白細胞介素-1α免疫誘導預防動脈粥樣硬化的自身抗體的製作方法

2023-06-10 21:41:46 2

專利名稱：：白細胞介素-1α免疫誘導預防動脈粥樣硬化的自身抗體的製作方法白細胞介素-la免疫誘導預防動脈粥樣硬化的自身抗體0001本申請要求2006年5月15日提交的序列號60/S00，029的權益，並通過引用將其引入。
背景技術：
：0002白細胞介素-lcx(IL-loO被很好地表徵為炎症的主要介質(primarymediator),並且其在炎症相關疾病中的作用已在幾個動物模型中得到暗示。在普通人群中已經相對較高頻率地檢測到抗白細胞介素(IL)-la的人IgG自身抗體(autoantibodies,aAb)。事實上，據報導20%以上的表面健康的人具有高度特異性的IL-lcxaAb。雖然對攜帶天然IL-laaAb的男性的觀察已表明內源性IL-lcx的中和性在降低炎症相關疾病——如動脈粥樣硬化或風溼性關節炎——進展風險中的作用，但是，這些研究沒有排除在這些個體內存在其它的自身抗體，並且，一直難以建立因果關係，這些抗IL-la抗體的生理作用還沒有明確確定。附圖簡述0003圖lC57BL/6小鼠三次皮下注射在明礬中的IL-la-PPD偶聯物後，在第56天在C57BL/6小鼠中抗IL-la自身抗體的形成。對照小鼠僅用在明礬中的PPD免疫(■)。0004圖2抗體依賴性補體介導的EL-4細胞殺傷。EL-4細胞與連續稀釋的小鼠抗小鼠IL-lct多克隆抗血清一起溫育。死亡細胞與活細胞的比例與血清濃度成正比。人抗小鼠IL-la單克隆抗體作為陽性對照。與幼鼠血清溫育或僅與培養基溫育作為兩個陰性對照。發明詳述0005ApoE-A小鼠具有工程改造的脂類運輸缺陷(lipidtransportdefect),該脂類運輸缺陷導致在主動脈中動脈粥樣硬化樣斑塊的快速發展。這些小鼠被認為是人類動脈粥樣硬化最有說服力的模型(mostcompellingmodel)，因為它們是高膽固醇血的，並自然地發展成動脈病變。ApoE-A小鼠也因此被廣泛用作研究動脈粥樣硬化和進行治療的模型系統。0006本發明提供了IL-la的抗體中和的動物模型，其可通過例如對八(^-/-小鼠進行抗化-101的免疫來獲得。所有被免疫的動物會產生抗IL-la的IgGaAb，其會保持在高水平。來源於免疫小鼠血清的IL-laaAb抑制IL-la與IL-la反應性鼠T細胞系NOB-l的結合，並在體內中和IL-la(而不是IL-l(3誘導的IL-6)。0007被餵食高脂肪飲食的對照ApoE-Z-小鼠在主動脈裡形成動脈粥樣硬化樣病變。該病變的標誌是巨噬細胞浸潤、壞死性核和具有不同量細胞外基質的平滑肌細胞增殖。與此相比，進行抗化-1<1免疫的八0￡-/-動物，其動脈粥樣硬化病變的水平已大幅度降低，並產生驚人的對動脈粥樣硬化進展的抗性。在免疫前已具有脂肪紋(動脈粥樣硬化病變的開始)的小鼠中，用IL-la免疫可以阻止動脈粥樣硬化病變的發展，以使血管床保持基本健康。0008在通過免疫產生的內源性IL-la自身抗體存在的情況下，八(^-/-小鼠得以良好預防動脈粥樣硬化相關疾病(如外周缺血性心臟病、冠狀動脈疾病、腦血管疾病和外周動脈的疾病(peripheralarterialdisease))。因此，本發明提供了精緻的動物模型(elegantanimalmodel)，其支持我們以前的臨床觀察具有天然IL-loiaAb的男性與不具有中和性IL-laaAb的男性相比，具有降低的動脈粥樣硬化相關心臟疾病發病率。