高活性雙歧桿菌菌粉及其製備方法
2023-05-30 08:11:41 2
專利名稱：高活性雙歧桿菌菌粉及其製備方法
技術領域：
本發明涉及一種雙歧桿菌製品，特別是涉及一種高活性雙歧桿菌菌粉及其製備 方法，屬於雙歧桿菌製品製備技術領域，本發明製得的高活性雙歧桿菌菌粉可以根據需 要製成各類劑型，既可直接服用，又可作為添加劑用於研製功能性食品和醫藥製劑。
背景技術：
雙歧桿菌是1899年在法國巴斯德研究所由Tisser.H博士首次從健康的母乳哺育 嬰兒的糞便中發現並分離出來的，是人體腸道內重要的生理性細菌，與人的一生始終保 持著和諧的共生關係，是健康個體腸道中的優勢菌，其促進人體健康的有益作用遠遠超 過其它乳酸菌。但是，由於機體衰老、環境汙染、飲食改變、濫用抗生素等原因，往 往使人體腸道的雙歧桿菌數量下降，導致腸道微生態失調，引起菌群易位，誘發內源感 染，造成機體病變。因此，基於雙歧桿菌的生物化學屏障、抑制致病菌和腐敗菌、提供 營養、提高免疫力、抗腫瘤功能及其臨床功效的肯定，國內外研究者相繼開發出多種雙 歧桿菌食品和微生態藥品用於保健功能和治療各種因素引起的腸道菌群失調，通過外源 方式增加人體腸道中雙歧桿菌數量，促進人體健康。雖然雙歧桿菌製品的開發層出不窮，但在眾多製品中存在的最為關鍵的問題是 產品在貯藏和消費過程中活菌含量下降。研究發現，雙歧桿菌在人體內的存活和增殖能 力對其益生作用有著重要影響，要獲得所期望的治療效果，雙歧桿菌必須達到足夠的數 量，以確保進入人體後有足夠的活菌發揮保健功能。然而，由於雙歧桿菌對營養條件要 求較高，對氧極為敏感，對低pH值的抵抗力差，導致進入市場的產品中雙歧桿菌的數量 急劇下降。另外，雙歧桿菌對人體產生有益效果，必須在通過胃環境後仍有大量的存活 菌到達腸道並定殖於腸黏膜上。但在胃酸和膽鹽環境中，雙歧桿菌菌數會很快下降，使 得最終在人體內沒有足夠的雙歧桿菌發揮作用。因此，如何提高產品中雙歧桿菌活菌數 量，確保其在人體腸道內定殖而發揮療效已成為我們亟待解決的問題。國內研究人員針對以上實際應用問題做了大量研究，主要體現在菌種基因改 造、高密度培養、微囊技術、保護劑研究等方面。專利CN 1056877C中公開了一種雙 歧桿菌微膠囊及其製造方法，CN 1063051C中公開了一種雙歧桿菌複合活菌製劑，CN 1149092C中公開了一種活性雙歧聯菌株耐酸腸溶微囊，三項專利均採用微膠囊技術，使 雙歧桿菌能夠抵抗外界環境的能力增強，可以抵擋胃酸及膽鹽的侵蝕，在液態或常溫狀 態下長時間儲存，仍可有效保護其活性，但是，一般經微膠囊包埋的雙歧桿菌到達腸道 後卻需要六小時以上才能溶解釋出，效果有限。專利CN 1116410C公開了一種高存活 性的活菌製劑及其製備方法，該專利將雙歧桿菌進行液體深層高密度培養，發酵液含活 菌數5X108cfU/mL，菌體採用凍乾粉、微膠囊、充氮氣罐裝膠囊、充氮氣雙鋁包裝四重 保護措施，製成活菌製劑，使得菌體存活率顯著提高，製劑保存期常溫下可達兩年，但 是，該製劑工藝較繁瑣、費時，經高密度培養後活菌數仍較低，後期採用微膠囊技術同 樣存在有益效果發揮問題。專利CN 100519738C中公開了一種雙歧桿菌活菌製劑及其專用保護劑，CN 100497594C中公開了一種高活性雙歧桿菌乾粉製劑的複合保護劑，兩項 專利採用特製保護劑，用其製成的凍乾粉劑，活菌含量均達LOXlO^cfu/g以上，同時解 決了雙歧桿菌製品常溫保存困難的問題，但是，雙歧桿菌有效定植腸道並發揮益生效果 的有效性問題並未解決。
