中起作用。T細胞中首要的是「輔助/誘導」細胞。輔助T細胞與T4細胞具有一致的標誌，是激活B細胞和其它T細胞以及自然殺傷細胞和巨噬細胞所必須的。細胞毒型T細胞是殺傷細胞，例如，它直接侵襲和除去已被病毒感染或被腫瘤轉化了的細胞本身。重要的吞噬細胞是單核細胞和巨噬細胞。單核細胞在血液中循環，然後遷移至組織發育成為巨噬細胞(「豪食者」)。巨噬細胞存在於全身的組織中，是多能的細胞，起多種作用。巨噬細胞可行使清潔工的作用，清除死細胞的胞體和其它的碎片。巨噬細胞是在所有呈遞抗原給T細胞的細胞中首先消化和處理抗原，在啟動免疫反應中所起的關鍵作用。作為分泌細胞，單核細胞和巨噬細胞是調節免疫反應所必需的。它們也攜帶有淋巴因子的受體，從而使它們被激活去找尋微生物和腫瘤細胞。獲得性免疫缺損綜合症(愛滋病)是由一種病毒，人類免疫缺損病毒(HIV)引起的。HTV損壞輔助T細胞並且寄居在巨噬細胞和單核細胞中。愛滋病的特徵是多種不尋常的感染，否則為稀有的癌症。HIV也損害腦組織和脊髓，導致漸進性痴呆。當HIV感染了病人，它使自身與免疫細胞中的脫氧核糖核酸(DNA)結合，在從3個月到7年的不等長的階段中，病人可不表現任何免疫缺損症狀。有時不能產生達到可檢測水平的抗愛滋病抗體。由於最初的HIV感染也許並不立刻導致可檢測的臨床病症或可檢測的抗體水平，因此在這裡「HIV感染」這一名稱包括感染和任何由此導致的疾病，後者被稱為「HIV相關疾病」。HIV相關疾病的例子是愛滋病和愛滋病相關綜合症。在上述的潛伏期之後，HIV在感染的細胞中增殖，並且最終摧毀宿主細胞，釋放出新合成的病毒。由於在這一過程中寄生的細胞被損壞，病人的免疫系統被損害，其易於感染具有正常免疫系統的人不易感染的少見的疾病。在人類，愛滋病病毒通常要增殖，並最終死於嚴重的免疫缺損。有趣的是，只有人類才能受到愛滋病的損害。當給非人類哺乳動物，如兔子、小鼠、大鼠或牛注射HIV，這些動物可暫時有一些T細胞的損害。然而，感染14至21天後，這些動物將達到一個抗體攻擊作用，並且不會死於愛滋病。因此，沒有愛滋病的動物模型。目前，即沒法治癒也沒有有效治療愛滋病的方法。在這一領域的研究正在進行。同樣也有持續的研究探索在愛滋病的早期準確診斷這一疾病的方法。目前，商業上可提供的診斷檢驗通常直接檢測病人的抗HIV抗體。這種檢驗有一段從病人受到感染到病人產生抗病毒抗體的14到21天的檢測盲區。因此，如果病人在這一育盲區的時間內進行檢驗，檢驗將產生錯誤的陰性結果。另一方面，一些這類的檢驗也會由於非特異性的抗體結合而產生錯誤的陽性結果。檢測病毒感染的另一種方法是通過核酸雜交。除非另有註明，下面的敘述是根據Stein，D.S.等，傳感病雜誌(Infeet.Diseases)，165352(1992)。與HIV感染階段最為相關的代替標誌是CD4-或T輔助細胞的細胞計數。HIV-1的外殼糖蛋白，gp120，特異性地結合CD4受體。CD4受體在一種T淋巴細胞的亞型上最大濃度地表達，而在單核細胞和巨噬細胞中少量表達。表達CD4受體的細胞稱為「輔助/誘導」亞型，反映了它們既能作為B細胞對帶有人類的細胞抗原(HLA)H類受體的細胞表達的抗原反應時的輔助細胞，又能作為誘導細胞引起T細胞抑制免疫反應。有選擇地去除CD4+細胞會導致嚴重的免疫缺損，其和作為愛滋病標誌的對機會感染的易感性相關。HIV核心抗原P24能在出現HIV抗體之前被檢測到。當HIV抗體的存在能通過掃描酶聯免疫吸附測試時，P24抗原通常變得無法檢測到，儘管它在發病階段能偶爾地持續表達並且經常地在隨後重新表達。在血漿和外周血單核細胞培養中發現當特異的抗體可檢測到時，HIV-I的滴度會迅速下降，這說明宿主的免疫反應至少具有短暫的效果。免疫刺激的標誌包括β2-微球蛋白。當病人在血清轉型之後，CD4+細胞的下降是與愛滋病病情的發展相關的。β2微球蛋白的血清水平和血液中P24抗原的檢測都是分別與病情發展的程度相關。採用檢測β2微球蛋白和P24抗原結合CD4+細胞計數比僅用CD4+細胞計數能增加愛滋病發展的預後的準確性。然而，對於血清陽轉者而言，在隨後的三年裡，CD4+細胞的百分數的持續下降是很少見的。在兩次查診之間，有38％的病例，其CD4+細胞的百分數呈現穩定或下降水平，同時有12％的發生著下降並隨後伴有CD4+細胞丟失率的調整。總的來說，有62％的在隨後的三年內發生過CD4+細胞比例的下降。在一項研究306個不知其血清轉變時間的HIV感染血清陽性的同性戀男子中。CD4+細胞計數小於500/ml和P24抗原檢測都斷定了在30月內發生的愛滋病。CD8+細胞計數的增加在一定程度上可斷定隨後的愛滋病的發生。為了更好地確定臨床終點，如愛滋病的存在和進展，與抗病毒治療效果的替代指標的相關性，分析其他一些指標如新喋呤和β2-微球蛋白已與CD4+細胞計數P24抗原結合起來。在對患有愛滋病和愛滋病相關綜合症，而又耐受一種抗愛滋病藥物，齊多夫定，並且存活了12周的病人的有限研究中(Jacobson，MA.，BNJ，30273(1991))，有如下發現。對照三種因素(年齡、基本的愛滋病診斷，基礎血清新喋呤濃度的對數值)後，8至12周的CD4+細胞計數的對數值，而不是隨時間的變化，能最準確地預測以後的存活。8至12周時β2微球蛋白濃度的下降能顯著地預測存活，結合CD4+細胞計數的對數值，則提供了最好診斷模式。P24抗原、血清新喋呤濃度的下降和Karnofsky表現狀態(一種測定正常活動中功能的方法)都與治療後的存活無明顯的相關。Stein，D.S.等人綜合上述認為在研究早期HIV感染的病人的藥物或治療的抗逆轉錄活性，CD4+細胞計數和其它替代標誌的變化可能更多地作為單獨的終點。本發明的第一個方面提供了可用於診斷和治療HIV感染，例如愛滋病和愛滋病相關綜合症的組合物。這項發明的另一方面提供了使用上述組合物檢測HIV感染的方法。這項發明的另一方面提供了使用上述組合物治療HIV感染的方法。這項發明的另一方面提供了從非人類的哺乳動物胸腺中製備上述組合物的方法。這項發明的另一方面提供了用上述組合物進行體外檢測HIV感染的裝置。附圖的簡要說明圖1示胸腺因子(「TF」)製備的色譜。圖2圖示雙向凝膠中第一維的位置。圖3圖示雙向凝膠中第二維的位置。圖4至11是雙向凝膠顯示的HIV陽性或愛滋病人病例和正常健康人的血清樣品的TF沉澱模式的照片。圖12圖7的圖示，分析時的距離測定。圖13雙向電泳的凝膠的照片，顯示HIV陰性人的血清樣品中的TF沉澱模式。圖14雙向電泳的凝膠照片，顯示HIV陽性人的血清樣品的TF沉澱模式。圖15是雙向電泳凝膠的照片，血清樣品取自樣本3的測試病人，1995年，5月4日。圖16是雙向電泳凝膠的照片，血清樣品取自樣本3的測試病人，1995年，5月11日。圖17是雙向電泳凝膠照片，血清樣品取自樣本3的測試病人，1995年，5月18日。圖18是雙向電泳凝膠照片，血清樣品取自樣本3的測試病人，1995年，5月24日。圖19是雙向電泳凝膠照片，血清樣品取自樣本3的測試病人，1995年，5月31日。