0009由於已經發現天然產生IL-laaAb的人發生動脈粥樣硬化的風險較小，所以很可能天然IL-lcxaAb可在中和血管內皮細胞中的IL-la有害炎症作用方面發揮生理作用。因此，本發明還提供了治療個體的方法，所述個體包括人類，其處於動脈粥樣硬化相關疾病(如外周缺血性心臟病、冠狀動脈疾病、腦血管疾病和外周動脈的疾病)發生的風險下，該方法是通過誘導對抗這些疾病的保護性IL-la自身抗體實現的。在大約20^沒有明顯的健康缺陷的人群中臨床觀察到IL-1(X自身抗體，表明施用抗IL-la的中和性自身抗體不會造成健康風險。此外，IL-la敲除小鼠也顯然是健康的，其支持了這種方法是安全的。因此，在人體內誘導IL-laaAb是降低動脈粥樣硬化相關疾病的風險和嚴重性的安全有效的方法。0010可使用本領域已知的任何免疫方法以在動物模型或哺乳動物(如貓、狗、綿羊、豬、山羊；優選人類)患者中達到期望的自身抗體反應(見下表)。tableseeoriginaldocumentpage80011在本公開內容中引用的所有專利、專利申請和參考文獻通過引用明確引入於此。上述公開內容一般性地描述本發明。更加完整的理解可通過參考以下具體實施例獲得，實施例只提供用於說明目的，而不企圖限制本發明範圍。實施例1ApoE敲除小鼠0012ApoE-Z匿小鼠取自JacksonLaboratory,BarHarbor,ME。只使用雄性動物，以避免性別對血管病變發生可能的影響；此外，進行觀察IL-laaAb在動脈粥樣硬化進展中的保護作用的臨床研究，這一點，只在男性中進行。使用10周齡小鼠，餵食高膽固醇含量膳食(1.25%的膽固醇、0%的膽酯;ResearchDiets,NewBrunswick,NJ)。小鼠餵養該膳食IO周，然後處死。採集血樣，並灌注主動脈，分割成部分，然後按照標準方法固定或冷凍。用鼠IL-la免疫0013根據Svenson等，JImmunolMethods.2000Mar6;236(1-2):1-8所述方法，使用以0.41(w/w)的比率偶聯至結核菌素純化蛋白衍生物(PPD)的鼠IL-la免疫小鼠。在尾基部皮下注射接種小鼠。重複接種3次，相隔三周。為了分析IL-laaAb，每次注射後2周從小鼠眼眶後叢(retroorbitalplexus)取血。對照動物使用不含IL-la的PPD溶液，按相同時間表接種。實施例3分析0014小鼠IgG對IL-la的反應按照Svenson等人，2000所述進行測定。IL-la對IgG的飽和結合分析如所述(Svenson等，JClinInvest.1993Nov;92(5):2533-9)實施。同樣的樣本在蛋白GSepharose柱和含SephadexG-75特級的柱上平行運行(Svenson等，Cytokine.1992Mar;4(2):125-33)，用以將與血清IgG結合的^I-IL-la同與血清的總結合進行比較。0015按照Svenson等，2000中所述，利用NOB-l鼠T細胞系實施細胞受體分析。IL-laRIA和IL-6ELISA也按照Svenson等，2000所述實施。0016體內IL-6誘導按照Svenson等，2000所述實施。實施例4ApoE-A小鼠中天然抗IL-laaAb的缺乏0017從15隻10周到10個月大的八(^-/-小鼠得到的血清都為1§0抗IL-laaAb陰性。實施例5在ApoE-A小鼠中產生IL-laaAb0018用偶聯至PPD的IL-loi接種四次後，所有小鼠都具有高IL-laIgGaAb效價。