一種從野艾蒿中製備咖啡醯奎尼酸的方法
2023-06-10 09:42:41 3
一種從野艾蒿中製備咖啡醯奎尼酸的方法
【專利摘要】本發明公開了野艾蒿作為製備咖啡醯奎尼酸類物質原料的應用及從野艾蒿中製備咖啡醯奎尼酸的方法。該方法是將野艾蒿的葉或全草研磨後，經提取劑浸提，固液分離後得到含咖啡醯奎尼酸的提取液，再經純化得到高純度的咖啡醯奎尼酸類產品。本發明得到總咖啡醯奎尼酸類物質量達5.8%，其中單咖啡醯奎尼酸（主要是5-O-咖啡醯奎尼酸）含量為2.1%，二咖啡醯奎尼酸含量3.7%，其中主要是1,5-二咖啡醯奎尼酸、3,5-二咖啡醯奎尼酸、4,5-二咖啡醯奎尼酸。本發明提供了製備咖啡醯奎尼酸類物質的新原料來源，為野艾蒿的利用提供了新途徑。
【專利說明】一種從野艾蒿中製備咖啡醯奎尼酸的方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種從植物中提取有效成分的方法，具體涉及一種從野艾蒿中製備咖啡醯奎尼酸類物質的方法。
【背景技術】
[0002]咖啡醯奎尼酸類物質是一類由奎尼酸和不同數目的咖啡酸通過酯化反應縮合形成的酚酸類天然化合物，包括單咖啡醯奎尼酸、二咖啡醯奎尼酸、三咖啡醯奎尼酸以及多咖啡醯奎尼酸。
[0003]單咖啡醯奎尼酸由一分子的咖啡酸和奎尼酸生成(包括3-咖啡醯奎尼酸，4-咖啡醯奎尼酸，5-咖啡醯奎尼酸)，具有廣泛的生物活性，如抗菌、抗病毒、保肝利膽、降血壓、降血脂、清除自由基、抗腫瘤等作用(黃林，唐菊利，黃靜，等.綠原酸提取與應用研究進展[J].高效實驗室工作研究，2012，3:114~117)。二咖啡醯奎尼酸是由二分子咖啡酸和奎尼酸生成的縮酚酸，根據咖啡酸取代位置的不同，分別為1，3- 二咖啡醯奎尼酸、1，4- 二咖啡醯奎尼酸、1，5-二咖啡醯奎尼酸、3，4-二咖啡醯奎尼酸、3，5-二咖啡醯奎尼酸、4，5-二咖啡醯奎尼酸。`
[0004]咖啡醯奎尼酸在保健品、藥物等領域的應用非常廣泛(CN100353938C ；CN100341500C)，特別是二咖啡醯奎尼酸應用更引人注目(魏振滿，丁晉彪，胡琳，等.二咖啡醯奎尼酸片健康人體安全性及耐受性研究[J].中國新藥雜誌，2010，19(2): 106~108)。Kimura等發現3，5- 二咖啡醯奎尼酸、4，5- 二咖啡醯奎尼酸以及3，4- 二咖啡醯奎尼酸抑制人外周多形核白細胞中鈣離子A23187誘導的白三烯B4產生，並且3，4- 二咖啡醯奎尼酸能促進前列腺素E2的形成(Kimura Y, Okuda H, Okuda T, et al.Studies onthe activities of tannins and related compounds, X:Effects of caffeetanninsand related compounds on arachidonate met abolism in human polymorphonuclearleukocytes [J].Nat Prod, 1987, 50 (3): 392)。Soh 等發現 4, 5_ 二咖啡醯奎尼酸預處理 C6細胞後，可消弱THP引起的穀胱甘肽過氧化酶(GSH-Px)、過氧化氫酶和SOD的改變，並且減少丙二醒的釋放(Soh Y, Kim J A, Sohn N W，et al.Protective effects of quinic acidderivatives on tetrahydropapaveroline-1nduced cell death in C6glioma cells[J].Biol Pharm Bull, 2003，26(6):803 ~806)。
