一種多藥自聚複合納米粒子、其製備方法和應用的製作方法
2023-06-10 09:03:46 2
一種多藥自聚複合納米粒子、其製備方法和應用的製作方法
【專利摘要】本發明公開了一種多藥自聚複合納米粒子、其製備方法和應用，所述多藥自聚複合納米粒子由至少一種疏水性藥物分子和至少一種水溶性藥物分子複合而成；其是通過將所述疏水性藥物分子溶解於良溶劑中得到疏水性藥物分子溶液，然後先後或同時將所述疏水性藥物分子溶液和水溶性藥物分子溶液加入所述疏水性藥物分子的不良溶劑中，並經加熱磁力攪拌和超聲處理得到的。所述多藥自聚複合納米粒子不含載體、具有高載藥量，不存在載體帶來的潛在毒副作用；其製備方法操作簡單，能廣泛應用，所得納米藥物尺寸均一，具有協同治療作用。
【專利說明】一種多藥自聚複合納米粒子、其製備方法和應用
【技術領域】
[0001]本發明涉及藥物納米粒子【技術領域】，尤其涉及一種多藥自聚複合納米粒子、其製備方法和應用。
【背景技術】
[0002]癌症已成為威脅人類健康的重大威脅之一，有效的治療癌症已經是科學研究中的當務之急。化學療法是用可以殺死癌細胞的藥物治療癌症，也是目前最常見的癌症治療方法。臨床常用的化療藥物的腫瘤細胞殺傷機制並不相同，通常為了提高療效，降低耐藥性，醫生的治療方案中會選擇不同的化療藥物聯合使用，兩種或以上的藥物會產生協同作用，可以獲得更好的治療效果。因此多種藥物聯合治療，是治療癌症最為有效的方法。
[0003]由於目前用於癌症治療的大多數化療藥物顯示出低的水溶性、有限的穩定性、快速地血液清除和缺乏選擇性，藥物進入機體後不僅分布於腫瘤組織也分布在正常組織，在殺傷腫瘤細胞的同時也殺傷了正常細胞，從而導致療效低、毒副作用強。因此，增強化療藥物的抗腫瘤效果並減少其毒副作用已成為臨床目前亟待解決的問題，開發更好的藥物傳輸系統對於腫瘤的治療已經迫在眉睫。
[0004]近年來，納米技術的出現，為癌症的治療找到了新的途徑。隨著納米技術的不斷發展，各種新型的納米級的藥物載體層出不窮，製備工藝逐步完善，劑型逐步改善，大量的研究證明利用納米載體包載藥物或者連接藥物，不僅大大的增加了藥物的水溶性和穩定性，延長藥物在血液循環中的時間，增加藥物的生物利用度，還能夠提高藥物治療指數、降低毒性、減小副作用。
[0005]儘管藥物載體具有很多優勢，然而，藥物納米載體僅僅作為藥物傳輸工具，並不具有腫瘤殺傷作用，載體材料所存在的潛在毒副作用很難被研究清楚，所以其臨床應用受到很大限制。而且由於納米載體的`引入，極大地降低了載藥量，增加了額外的代謝負擔，增加了藥物製劑的成本，帶來了更多的尚未明了的潛在安全性問題。
[0006]隨著癌症診療業的不斷發展，本領域需要在不使用藥物載體的情況下，製備高載藥量、納米尺寸的具有協同治療作用的多藥組合納米粒子。
【發明內容】
[0007]本發明的目的在於提供一種不含載體、具有高載藥量的多藥自聚複合納米粒子及其製備方法和應用，該多藥自聚複合納米粒子不存在載體帶來的潛在毒副作用，該方法操作簡單，能廣泛應用，其原料均為SFDA批准，所得納米藥物尺寸均一，具有協同治療作用。
[0008]為實現本發明的目的，本發明的提供以下技術方案:
[0009]在第一方面，本發明提供一種多藥自聚複合納米粒子，由至少一種疏水性藥物分子和至少一種水溶性藥物分子複合而成；其是通過將所述疏水性藥物分子溶解於良溶劑中得到疏水性藥物分子溶液，然後先後或同時將所述疏水性藥物分子溶液和水溶性藥物分子溶液加入所述疏水性藥物分子的不良溶劑中，並經加熱磁力攪拌和超聲處理得到的。[0010]優選地，所述多藥自聚複合納米粒子呈球形或近似球形，其平均粒徑為100_500nm,例如 llOnm、120nm、130nm、140nm、150nm、180nm、190nm、210nm、220nm、230nm、250nm、280nm、320nm、350nm、380nm、400nm、420nm、450nm 或 480nm,優選 150-400nm,更優選200_300nm。