本發明提供了一種蛋白質，這裡稱之為胸腺因子(「TF」)，它可用於檢測HIV愛滋病，HIV可引起另一種蛋白質的斷裂，這裡稱之為aTF，它能夠與TF結合。可以推測HIV引起aTF的斷裂，因此，一個未被感染的人將有完整的aTF，而一個被HIV感染的人將有aTF的片段。進一步推測在感染的早期，斷裂的aTF的總量是少於感染的晚期。同樣的，在感染的晚期，片斷將更小。因此，檢測aTF的片段可顯示HIV的感染。aTF片段的數量和大小顯示感染的階段。aTF和aTF的片段可通過與TF的沉澱模式，特別是通過確定與β-，α1-，α2-巨球蛋白相應的沉澱位置來檢測，如下述樣本2中描述的凝膠電泳。在雙向電泳膠中發現，TF與未受HIV感染的人的血清相互作用形成與血清中β-、α-、α2巨球蛋白的連續的沉澱支線。當TF與取自HIV感染病人的血清相互作用時，沉澱支線沿著一個或多個巨球蛋白中斷或消失。推測TF能沉澱aTF，aTF發現於健康人的β-、α1-、α2-巨球蛋白，與β-、α1-、α2-巨球蛋白相聯並導致沉澱支線連續地沿著β-α1-α2巨球蛋白出現。在HIV感染人時，aTF片段化，因此引起中斷的沉澱支線或在巨球蛋白處無沉澱支線。因此，在人類生物學樣本中發現TF能與aTF沉澱。生物等樣本的例子是體液，如血液，血清和血漿。除了實施例2描述的雙向凝脈電泳外，沉澱方式可用一些本領域的熟練技術人員已知的技術來檢測，包括用於檢測抗體和抗原的免疫沉澱的模式的方法。這類技術的例子由如下文章所描述。Oudin，J，科學院會議報告(C.R.AcadSci)，222115(1946)；Oudin，J.，醫學研究的方法(MethodsinMedicalReerrch).V335-78CorcoranA.C.編，YearBook出版公司。(1952)；OuchterlonyO，斯堪地那維亞病理微生物學報(Acta.Path.Microbiol.Scond.)，25186(1948)；Ouchterlony，O.，變態反應進展(PrograrsinAllergy.)，V.l-78，KallosP.WakemanB.H，BaselandKarger，NewYork(1958)；Oucherlony，O.，變態反應進展(PrograrsinAllergy)，VI30-154KallosP.Wakeman，編，BaselandKarger，NewYork.(1962)；Mancini，G.等第11屆生物流體學術討論會記要(Prot.Biol.Fluidsth11Colloqn，Bruges)，pp370-3，Peters12ed.(1964)mancini，G，等免疫化學(Immunochemistry)，2235(1965)。TF也可用於治療HIV的感染，如愛滋病和愛滋病相關綜合症。TF可以甲基化或非甲基化狀態存在。這裡所用的「TF」，除非另有修飾，如「甲基化的TF」，包括所有的甲基化和非甲基化TF。這一發明同樣也提供獲得TF的方法，尤其是從胸腺細胞獲得。胸腺細胞最好取自非人類哺乳動物，儘管HIV感染過的非人哺乳動物有較高滴度的TF，但是否被HIV感染並不重要。非人哺乳動物包括有猴子，猿，大猩猩，豚鼠，牛，兔子，狗，小鼠和大鼠。甲基化和非甲基化的TF都能與aTF結合，因此可用於診斷HIV感染，特別是愛滋病。然而，至可對於人類的測試對象的血清來說，甲基化的TF比去甲基化的TF受到其它蛋白非特異性結合的影響較小。因此，甲基化的TF是較好的。非甲基化的TF可以適用文獻中所述的方法，用化學的方法使之甲基化，如下述實施例1中所述的那樣。甲基化的TF可用於HIV感染的治療。特別是愛滋病。TF最好從新鮮獲取的胸腺中純化，即新鮮取得4小時內。新鮮宰殺的哺乳類動物如猴子、猩猩、猿、豚鼠、牛、兔子、狗、小鼠和大鼠。用文獻中的方法從胸腺細胞中分離細胞核。部分細胞核中賴氨酸豐富的組蛋白組分用美國專利號4,415,553的胃蛋白酶降解的方法獲取。其它的降解方法如胰酶降解、木瓜蛋白酶降解，溴化氰降解在提取TF時不是有效的。分離的蛋白質富集組合物用離子交換層析的方法純化。TF(甲基化和非甲基化)那部分蛋白質可用文獻中已熟知的多種方法之一濃縮，包括高鹽沉澱，如硫酸銨或通過超濾。如果TF是用沉澱的方法濃縮，將能較適於在隨後重新溶於含有蛋白酶抑制劑的適當的生理平衡鹽溶液。TF用於抗HIV感染的治療。申請者發現非人哺乳動物，如牛被HIV感染但並不發展成愛滋病，其TF不受損傷。這一發現可推測TF在阻止HIV的感染，特別是愛滋病的發展具有作用。因此，對HIV感染的病人可用TF進行治療。TF最好從被HIV感染但未發展成愛滋病的非人哺乳類動物取得。甲基化的非哺乳類來源的TF是最好的。進而，最好能在感染病人的治療中激發免疫反應。最後，TF最好能與佐劑一同給予或者TF用化學的方法與免疫原載體連接，免疫原載體可引起病人的抗體反應。免疫原載體的例子是釘形貝血藍蛋白(keyholelimpet)和牛血清白蛋白。這一發明的一個方面是TF用於接種預防，治療或治癒HIV的感染，特別是愛滋病和愛滋病相關綜合症。例如，TF通過以所需的純度與佐劑或生理上可接受的載體(即應用的劑量和濃度的載體對受者來說是無毒的)。混和進行製備以給藥。儘管TF最好與佐劑一同給藥，但在最初即用TF接種的情況下，用TF作為加強劑時不需要佐劑。對於這項發明作為疫苗的治療給藥來說，注射(肌肉注射或皮下注射)將是首選的途徑。然而，靜脈給藥，通過導管或其它的外科管給藥也是可行的。其它的途徑包括片劑和類似劑型，液體製劑和凍幹的或霧化的吸入劑。液體製劑也可用粉製劑重溶而成。TF的給藥方式也可以是通過微球體，脂質體及其它的微顆粒運輸系統，或者通過將藥物置於有血管的組織處持續釋放的方式。TF給藥的劑量取決於給藥方式的性質，即其結合活性和體內的血漿半衰期，劑型中TF的濃度，給藥途徑，劑量的作用位點和劑量率，病人的臨床耐受性，包括使病人感到痛苦的病理狀況及類似情況，也包括內科醫生的技術。在一系列的連續的預防接種中，應用不同劑量，醫生給予最初的接種後以相對較小劑量的TF加強刺激。下面是一個TF製劑配方、劑量和給藥方案的例子。病人通過肌肉注射或皮下注射給予8毫克的TF(估選配方是2毫升生理可接受溶液中含有每毫升4毫克的TF)或者病人每一公斤體重給予57微克的TF蛋白。每一療程包括16次注射，每周連續兩天注射兩次共八周。病人病情的監測通過下面進一步描述的方法進行。最後一次注射後三個月，如果病人仍然受到病情的折磨，治療程序將重複一次。治療程序可以不斷重複直至獲得滿意的結果，即中或延緩病情的發展，減輕疾病的痛苦或治癒。TF優選地與氫氧化鋁這種佐劑配伍。最後的一毫升TF的配方含有4毫克TF，0.016M.的磷酸鋁(或0.5毫克Al3+)，0.14M氯化鈉，0.004M乙酸鈉，0.004M氯化鉀，pH值6.2。另一種方案是，HIV感染的病人或未感染的受試者可在5個月後免疫接種，6個月至兩年後再次接種，8個月至一年後再次接種增強病人的免疫記憶。見於Anderson等人，傳染病雜誌(J.InfeetiousDiseases.)