在僅用PPD接種的對照小鼠血清中沒有發現aAb。在接種後3個月，組間沒有顯著重量差異。實施例6誘導的IL-laaAb的表徵0019在檢測到陽性小鼠接種後的2周和6周，收集血清。與血清結合的總IL-la和與IgG結合的總IL-loc之間沒有差異。Kd範圍從O.lnM到1.3nM(例如，0.1、0,15、0,2、0,25、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1,3nM)。實施例7誘導的抗IL-laaAb的表徵0020用RIA檢測IL-laaAb。抗血清功能與Svenson等，ZOOO所公開的相似。實施例8受體結合的抑制0021^I-IL-la與鼠細胞系NOB-l的結合被所有接種兩周後收集的aAb陽性血清抑制至少10X(例如，至少IO、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90或95%)，並且如Svenson等，2000所述進行檢測。aAb-陰性對照作是陰性的。實施例9IL-la的體內中和0022代表性抗血清的中和活性按照Svenson等，2000所述檢測。數據表明，IL-laaAb在NOB-1細胞中中和IL-1a活性。實施例IO動脈粥樣硬化病變的分析0023在不同時間點殺死小鼠，對動脈粥樣硬化的程度進行評估。斑塊沉積和動脈粥樣硬化病變在主動脈根和胸腹主動脈中評定，並根據標準化方法(例如Trogan等，ProcNatlAcadSciUSA.2002Feb19;99(4):2234-9;Chaabane等，InvestRadiol.2003Aug;38(8):532-8)量化。在IL-la免疫的ApoE-A小鼠中，主動脈根動脈粥樣硬化病變區與ApoE-A對照小鼠相比，顯著降低(例如，至少IO、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90或95%)。動脈粥樣硬化病變的的發展也在用蘇丹(Sudan)IV染色的降主動脈的製品中檢測。在IL-kx免疫的ApoE-Z-小鼠的腹部主動脈中，嗜蘇丹的脂富集病變的形成與它們同窩出生的對照組相比，顯著降低(例如，至少10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85，90或95%)。同樣地，與對照相比，在IL-kx免疫的動物中，主動脈弓部分中動脈粥樣硬化病變的形成一—其用蘇木精-伊紅染色後顯現——顯著減少(例如，至少10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90或95%)。0024對照八？(^-/-小鼠的冠狀動脈腔面積(11^1^1area)，與對照小鼠相比顯著減少(例如，至少10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90或95%)。主動脈根的組織學分析表明八(^-/-對照的心血管內膜中存在0068-陽性細胞，而IL-la免疫的動物沒有存在CD6S-陽性細胞。實施例11材料和方法用酶聯免疫吸附測定(ELISA)汲懂抗IL-la抗體效價0025人或鼠IL-k分別在96孔ELISA板上溫育過夜，每孔用0.5嗎/mllOO(il體積的量。板隨後用磷酸緩衝鹽溶液(phosphatebufferedsaline,PBS)+0.05%吐溫20(Tween20)洗滌4次，然後用封閉液進行飽和，所述封閉液含有在PBS+0.05%吐溫20中的1%牛血清白蛋白(bovineserumalbumin,BSA)。