發明內容
本發明的目 的在於針對目前雙歧桿菌製品中存在的產品在貯藏和消費過程中活 菌含量下降以及雙歧桿菌有效定植腸道並發揮益生效果的不足，提供一種高活性雙歧杆 菌菌粉及其製備方法。本發明製成的雙歧桿菌菌粉活菌含量高，可達IO11Cfuzig以上， 耐胃酸和膽鹽能力強，有效定殖腸道發揮療效，解決了目前雙歧桿菌製品中存在的的問題。本發明給出的技術解決方案是這種高活性雙歧桿菌菌粉，其特點是所述菌粉 由雙歧桿菌採用高密度培養和雙層包埋技術製得。為更好的完成本發明的目的，所述雙歧桿菌至少為嬰兒雙岐桿菌AS1.2202、短 雙歧桿菌AS1.2213、長雙歧桿菌CICC 6186、兩歧雙歧桿菌CICC 6071、青春雙歧桿菌 CICC 6070 中的一種。上述雙歧桿菌中的嬰兒雙岐桿菌AS 1.2202、短雙歧桿菌AS 1.2213均由中國普 通微生物菌種保藏管理中心保藏，長雙歧桿菌CICC 6186、兩歧雙歧桿菌CICC6071、青 春雙歧桿菌CICC 6070均由中國微生物菌種保藏管理委員會工業微生物菌種保藏管理中 心保藏，屬於現有的雙歧桿菌菌種。本發明給出的這種高活性雙歧桿菌菌粉的製備方法，包括有下列步驟A、高密度培養(1)菌種活化無菌條件下，挑取安瓿管中菌體接種於液體培養基和瓊脂平板 上，在36 38°C條件下厭氧培養24 48小時，連續活化2 3代，即得活化菌種；其中，用於本發明的雙歧桿菌液體培養基的配製方法如下胰蛋白腖5.0g、 酵母提取物lO.Og、大豆蛋白腖5.0g、葡萄糖lO.Og、L 半胱氨酸鹽酸鹽0.5g、吐溫 801.0mL、鹽溶液40mL、加水定容至lOOOmL，調節pH6.8 7.0，121°C滅菌20min。其 中鹽溶液的成分為氯化鈣0.2g、磷酸二氫鉀l.Og、硫酸鎂0.48g、碳酸氫鈉lO.Og、磷酸 氫二鉀l.Og、氯化鈉2.0g、加水定容至1000mL。(2)種子培養將活化菌種按5% 10%的接種量接入液體培養基中，在36 38°C條件下厭氧培養20 28小時，作為種子培養物。(3)發酵培養將種子培養物按5% 10%的接種量接入液體培養基中，在 36 38 °C條件下進行發酵罐高密度培養。(4)發酵終止培養基pH和葡萄糖含量均不再降低時終止發酵，獲得雙歧桿菌 高密度發酵液。B、雙層包埋(1)離心濃縮將雙歧桿菌高密度發酵液在4°C、6000 8000r/min的條件下離 心10 20min，無菌水洗滌2 3次，取下層沉澱即為活性菌泥。(2)添加保護劑按1 4 1 10(V保護劑/V發酵液)的比例在活性菌泥中加入菌體冷凍乾燥保護劑，無菌條件下150 250r/min攪拌15 30min至均勻，製備菌懸液。其中，用於本發明的冷凍乾燥保護劑的配製方法如下脫脂奶粉8 12g、蔗糖 8 12g、穀氨酸鈉0.5 1.5g、山梨醇0.5 1.5g，加水定容至lOOmL，加熱攪拌使其溶 解，然後115°C滅菌15min。(3)1層包埋按1 1 1 5 (Vljg包埋液/V保護劑)的比例將I層包埋液加入菌懸 液中，無菌條件下150 250r/min攪拌15 30min至均勻。