[0011]所謂「近似球形」是指所述疏水性藥物納米顆粒的形狀接近球形，比如呈橢球形、部分隆起或凹陷的球形、部分隆起或凹陷的橢球形等。總之，任何並非完全規則但整體上大體呈球形的形狀都是本發明所說的「近似球形」。
[0012]本發明中，疏水性藥物分子不受限制，可以是任何對特定疾病(比如腫瘤、糖尿病或心血管疾病等)具有預防、治療或改善作用的疏水性藥物分子，而且這種疏水性藥物分子在臨床治療上有被製備成納米粒子的需要。
[0013]優選地，所述疏水性藥物分子為疏水性抗癌藥物分子，用於癌症治療。
[0014]更優選地，所述疏水性抗癌藥物分子為紫杉醇、多西紫杉醇、喜樹鹼、10-羥基喜樹鹼、秋水仙鹼、長春新鹼、甲氨蝶呤、他莫西芬、替尼泊苷、順鉬和6-巰基嘌呤中的一種或多種。所謂「多種」是指兩種以上，其典型但非限定性的例子有:紫杉醇和多西紫杉醇，紫杉醇和喜樹鹼，紫杉醇和10-羥基喜樹鹼，紫杉醇和秋水仙鹼，紫杉醇和長春新鹼，紫杉醇和甲氨蝶呤，紫杉醇和他莫西芬，紫杉醇和替尼泊苷，多西紫杉醇和喜樹鹼，多西紫杉醇和10-羥基喜樹鹼，多西紫杉醇和秋水仙鹼，多西紫杉醇和長春新鹼，多西紫杉醇和甲氨蝶呤，多西紫杉醇和他莫西芬，10-羥基喜樹鹼和秋水仙鹼，10-羥基喜樹鹼和長春新鹼，10-羥基喜樹鹼和甲氨蝶呤，10-羥基喜樹鹼和他莫西芬，10-羥基喜樹鹼和替尼泊苷，10-羥基喜樹鹼和順鉬，10-羥基喜樹鹼和6-巰基嘌呤，秋水仙鹼和長春新鹼，長春新鹼和甲氨蝶呤，甲氨蝶呤和他莫西芬，他莫西芬和替尼泊苷，替尼泊苷和順鉬，順鉬和6-巰基嘌呤，紫杉醇、多西紫杉醇和喜樹鹼，多西紫杉醇、喜樹鹼和10-羥基喜樹鹼，喜樹鹼、10-羥基喜樹鹼和秋水仙鹼，10-羥基喜樹鹼、秋水 仙鹼和長春新鹼，秋水仙鹼、長春新鹼和甲氨蝶呤，長春新鹼、甲氨蝶呤和他莫西芬，甲氨蝶呤、他莫西芬和替尼泊苷，他莫西芬、替尼泊苷和順鉬，替尼泊苷、順鉬和6-巰基嘌呤，以及紫杉醇、多西紫杉醇、喜樹鹼和10-羥基喜樹鹼，等等。
[0015]本發明中，水溶性藥物分子不受限制，可以是任何對特定疾病(比如腫瘤、糖尿病或心血管疾病等)具有預防、治療或改善作用的水溶性藥物分子，而且這種水溶性藥物分子在臨床治療上有被製備成納米粒子的需要。
[0016]優選地，所述水溶性藥物分子為水溶性抗癌藥物分子，用於癌症治療。
[0017]優選地，所述水溶性抗癌藥物分子為鹽酸阿黴素、鹽酸柔紅黴素、鹽酸表阿黴素、鹽酸阿柔比星、鹽酸佐柔比星、鹽酸米託蒽醌和5-氟尿嘧啶中的一種或多種。所謂「多種」是指兩種以上，其典型但非限定性的例子有:鹽酸阿黴素和鹽酸米託蒽醌，鹽酸阿黴素和5-氟尿嘧啶，鹽酸阿黴素和鹽酸表阿黴素，鹽酸米託蒽醌和5-氟尿嘧啶，鹽酸阿黴素和鹽酸柔紅黴素，鹽酸阿黴素和鹽酸阿柔比星，鹽酸阿黴素和鹽酸佐柔比星，鹽酸阿黴素、鹽酸米託蒽醌和5-氟尿嘧啶，鹽酸阿黴素、鹽酸柔紅黴素和5-氟尿嘧啶，等等。
[0018]本發明中，所述疏水性抗癌藥物分子與所述水溶性抗癌藥物分子的比例不受限制，只要按照一定比例能夠形成多藥自聚複合納米粒子即可。
[0019]優選地，所述疏水性抗癌藥物分子與所述水溶性抗癌藥物分子的摩爾比為1:(1-10)，例如 1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9 或 1:10。[0020]所謂「良溶劑」即對溶質(疏水性藥物分子)具有較強溶解能力的溶劑，比如根據Flory-Krigboum稀溶液理論，良溶劑是指與溶質相互作用參數小於0.5的溶劑。
[0021 ] 本發明中，所述良溶劑優選為有機溶劑。
[0022]優選地，所述有機溶劑為乙醇、甲醇、氯仿、丙醇、異丙醇、N，N-二甲基甲醯胺、二甲基亞碸、二氯甲烷、丙酮和四氫呋喃中的一種或多種的混合。所謂「多種的混合」是指兩種以上的混合，其典型但非限定性的例子有:乙醇和甲醇的混合，乙醇和丙醇的混合，乙醇和異丙醇的混合，氯仿和N，N- 二甲基甲醯胺的混合，N, N- 二甲基甲醯胺和二甲基亞碸的混合，二甲基亞碸和二氯甲烷的混合，二氯甲烷和丙酮的混合，丙酮和四氫呋喃的混合，乙醇、甲醇和丙醇的混合，甲醇、丙醇和異丙醇的混合，N，N-二甲基甲醯胺、二甲基亞碸、二氯甲烷和丙酮的混合，等等。