在室溫下，每孔j吏用200pl這種封閉緩衝液l-2小時。然後用PBS+0.050/。Tween20(PBST)再洗滌板4次。100ml連續稀釋的血清樣品(在PBST+1XBSA中1:2稀釋)隨後加入，並在室溫下溫育一小時或4'C溫育過夜。然後再次用PBST洗滌板4次。然後加入辣根過氧化物酶(Horseradishperoxidise，HRP)偶聯的抗Fc-抗體作為二抗(在具有1XBSA的PBST中1:2000稀釋，每孔加100^U，l小時，室溫)。人0.2W山羊抗人IgG-HRP在400WPBST+1XBSA中。小鼠0.5^1HRP山羊抗小鼠IgG(H+L)。然後，板再次用PBST洗滌4次。用ABTS緩衝液進行顯色反應(coloringreaction)。ABTS緩衝液(3-乙基苯並噻唑啉-6-磺酸，Sigma目錄號A-1888，150mg;0.1M檸檬酸，Fisheranhydrous,目錄號A-940，500毫升；用NaOH顆粒將pH值調整到4.35，llml等分樣品被保存在-20。C、40%SDS(80gSDS溶於200mlddH20)中，並添加200mlDMF(N,N-二甲基甲醯胺))。向每個孔加IOOplABTS緩衝液。當良好對比度可見時，通過加入100^12%草酸溶液停止反應。然後，用ELISA讀數器在波長405nm下測量光密度。小鼠0026ApoE-/-小鼠從Jackson實驗室(BarHarbor,Maine,B6.129P2-Apoetm^7J株)獲得。Apoet"^突變純合小鼠表現出血漿總膽固醇水平的顯著增加，這不受年齡或性別的影響。在3月齡時，在主動脈近端發現脂肪紋。病變隨著年齡而發展，病變的發展伴隨脂質減少和伸長的細胞增加，這是前動脈粥樣硬化病變更晚期的典型特徵。已報導在混合的C57BL/6xl29遺傳背景上攜帶這一突變的小鼠中甘油三酯水平適度增加。老年ApoE缺陷小鼠(大於17個月)已顯示出在大腦中形成黃瘤性病變(xanthomatouslesion)，所述大腦大部分由結晶膽固醇裂隙、脂質小球和泡沫細胞組成。在脈絡叢和腹穹窿中可見較小的黃瘤。最近的研究表明，ApoE缺陷小鼠具有對應激的改變的反應、受損的空間學習和記憶、改變的長時程增強和突觸損傷。C57BL/6和SCID小鼠從Harlan(Horst，荷蘭)獲得。用與PPD偶聯的IL-la和IL-ip免疫小鼠0027IL-la和IL-l(3從eBioscience(SanDiego,CA)獲得。PPD從StatensSerumInstitute(Copenhagen,Denmark)獲得。偶聯方法改編自Svenson等(SvensonM,2000)。IL-la和IL陽l卩在4。C與PPD以0.41(w/w)的比例並且在0.1W戊二醛存在下溫育48小時(IL-1/PPD二0.41)。作為對照，PPD被平行處理，但不含IL-la或IL-ip。偶聯物隨後被吸附到Al(OH)3(Rehydragel;ReheisChemical,Dublin,Ireland),以使終體積中具有1.5%的Al(OH)3。0028與明磯在室溫下溫育90分鐘。顆粒隨後用0.9XNaCl洗滌，並將其重懸在0.9^NaCl中，達到ll嗎IL-la/100nl懸液，假設70。/。IL-lot被吸附到A1(0H)3(使用^I-IL-la在實驗性研究中發現)。