其中，用於本發明的I層包埋液為蛋白質溶液，包括酪蛋白、乳白蛋白、卵白蛋 白、卵黃磷蛋白、肌蛋白、大豆分離蛋白、中草藥白蛋白等中的一種或幾種。(4)11層包埋按1 1 1 5 (V11層包埋液/V保護劑)的比例將II層包埋液加入上 述混合液中，無菌條件下150 250r/min攪拌15 30min至均勻。 其中，用於本發明的II層包埋液為為膠質溶液，包括卡拉膠、黃原膠、瓜爾 膠、果膠、木薯澱粉、瓊脂、海藻酸鈉、刺槐豆膠、魔芋膠等中的一種或幾種。C、冷凍乾燥將經雙層包埋的雙歧桿菌置於_70°C冰箱中預凍2 6h後，在冷阱溫 度-45 -55°C，真空度0.1 10帕下真空冷凍乾燥，即得雙歧桿菌菌粉。與現有技術相比，本發明的有益效果是(1)高密度培養使菌體密度較傳統培養方式有顯著提高，從而達到減少培養體 積，還可以縮短生產周期，最終提高特定產物的比生產速率，減少設備投資從而降低生 產成本，提高在市場上的競爭力。(2)雙層包埋的外層膠體在酸性環境中不溶解，保護菌體安全通過胃部，不受胃 酸及膽鹽的破壞。到達腸道後外層膠體溶解，暴露出內層蛋白質，協助菌體黏附在腸壁 絨毛上而在腸道內定殖，同時提供營養，促進菌體增殖。(3)真空冷凍乾燥技術在低溫、低壓下進行，基本隔絕空氣，有效抑制產品發生 理化性質改變，可以較好地保存活性物質，並賦予產品良好的穩定性，便於長期貯存。
具體實施方案試驗表明，本發明給出的工藝適合任何雙歧桿菌高活性菌粉的製備，以下給出 的實施例僅對本發明的技術方案做進一步說明，而不是限制本發明的保護範圍。實施例1 :嬰兒雙歧桿菌菌粉的製備1、高密度培養(1)菌種活化無菌條件下，挑取安瓿管中菌體接種於液體培養基和瓊脂平板 上，在37°C條件下厭氧培養48小時，連續活化3代，即得活化菌種。其中，用於本發明的雙歧桿菌培養基的配製方法如下胰蛋白腖5.0g、酵母提 取物lO.Og、大豆蛋白腖5.0g、葡萄糖lO.Og、L 半胱氨酸鹽酸鹽0.5g、吐溫801.0mL、 鹽溶液40mL、加水定容至lOOOmL，調節pH6.8 7.0，121°C滅菌20min。其中鹽溶液 的成分為氯化鈣0.2g、磷酸二氫鉀l.Og、硫酸鎂0.48g、碳酸氫鈉lO.Og、磷酸氫二鉀 l.Og、氯化鈉2.0g、加水定容至1000mL。(2)種子培養將活化菌種按5%的接種量接入液體培養基中，在37°C條件下厭 氧培養24小時，作為種子培養物。
(3)發酵培養將種子培養物按5%的接種量接入液體培養基中，在37°C條件下 進行發酵罐高密度培養。發酵過程主要參數控制為pH控制接種後NaOH調節培養基初始pH至7.0，發酵期間流加NaOH維持 pH>5.0 ；葡萄糖控制發酵期間監測培養基中葡萄糖濃度，流加葡萄糖維持葡萄糖含量 >4g/L0(4)發酵終止培養基pH和葡萄糖含量均不再降低時終止發酵，獲得的雙歧杆 菌高密度發酵液的活菌數可達5X IO9CfuAnL以上。2、雙層包埋(1)離心濃縮將雙歧桿菌高密度發酵液在4°C、eOOOr/min的條件下離心 15min,無菌水洗滌2次，取下層沉澱即為活性菌泥。(2)添加保護劑按V保護劑/Vssw= 1 8的比例在活性菌泥中加入菌體冷凍幹 燥保護劑，無菌條件下200r/min攪拌15min至均勻，製備菌懸液。