[0023]所謂「不良溶劑」即對溶質(疏水性藥物分子)具有較弱或不具有溶解能力的溶劑，比如根據Flory-Krigboum稀溶液理論,不良溶劑是指與溶質相互作用參數大於0.5的溶劑。
[0024]優選地，所述不良溶劑為磷酸鹽緩衝液、水、生理鹽水和葡萄糖溶液中的一種或多種的混合。所謂「多種的混合」是指兩種以上的混合，其典型但非限定性的例子有:磷酸鹽緩衝液和生理鹽水的混合，磷酸鹽緩衝液和葡萄糖溶液的混合，生理鹽水和葡萄糖溶液的混合，磷酸鹽緩衝液、生理鹽水和葡萄糖溶液的混合，等等。
[0025]本發明中，所述良溶劑與所述不良溶劑互溶，所述良溶劑與所述不良溶劑的體積比優選為 1:(5-30)，例如 1:6、1:8、1:12,1:15、1:18、1:21、1:25、1:28 或 1:29，優選 I:(10-25)。
[0026]在第二方面，本發明提供一種如第一方面所述的多藥自聚複合納米粒子的製備方法，所述方法包括:
[0027]( I)將疏水性藥物分子溶解於良溶劑中得到疏水性藥物分子溶液；
[0028](2)然後，Ca)將所述疏水性藥物分子溶液加入所述疏水性藥物分子的不良溶劑中，加熱磁力攪拌並靜置，獲得納米纖維懸浮液，再將水溶性藥物分子溶液加入所述納米纖維懸浮液中；或(b)同時將所述疏水性藥物分子溶液和水溶性藥物分子溶液加入所述疏水性藥物分子的不良溶劑中；
[0029](3)加熱磁力攪拌並超聲處理後靜置，即得所述多藥自聚複合納米粒子。
[0030]優選地，所述步驟(1)中的疏水性藥物分子為疏水性抗癌藥物分子。
[0031]優選地，所述疏水性抗癌藥物分子為紫杉醇、多西紫杉醇、喜樹鹼、10-羥基喜樹鹼、秋水仙鹼、長春新鹼、甲氨蝶呤、他莫西芬、替尼泊苷、順鉬和6-巰基嘌呤中的一種或多種。其中「多種」的含義及實例如上所述，不再贅述。
[0032]優選地，所述步驟(1)中的良溶劑為有機溶劑。
[0033]優選地，所述有機溶劑為乙醇、甲醇、氯仿、丙醇、異丙醇、N，N-二甲基甲醯胺、二甲基亞碸、二氯甲烷、丙酮和四氫呋喃中的一種或多種的混合。其中「多種的混合」的含義及實例如上所述，不再贅述。
[0034]優選地，所述步驟(2)中的不良溶劑為磷酸鹽緩衝液、水、生理鹽水和葡萄糖溶液中的一種或多種的混合。其中「多種的混合」的含義及實例如上所述，不再贅述。
[0035]優選地，所述良溶劑與所述不良溶劑互溶，所述良溶劑與所述不良溶劑的體積比為 1:(5-30),例如 1:6、1:8、1:12,1:15、1:18、1:21、1:25、1:28 或 1:29，優選 1:(10-25)。
[0036]優選地，所述步驟(2)中的水溶性藥物分子為水溶性抗癌藥物分子。
[0037]優選地，所述水溶性抗癌藥物分子為鹽酸阿黴素、鹽酸柔紅黴素、鹽酸表阿黴素、鹽酸阿柔比星、鹽酸佐柔比星、鹽酸米託蒽醌和5-氟尿嘧啶中的一種或多種。其中「多種」的含義及實例如上所述，不再贅述。
[0038]優選地，所述步驟(2)中的疏水性抗癌藥物分子與所述水溶性抗癌藥物分子的摩爾比為 1:(1-10),例如 1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9 或 1:10。
[0039]優選地，所述步驟(2)中的加熱溫度為40_90°C，例如45 °C、48°C、52 °C、54°C、58°C、6(TC、65t:、68t:、72t:、75t:、78t:、8(rC、8rC、84t:、87t:或 89°C。
[0040]優選地,所述步驟(2)中的磁力攪拌時間為5min以上，例如6min、8min、lOmin、12min、15min、17min、19min、22min、25min、27min、30min、40min 或 60min,優選 5_30mino