[0005]野艾蒿(Artemisia lavandulaefolia D C.)和艾蒿(Artemisia argyi Levi, etVant)均為菊科蒿屬草本植物，具有芳香氣味，生長於路旁、草地、荒野等處，也有栽培者。我國大部分地區，如江蘇、安徽、浙江、河南等地多有出產。
[0006]蒿屬植物常見的成分有揮髮油、黃酮類、三萜類等，如桉油素、β_石竹烯、α-萜品烯醇等，具有抗菌、消炎、抗氧化、抗過敏等多種生物活性(王錦軍，黃兆文，李瑤瑤.艾葉化學成分的研究[J].藥學服務與研究，2008，8 (6):465~466)。有文獻報導艾蒿葉中的3，5- 二咖啡醯奎尼酸及其衍生物可以有效抑制梨形鞭毛蟲的亮氨醯tRNA合成酶的氨醯化活性，3，5-diCQA是在艾蒿葉的乙醇提取物中檢測得到，但含量非常低，不足0.01%(Yan-Hong Zhang，Me1-Qin Xuej Yuan-Chao Baij et al.3,5-dicaffeoylquinic acidisolated from Artemisia argyi and its ester derivatives exert ant1-leucyl-tRNAsynthetase of Giardia lamblia (G/LeuRS)and potential ant1-giardial effects[J].Fitoterapiaj2012，83:1281 ~1285)。
[0007]劉益紅等測定了不同月份艾蒿(A.argyi Levi, et Vant)中的綠原酸含量,發現艾蒿(採自陝西)其綠原酸含量最高為1.18%，但未對二咖啡醯奎尼酸含量進行測定(劉益紅，周建軍，王晶.HPLC測定不同月份艾葉中綠原酸含量[J].陝西農業科學，2012，(1):82~84)。與傳統的綠原酸工業化生產原料金銀花(綠原酸含量2.40~9.23%)(向增旭，郭巧生.不同產地金銀花的綠原酸含量比較[J].中藥材，2007, 30(12):1497~1499)和杜仲葉(綠原酸含量1.0~5.5%)(蘭小豔，張學俊，龔桂珍.杜仲葉綠原酸的研究進展[J].中國農學通報，2009, 25(21): 86~89)相比，艾蒿的工業應用價值較小。
[0008]野艾蒿(A.lavandulaefolia DC)與艾蒿(A.argyi Levi, et Vant)是不同種(同屬)的植物，在江蘇地區野艾蒿的資源量比艾蒿多，而關於野艾蒿中的咖啡醯奎尼酸的含量鮮有報導。因此，本發明對其進行了詳細的研究，實驗結果發現野艾蒿中總咖啡醯奎尼酸含量很高(5.8%)，其中僅二咖啡醯奎尼酸含量達3.7%，單咖啡醯奎尼酸量達2.1%，高於艾蒿中的單咖啡醯奎尼酸含量(1.18%)，因而野艾蒿中的高咖啡醯奎尼酸特別是高的二咖啡醯奎尼酸含量使其成為極具潛力的咖啡醯奎尼酸產品生產新原料來源。
[0009]目前傳統的咖啡醯奎尼酸類物質生產原料(杜仲、金銀花等)或因是國家保護植物(杜仲)或因生物量小(僅為金銀花植物的花)的原因而導致資源量不高，而野艾蒿在我們國家分布廣，生物量大(全草)，其中的咖啡醯奎尼酸類物質含量豐富，因而原料成本和生產成本與傳統原料相比有很大的優勢，應用前景廣闊。
【發明內容】
[0010]本發明公開了一種野艾蒿的新用途，並提供了一種製備咖啡醯奎尼酸的新方法，為綜合利用野艾蒿提供了新途徑。