，160(6)960-969(1989)總的說來，用TF在相對較長的時間間隔後不經常地免疫比經常性地免疫在引起最強的免疫反應和保護作用方面具有更好的效果。TF能夠以多種的方式給藥並且給不同類型的受者。TF也可作為疫苗給予那些可能或不可能有接觸HIV危險的人。另外，這種疫苗應給予血清陽性的人或以前接觸過HIV的人。TF可以與其它的抗原組成一種「雞尾酒」接種物給藥。TF也可作為一系列長期接種給藥的之一，這種系列給藥可包括接種同樣或不同的HIV抗原或其它疫苗的製劑。適當的治療參數的選擇，例如劑量，時間方案，佐劑選擇以及類似的參數的選擇是通過獲取病人血清樣和在整個一個療程中抗體和/或T細胞滴度的測定而確定的。T細胞滴度可用常規的方法來測定。如T淋巴細胞可用E-玫瑰花結的形成來檢測，如下述文獻描述Bach，J.F，當代免疫學課題(ComptemporaryTopicinImmunology)，Vol.2胸腺依賴性，P.189.PlenumPress.NewYork，1973；Hoffman，T.Kunkel，HG.，andKaplan，M.，E.等，兩篇文章都出自細胞介導和腫瘤免疫中的體外方法(InVitroMethodinCellmediatedandTumorImmunity)，B.R.BloomJ.R.David編，AcademicPress，NewYork(1976)。例如，T細胞政瑰花結形成的數量的分析可在TF治療三周後，十周前進行。若形成的政瑰花結超過百分之六十五，則顯示病人具有良好的細胞介導的免疫反應。進一步的檢驗的指標是病人aTF的形成，這可用下面進一步描述的雙向電泳的方法檢測。另外，病人臨床狀況可作為預期效果的檢測指標，如抗感染效應。如果未取得足夠的抗感染效果，病人可用進一步的TF治療激發而且治療參數可以調整。如通過增加TF和/或佐劑的量，將TF與載體混和或與一種免疫原性蛋白結合，或改變給藥途徑以增強免疫反應。TF可任意地與其它藥劑一起給藥用以治療諸如愛滋病和愛滋病相關綜合症類HIV感染。這類藥物有AZT，抗生素，免疫調節劑，如幹擾素，抗炎藥和抗腫瘤藥。檢測HIV感染的診斷裝置這項發明的另一方面是提供可用於體外檢測HIV感染的診斷裝置。這種裝置設計成可檢測生物樣品中TF和aTF之間的相互作用。更優選地，當生物樣品是血液、血清或血漿的情況下，這種裝置可檢測TF與樣品中β-，α1-和α2巨球蛋白相關的沉澱模式。因此，最好這種裝置包括有一TF位點和一測試樣品位點。因為如實施例2中描述的雙向凝膠電泳是優選的，這種裝置最優選地由一個分別帶有TF和諸如血清樣品的測試樣品槽的凝膠組成。這種裝置優選地包裝成一個試劑盒，其中含有測試操作必要的試劑，諸如緩衝溶液和TF。優選地，該測試裝置有自備的電源，如電池，以便能進行雙向電泳。否則，優選地設計成能與外接電源連接。已描述了申請人所稱的發明，下面的實施例用以闡明這一發明，但並不可認為是對這項發明範圍的限制。實施例實施例一胸腺因子的提取和純化下面的實驗顯示了從宰殺後4小時的牛胸腺中提取TF並純化和分析其特徵。用胃蛋白酶降解的方法從胸腺細胞中分離賴氨酸富集的組蛋白片段。這一部分所用的所有的緩衝液和其它溶液已經過濾除菌。如果需要，緩衝液的pH值可用0.2N氫氧化鈉或0.1N的鹽酸調節。所有的化學試劑，包括製備緩衝液和其它溶液的蒸餾水都是USP級的。新鮮宰殺的牛在4小時內將胸腺組織及相連的結締組織分離。組織用含有0.14M氯化鈉和0.005M乙二胺四乙酸鈉的溶液在4℃洗5分鐘。棄去洗滌溶液，再用同樣的條件洗第二遍。組織在棄去洗滌液後稱重。組織在勻漿器(BrinkmanPolytron勻漿器Brinkman儀器公司，Westbury，NewYork)中勻漿以去除細胞核。勻漿緩衝液含0.14M氯化鈉，0.05M氯化鉀，0.005M氯化鎂，0.003M氯化鈣，0.15MTROS-HCl，pH7.6，0.25M蔗糖。4℃，每分鐘的轉數和時間按勻漿器操作手冊上的推薦值。組織與緩衝液的重量比為1∶4。組織勻漿液用紗布塊真空過濾。濾液在1000g4℃條件下離心90分鐘，棄去上清。沉澱用含0.008M氯化鈉，0.003M氯化鈣，0.003M氯化鎂，0.08M磷酸二氫鈉，0.002MTRIS-HCl，0.25M氯化鈣，pH5.2的緩衝液垂懸，沉澱與緩衝液的重量比為1∶4。垂懸液置於有磁力攪拌子的燒杯中混勻，200rpm，4℃，5分鐘。勻漿液再在4℃，以3500g離心60分鐘。棄去上清。沉澱垂懸於含0.014M氯化鈉，0.001M氯化鈣，0.002M氯化鎂，0.001M乙二胺四乙酸鈉，0.002MTRIS-HCl，0.25M蔗糖，pH4.2的緩衝液中，沉澱與緩衝液的重量比為1∶4。垂懸液再置於有磁力攪拌子的燒杯中混勻，200rpm-4℃，5分鐘。勻漿液再以8000g，4℃離心60分鐘，棄上清。沉澱以預先製備的緩衝液，按重量比1∶4垂懸。緩衝液包括1份溶液1，2分溶液2，17份緩衝液4(體積/體積)。溶液1為10％的十二烷基磺酸鈉的水/乙醇溶液(55∶45，體積/體積)。溶液2為10％吐溫80(溶於蒸餾水)。緩衝液4為0.011M磷酸二氫鈉和0.19M磷酸氫二鈉，pH7.4。垂懸液置於有磁力攪拌子的燒杯中勻漿，以200g，4℃，15分鐘。勻漿液再以12000g，4℃離心60分鐘。棄上清。沉澱稱重並垂懸於含0.05MNa3C6H5O7，0.05M乙酸鈉，0.1N鹽酸，pH2.8的緩衝液，沉澱與緩衝液的重量比為1∶4。垂懸液置於組織勻漿器中以1000rpm，4℃勻漿1分鐘。將每毫克800-2500活力單位的胃蛋白酶(目錄號P7000，SigmaChemicalCompany，St.Louis，Missouri)按1∶10，000稀釋於蒸餾水。按胃蛋白酶(乾粉)與勻漿後的沉澱重量比100∶1.8加胃蛋白酶於勻漿液中。混合物置於燒杯中攪拌。充氮氣，45rpm，4℃下磁力攪拌12小時。攪拌後的混合物在12，000g，4℃下離心60分鐘。棄沉澱，轉移上清並用含飽和硫酸銨的溶液沉澱。一部分上清與一部分溶液混合，用磁力攪拌器攪拌600rmp，4℃，6小時。然後將混合物以12,000g，4℃離心60分鐘。棄上清，沉澱以最少量的含0.1M氯化鈉，0.1M乙酸鈉，0.02M硫二甘醇的溶液溶解。得到的溶液用0.01M氯化鈉，0.01M乙醇鈉pH6.4的溶液透析，直到硫酸銨從透析液中去除。透析液中的蛋白質用Lowry法定量。溶液稀釋至每毫升2毫克蛋白質。用0.1N氫氧化鈉調溶液的pH值至7.2。另將溴乙酸溶於10毫升或更少的水中配成0.2M溴乙酸溶液，用0.1N的氫氧化鈉調pH值至7.0。得到的溴乙酸溶液加入蛋白溶液中，混合物用磁力攪拌器充氮攪拌48小時。在反應過程中，混合溶液的pH值維持在7.2。反應結束時，重複硫酸銨沉澱的步驟到用Lowry法測定蛋白質的濃度。最終的溶液按需要稀釋或濃縮，從200克牛胸腺細胞獲得濃度為每毫升4毫克的蛋白質TF。羧甲基柱色譜一毫升上述含有4毫克蛋白的TF溶液加入用0.05M乙酸鈉平衡的0.9×14cm的羧甲基柱。柱子用氯化鈉溶於0.05M的乙酸鈉，pH6.8的線性梯度溶液洗滌並洗脫。