[0041]優選地，所述步驟(3)中的加熱溫度為40_90°C，例如45°C、48°C、52°C、54°C、58°C、6(TC、65t:、68t:、72t:、75t:、78t:、8(rC、8rC、84t:、87t:或 89°C。
[0042]優選地，所述步驟(3)中的磁力攪拌時間為0.5_2h，例如0.6h、0.7h、0.8h、0.9h、lh、l.2h、l.5h、l.7h、l.8h 或 1.9h。
[0043]優選地,所述步驟(3)中的磁力攪拌速度為500-1200rpm,例如550rpm、600rpm、650rpm、700rpm、800rpm、900rpm、lOOOrpm、1050rpm>IlOOrpm 或 1150rpm。
[0044]優選地,所述步驟(3)中的超聲處理時間為15_35min,例如16min、18min、20min、25min、27min、29min、31min 或 33min。
[0045]優選地，所述步驟(3 )之後進行:
[0046](4)通過超濾離心去除游離的藥物分子，然後用去離子水重新溶解濾膜上的多藥自聚複合納米粒子。離心速度可以是5000_10000g,例如7500g ;離心時間可以是10_30min,例如20min。
[0047]優選地，所述多藥自聚複合納米粒子呈球形或近似球形，其平均粒徑為100-500nm，優選 150_400nm，更優選 200_300nm。
[0048]在本發明的一個優選技術方案中，所述方法包括:
[0049]( 1 』)將疏水性抗癌藥物分子溶解於良溶劑中得到疏水性抗癌藥物分子溶液；
[0050](2』 )然後，將所述疏水性抗癌藥物分子溶液加入所述疏水性抗癌藥物分子的不良溶劑中，其中所述良溶劑與所述不良溶劑的體積比為1:(5-30);在溫度40-90°C下，磁力攪拌5min以上之後靜置，獲得納米纖維懸浮液；再將水溶性抗癌藥物分子溶液加入所述納米纖維懸浮液中，其中所述疏水性抗癌藥物分子與所述水溶性抗癌藥物分子的摩爾比為1:(1-10)；
[0051](3』)在溫度40-90°C下，磁力攪拌0.5_2h並超聲處理15_35min後靜置，即得所述多藥自聚複合納米粒子；
[0052](4』 )通過超濾離心去除游離的藥物分子，然後用去離子水重新溶解濾膜上的多藥自聚複合納米粒子。
[0053]在本發明的另一個優選技術方案中，所述方法包括:
[0054](1』 』)將疏水性抗癌藥物分子溶解於良溶劑中得到疏水性抗癌藥物分子溶液；[0055](2』 』)同時將所述疏水性抗癌藥物分子溶液和水溶性抗癌藥物分子溶液加入所述疏水性抗癌藥物分子的不良溶劑中，其中所述良溶劑與所述不良溶劑的體積比為1:(5-30)，所述疏水性抗癌藥物分子與所述水溶性抗癌藥物分子的摩爾比為1:(1-10)；
[0056](3，』 )在溫度40-90°C下，磁力攪拌0.5_2h並超聲處理15_35min後靜置，即得所述多藥自聚複合納米粒子；
[0057](4』』)通過超濾離心去除游離的藥物分子，然後用去離子水重新溶解濾膜上的多藥自聚複合納米粒子。
[0058]在第三方面，本發明提供如第一方面所述的多藥自聚複合納米粒子在製備用於治療腫瘤的藥物中的應用。
[0059]本發明的多藥自聚複合納米粒子不含載體，因此提高了其載藥量，載藥量達到100%，並且不存在載體帶來的潛在毒副作用，成本較低；其包括多種具有不同作用機制的疏水性藥物分子和水溶性藥物分子，因此具有較好的協同治療作用，對多藥耐藥性細胞有明顯增強的殺傷能力；其穩定性和生物利用度高。
[0060]此外，通過對反應條件和方法的控制，得到的多藥自聚複合納米粒子在體內具有EPR效應(Enhanced Permeability and Retention),有益於提高藥物療效；10-羥基喜樹鹼和鹽酸阿黴素在紫外光激發下均有螢光發射現象，通過其自身螢光性質，易於實現其胞內成像；本發明所用的原料均為SFDA批准可用；製備方法反應過程溫和、無雜質且樣品純度高；製備方法具有普適性，對一系列抗癌藥物均適用；製備方法簡單易行、可重複性好，因此極具應用價值。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0061]圖1為本發明實施例1製備得到的10-羥基喜樹鹼/阿黴素雙藥自聚複合納米粒子的掃描電鏡(SEM)圖。`