IL-1(3偶聯物以同樣方式製備。對照懸液同樣地稀釋以匹配IL-la-PPD偶聯物中PPD的量。該偶聯物儲存在《C備用。實施例12C57BL/6小鼠中抗IL-la抗體反應的產生0029由於免疫系統對自身蛋白質如細胞因子的耐受，所以主動免疫必須打破自身耐受性。對大多數自身蛋白來說，免疫耐受是由於缺乏特異性T細胞——這是胸腺中負選擇的結果~引起的。相反，潛在的自身反應B細胞通常存在。當僅注射像IL-la這樣的自身蛋白時，由於缺乏T細胞的幫助，這些B細胞不會應答。將一種外源蛋白，如PPD，與自身抗原IL-la偶聯，就提供了T細胞對B細胞刺激的幫助，因為T細胞識別PPD，導致受刺激的B細胞針對IL-l(x和PPD產生抗體。0030因此，我們用明礬中的IL-la-PPD偶聯物接種小鼠，以確保T細胞對IL-la-特異性B細胞產生有效的幫助。抗體效價用ELISA測定。5隻小鼠的組接受用15昭偶聯至10嗎PPD的重組IL-la進行的皮下免疫，該偶聯採用與戊二醛溫育的步驟進行。IL-l(x-PPD偶聯物隨後吸附到明礬。小鼠接受三次這樣的皮下免疫，時間間隔為2周。這種免疫產生高效價的抗IL-l(x抗體，而用明碸中的PPD免疫的對照小鼠未能誘導出可檢測的抗體效價(圖l)。抗IL-lct抗體的誘導需要至少2次注射。在僅僅注射一次明礬中的重組IL-loi-PPD偶聯物之後，血清中檢測不到抗體反應。但在用明礬中的重組IL-k-PPD偶聯物第三次注射後，所有接種的小鼠都產生抗IL-la抗體。實施例13對IL-la的主動免疫防止動脈粥樣硬化的形成0031在第0天、第14天和第28天，通過在頸部區域皮下給藥，用在氫氧化鋁中與10(igPPD(由結核分枝桿菌(M^Z^c"/oi)純化的蛋白衍生物)偶聯的15嗎鼠IL-la對ApoE敲除小鼠(6周齡)進行主動免疫。注射體積為100pl，氫氧化鋁的量為約lmg。對照小鼠進行類似處理，但是使用含有相同量的PPD和氫氧化鋁，但不包含IL-la的製品。在第0、28、42和56天，從尾靜脈血液取樣，用ELISA法測量抗IL-lot抗體反應。首次免疫後4周，開始給小鼠動脈粥樣硬化膳食，其中食物小球包含16%脂肪、1.16。％膽固醇和0.5%膽酸，這是已知的加速動脈粥樣硬化的膳食。然後，小鼠在18周齡處以安樂死。其主動脈被移出用於肉眼和顯微鏡分析。組織學切片用蘇木精和伊紅(HE)，以及蘇丹(Sudan)染色。0032此時間點後，在雙目顯微鏡下檢查切開的主動脈，在針對IL-la主動免疫的ApoE-A小鼠中顯示出動脈粥樣硬化斑塊明顯地減少，但僅針對PPD免疫的ApoE-A對照小鼠沒有這種減少。實施例14對IL-lot的被動免疫防止動脈粥樣硬化的形成0033使用明礬中的IL-la-PPD偶聯物三次皮下注射，對C57BL/6小鼠進行對IL-la的主動免疫。56天後，採集它們的血清，並用ELISA確定抗IL-la抗體效價的產生。200ji1這種血清被動轉移至6周齡的ApoE敲除小鼠。每周重複這些被動血清轉移。對照ApoE-A小鼠每周被動地接受來自幼C57BL/6小鼠血清的被動轉移。從這些被動血清轉移開始，八0￡-/-小鼠被餵食動脈粥樣硬化膳食，其中食物小球含有16%脂肪、1.16%膽固醇和0.5%膽酸，用以加速動脈粥樣硬化的形成。對照ApoE-A小鼠以每周間隔被動轉移200ml來自幼C57BL/6小鼠的血清。6周後小鼠被處以安樂死，進行主動脈的肉眼分析和組織學分析。組織學分析包括橫切片的蘇木精和伊紅染色，以及蘇丹染色。