為了形成梯度，兩個同樣大小和形狀的燒瓶用虹吸管連接。一個燒瓶中裝有50毫升0.05M的乙酸鈉，pH6.8的溶液，另一燒瓶中裝有50毫升0.05M乙酸鈉、0.5M氯化鈉，pH6.8的溶液。只有有0.5M氯化鈉的燒瓶才與柱子相連。氯化鈉的梯度從0到0.5M。兩個燒瓶必須劇烈地攪拌以確保完全混勻。1毫升收集1份。洗脫液用流式分光光度計在280nm處的光吸收讀數檢測。洗脫組分45號被確定為含有蛋白質。(見圖1)。TF組分以10,000rpm離心，發現有兩條沉降帶。收集第45號組分並用硫酸銨沉澱法濃縮。所得的濃縮的組分進一步分析如下i)測定分子量收集的TF組分的分子量通過銀染的11％非還原性十二烷基硫酸鈉-聚丙烯醯胺凝膠電泳確定。該電泳是使用Laemmli方法(Laemmli，U.K.Datrue，227680(1970))和Sigrma技術公告MWS-877L所提供的指南(SigmaChemicalCompany，St.Louis，Missouri)而進行的。快速銀染(RSK-l，SigmaChemicalCompany)用於染蛋白質。所用的低分子量標準品(M5630，SigmaChemicalCompany)包括5種蛋白質的混合物(總的蛋白質濃度是1mg/ml)牛血清白蛋白(66,000分子量，MW)；豬心延胡索酸酶(48,500MW)；牛紅細胞碳酸酐酶，(29,000MW)；牛乳β-乳球蛋白(18,400MW)；和牛乳α-乳清蛋白(14,200MW)。凝膠上有兩條帶。較大的帶是非甲基化TF，佔TF組分的98％。較小的帶是甲基化的TF，佔TF組分餘下的2％。根據蛋白質的標準曲線，非甲基化的TF的分子量約為35千道爾頓(Kd)，甲基化的TF分子量約為28Kd。TF混合物(包括甲基化和非甲基化的TF)用pH滴定測定其pH值在7.64和8.6之間。用免疫電聚焦的方法確定其等電點約為5.6±0.1。TF組分中發現的蛋白質的甲基化。TF可通過甲基化製備成甲基化的TF以供下例使用。甲基化的操作如下。TF與足夠量的溴乙酸混合成終濃度為0.2M的溴乙酸溶液。例如，2.78克溴乙酸溶於10毫升蒸餾水中並加入TF至100毫升，含TF700毫克(7mg/ml)。混合物的pH值用0.1M的氫氧化鈉調節並維持在7.24。混合物可孵育6至8小時。所獲得的水相中的TF蛋白質可用文獻中的技術用硫酸銨沉澱的方法濃縮。10毫升甲基化的TF組分加入等量的飽和硫酸銨溶液。混和物冷藏12小時，然後以20,000rpm離心60分鐘。轉移沉澱並溶於含0.1M氯化鈉，0.1M檸檬酸鈉，0.02M硫二甘醇的緩衝液中。混合物再以同樣的緩衝液透析24小時，以去除硫酸銨。實施例2HIV感染的診斷從實施例1中獲得的甲基化的TF用於測定取自病人的血清樣品是否感染HIV。實驗操作如下。本例中的人血清樣品由加利弗尼亞洛杉磯愛滋病健康基金會提供。該基金會已用商品化的酶聯免疫沉澱測試(ELISA)和檢測病人抗HIV抗體的Western印跡法測試過該樣品。首先用ELISA測試，如果ELISA顯示HIV感染(HIV陽性)，Western印跡法用作確定。使用本發明，上述樣品用雙向電泳檢測。檢測裝置是用水浸沒的小型凝膠電泳裝置。(目錄號E0638，SigmaChemicalCompany)。這套裝置包括一可容納800ml緩衝液的緩衝液槽。裝置也裝有一蠕動泵用於緩衝液的循環。該電源的輸出範圍為20至240V，0至100mA，包括穩流和穩壓輸出。凝膠用1％瓊脂糖(目錄號A4679，SigmaChemicalCompany)製備。該凝膠緩衝液包含0.0257MTRIS-HCl，0.009M十水合硼酸鈉，0.067M甘氨酸，0.0034M三水乙酸鈉，0.015M2-巰基乙醇和0.015M硫二甘醇，pH7.64。將14.25ml熔化的1％的瓊脂糖置於電泳膠板上。凝固的凝膠有0.2cm厚，大小為7.5cm×7.5cm。凝膠用同樣的緩衝液覆蓋。用注射針在凝膠上刺了直徑0.9mm可容納5μl血清樣品的槽。在走第一相電泳分離血清蛋白時，電壓用9V/cm，電泳是27mA/cm2，14℃，通電90分鐘，圖2圖示了第一向膠的排布，1指示血清樣品槽。為進行第二相電泳，膠盤需轉90°，並且在新的陰極端去掉一個0.9×45mm的槽，這個槽位於新的陰極端和血清樣槽之間，垂直於陰極-陽極線。圖3圖示了第二向的排布，2指示槽，槽中加滿100μl實施例1中的甲基化的TF。同樣的電壓和電流條件下，14℃電泳50分鐘。在雙向電泳時，電泳緩衝液以25ml/min的速率循環。最後一次電泳後，關閉電源，數秒鐘後移開凝膠。然後將凝脈同時固定和染色，45分鐘，所用溶液為3份甲醇，1份乙醇，12％乙醇和0.1％的溴酚藍(目錄號B-8026，SigmaChemicalCompany)。凝膠再浸沒於蒸餾水中脫色3至4小時然後乾燥。為測定分子量，在同樣的條件下做一個對照的雙向電泳，採用銀染的方法，用小分子量的標記物代替血清和例1中所述的TF。雙向電泳凝膠上血清蛋白質的位置如圖4所顯示。圖4中，免疫球蛋白的斑點3緊鄰含有病人血清樣品的血清槽1。β聚球蛋白4也同樣。距血清槽較遠的是α2巨球蛋白5，α1聚球蛋白6和血清白蛋白7。TF與血清中的aTF的沉澱通過顯示的細的乳白線(沉澱支線)來檢測。這些沉澱的方式顯示測試對象是否有HIV感染。圖4中顯示的沿著β和α1巨球蛋白直至α2巨球蛋白的連續的沉澱支線8表明測試對象未被HIV感染。不連續的(即中斷的)沉β-，α1，和α2巨球蛋白的沉澱支線和/或不沿著任何或所有巨球蛋白的沉澱支線表明有HIV感染。進一步，當測試對象的HIV感染(如愛滋病)加劇，沉澱會變少，沉澱支線也變得不清楚。上述的發現提示，健康血清中aTF在HIV感染時被斷裂，導致TF和斷裂的αTF沉澱形成的中斷的沉澱支線。αTF片段的分子量小於整個分子，因此在電泳場中遷移得更遠。因而沉澱支線離TF槽更遠。可以假設，但不必受這種假設的約束，當愛滋病，HIV相關疾病或HIV感染相當嚴重時，αTF將會斷裂成更多的片段，因此，將會有較多的不連續的沉澱支線在距離含TF的溝較遠的位置上。因而，沉澱的方式也能顯示疾病發展的程度。所以，顯示在圖上的凝膠可作如下解釋圖5顯示斷裂的沉澱支線9表明測試對象是HIV陽性。這個受試者的血清用ELISA和本發明的方法都為HIV陽性。在取血樣時，受試者並未顯示任何臨床的愛滋病症狀。圖6至9顯示位置10，β巨球蛋白定位於此，健康受試者的沉澱支線緊鄰於此，並且沉澱支線沿β-，α-、α2巨球蛋白的位置(圖4)連續展開。相對的是，在圖6至9受試樣的沉澱支線11是中斷的(即不是沿著β-、α-和α2巨球蛋白的位置連續的)並且低於位置10。受試樣的沉澱支線的位置表明它們比健康受試樣的沉澱支線有較小的分子量。斷裂的片段和支線以及較小的分子量表明受試樣是HIV陽性的。在本測試進行之前3至6個月，這些樣品用ELISA檢測為HIV-陽性。本檢測所用的血清是與做ELISA檢測時同時取的。在進行本檢測時，受試者顯示出愛滋病的臨床症狀。受試者病情的嚴重程度依次為圖6(愛滋病最嚴重的病例)，圖7，圖8和圖9(愛滋病最輕的病例)。