[0062]圖2為本發明實施例1製備得到的10-羥基喜樹鹼/阿黴素雙藥自聚複合納米粒子的粒徑分布圖。
[0063]圖3為本發明實施例1製備得到的10-羥基喜樹鹼/阿黴素雙藥自聚複合納米粒子與對照組(單純阿黴素組、單純10-羥基喜樹鹼組、阿黴素和10-羥基喜樹鹼共混組)的細胞毒性實驗結果，其中圖3a為以阿黴素濃度為參照的細胞存活率/藥物濃度曲線，圖3b為以10-羥基喜樹鹼為參照的細胞存活率/藥物濃度曲線。
【具體實施方式】
[0064]下面將結合實施例對本發明的實施方案進行詳細描述。本領域技術人員將會理解，以下實施例僅為本發明的優選實施例，以便於更好地理解本發明，因而不應視為限定本發明的範圍。對於本領域的技術人員來說，本發明可以有各種更改和變化，凡在本發明的精神和原則之內，所作的任何修改、等同替換或改進等，均應包含在本發明的保護範圍之內。下述實施例中的實驗方法，如無特殊說明，均為常規方法；所用的實驗材料，如無特殊說明，均為自常規生化試劑廠商購買得到的。
[0065]實施例1
[0066]首先，本實施例描述多藥自聚複合納米粒子的製備方法，方法如下:[0067]1)將疏水性抗癌藥物分子製備成前驅納米纖維懸浮液:將100 μ L0.5mmol/L的10-羥基喜樹鹼的乙醇溶液滴加到lmL50°C水浴的去離子水中，磁力攪拌5min後靜置，獲得前驅納米纖維懸浮液。
[0068]2)將20 μ L5mmol/L的鹽酸阿黴素水溶液滴加到前驅納米纖維懸浮液中，鹽酸阿黴素與10-羥基喜樹鹼的摩爾比為2:1,50°C水浴攪拌Ih後,超聲分散30min。
[0069]3)還優選去除游離藥物，其方法是通過7500g超濾離心20min，然後用去離子水重新溶解濾膜上的藥物納米粒子。
[0070]本實施例製備的多藥自聚複合納米粒子通過日立公司的Hitachi S4800掃描電鏡和突光光譜(美國Perkin Elmer Instruments公司的LS55突光分光光度計)進行藥物納米粒子的表徵，並用細胞毒性實驗來驗證本發明的有效性。本發明實施例1製備得到的10-羥基喜樹鹼/阿黴素雙藥自聚複合納米粒子的掃描電鏡(SEM)圖如圖1所示；其粒徑分布如圖2所示，其平均粒徑為217nm。
[0071]其次，本實施例通過如下方法對10-羥基喜樹鹼/阿黴素雙藥自聚複合納米粒子對腫瘤細胞的毒性作用進行驗證。
[0072]所得雙藥自聚複合納米粒子用噻唑藍法(MTT)測定了人乳腺癌細胞的細胞活力(參考《細胞培養》，司徒鎮強，世界圖書出版公司，1996年)。將雙藥自聚複合納米粒子溶於改良 Eagle 低糖細胞培養基(Dulbecco，s modification of Eagle’s medium, DMEM)配製成1-50 μ M不同的濃度，每孔100 μ L加入於接種96孔板後過夜的人乳腺癌細胞，培養24h，然後棄去培養基並每孔100 μ L加入含有0.5mg/mL噻唑藍的無血清DMEM培養基37°C處理4h，之後棄去培養基，每孔加入150 μ L 二甲基亞碸(DMSO)溶解生成的紫色甲瓚，最後與酶標儀讀取570nm處的紫外吸收，對比對照組的吸光度，計算出每種處理對應的細胞活力。按上述方法進行對照組實驗，對照組I為單純鹽酸阿黴素的DMEM不同濃度溶液，對照組2為單純10-羥基喜樹鹼的DMEM不同濃度溶液，對照組3為10-羥基喜樹鹼和阿黴素共混的DMEM不同濃度溶液。通過以上細胞活力測試及比較，如圖3所示，得到了確定的10-羥基喜樹鹼/阿黴素雙藥自聚複合納米粒子協同殺傷效力強於單純的鹽酸阿黴素和單純的10-羥基喜樹鹼以及雙藥物理共混組聯合給藥。
[0073]實施例2