其中，用於本發明的冷凍乾燥保護劑的配製方法如下脫脂奶粉10g、蔗糖 log、穀氨酸鈉l.Og、山梨醇l.Og，加水定容至lOOmL，加熱攪拌使其溶解，然後115°C 滅菌15min。(3) I層包埋按％層包_/乂保護劑=1 2的比例將I層包埋液加入菌懸液中，無 菌條件下200r/min攪拌15min至均勻。其中，用於本發明的I層包埋液為5%的大豆分離蛋白溶液。(4)11層包埋按V11層包埋液V保護劑=1 2的比例將II層包埋液加入上述混合 液中，無菌條件下200r/min攪拌15min至均勻。其中，用於本發明的II層包埋液為0.04%的κ-卡拉膠和0.06%的魔芋膠的膠體 混合溶液。3、冷凍乾燥將經雙層包埋的雙歧桿菌置於_70°C冰箱中預凍4h後，在冷阱溫度_50°C，真空 度0.1 10帕下真空冷凍乾燥，即得雙歧桿菌菌粉，活菌數可達1.0X lO^cfu/g以上。實施例2 青春雙歧桿菌菌粉的製備1、高密度培養(1)菌種活化無菌條件下，挑取安瓿管中菌體接種於液體培養基和瓊脂平板 上，在37°C條件下厭氧培養48小時，連續活化3代，即得活化菌種。(2)種子培養將活化菌種按5%的接種量接入液體培養基中，在37°C條件下厭 氧培養24小時，作為種子培養物。(3)發酵培養將種子培養物按5%的接種量接入液體培養基中，在37°C條件下 進行發酵罐高密度培養。發酵過程主要參數控制為pH控制接種後NaOH調節培養基初始pH至7.0，發酵期間流加NaOH維持 pH>5.0 ；葡萄糖控制發酵期間監測培養基中葡萄糖濃度，流加葡萄糖維持葡萄糖含量 >4g/L0(4)發酵終止培養基pH和葡萄糖含量均不再降低時終止發酵，獲得的雙歧桿菌高密度發酵液的活菌數可達IXlOuiCfoAnL以上。2、雙層包埋(1)離心濃縮將雙歧桿菌高密度發酵液在4°C、eOOOr/min的條件下離心 15min,無菌水洗滌2次，取下層沉澱即為活性菌泥。(2)添加保護劑按V保護劑/Vssw= 1 8的比例在活性菌泥中加入菌體冷凍幹 燥保護劑，無菌條件下200r/min攪拌15min至均勻，製備菌懸液。(3)1層包埋按％層包_/乂保護劑=1 2的比例將I層包埋液加入菌懸液中，無 菌條件下200r/min攪拌15min至均勻。(4)11層包埋按V11層包埋液V保護劑=1 2的比例將II層包埋液加入上述混合 液中，無菌條件下200r/min攪拌15min至均勻。3、冷凍乾燥
將經雙層包埋的雙歧桿菌置於_70°C冰箱中預凍4h後，在冷阱溫度_50°C，真空 度0.1 10帕下真空冷凍乾燥，即得雙歧桿菌菌粉，活菌數可達2.0X lO^cfu/g以上。實施例3 兩歧雙歧桿菌菌粉的製備1、高密度培養(1)菌種活化無菌條件下，挑取安瓿管中菌體接種於液體培養基和瓊脂平板 上，在37°C條件下厭氧培養48小時，連續活化3代，即得活化菌種。(2)種子培養將活化菌種按5%的接種量接入液體培養基中，在37°C條件下厭 氧培養24小時，作為種子培養物。(3)發酵培養將種子培養物按5%的接種量接入液體培養基中，在37°C條件下 進行發酵罐高密度培養。發酵過程主要參數控制為pH控制接種後NaOH調節培養基初始pH至7.0，發酵期間流加NaOH維持 pH>5.0 ；葡萄糖控制發酵期間監測培養基中葡萄糖濃度，流加葡萄糖維持葡萄糖含量 >4g/L0(4)發酵終止培養基pH和葡萄糖含量均不再降低時終止發酵，獲得的雙歧杆 菌高密度發酵液的活菌數可達5X IO9CfuAnL以上。