臨床觀察的疾病的嚴重程度與圖中顯示的沉澱模式是一致的。首先，凝膠上的沉澱支線比預計的健康樣品的沉澱支線在距離上較遠的與較近相比表明aTF的片段較小因而愛滋病的病情更嚴重。例如，這一距離可以與第一條沉澱支線的相對距離來確定，即從預計的健康樣品的沉澱支線算起，離血清樣品孔垂直距離最近的沉澱支線。從健康樣品的沉澱支線的位置算起，無論水平方向還是垂直方向，相對距離越遠，則病情越嚴重。第二，如果上述的因素在兩個愛滋病樣品的凝膠中不能明顯區分，則凝膠上顯示沉澱支線顏色深而數量少的樣品，病情較輕。沉澱支線數量少且沉澱作用強表明aTF較少斷裂並且水平較高，因而愛滋病的病情較輕。第一個分析的應用的例子是用於分析圖6至10。為了使這些圖的比較標準化。所有的圖應有一固定的點，這裡選血清樣品孔1作為基線14。第一個沉澱支線是在垂直距離上15，最靠近基線14。由於健康樣品的沉澱支線從β和α1巨球蛋白的附近延伸至α2巨球蛋白(見圖4)，因而可以從β、α1或α2巨球蛋白中任一點來計數相對距離。在這裡選擇β巨球蛋白的位置10。這一系列的圖中，沉澱支線到β巨球蛋白的位置10的垂直17和水平16距離都測定和比較。那些血清在凝膠上形成沉澱支線與β巨球蛋白的位置具有相對較大的垂直17和水平16距離的受試者比那些具較小距離的受試者病情更為嚴重。比較顯示如下圖6(愛滋病最嚴重的病例)，圖7，圖8和圖9(愛滋病病情最輕的病例)。這是第一種分析應用的實例。本領域的熟練技術人員會認識到基線可作為另一個對所有凝膠照片都是標準的位置，相對距離可從另一血清樣品延伸的點上計算。只要所有用於比較的照片上的這些點是一致的並且可始終用於測定相對距離。其它只要不偏離第一種分析的主旨的改變都是可行的。圖10的重要意義在於用血清進行這次檢測的同時，樣品用ELISA檢測為陰性。而本發明的檢測表明樣品顯示有斷裂的沉澱支線11，是HIV陽性的。血清檢測二個月後，ELISA檢測的結果HIV陽性。因此，這一圖示確認了本發明的檢測比常規的ELISA更適於早期診斷HIV的感染。圖11的重要意義在於血清樣品取自臨床已診斷為愛滋病且接受了健康供體的輸血的病人。由健康供體血清引起的沉澱支線，表明如箭頭12所指在較高分子量的位置，這傾向於顯示最初來自健康供體的全部aTF的少量斷裂片段，所以沉澱支線的位置接近於預計的健康樣品的分子量，其與圖10中沉澱支線顯示的相對相似的位置更表明感染的早期階段。由愛滋病患者血清導致的沉澱支線如箭頭13所指，位於低分子量的位置，表明來自病人和HIV感染的斷裂而致的小的aTF。這裡顯示的雙向凝膠電泳可作為一種體外裝置的批量生產，用以檢測生物流體樣品以確定受試樣品中HIV感染的存在。凝膠可進行乾燥處理以易於包裝和運輸。包裝好的凝膠可包括預先制好的用以放樣品的圖形孔和放TF的槽。TF可以置於一容器內分開出售或與凝膠一起作為一試劑盒出售。另外，試劑盒也可包括放電泳緩衝液的容器，染色劑和/或分子量標準。為了做對照，試劑盒更可包括來源於健康受試者的血清樣品。除了上述的檢測，本發明還包括上述檢測的改進方法和任何用aTF進行測定生物流體樣品沉澱模式的方法，特別是與β、α1和α2巨球蛋白有關的。含有這一檢測需要的試劑和材料的試劑盒也屬於本發明。實施例3本實施例描述的是用本發明的TF組合物治療愛滋病人(在本實施例3中也稱為受試者)的研究。在研究過程中病人未接受任何其它治療或服用藥物。病人為一名27歲的白種同性戀男子，治療開始時體重為138磅。8個月前，病人的血清檢測為HIV抗體陽性。其基於臨床症狀的診斷也為HIV陽性，如下表1中所顯示的開始TF治療前2周，即1995年4月22日所取病人血樣的檢驗結果，指標包括P24抗體計數，C4+和CD8+全部細胞的計數(細胞數/微升)，和淋巴細胞亞型所佔的百分率。在接受TF治療的前後，病人都未有愛滋病的症狀。治療從1995年4月27日開始。病人每周接受兩次肌肉注射共14mg的TF。一次在周二，另一次在周三。每次注射含7mg的TF(2ml，按3.5mg/mlTF的配方)。該TF是按上述實施例1所述方法純化，無菌的TF配方含有3.5mg/ml甲基化的TF，8.1mg/ml氯化鈉，1.9mg/ml乙酸鈉，2.6mg/ml三磷酸鈉，2.1mg/ml氯化鋁，pH6.2。表1表1顯示了實驗結果，日期為取病人血樣的日期。測試是由Unilab公司(Tarzana，California)，用普遍接受的臨床檢驗方法完成的。測試指標如下「RBC」和「WBC」分別代表紅細胞和白細胞的計數(×103/mm3)。「HEMOGLOBIN」和「PLATELETCOUNT」分別代表血紅蛋白計數(以g/dl計)和血小板計數(×103mm3)。「POLYS」代表嗜中性細胞計數佔白細胞計數的百分率。「LYMPHOCYTES」，「MONOCYTES」，「EOSINOPHILS」，和「BASOPHILS」的計數分別是佔白細胞計數的百分率。上述所有的血液計數是用血液分析儀完成的。「CD4％」和「CD8％」分別代表淋巴細胞亞型CD4+和CD8+的百分率。「CD4ABS」和「CD8ABS」分別代表CD4+和CD8+細胞的絕對細胞數(按細胞數/微升計)。CD4+和CD8+細胞計數用流式細胞儀完成。「RATIOH/S」代表輔助細胞對抑制細胞的比率，由「CD4ABS」數除以「CD8ABS」數獲得。「TOTALPROT」代表病人血樣中全部血清蛋白的量，以g/dL計。用OlympusAll5000儀器(OlympusCo.Ltd，Tokyo，Japan)採樣比色法獲得。「ALB」代表血清白蛋白；「ALPHA-1」代表alpha-1球蛋白；「ALPHA-2」代表alpha-2球蛋白；「BETA」代表beta球蛋白；「GAMMA」代表gamma球蛋白。這些血清蛋白通過血清蛋白電泳測定。對每一欄的對某一種血清蛋白的每一列而言，左邊的數據是以g/dl計，右邊的數據顯示每一種血清球蛋白在全部的血清球蛋白中所佔的百分比例。「P/24」代表P24病毒核心抗原，用P24抗原的EIA檢測試劑盒(AbbottLaboratories，AbbotlPark，Illinois)測定。還有，在表1所示時間所取的血樣用OrganonTechnica(Roleigh，NorthCarolma)的HIVELISA試劑盒檢測結果為HIV-1抗體陽性。從第一次注射TF到1995年5月24日，病人體重增加了7磅。上述的檢測結果顯示了在開始TF治療後，CD4+細胞計數上升和CD8+細胞計數下降的趨勢。另外，在開始TF治療後，P24抗原檢測顯示陽性結果，而在TF治療之前和開始時受試樣為陽性。因受試樣中仍存在殘留的抗體，所以HIV抗體分析仍為陽性。這些檢測結果提示，TF治療對於抵抗HIV感染和由HIV感染引起的疾病的發展是有效的。除了由Unilab公司進行的上述檢測外，申請人也對表1中顯示時間取的血清樣品進行了上述實施例2中所述的雙向電泳HIV診斷檢測。