[0074]本實施例描述多藥自聚複合納米粒子的製備方法與實施例1不同，但也能實現10-羥基喜樹鹼/阿黴素雙藥自聚複合納米粒子的製備，方法如下:
[0075]將20 μ L5mmol/L鹽酸阿黴素水溶液和100 μ L0.5mmol/L10-羥基喜樹鹼的乙醇溶液(鹽酸阿黴素與10-羥基喜樹鹼的摩爾比為2:1)同時滴加到lmL50°C水浴的去離子水中，磁力攪拌Ih後，超聲分散30min。
[0076]還優選去除游離藥物，其方法是通過7500g超濾離心20min，然後用去離子水重新溶解濾膜上的藥物納米粒子。
[0077]本實施例製備的多藥自聚複合納米粒子通過掃描電鏡、螢光光譜、共聚焦顯微鏡等進行藥物納米粒子的表徵，並用細胞毒性實驗來驗證本發明的有效性。其結果與實施例1相似，雙藥自聚複合納米粒子協同殺傷效力強於單純的鹽酸阿黴素和單純的10-羥基喜樹鹼以及雙藥物理共混組聯合給藥。
[0078]實施例3[0079]本實施例描述多藥自聚複合納米粒子的製備方法與實施例1不完全相同，其中改變藥物溶劑和反應條件也可實現?ο-羥基喜樹鹼/阿黴素雙藥自聚複合納米粒子的製備，方法如下:
[0080]I)將疏水性抗癌藥物分子製備成前驅納米纖維懸浮液:將100 μ L0.5mmol/L的10-羥基喜樹鹼的二甲基亞碸(DMSO)溶液滴加到lmL60°C水浴的去離子水中，磁力攪拌20min後靜置，獲得前驅納米纖維懸浮液。
[0081]2)將20 μ L10mmol/L的鹽酸阿黴素水溶液滴加到前驅納米纖維懸浮液中，阿黴素與10-羥基喜樹鹼摩爾比為4:1，60°C水浴攪拌0.5h後，超聲分散20min。
[0082]3)還優選去除游離藥物，其方法是通過7500g超濾離心20min，然後用去離子水重新溶解濾膜上的藥物納米粒子。
[0083]本實施例製備的多藥自聚複合納米粒子通過掃描電鏡、螢光光譜、共聚焦顯微鏡等進行藥物納米粒子的表徵，並用細胞毒性實驗來驗證本發明的有效性。其結果與實施例1相似，雙藥自聚複合納米粒子協同殺傷效力強於單純的鹽酸阿黴素和單純的10-羥基喜樹鹼以及雙藥物理共混組聯合給藥。
[0084]實施例4
[0085]本實施例描述多藥 自聚複合納米粒子的製備方法，方法如下:
[0086]I)將疏水性抗癌藥物分子製備成前驅納米纖維懸浮液:將50 μ Llmmol/L的紫杉醇的二甲基亞碸(DMSO)溶液滴加到lmL50°C水浴的去離子水中，磁力攪拌5min後靜置，獲得前驅納米纖維懸浮液。
[0087]2)將20 μ L10mmol/L鹽酸阿黴素水溶液滴加到前驅納米纖維懸浮液中，阿黴素與紫杉醇摩爾比為4:1，50°C水浴攪拌Ih後，超聲分散30min。
[0088]3)還優選去除游離藥物，其方法是通過7500g超濾離心20min，然後用去離子水重新溶解濾膜上的藥物納米粒子。
[0089]本發明可以通過掃描電鏡、螢光光譜、共聚焦顯微鏡等進行藥物納米粒子的表徵，並用細胞毒性實驗來驗證本發明的有效性。
[0090]本實施例製備的多藥自聚複合納米粒子通過掃描電鏡、螢光光譜、共聚焦顯微鏡等進行藥物納米粒子的表徵，並用細胞毒性實驗來驗證本發明的有效性。其結果與實施例1相似，雙藥自聚複合納米粒子協同殺傷效力強於單純的鹽酸阿黴素和單純的紫杉醇以及雙藥物理共混組聯合給藥。
[0091]實施例5
[0092]本實施例描述多藥自聚複合納米粒子的製備方法，方法如下:
[0093]I)將疏水性抗癌藥物分子製備成前驅納米纖維懸浮液:將100 μ L0.2mmol/L的甲氨蝶呤的二甲基亞碸(DMSO)溶液滴加到lmL50°C水浴的去離子水中，磁力攪拌5min後靜置，獲得前驅納米纖維懸浮液。
[0094]2)將20 μ L10mmol/L的鹽酸阿黴素水溶液滴加到前驅納米纖維懸浮液中，阿黴素與甲氨蝶呤摩爾比為10:1，50°C水浴攪拌Ih後，超聲分散30min。
[0095]3)還優選去除游離藥物，其方法是通過7500g超濾離心20min，然後用去離子水重新溶解濾膜上的藥物納米粒子。