2、雙層包埋(1)離心濃縮將雙歧桿菌高密度發酵液在4°C、eOOOr/min的條件下離心 15min,無菌水洗滌2次，取下層沉澱即為活性菌泥。(2)添加保護劑按V保護劑/Vssw= 1 8的比例在活性菌泥中加入菌體冷凍幹 燥保護劑，無菌條件下200r/min攪拌15min至均勻，製備菌懸液。(3) I層包埋按％層包_/乂保護劑=1 2的比例將I層包埋液加入菌懸液中，無 菌條件下200r/min攪拌15min至均勻。其中，用於本發明的I層包埋液為5%的大豆分離蛋白溶液。(4)11層包埋按V11層包埋液V保護劑=1 2的比例將II層包埋液加入上述混合 液中，無菌條件下200r/min攪拌15min至均勻。其中，用於本發明的II層包埋液為0.04%的κ-卡拉膠和0.06%的魔芋膠的膠體 混合溶液。
3、冷凍 乾燥將經雙層包埋的雙歧桿菌置於_70°C冰箱中預凍4h後，在冷阱溫度_50°C，真空 度0.1 10帕下真空冷凍乾燥，即得雙歧桿菌菌粉，活菌數可達1.0X lO^cfu/g以上。實施例4 長雙歧桿菌菌粉的製備1、高密度培養(1)菌種活化無菌條件下，挑取安瓿管中菌體接種於液體培養基和瓊脂平板 上，在37°C條件下厭氧培養48小時，連續活化3代，即得活化菌種。(2)種子培養將活化菌種按5%的接種量接入液體培養基中，在37°C條件下厭 氧培養24小時，作為種子培養物。(3)發酵培養將種子培養物按5%的接種量接入液體培養基中，在37°C條件下 進行發酵罐高密度培養。發酵過程主要參數控制為pH控制接種後NaOH調節培養基初始pH至7.0，發酵期間流加NaOH維持 pH>5.0 ；葡萄糖控制發酵期間監測培養基中葡萄糖濃度，流加葡萄糖維持葡萄糖含量 >4g/L0(4)發酵終止培養基pH和葡萄糖含量均不再降低時終止發酵，獲得的雙歧杆 菌高密度發酵液的活菌數可達1.5X KTcfu/mL以上。2、雙層包埋(1)離心濃縮將雙歧桿菌高密度發酵液在4°C、eOOOr/min的條件下離心 15min,無菌水洗滌2次，取下層沉澱即為活性菌泥。(2)添加保護劑按V保護劑/Vssw= 1 8的比例在活性菌泥中加入菌體冷凍幹 燥保護劑，無菌條件下200r/min攪拌15min至均勻，製備菌懸液。(3) I層包埋按％層包_/乂保護劑=1 2的比例將I層包埋液加入菌懸液中，無 菌條件下200r/min攪拌15min至均勻。其中，用於本發明的I層包埋液為5%的大豆分離蛋白溶液。(4)11層包埋按V11層包埋液V保護劑=1 2的比例將II層包埋液加入上述混合 液中，無菌條件下200r/min攪拌15min至均勻。其中，用於本發明的II層包埋液為0.04%的κ-卡拉膠和0.06%的魔芋膠的膠體 混合溶液。3、冷凍乾燥將經雙層包埋的雙歧桿菌置於_70°C冰箱中預凍4h後，在冷阱溫度_50°C，真空 度0.1 10帕下真空冷凍乾燥，即得雙歧桿菌菌粉，活菌數可達3.0X lO^cfu/g以上。實施例5 雙歧桿菌混合菌株發酵製備菌粉(以嬰兒雙歧桿菌和青春雙歧桿菌為 例)1、高密度培養(1)菌種活化無菌條件下，分別挑取安瓿管中嬰兒雙歧桿菌和青春雙歧桿菌 菌體接種於液體培養基和瓊脂平板上，在37°c條件下厭氧培養48小時，連續活化3代， 即得活化菌種。