0034這6周後，在雙目顯微鏡下檢查切開的主動脈，在被動轉移抗IL-la抗血清的六(^-/-小鼠中顯示出動脈粥樣硬化斑塊明顯地減少，但僅接受幼血清的ApoE-/-對照小鼠沒有這種減少。實施例15對IL-la的主動免疫保持動脈粥樣硬化沒有效果0035在第0天、第14天和第28天，通過在頸部區域皮下給藥，用在氫氧化鋁中與10嗎PPD(由結核分枝桿菌純化的蛋白衍生物)偶聯的15嗎鼠IL-la對ApoE敲除小鼠(6周齡)進行主動免疫。注射體積為IOOjil，氫氧化鋁的量為約lmg。對照小鼠進行類似的處理，但是使用含有相同量的PPD和氫氧化鋁，但不包含IL-la的製品。在第O、28、42和56天，從尾靜脈血液取樣，用ELISA法測量抗IL-la抗體反應。首次免疫後4周，開始給小鼠動脈粥樣硬化膳食，其中食物小球包含16%脂肪、1.16%膽固醇和0.5%膽酸，這是已知的加速動脈粥樣硬化的膳食。然後，小鼠在18周齡處以安樂死。其主動脈被移出用於肉眼和顯微鏡分析。組織學切片用蘇木精和伊紅(HE)以及蘇丹染色。0036此時間點後，在雙目顯微鏡下檢查切開的主動脈，在對IL-la抗血清免疫的ApoE-A小鼠和對照ApoE-A小鼠兩者中，顯示出具有相同程度的動脈粥樣硬化斑塊。實施例16對IL-la的被動免疫保持動脈粥樣硬化沒有效果0037使用明礬中IL-la-PPD偶聯物三次皮下注射，對C57BL/6小鼠進行對IL-la的主動免疫，。56天後，採集它們的血清，並用ELISA確定抗IL-la抗體效價的產生。200pl這種血清被動轉移至6周齡的ApoE敲除小鼠。每周重複這些被動血清轉移。對照ApoE-Z-小鼠接受來自幼C57BL/6小鼠200|il血清轉移。從這些被動血清轉移開始，ApoE-A小鼠被餵食動脈粥樣硬化膳食，其中食物小球含有16%脂肪、1.16%膽固醇和0.5°/。膽酸，用以加速動脈粥樣硬化的形成。對照ApoE-A小鼠以每周間隔被動轉移200ml來自幼C57BL/6小鼠的血清。6周後小鼠被處以安樂死，用於主動脈的肉眼分析和組織學分析。組織學分析包括橫切片的蘇木精伊紅染色，以及蘇丹染色。0038這6周後，在雙目顯微鏡下檢査切開的主動脈，在接受抗IL-la抗血清和接受來自幼小鼠的血清的ApoE-/-小鼠中，顯示出具有相同程度的動脈粥樣硬化斑塊。實施例17ADCK-抗體依賴性補體介導殺傷0039使用明礬中的IL-la-PPD偶聯物三次皮下注射，對C57BL/6小鼠進行對IL-la的主動免疫。56天後，採集它們的血清，並用ELISA確定抗IL-la自身抗體效價的產生。熱滅活血清。50plEL-4細胞懸液被鋪入96孔板。向這些孔的每一個中加入15pl的熱滅活血清的1:2連續稀釋液。然後在37。C溫育板20分鐘。隨後將25ml鼠血清加入每個孔。在37。C下另外溫育5h後，對孔進行拍照，隨後使用臺盼藍將死細胞與活細胞區分，在計數室對細胞進行計數。0040EL-4細胞的多克隆小鼠抗小鼠IL-la抗血清介導的補體依賴性殺傷為濃度依賴方式。見圖2。1權利要求1.白細胞介素-1α在製備降低哺乳動物動脈粥樣硬化相關疾病的風險和嚴重程度的藥物中的用途。2.編碼IL-la的重組病毒在製備降低哺乳動物動脈粥樣硬化相關疾病的風險和嚴重程度的藥物中的用途。3.與IL-la化學連接的病毒樣顆粒在製備降低哺乳動物動脈粥樣硬化相關疾病的風險和嚴重程度的藥物中的用途。4.根據權利要求1、2或3所述的用途，其中所述哺乳動物選自鼠、豬、山羊、狗、貓和綿羊。5.