[0011]野艾蒿作為製備咖啡醯奎尼酸類物質的原料的應用。所述野艾蒿是菊科蒿屬多年生植物野艾蒿(Artemisia lavandulaefolia DC.)的葉或全草。
[0012]本發明還公開了一種製備咖啡醯奎尼酸的方法，是將將野艾蒿的葉或全草經提取劑浸提，固液分離後得到含咖啡醯奎尼酸的提取液，再經純化得到高純度的咖啡醯奎尼酸。所用提取劑為水、甲醇、乙醇、丙酮、正丁醇、正戊醇、乙酸乙酯、乙酸丁酯的一種或多種不同比例的混合液。提取劑的pH為1.0~10.0，原料與提取劑的料液比為1:10 ~ l:50(w/w),提取時間0.5~10h。所用的提取方式是水浴提取法、超聲輔助提取法、微波輔助提取法、超高壓技術提取法、超臨界流體萃取法的一種或多種形式的組合。
[0013]經浸提獲得的提取液中單咖啡醯奎尼酸類物質為3-0-咖啡醯奎尼酸、4-0-咖啡醯奎尼酸、5-0-咖啡醯奎尼酸中的一種或多種成分。二咖啡醯奎尼酸類物質為3，4-二咖啡醯奎尼酸、3，5-二咖啡醯奎尼酸、4，5-二咖啡醯奎尼酸、1，3-二咖啡醯奎尼酸、1，4-二咖啡醯奎尼酸、1，5- 二咖啡醯奎尼酸中的一種或多種成分。
[0014]純化所用材料是大孔樹脂、聚醯胺、Sephadex LH20、製備性液相色譜、高效逆流色譜或離子交換色譜的一種或多種。[0015]野艾蒿作為製備咖啡醯奎尼酸原料的優點在於:
[0016]1.野艾蒿中咖啡醯奎尼酸類物質含量高(5.8%)。
[0017]2.野艾蒿中咖啡醯奎尼酸類物質種類多，特別是1，5- 二咖啡醯奎尼酸(艾蒿中未檢測到)，佔總咖啡醯奎尼酸量的21% ;與目前已在臨床試驗的抗愛滋病毒和保肝應用的藥物(化學合成)比較，從野艾蒿和旋覆花等天然來源的1，5-二咖啡醯奎尼酸有著明顯的優勢。
[0018]3.野艾蒿資源豐富，因而在原料成本與分離成本方面都有著極大的優勢。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0019]圖1野艾蒿浸提液HPLC圖。
[0020]圖2單咖啡醯奎尼酸HPLC圖。
[0021]圖3 二咖啡醯奎尼酸HPLC圖。
【具體實施方式】
[0022]下面將結合【具體實施方式】進一步說明本發明，舉例是為說明本發明的過程而非僅限於實施例。
[0023]實施例1
[0024]稱取野艾蒿100g，按固液比1:10 (w/w)加入pH=3.0體積濃度60%的乙醇溶液，超聲作用下浸提lh，經固液分離後，得到含咖啡醯奎尼酸的提取液，其中單咖啡醯奎尼酸類物質2.lg，二咖啡醯奎尼酸類物質3.7g。經聚醯胺純化後，得純度為55.6%單咖啡醯奎尼酸，純度為67.8% 二咖啡醯奎尼酸。再經有機溶劑萃取，可分別得到純度90%~95%的單咖啡醯奎尼酸1.3g和二咖啡醯奎尼酸2.lg。
[0025]其中野艾蒿浸提液液相圖、單咖啡醯奎尼酸液相圖、二咖啡醯奎尼酸液相圖見圖1、圖2、圖3所示。
[0026]實施例2
[0027]稱取野艾蒿100g，按固液比1:30 (w/w)加入pH=5.0體積濃度70%的乙醇溶液，微波作用下浸提20min，經固液分離後，得到含咖啡醯奎尼酸的提取液，其中單咖啡醯奎尼酸類物質1.8g, 二咖啡醯奎尼酸類物質2.5g。經大孔樹脂純化後，得純度為49.8%單咖啡醯奎尼酸，純度為56.5% 二咖啡醯奎尼酸。再經聚醯胺純化，可分別得到純度85%~90%的單咖啡醯奎尼酸1.1g和二咖啡醯奎尼酸1.7g。
[0028]實施例3