[0096]本實施例製備的多藥自聚複合納米粒子通過掃描電鏡、螢光光譜、共聚焦顯微鏡等進行藥物納米粒子的表徵，並用細胞毒性實驗來驗證本發明的有效性。其結果與實施例1相似，雙藥自聚複合納米粒子協同殺傷效力強於單純的鹽酸阿黴素和單純的甲氨蝶呤以及雙藥物理共混組聯合給藥。
[0097]實施例6
[0098]本實施例描述多藥自聚複合納米粒子的製備方法，方法如下:
[0099]I)將疏水性抗癌藥物分子製備成前驅納米纖維懸浮液:將100 μ Llmmol/L的10-羥基喜樹鹼的乙醇溶液滴加到lmL50°C水浴的去離子水中，磁力攪拌5min後靜置，獲得前驅納米纖維懸浮液。
[0100]2)將100 μ Llmmol/L的5_氟尿嘧啶水溶液滴加到前驅納米纖維懸浮液中，5-氟尿嘧啶與10-羥基喜樹鹼摩爾比為10:1，50°C水浴攪拌Ih後，超聲分散30min。
[0101]3)還優選去除游離藥物，其方法是通過7500g超濾離心20min，然後用去離子水重新溶解濾膜上的藥物納米粒子。
[0102]本實施例製備的多藥自聚複合納米粒子通過掃描電鏡、螢光光譜、共聚焦顯微鏡等進行藥物納米粒子的表徵，並用細胞毒性實驗來驗證本發明的有效性。其結果與實施例1相似，雙藥自聚複合納米粒子協同殺傷效力強於單純的5-氟尿嘧啶和單純的10-羥基喜樹鹼以及雙藥物理共混組聯合給藥。
[0103] 申請人:聲明，本發明通過上述實施例來說明本發明的詳細特徵以及詳細方法，但本發明並不局限於上述詳細特徵以及詳細方法，即不意味著本發明必須依賴上述詳細特徵以及詳細方法才能實施。所屬【技術領域】的技術人員應該明了，對本發明的任何改進，對本發明選用組分的等效替換及輔助成分的添加、具體方式的選擇等，均落在本發明的保護範圍和公開範圍之內。`
【權利要求】
1.一種多藥自聚複合納米粒子,其特徵在於,所述多藥自聚複合納米粒子由至少一種疏水性藥物分子和至少一種水溶性藥物分子複合而成；其是通過將所述疏水性藥物分子溶解於良溶劑中得到疏水性藥物分子溶液，然後先後或同時將所述疏水性藥物分子溶液和水溶性藥物分子溶液加入所述疏水性藥物分子的不良溶劑中，並經加熱磁力攪拌和超聲處理得到的； 優選地，所述多藥自聚複合納米粒子呈球形或近似球形，其平均粒徑為100-500nm，優選 150-400nm，更優選 200-300nm。
2.根據權利要求1所述的多藥自聚複合納米粒子，其特徵在於，所述疏水性藥物分子為疏水性抗癌藥物分子； 優選地，所述疏水性抗癌藥物分子為紫杉醇、多西紫杉醇、喜樹鹼、10-羥基喜樹鹼、秋水仙鹼、長春新鹼、甲氨蝶呤、他莫西芬、替尼泊苷、順鉬和6-巰基嘌呤中的一種或多種； 優選地，所述水溶性藥物分子為水溶性抗癌藥物分子； 優選地，所述水溶性抗癌藥物分子為鹽酸阿黴素、鹽酸柔紅黴素、鹽酸表阿黴素、鹽酸阿柔比星、鹽酸佐柔比星、鹽酸米託蒽醌和5-氟尿嘧啶中的一種或多種； 優選地，所述疏水性抗癌藥物分子與所述水溶性抗癌藥物分子的摩爾比為1: (1-10)。
3.根據權利要求1或2所述的多藥自聚複合納米粒子，其特徵在於，所述良溶劑為有機溶劑； 優選地，所述有機溶劑為乙醇、甲醇、氯仿、丙醇、異丙醇、N，N-二甲基甲醯胺、二甲基亞碸、二氯甲烷、丙酮和四氫呋喃中的一種或多種的混合； 優選地，所述不良溶劑為磷酸鹽緩衝液、水、生理鹽水和葡萄糖溶液中的一種或多種的混合； 優選地，所述良溶劑與所述不良溶劑互溶，所述良溶劑與所述不良溶劑的體積比為1:(5-30)、優選 1:(10-25)。
4.一種如權利要求1-3任一項所述的多藥自聚複合納米粒子的製備方法，其特徵在於，所述方法包括: (1)將疏水性藥物分子溶解於良溶劑中得到疏水性藥物分子溶液； (2)然後，Ca)將所述疏水性藥物分子溶液加入所述疏水性藥物分子的不良溶劑中，加熱磁力攪拌並靜置，獲得納米纖維懸浮液，再將水溶性藥物分子溶液加入所述納米纖維懸浮液中；或6)同時將所述疏水性藥物分子溶液和水溶性藥物分子溶液加入所述疏水性藥物分子的不良溶劑中； (3)加熱磁力攪拌並超聲處理後靜置，即得所述多藥自聚複合納米粒子。