圖13和14是兩個對照血清樣品的雙向電泳凝膠的照片一個受試者的血清樣品在OrganonTechnica進行的ELISA檢測中HIV抗體陰性，另一個受試者的血清樣品在同樣的ELISA檢測中呈陽性，從圖13可見，沉澱支線9是一個沿著β、α1和α2巨球蛋白延伸的連續的支線，表明健康的HIV陰性的受試者。相對的是，圖14中的沉澱支線9是不連續的，表明受試者是受HIV感染的。圖15至19顯示的是分別在1995年5月11日，5月18日，5月24日和5月31日採集的受試者血清樣品的雙向電泳凝膠的結果照片。如圖15所示，在接受了上述的於1995年5月4目的TF治療一周後，受試者血清樣品HIV感染檢測為陰性，如沿著β、α1和α2巨球蛋白的位置的連續的沉澱支線9所示的那樣。如圖16所示，在治療的第二周，即1995年5月11日，受試者的血清形成沿β、α1巨球蛋白位置沉澱支線9，這比圖14中HIV陽性病人對照連續性好。如圖17和18所示，在治療的第三和第四周，即1995年5月18日和24日。受試者血清形成不很連續的沉澱支線9。然而在第5周，1995年5月31日，又能發現沿β、α1和α2巨球蛋白位置的連續的沉澱支線9(如圖19所示)，表明HIV陰性狀況。雙向電泳檢測有助於提示本發明的TF治療對抵抗HIV感染和/或病情的發展的有效性。實施例4本實施例提供有關6個病人用本發明的TF組合物進行治療的進一步資料。這些病人在治療過程中和治療後6周內未接受任何其它的治療和藥物。下表也顯示病人在治療期結束後9個月(第1-5號病人)和2個月(第6號病人)的資料。在連續的6周裡，每個病人接受每周2次肌肉注射共14mgTF，一次注射在周二，另一次在周三。每次注射含7mg的TF(2ml，配方為3.5mg/ml的TF)。TF按上述實施例1中所述純化，無菌的TF配方包含3.5mg/ml甲基化TF，8.1mg/ml氯化鈉，1.9mg/ml乙酸鈉，2.6mg/ml三磷酸鈉，2.1mg/ml氯化鋁，pH6.2。表2至7顯示對每個病人研究的結果。檢測是由實驗室用普遍接受的臨床分析方法完成。表中「HIV-Ab，ELISA」表示HIV-1抗體用ELISA來測定。「CD4abs」和「CD8.abs」分別表示CD4和CD8細胞的絕對細胞數(按細胞數/微升計)。「P24Ag」表示P24病毒核心抗原用P24抗原免疫複合物分解(ICD)EIA測定。這種用於HIV-1抗原的EIA在分解免疫複合物後檢測P24核心蛋白。「HIV-1RNA，PCR」表示用聚合酶鏈式反應(PCR)擴增的方法定量檢測每毫升血漿中HIV-1核糖核酸(RNA)的拷貝數。檢測的病毒RNA拷貝數的增加/減少是與血漿中病毒的增加/減少有關。「HIV-1PlasmaCulture」表示在血漿和外周血單核細胞培養中HIV-1的滴度。「HIV-1PlasmaQuantitative」表示HIV-1病毒感染率，以每毫升感染單位表示(Iu/ml)。「PolyCells」表示白細胞的絕對計數(細胞數/微升)。α1巨球蛋白(以alpha-1macro表示)，α-2巨球蛋白(以apha-2Macro表示)和γ免疫球蛋白(IgG)由血清蛋白電泳測定。數據(％)表明的是某一血清球蛋白在全部血清球蛋白中所佔的百分率。表7中「IgA」和「IgM」分別表示免疫球蛋白A和M。表7中，IgG，IgA和IgM以mg/DL血清表示。「HLA-DR」代表位於染色體6上的人類主要組織相容性抗原複合物的一種產物。表2-7中使用的其它的定義有inc.健康人的正常水平pos.陽性+陽性，陽性水平的上升以增加的「+」表示neg.陰性-未檢測nt未檢測x健康人正常水平的倍數，如「2x」表示正常水平的兩倍。下面是對每人病人情況的詳細描述。1號病人下面的表2概括了對1號病人所做臨床檢測的結果。治療開始時，1號病人(-21歲的女性)已完全發展為愛滋病，伴有大腦的損傷和神智失常，CD4計數為36，預計壽命6至12個月。她的CD4計數從36(在治療開始時)到108(在結束療程後9個月)。在治療第四周開始時，P24核心抗原為陰性，即低於5μg/ml。這一陰性的P24核心抗原的結果表明，在治療的第四周，已無病毒的活動。當治療4個月時，血漿HIV-1培養檢測為陰性。陰性的血漿HIV培養結果表明分離自該病人血漿的T細胞當與未感染的對照血液混合，在體外進行檢測時是無感染活力的，即陰性血漿培養。相反，當來自HIV-1感染的對照血液的T細胞與未感染的對照血液混合進行體外檢測時產生陽性血漿培養。在TF治療中和治療後，IgG，α-1和α-2巨球蛋白的活性上升。治療後4個月，病人不再有充分發展的愛滋病(即不會再有得病的機會)，儘管她仍然是HIV陽性。(即ELISA檢測抗HIV抗體陽性)。表2病例1人的臨床和實驗室檢驗結果檢測指標治療前治療中的結果肌內注射2×/周治療後的結果未進行其它治療-月2461245679HIV-Ab，ELISA+++++++++--++++++++--++++CD4絕對數36233449--5361--108CD8絕對數672237775537--12091162--983P24抗原pos.pos.neg.neg.---neg.neg.negHIV-1RNA，PCR88200--17300--11900---6500每ml拷貝數HIV-1血漿培養pos.--neg.--neg---neg.HIV-1定量培養-----------白細胞×1032.232.84.765.7--6.66.4--6.9α-1巨球蛋白1.35％1.24％2.66％2.70％--2.70％2.70％--1.9％α-2巨球蛋白8.12％7.91％5.22％11.1％--9.30％8.80％--8.80％γ免疫球蛋白14.20％23.60％25.00％26.2％--26.00％25.20％--22.00％δ/γ鏈2x2x1.5x--inc.inc.--inc.HLA-DR2x2x2x--incinc--inc.第2號病人下面的表3概括了2號病人所做臨床檢測的結果。治療開始時，2號病人(30歲男子)是HIV陽性(即ELISA檢測抗HIV抗體陽性)，但沒有所有的愛滋病症狀。他的CD4細胞計數從193(治療前)上升至305(治療結束後9個月)。他的P24核心抗原在TF治療前、治療中和治療後保持陰性，表明低病毒活力。他的血漿培養在治療4個月後轉變為陰性，表明他的血漿在體外檢測中無感錄活性。IgG，α1和α2巨球蛋白水平的上升表明他體液免疫力上升。在治療結束後4個月，病人仍未顯示任何愛滋病的症徵兆。表3病例2人的臨床和實驗室檢驗結果檢測指標治療前治療中的結果肌內注射2×/周治療後的結果未進行其它治療-月2461245679HIV-Ab，ELISA+++++++++++--+++++++--++++CD4絕時數19350144173--193288--305CD8絕對數1348298755840--15331312--1291P24抗原neg.negneg.neg.-neg.neg.--neg.HIV-1RNA，PCR43200--21100--9000---7000每ml拷貝數HHI-1血漿培養pos-neg.--neg.