[0029]稱取野艾蒿100g，按固液比1:20 (w/w)加入pH=6.0體積濃度50%的乙酸乙酯溶液，微波作用浸提30min，經固液分離後，得到含咖啡醯奎尼酸的提取液，其中單咖啡醯奎尼酸類物質1.5g，二咖啡醯奎尼酸類物質3.lg。經大孔樹脂純化後，得純度為45.7%單咖啡醯奎尼酸，純度為53.2% 二咖啡醯奎尼酸。再經有機溶劑萃取，可分別得到純度80%~85%的單咖啡醯奎尼酸0.9g和二咖啡醯奎尼酸1.8g。
[0030]實施例4
[0031]稱取野艾蒿100g，按固液比1:30 (w/w)加入pH=3.0體積濃度70%的乙酸丁酯溶液，超聲作用下浸提3h，經固液分離後，得到含咖啡醯奎尼酸的提取液，其中單咖啡醯奎尼酸類物質1.2g，二咖啡醯奎尼酸類物質2.4g。經大孔樹脂純化後，得純度為43.9%單咖啡醯奎尼酸，純度為59.7% 二咖啡醯奎尼酸。再經S印hadex LH20純化，可分別得到純度90%~95%的單咖啡醯奎尼酸0.7g和二咖啡醯奎尼酸1.4g。
[0032]實施例5
[0033]稱取野艾蒿100g，按固液比1:50 (w/w)加入pH=4.0體積濃度60%的正丁醇溶液，超高壓提取lh，經固液分離後，得到含咖啡醯奎尼酸的提取液，其中單咖啡醯奎尼酸類物質1.6g，二咖啡醯奎尼酸類物質2.8g。經乙酸乙酯萃取後，得純度為33.2%單咖啡醯奎尼酸，純度為41.6% 二咖啡醯奎尼酸。再經製備性液相色譜純化，可分別得到純度85%~90%的單咖啡醯奎尼酸0.7g和二咖啡醯奎尼酸1.4g。
[0034]實施例6
[0035]稱取野艾蒿100g，按固液比1:30 (w/w)加入pH=7.0體積濃度40%的甲醇溶液，50°C恆溫水浴下浸提5h，經固液分離後，得到含咖啡醯奎尼酸的提取液，其中單咖啡醯奎尼酸類物質2.0g，二咖啡醯奎尼酸類物質1.9g。經乙酸乙酯純化後，得純度為33.9%單咖啡醯奎尼酸，純度為39.7% 二咖啡醯奎尼酸。再經S印hadex LH20純化，可分別得到純度80%~85%的單咖啡醯奎尼酸0.7g和二咖啡醯奎尼酸1.lg。
[0036]實施例7
[0037]稱取野艾蒿100g，按固液比1:50 (w/w)加入pH=3.0體積濃度60%的甲醇溶液，超臨界流體萃取30min，經固液分離後，得到含咖啡醯奎尼酸的提取液，其中單咖啡醯奎尼酸類物質1.5g，二咖啡醯奎尼酸類物質2.9g。經製備性液相色譜純化後，得純度為67.5%單咖啡醯奎尼酸，純度為78.6% 二咖啡醯奎尼酸。再經有機溶劑萃取，可分別得到純度90%~95%的單咖啡醯奎尼酸0.6g和二咖啡醯奎尼酸1.8g。
[0038]實施例8
[0039]稱取野艾蒿100g，按固液比1:20 (w/w)加入pH=6.0體積濃度30%的正戊醇溶液，50°C恆溫水浴下浸提3h，經固液分離後，得到含咖啡醯奎尼酸的提取液，其中單咖啡醯奎尼酸類物質1.8g, 二咖啡醯奎尼酸類物質2.4g。經S印hadex LH20純化後，得純度為60.9%單咖啡醯奎尼酸，純度為72.3% 二咖啡醯奎尼酸。再經有機溶劑萃取，可分別得到純度85%~90%的單咖啡醯奎尼酸1.1g和二咖啡醯奎尼酸1.0g。
[0040]實施例9
[0041]稱取野艾蒿100g，按固液比1:40 (w/w)加入pH=5.0體積濃度50%的丙酮溶液，微波作用下浸提40min，經固液分離後，得到含咖啡醯奎尼酸的提取液，其中單咖啡醯奎尼酸類物質1.7g，二咖啡醯奎尼酸類物質2.3g。經聚醯胺純化後，得純度為59.7%單咖啡醯奎尼酸，純度為65.6% 二咖啡醯奎尼酸。再經S印hadex LH20純化，可分別得到純度90%~95%的單咖啡醯奎尼酸0.9g和二咖啡醯奎尼酸1.7g。