根據權利要求3所述的用途，其中所述哺乳動物是小鼠，並且所述小鼠是ApoEV-。6.根據權利要求l、2或3所述的用途，其中所述哺乳動物是人。7.根據權利要求l、2或3所述的用途，其中所述動脈粥樣硬化相關疾病是外周動脈疾病。8.根據權利要求1、2或3所述的用途，其中所述動脈粥樣硬化相關疾病是外周缺血性心臟病。9.根據權利要求l、2或3所述的用途，其中所述動脈粥樣硬化相關疾病是冠狀動脈疾病。10.根據權利要求l、2或3所述的用途，其中所述動脈粥樣硬化相關疾病是腦血管疾病。11.根據權利要求l、2或3所述的用途，其中所述動脈粥樣硬化相關疾病是外周動脈的疾病。12.根據權利要求1或權利要求3所述的用途，其中所述IL-la是重組IL-la。13.根據權利要求2或權利要求12所述的用途，其中所述重組IL-la是鼠的或人的。14.根據權利要求1所述的用途，其中所述IL-la是與載體相連的。15.根據權利要求14所述的用途，其中所述載體是結核菌素的純化蛋白質衍生物(PPD)。16.根據權利要求l、權利要求2或權利要求3所述的用途，其中所述IL-la在佐劑存在下使用。17.根據權利要求16所述的用途，其中所述佐劑是氫氧化鋁。18.ApoE-A小鼠，其用IL-la免疫。19.ApoE-A小鼠，其包括IL-la自身抗體。20.治療哺乳動物以降低動脈粥樣硬化相關疾病的風險和嚴重程度的方法，其包括用IL-la免疫所述哺乳動物。21.根據權利要求20所述的方法，其中所述哺乳動物選自小鼠、豬、山羊、狗、貓和綿羊。22.根據權利要求21所述的方法，其中所述哺乳動物是小鼠，且所述小鼠是ApoE-A。23.根據權利要求20所述的方法，其中所述哺乳動物是人。24.根據權利要求20所述的方法，其中所述動脈粥樣硬化相關疾病是外周動脈疾病。25.根據權利要求20所述的方法，其中所述動脈粥樣硬化相關疾病是外周缺血性心臟病。26.根據權利要求20所述的方法，其中所述動脈粥樣硬化相關疾病是冠狀動脈疾病。27.根據權利要求20所述的方法，其中所述動脈粥樣硬化相關疾病是腦血管疾病。28.根據權利要求20所述的方法，其中所述動脈粥樣硬化相關疾病是外周動脈的疾病。29.根據權利要求20所述的方法，其中所述哺乳動物用重組IL-la免疫。30.根據權利要求20所述的方法，其中所述重組IL-la是鼠的或人的。31.根據權利要求20所述的方法，其中所述哺乳動物用與載體相連的IL-la免疫。32.根據權利要求31所述的方法，其中所述載體是結核菌素的純化蛋白質衍生物(PPD)。33.根據權利要求20所述的方法，其中所述哺乳動物在佐劑存在下用IL-la免疫。34.根據權利要求33所述的方法，其中所述佐劑是氫氧化鋁。35.根據權利要求20所述的方法，其中所述哺乳動物用編碼IL-la的重組病毒免疫。36.根據權利要求20所述的方法，其中所述哺乳動物用與IL-la化學相連的病毒樣顆粒免疫。全文摘要本發明涉及白細胞介素-1α免疫誘導預防動脈粥樣硬化的自身抗體。用IL-1α免疫哺乳動物引起哺乳動物產生IL-1α自身抗體，可用於降低哺乳動物動脈粥樣硬化相關疾病的風險和嚴重程度，或降低其進展。使用這種治療，可降低動脈粥樣硬化相關疾病如外周缺血性心臟病、冠狀動脈疾病、腦血管疾病和外周動脈的疾病的進展。文檔編號A61K48/00GK101448528SQ200780018614公開日2009年6月3日申請日期2007年5月15日優先權日2006年5月15日發明者J·賽瑪德申請人:埃克斯生物科技公司