----negHIV-1定量培養----------白細胞×1034.93.86.16.2--6.06.9--6.1α-1巨球蛋白1.37％1.4％2.4％2.5％--2.5％2.3％--2.1％α-2巨球蛋白2.7％4.2％8.4％8.7％--8.8％8.3％--8.5％γ免疫球蛋白13.0％13.5％15.0％17.0％--20.0％18.0％--18.8％δ/γ鏈1.5x1.4x1.2x--inc.inc.--inc.HLA-DR1.2x1.2x1.2x--inc.inc--inc.3號病人下面的表4概括了3號病人進行臨床檢測的結果。治療開始時，3號病人(24歲女子)是HIV陽性(即ELISA檢測抗HIV抗體陽性)，但並未有所有愛滋病症狀。CD4細胞計數從404(治療前)上升到636(治療結束後9個月)。在整個研究過程中她的P24核心抗原檢測為陰性。她的血漿培養在治療後4個月時轉為陽性。她的IgG，α1和α2巨球蛋白的上升表明病人體液免疫力的增強。治療結束後9個月，病人未顯示愛滋病徵兆。表4病例3人的臨床和實驗室檢驗結果檢測指標治療前治療中的結果肌內注射2×/周治療後的結果未進行其它治療-月2461245679HIV-Ab.ELISA++++++++++--++++++--+++CD4絕對數404217538375--446580--636CD8絕對數154410541587898--14961381--1191P24抗原neg.negnegneg--neg.neg.--neg.HIV-1RNA，PCR每ml拷貝數5121014240--------8840HIV-1血漿培養pos.--neg.--neg--neg.HIV-1定量培養---------白細胞×1033.72.95.16.9--6.86.6--6.7γ免疫球蛋白12.24％144％17.7％21.0％--19.8％18.01％--18.0％α-1巨球蛋白1.2％1.4％2.6％2.7％--2.7％2.4％--2.4％α-2巨球蛋白4.1％4.1％5.3％8.3％--8.1％8.2％--8.2％δ/γ鏈1.2x1.4xinc.--inc.inc.--inc.HLA-DR1.8x1.4x1.2x--incinc--inc.4號病人下面的表5概括了4號病人所做臨床檢驗的結果。治療前，病人(27歲男子)是HIV陽性(即ELISA檢測抗HIV抗體陽性)，並且有成熟的愛滋病症狀(3級伴隨喉和肺上部的機會感染)。他的CD4細胞計數從389(治療前)增加至599(治療結束後9個月)。他的P24核心抗原在治療4周後轉陰並維持下去。他的HIV血漿感染力在治療6周後轉變成無感染力並維持下去。他的IgG，α1和α2巨球蛋白上升表明病人體液免疫力增強。治療結束後12個月時，病人不表現任何愛滋病徵兆。表5病例4人的臨床和實驗室檢驗結果檢測指標治療前治療中的結果肌內注射2×/周治療後的結果未進行其它治療-月2461245679HIV-Ab，ELISA+++++++++--++++++++--++++CD4絕對數389322507394--393573--599CD8絕對數850752839540--563607--802P24抗原pos.pos.neg.neg--negneg.--neg.HIV-1RNA.PCR每ml拷貝數116000--30000------6600HIV-1血漿培養pospos.-neg.--neg---neg.HIV-1定量培養-----------白細胞×1034.33.86.36.7--6.66.3--6.4α-1巨球蛋白1.7％1.8％4.0％4.4％--3.3％2.4％--1.6％α-2巨球蛋白9.1％9.0％7.8％10.2％--10.2％9.8％--10.1％γ免疫球蛋白14.8％12.6％23.0％23.0％--19.8％21.0％--19.3％δ/γ鏈2x2x1.5x--inc.inc.--inc.HLA-DR2x2x2x--inc.inc.--inc.5號病人此病人是與上述實施例3中的為同一人。下面的表6概括了5號病人所做的臨床檢驗的結果。治療前，病人是HIV陽性(即ELISA檢測抗HIV抗體為陽性)，有肺炎、嘔吐和無便血的腹瀉症狀。但沒有成熟的愛滋病症狀。他的CD4細胞計數在治療後保持不變。他的P24核心抗原在治療4周時轉陰並在治療後7個月保持不變。HIV-1的RNA的PCR結果顯示病毒的拷貝數維持在大約6000-7000拷貝/ml。他的血漿培養在治療後無感染力。他的免疫系統使IgG，α1和α2巨球蛋白上升。他體重增加了10-12磅。治療結束後10個月，他不顯示任何愛滋病徵兆。表6病例5人的臨床和實驗室檢驗結果檢測指標治療前治療中的結果肌內治療後的結果未進行其它治療-月注射2×/周2461245679HIV-Ab，+++++++++++++++++++++++++++++++++++ELISACD4絕對數528531502420470596434415438438669CD8絕對數nt1108979803810122010041150926909890P24抗原pos.pos.neg.neg.negneg.negneg.neg.neg.neg.HIV-1RNAPCR，每ml拷貝數70000---787030920---6317-HIV-1血漿pos.pos.pos.negneg.negneg.neg.neg.neg.neg.培養HIV-1定培ntnt--ntntntntntntnt養量白細胞×1034.36.25.75.9605.97.36.55.65.86.0α-1巨球蛋1.3％2.6％1.9％2.0％2.8％2.6％2.1％2.4％2.4％2.4％2.4％白α-2巨球9.4％9.2％7.3％8.0％10.3％-10.1％11.8％11.8％-11.2％蛋白γ免疫球蛋18.6％25.0％26.3％25.1％24.7％-24.6％23.9％22.8％-23.3％白δ/γ鏈1.2x1.6x2.0x1.5x---inc.-inc.HLA-DR1.2x1.8x2.0x2.0x---1.2x-inc.6號病人下面的表7概括了6號病人所做的臨床檢驗的結果。在療程開始時，病人有成熟的愛滋病徵狀(介於3至4級，有諸如視網膜炎，細胞肥大病毒感染，喉、肺、氣管和支氣管的真菌感染、以及臥床不起等病症)。他的CD4細胞計數在2個月治療後略有上升。他的P24核心抗原在4周治療後轉陰並維持下去。他的血漿培養在治療前是陽性，治療後轉陰成無感染力。通常，病人外周血細胞培養為陽性伴有CD4計數低於100，病毒數量為5×105但對於6號病人，在治療1個和2個月時外周血細胞中檢測不到HIV。重要的是，病人的病毒數從5×105下降至3×104病毒RNA拷貝，這接近於病毒RNA下降1.5個對數值。6號病人從治療開始後體重也增加了15磅。治療結束的3個月，病人未患愛滋病。表7病例6人的臨床和實驗室檢驗結果nt＝未檢測；neg＝陰性結論本實施例顯示當P24核心抗原變得低於測試方法的測檢低限，5μg/ml時，HIV病毒的活性被中止。