[0042]實施例10
[0043]稱取野艾蒿100g，按固液比1:20 (w/w)加入pH=3.0體積濃度20%丙酮溶液，超聲作用下浸提8h，經固液分離後，得到含咖啡醯奎尼酸的提取液，其中單咖啡醯奎尼酸類物質
1.5g，二咖啡醯奎尼酸類物質2.4g。經大孔樹脂純化後，得純度為48.5%單咖啡醯奎尼酸，純度為53.1% 二咖啡醯奎尼酸。再經製備性液相色譜純化，可分別得到純度85%~90%的單咖啡醯奎尼酸0.8g和二咖啡醯奎尼酸1.3g。[0044]實施例11
[0045]稱取野艾蒿100g，按固液比1:20 (w/w)加入pH=4.0,乙醇:丙酮=5:1的提取液，超聲作用下浸提2h，經固液分離後，得到含咖啡醯奎尼酸的提取液，其中單咖啡醯奎尼酸類物質1.1g, 二咖啡醯奎尼酸類物質2.6g。經聚醯胺純化後，得純度為55.3%單咖啡醯奎尼酸，純度為66.2% 二咖啡醯奎尼酸。再經製備性液相色譜純化，可分別得到純度90%~95%的單咖啡醯奎尼酸1.0g和二咖啡醯奎尼酸1.7g。
[0046]實施例12
[0047]稱取野艾蒿100g，按固液比1:50 (w/w)加入ρΗ=6.0,甲醇:丙酮=4:1的提取液，超聲作用下浸提2h，經固液分離後，得到含咖啡醯奎尼酸的提取液，其中單咖啡醯奎尼酸類物質1.3g, 二咖啡醯奎尼酸類物質2.5g。經S印hadex LH20純化後，得純度為61.6%單咖啡醯奎尼酸，純度為78.7% 二咖啡醯奎尼酸。再經製備性液相色譜純化，可分別得到純度90%~95%的單咖啡醯奎尼酸0.6g和二咖啡醯奎尼酸1.9g。
【權利要求】
1.野艾蒿作為製備咖啡醯奎尼酸類物質原料的應用。
2.根據權利要求1所述的應用，其特徵在於，所述野艾蒿是菊科蒿屬多年生植物野艾蒿(Artemisia lavandulaefolia DC.)的葉或全草。
3.一種製備咖啡醯奎尼酸的方法，其特徵在於將野艾蒿的葉或全草研磨後，經提取劑浸提，固液分離後得到含咖啡醯奎尼酸的提取液，再經純化得到高純度的咖啡醯奎尼酸類
口廣BH ο
4.根據權利要求3所述方法，其特徵在於所述提取劑為水、甲醇、乙醇、丙酮、正丁醇、正戊醇、乙酸乙酯或乙酸丁酯中的一種或多種不同比例的混合液。
5.根據權利要求3所述方法，其特徵在於所述提取劑的pH為1.0~10.0，原料與提取劑的料液比為1:10~1:50 (w/w)，提取時間0.1~IOho
6.根據權利要求3所述方法，其特徵在於所述的提取方式可以是水浴提取、超聲輔助提取、微波輔助提取、超高壓技術提取或超臨界流體萃取中的一種或多種方法的組合。
7.根據權利要求3所述方法，其特徵在於提取液中的單咖啡醯奎尼酸類物質為3-0-咖啡醯奎尼酸、4-0-咖啡醯奎尼酸、5-0-咖啡醯奎尼酸中的一種或多種成分。二咖啡醯奎尼酸類物質為3，4- 二咖啡醯奎尼酸、3，5- 二咖啡醯奎尼酸、4，5- 二咖啡醯奎尼酸、I, 3- 二咖啡醯奎尼酸、1，4- 二咖啡醯奎尼酸、1，5- 二咖啡醯奎尼酸中的一種或多種成分。
8.根據權利要求3所述方法，其特徵在於純化所用材料是大孔樹脂、聚醯胺、SephadexLH20、製備性液相色譜、高效 逆流色譜或離子交換色譜的一種或多種。
【文檔編號】C07C67/48GK103570545SQ201310424422
【公開日】2014年2月12日 申請日期:2013年9月17日 優先權日:2013年9月17日
【發明者】陳育如, 錢媛媛, 柯小紅, 閆莽 申請人:南京師範大學