其中，用於本發明的雙歧桿菌培養基的配製方法如下胰蛋白腖5.0g、酵母提取物lO.Og、大豆蛋白腖5.0g、葡萄糖lO.Og、L 半胱氨酸鹽酸鹽0.5g、吐溫801.0mL、 鹽溶液40mL、加水定容至IOOOmL,調節pH6.8 7.0，121°C滅菌20min。其中鹽溶液 的成分為氯化鈣0.2g、磷酸二氫鉀l.Og、硫酸鎂0.48g、碳酸氫鈉lO.Og、磷酸氫二鉀 l.Og、氯化鈉2.0g、加水定容至1000mL。(2)種子培養分別將活化的嬰兒雙歧桿菌和青春雙歧桿菌菌種按5%的接種量 接入液體培養基中，在37°C條件下厭氧培養24小時，作為種子培養物。 (3)發酵培養同時將嬰兒雙歧桿菌和青春雙歧桿菌種子培養物按5%的接種量 接入液體培養基中，在37°C條件下進行發酵罐高密度培養。發酵過程主要參數控制為pH控制接種後NaOH調節培養基初始pH至7.0，發酵期間流加NaOH維持 pH>5.0 ；葡萄糖控制發酵期間監測培養基中葡萄糖濃度，流加葡萄糖維持葡萄糖含量 >4g/L0(4)發酵終止培養基pH和葡萄糖含量均不再降低時終止發酵，獲得的雙歧杆 菌高密度發酵液中嬰兒雙歧桿菌和青春雙歧桿菌的活菌數均可達2.5X IO9CfuAnL以上。2、雙層包埋(1)離心濃縮將嬰兒雙歧桿菌和青春雙歧桿菌高密度發酵液在4°C、6000r/ min的條件下離心15min，無菌水洗滌2次，取下層沉澱即為活性菌泥。(2)添加保護劑按Vfti^zVssw= 1 8的比例在活性菌泥中加入菌體冷凍幹 燥保護劑，無菌條件下200r/min攪拌15min至均勻，製備菌懸液。其中，用於本發明的冷凍乾燥保護劑的配製方法如下脫脂奶粉10g、蔗糖 log、穀氨酸鈉l.Og、山梨醇l.Og，加水定容至lOOmL，加熱攪拌使其溶解，然後115°C 滅菌15min。(3)1層包埋按保護劑=1 2的比例將I層包埋液加入菌懸液中，無 菌條件下200r/min攪拌15min至均勻。其中，用於本發明的I層包埋液為5%的大豆分離蛋白溶液。(4)11層包埋按V11層包埋液V保護劑=1 2的比例將II層包埋液加入上述混合 液中，無菌條件下200r/min攪拌15min至均勻。其中，用於本發明的II層包埋液為0.04%的κ-卡拉膠和0.06%的魔芋膠的膠體 混合溶液。3、冷凍乾燥將經雙層包埋的嬰兒雙歧桿菌和青春雙歧桿菌置於-70°C冰箱中預凍4h後，在 冷阱溫度_50°C，真空度0.1 10帕下真空冷凍乾燥，即得混合雙歧桿菌菌粉，活菌數可 達 LOxiO11CiVg 以上。實施例6:配方組成
權利要求
1.一種高活性雙歧桿菌菌粉，其特徵在於所述菌粉由雙歧桿菌採用高密度培養和雙 層包埋技術製得。
2.根據權利要求1所述的高活性雙歧桿菌菌粉，其特徵在於所述雙歧桿菌至少為嬰 兒雙岐桿菌AS 1.2202、短雙歧桿菌AS 1.2213、長雙歧桿菌CICC 6186、兩歧雙歧桿菌 CICC 6071、青春雙歧桿菌CICC 6070中的一種。
3.權利要求1所述高活性雙歧桿菌菌粉的製備方法，其特徵在於包括有下列步驟A、高密度培養(1)菌種活化無菌條件下，挑取安瓿管中菌體接種於液體培養基和瓊脂平板上， 在36 38°C條件下厭氧培養24 48小時，連續活化2 3代，即得活化菌種；(2)種子培養將活化菌種按5% 10%的接種量接入液體培養基中，在36 38°C 條件下厭氧培養20 28小時，作為種子培養物。(3)發酵培養將種子培養物按5% 10%的接種量接入液體培養基中，在36 38 V條件下進行發酵罐高密度培養。