5.根據權利要求4所述的方法，其特徵在於，所述步驟(1)中的疏水性藥物分子為疏水性抗癌藥物分子； 優選地，所述疏水性抗癌藥物分子為紫杉醇、多西紫杉醇、喜樹鹼、10-羥基喜樹鹼、秋水仙鹼、長春新鹼、甲氨蝶呤、他莫西芬、替尼泊苷、順鉬和6-巰基嘌呤中的一種或多種； 優選地，所述步驟(1)中的良溶劑為有機溶劑； 優選地，所述有機溶劑為乙醇、甲醇、氯仿、丙醇、異丙醇、N，N-二甲基甲醯胺、二甲基亞碸、二氯甲烷、丙酮和四氫呋喃中的一 種或多種的混合。
6.根據權利要求4或5所述的方法，其特徵在於，所述步驟(2)中的不良溶劑為磷酸鹽緩衝液、水、生理鹽水和葡萄糖溶液中的一種或多種的混合； 優選地，所述良溶劑與所述不良溶劑互溶，所述良溶劑與所述不良溶劑的體積比為1:(5-30)、優選 1:(10-25)； 優選地，所述步驟(2)中的水溶性藥物分子為水溶性抗癌藥物分子； 優選地，所述水溶性抗癌藥物分子為鹽酸阿黴素、鹽酸柔紅黴素、鹽酸表阿黴素、鹽酸阿柔比星、鹽酸佐柔比星、鹽酸米託蒽醌和5-氟尿嘧啶中的一種或多種； 優選地，所述步驟(2)中的疏水性抗癌藥物分子與所述水溶性抗癌藥物分子的摩爾比為 1:(1-10)； 優選地，所述步驟(2)中的加熱溫度為40-90°C ； 優選地，所述步驟(2)中的磁力攪拌時間為5min以上、優選5_30min。
7.根據權利要求4-6任一項所述的方法，其特徵在於，所述步驟(3)中的加熱溫度為40-90 0C ； 優選地，所述步驟(3)中的磁力攪拌時間為0.5-2h ； 優選地，所述步驟(3)中的磁力攪拌速度為500-1200rpm ； 優選地，所述步驟(3)中的超聲處理時間為15-35min ； 優選地，所述步驟(3)之後進行: (4)通過超濾離心去除游離的藥物分子，然後用去離子水重新溶解濾膜上的多藥自聚複合納米粒子； 優選地，所述多藥自聚複合納米粒子呈球形或近似球形，其平均粒徑為100-500nm，優選 150-400nm，更優選 200-300nm。
8.根據權利要求4-7任一項所述的方法，其特徵在於，所述方法包括: 0-)將疏水性抗癌藥物分子溶解於良溶劑中得到疏水性抗癌藥物分子溶液； (2』)然後，將所述疏水性抗癌藥物分子溶液加入所述疏水性抗癌藥物分子的不良溶劑中，其中所述良溶劑與所述不良溶劑的體積比為1:(5-30);在溫度40-90°C下，磁力攪拌5min以上之後靜置，獲得納米纖維懸浮液；再將水溶性抗癌藥物分子溶液加入所述納米纖維懸浮液中，其中所述疏水性抗癌藥物分子與所述水溶性抗癌藥物分子的摩爾比為1:(1-10)； (3』)在溫度40-90°C下，磁力攪拌0.5-2h並超聲處理15_35min後靜置，即得所述多藥自聚複合納米粒子； (4』)通過超濾離心去除游離的藥物分子，然後用去離子水重新溶解濾膜上的多藥自聚複合納米粒子。
9.根據權利要求4-7任一項所述的方法，其特徵在於，所述方法包括: (I』 』)將疏水性抗癌藥物分子溶解於良溶劑中得到疏水性抗癌藥物分子溶液； (2』 』)同時將所述疏水性抗癌藥物分子溶液和水溶性抗癌藥物分子溶液加入所述疏水性抗癌藥物分子的不良溶劑中，其中所述良溶劑與所述不良溶劑的體積比為1: (5-30)，所述疏水性抗癌藥物分子與所述水溶性抗癌藥物分子的摩爾比為1:(1-10)； (3』 』)在溫度40-90°C下，磁力攪拌0.5-2h並超聲處理15_35min後靜置，即得所述多藥自聚複合納米粒子； (4』』)通過超濾離心去除游離的藥物分子，然後用去離子水重新溶解濾膜上的多藥自聚複合納米粒子。
10.如權利要求1-3任一項所述的多藥自聚複合納米粒子在製備用於治療腫瘤的藥物中的應用。`
【文檔編號】A61K45/06GK103550777SQ201310533322
【公開日】2014年2月5日 申請日期:2013年10月31日 優先權日:2013年10月31日
【發明者】梁興傑, 陳飛, 趙元元 申請人:國家納米科學中心