在HIV病人中也顯示令人注目的CD4計數的上升。比之那些諸如AZT和其它的在美國可購買到的抗病毒產品，這種上升在時間上更引人注目。本實施例也顯示用定量RNA聚合酶鏈式反應的方法檢測到病人病毒數量的令人注目的下降。病人的血漿培養轉陰。在體外體系中，病人的血漿是無感染力的。病人的T細胞是不能在體外感染未感染(正常)的病人的T細胞。上述可能也表明血漿中無病毒。也可能表明病人可能已受到免疫，因此不能夠感染其它未感染的病人。外周血單核細胞(PBMC)檢測呈HIV陰性。治療使成熟的愛滋病人變成其血漿和外周血細胞都檢測不到HIV的病人。顯然，病人的體液免疫和細胞免疫都參與了破壞和中和病毒。本發明已參照具體的實施方案來描述。然而，本申請意圖包括那些不超出附加的權利要求書的精神和範圍的並由那些本領域的熟練技術人員作做出的改更和替代。權利要求1.一種包含有可從哺乳動物胸腺細胞核獲得的賴氨酸富集的組蛋白組分的組合物，其與未受HVI感染的人的血清接觸時，能夠沉澱健康哺乳動物β、α1和α2巨球蛋白。2.根據權利要求1所述的組合物，當其去甲基化時，包含一種用11％非還原的十二烷基硫酸鈉-聚丙烯醯胺凝膠電泳鑑定的約35千道爾頓的蛋白質。3.根據權利要求1所述的組合物，當它甲基化時，包含一種用11％非還原的十二烷基硫酸鈉-聚丙烯醯胺凝膠電泳鑑定的約28千道爾頓的蛋白質。4.根據權利要求1所述的組合物，其蛋白質的等電點約為5.6。5.根據權利要求4所述的組合物，其pH值介於7.4和8.6之間。6.一種用包括如下的步驟的方法製備的TF蛋白的組合物，步驟為a)從哺乳動物胸腺細胞核純化一種賴氨酸富集的組蛋白組分；並且b)將賴氨酸富集的組蛋白組分與一種陽離子交換色譜材料接觸足夠的時間以便TF蛋白與這種材料結合；c)通過使色譜材料與一種有效的鹽的水溶液接觸以從陽離子色譜材料中洗脫TF蛋白。7.根據權利要求6所述的組合物，進一步包括收集能夠沉澱健康哺乳動物的B、α1和α2巨球蛋白的洗脫物的步驟。8.根據權利要求7所述的組合物，其陽離子交換色譜材料是一種羧甲基柱色譜，洗滌羧甲基柱和洗脫TF蛋白是用線性梯度的氯化鈉的0.05M乙酸鈉的溶液(pH6.8)。9.根據權利要求7所述的組合物，其中的賴氨酸富集的組蛋白組分的獲得是通過用胃蛋白酶處理以解聚細胞核，並從得到的解聚混合物中分離而進行的。10.一種檢測人類受試者的感染的方法，包含的步驟有a)從受試者收集生物樣品，並，b)檢測一種蛋白質，aTF斷裂的模式，aTF能夠與從胸腺細胞核獲取的存在於賴氨酸富集組分中的一種蛋白質TF結合，其中的感染導致aTF的斷裂。11.根據權利要求10所述的方法，其中的TF能夠沉澱健康哺乳動物的β、α1和α2巨球蛋白。12.根據權利要求11所述的方法，其中的TF在去甲基化時約為35千道爾頓，在甲基化時約28千道爾頓，這是用11％非還原性的十二烷基硫酸鈉-聚丙烯醯胺凝膠電泳測定的。13.根據權利要求12所述的方法，其中的aTF斷裂模式是通過它與TF沉澱的模式來檢測的。14.根據權利要求13所述的方法，其中包括向凝膠電泳，而該凝膠電泳的aTF與TF沉澱模式是進一步通過其在凝膠電泳上有關於β、α1和α2巨球蛋白的位置而檢測的。15.根據權利要求14所述的方法，其中的生物標本的選自血清、血液和血漿。16.一種檢測人類受試者HIV感染的方法，包括步驟a)採集受試者生物標本，所述的生物標本選自血清、血漿和血液。b)將生物標本與從來自非哺乳類胸腺細胞核賴氨酸容集的組蛋白組分中純化得到的TF蛋白混合，c)確定TF和來自HIV感染的生物標本中的β、α1和α2和α2巨球蛋白的相關的沉澱模式。17.根據權利要求16所述的方法，其包括將生物標本和TF施加於凝膠電泳，以及確定TF和HIV感染的生物標本間的與凝膠上β、α1和α2巨球蛋白位置相關的沉澱模式。18.根據權利要求17所述的方法，其中的TF進一步甲基化並由11％非還原性十二烷基磺酸鈉-聚丙烯醯胺凝膠電泳確定分子量約為28千道爾頓，且等電點約為5.6。19.根據權利要求18所述的方法，其中的凝膠電泳是雙向凝膠電泳。20.根據權利要求19所述的方法，其中在凝膠上緊鄰從β、α1至α2巨球蛋白位置發出的連續的沉澱支線的缺失表明受試人受到HIV的感染。21.根據權利要求20所述的方法，其中如果沒有連續的沉澱支線，而發現有斷裂的沉澱支線，若沉澱支線較弱或分子量較小，則受試人較重的HIV感染或HIV相關疾病。22.一種用於受試人體外檢測HIV感染的裝置，所述的裝置包括一固體支持物，其中含有一可放置取自受試人的生物流體標本的區域，及放置TF蛋白的區域；所述的TF是能從非人哺乳類胸腺細胞核的賴氨酸富集組分中提取，並能夠沉澱取自未受HIV感染的人的血清樣品中β、α1和α2巨球蛋白；所述的固體支持物應能使生物標本與TF接觸並形成沉澱，且能檢測這種沉澱支線。23.根據權利要求22所述的裝置，即所述的固體支持物是一種雙向電泳凝膠，而所述的接觸和沉澱是通過雙向凝膠電泳來實現的，所述的生物是選自血液、血清和血漿。24.一種用於體外檢測受試人HIV感染的試劑盒，該試劑盒包括a)一種含有TF蛋白的容器，該TF蛋白能夠從非人哺乳類胸腺細胞核中的賴氨酸富集的部分提取，並且能沉澱取自未受HIV感染的人的血清標本中β、α1和α2巨球蛋白；和b)一種適用於進行雙向電泳的電泳凝膠的裝置。25.一種純化蛋白質TF的方法，包含步驟有a)從哺乳類胸腺中提取細胞核b)從細胞核中獲取賴氨酸富集部分；和c)基於TF沉澱β、α1和α2巨球蛋白的能力，從賴氨酸富集部分純化TF。26.第一種蛋白質具有第二種蛋白質的特性，所述的第二種蛋白質是從哺乳類胸腺細胞核的賴氨酸富集的組蛋白組分中提取。所述的第一種和第二種蛋白具有的特性是a)在雙向電泳的凝膠上於鄰近來源於健康人血清的β、α1和α2巨球蛋白處形成單一的連續的沉澱支線的能力；和b)在雙向電泳的凝膠上在鄰近來源於愛滋病病人血清的β、α1和α2巨球蛋白處不能形成單一的連續的沉澱支線。27.根據權利要求26所述的第一種蛋白質，其中的第二種蛋白質是可用胃蛋白酶降解的方法從哺乳類胸腺細胞核中提取。28.一種治療遭受HIV感染的人的方法，包括注射一種含有權利要求26所述的第一種和/或第二種蛋白質的組合物。29.根據權利要求28所述的方法，其中的HIV感染選自愛滋病和愛滋病相關疾病；第二種蛋白是可用胃蛋白酶降解的方法從哺乳類胸腺細胞核中提取，而哺乳類胸腺細胞核是非人類的。30.一種接種人以抗HIV感染的方法，包括注射含有根據權利要求26所述的第一種和/或第二種蛋白的組合物。全文摘要本發明涉及免疫學和病毒學領域,特別涉及從哺乳類胸腺細胞獲取的組合物,這些組合物可用於診斷、接種和治療人類免疫缺損病毒(HIV)的感染及相關的疾病,如獲得性免疫缺損綜合症(AIDS)和愛滋病相關綜合症(ARC)。本發明也公開了使用這些組合物進行診斷、接種和治療的方法和裝置。文檔編號A61K39/00GK1189839SQ96195203公開日1998年8月5日申請日期1996年5月1日優先權日1995年5月1日發明者哈裡·P·扎比羅夫申請人:美國湯姆森有限公司