(4)發酵終止培養基pH和葡萄糖含量均不再降低時終止發酵，獲得雙歧桿菌高密 度發酵液。B、雙層包埋(1)離心濃縮將雙歧桿菌高密度發酵液在4°C、6000 8000r/min的條件下離心 10 20min，無菌水洗滌2 3次，取下層沉澱即為活性菌泥。(2)添加保護劑按1 4 1 IO(Vfti^zVssw)的比例在活性菌泥中加入菌體 冷凍乾燥保護劑，無菌條件下150 250r/min攪拌15 30min至均勻，製備菌懸液。(3)1層包埋按1 1 1 5 (Vljg包埋液/V保護劑)的比例將I層包埋液加入菌懸液 中，無菌條件下150 250r/min攪拌15 30min至均勻。⑷II層包埋按1 1 1 5 (V11層包埋液/V保護劑)的比例將II層包埋液加入上述混 合液中，無菌條件下150 250r/min攪拌15 30min至均勻；C、冷凍乾燥將經雙層包埋的雙歧桿菌置於-70 0C冰箱中預凍2 6h後，在冷阱溫 度-45 -55°C，真空度0.1 10帕下真空冷凍乾燥，即得雙歧桿菌菌粉。
4.根據權利要求3所述高活性雙歧桿菌菌粉的製備方法，其特徵在於雙歧桿菌液體培 養基的配製方法如下胰蛋白腖5.0g、酵母提取物lO.Og、大豆蛋白腖5.0g、葡萄糖lO.Og、L 半胱氨酸鹽 酸鹽0.5g、吐溫801.0mL、鹽溶液40mL、加水定容至lOOOmL，調節pH6.8 7.0，121°C 滅菌20min，其中鹽溶液的成分為氯化鈣0.2g、磷酸二氫鉀l.Og、硫酸鎂0.48g、碳酸 氫鈉lO.Og、磷酸氫二鉀l.Og、氯化鈉2.0g、加水定容至IOOOmL0
5.根據權利要求3所述高活性雙歧桿菌菌粉的製備方法，其特徵在於冷凍乾燥保護劑 的配製方法如下脫脂奶粉8 12g、蔗糖8 12g、穀氨酸鈉0.5 1.5g、山梨醇0.5 1.5g，加水定 容至IOOmL,加熱攪拌使其溶解，然後115°C滅菌15min。
6.根據權利要求3所述高活性雙歧桿菌菌粉的製備方法，其特徵在於I層包埋液為蛋 白質溶液，包括酪蛋白、乳白蛋白、卵白蛋白、卵黃磷蛋白、肌蛋白、大豆分離蛋白、中草藥白蛋白中的一種或幾種。
7.根據權利要求3所述高活性雙歧桿菌菌粉的製備方法，其特徵在於II層包埋液為 膠質溶液，包括卡拉膠、黃原膠、瓜爾膠、果膠、木薯澱粉、瓊脂、海藻酸鈉、刺槐豆 膠、魔芋膠等中的一種或幾種。
8.根據權利要求1所述的一種高活性雙歧桿菌菌粉，其特徵在於所述菌粉可製成 用於作為食品、保健品、藥品或食品添加劑的膠囊劑、衝劑、顆粒劑、片劑等。
全文摘要
本發明提供一種高活性雙歧桿菌菌粉及其製備方法，屬於雙歧桿菌製品製備技術領域，其特點是該菌粉是雙歧桿菌採用高密度培養和雙層包埋技術製得。本發明製成的雙歧桿菌菌粉活菌含量高，可達1011cfu/g以上，耐胃酸和膽鹽能力強，有效定殖腸道發揮療效，解決了目前雙歧桿菌製品中存在的產品在貯藏和消費過程中活菌含量下降的問題。本發明具有操作簡便、成本低、適合工業化生產的特點，可以根據需要製成各類劑型，既可直接服用，又可作為添加劑用於研製功能性食品和醫藥製劑。
文檔編號C12N11/04GK102021162SQ20091017565
公開日2011年4月20日 申請日期2009年9月19日 優先權日2009年9月19日
發明者曾星 申請人:菲伯納生物醫藥有限責任公司