七葉一枝花的快速繁殖方法

2023-05-30 06:41:46 2

專利名稱：七葉一枝花的快速繁殖方法
技術領域：
本發明涉及生物工程領域，涉及植物組織培養技術，具體地說是一種七葉一枝花 的組織培養方法。
背景技術：
植物是藥物的天然寶庫，人們利用藥用植物的歷史源遠流長，全世界約有75%的 人口以植物作為治療預防疾病的藥物來源(邢建民，2001)。人類已經從植物中發現了許 多具有高度生理活性的藥物，目前從植物來源的藥物佔藥物總量的25%以上(鄭光植， 1987)。我國的傳統中草藥已有數千年的歷史，至今仍在我國和許多國家和地區廣為使用。 但由於傳統的中草藥獲取方法是以採集和消耗大量的野生植物資源為代價的，當採集和消 耗量超過自然資源的再生能力時，必然會導致物種的瀕危甚至滅絕。同時隨著自然生態環 境的日益破壞，也進一步導致藥用植物資源的匱乏。生物技術的蓬勃發展為從根本上改變 傳統藥材的生產提供了一個嶄新的方法，植物組織和細胞培養技術則是其中一個重要的手 段。我國自1964年羅士韋教授首先報導了人參組織培養獲得成功的研究成果以來，許多 科學家先後從事了多種藥用植物的組織培養研究。至今，我國藥用植物的組織培養研究迅 速發展。目前，世界各國對植物的藥用開發和研究都十分重視，就以美國來說，其成藥中有 47%是以植物為原料製成的(謝啟昆，1986)。為了解決藥用植物的供需矛盾，人們採用人 工栽培的方法擴大藥源。但在人工栽培的藥用植物中，有不少名貴藥材等生產周期較長，如 人參、黃連，如果以常規方法育種或育苗，需要花費很長的時間；另有一些藥用植物如貝母、 番紅花等，因繁殖係數小、耗種量大，導致育種速度很慢，生產成本增加。利用植物的有性 繁殖方式對其有效成分含量波動比較大，所以利用植物組織培養技術解決藥用植物的植株 再生與繁殖問題迫在眉睫。近年來，國內外在這方面已做了大量工作，已成功離體培養獲得 試管植株的藥用植物至少有200種，如雲南黑節草、延齡草、高山紅景天、莪朮、水母雪蓮、 星花繡線菊、溪黃草、玉葉金花、遼東榴木等；其中包括一些具有抗癌有效成分的珍稀植物， 如紅豆杉、艾、黃楊、大戟屬植物、長春花、米仔蘭、狗牙花和香榧等。七葉一枝花，又名七葉 蓮，屬於百合科。多年生草本，高30 100cm。莖直立。葉5 8片輪生於莖頂，葉片長圓 狀披針形、倒卵狀披針形或倒披針形，長7 17cm，寬2. 5 5cm。花梗從莖頂抽出，通常比 葉長，頂生一花，寬1 1. 5mm,長為萼片的1/3至近等長；雄蕊8 10，花葯長1. 2 2cm。 蒴果球形。花期5 7月，果期8 10月。果實為蒴果。生於海拔1800-3200米的林下或 山坡林下蔭處或溝邊的草叢陰溼處。我國主要分布在西藏東南部、雲南、湖南、四川和貴州。 研究表明，七葉一枝花的乾燥根莖具有很高的藥用成分，主要含有含薯蕷皂苷元、蚤休皂苷 A、B，薯蕷皂苷等活性成分。具有一定的抗菌作用體外對傷寒桿菌、甲型副傷寒桿菌、志賀 和福氏痢疾桿菌均有抑制作用。殺精子作用、平喘、止咳作用和鎮靜、鎮痛作用等藥理作用。 其乾燥根莖目前主要在雲南白藥中大量應用。因此，為了滿足日益增大的藥用需求，種子收 獲量小，種子繁殖出苗率極低，種子培育過程煩瑣，生長速度慢，同時保護七葉一枝花的野 生資源，利用組培快繁技術，實現人工栽培是最好的解決方法。
迄今為止，在國內外尚未見關於七葉一枝花組織培養快繁成功的報導。我們通過 大量試驗，終於摸索出一套成熟的方法，成功實現了七葉一枝花的組培快繁，可以快速培育 出大量幼苗，為實現工業化人工栽培七葉一枝花提供可能。七葉一枝花的組培快繁技術方 法的成功建立，可以為大規模人工栽培藥用植物七葉一枝花提供種苗，為現代科技農業提 供了一種切實可行的開發項目。

發明內容
本發明的目的是提供七葉一枝花的快速繁殖方法，該方法非常適合工業化生產， 配方效果佳，出芽率高，培養時間短，植株生長旺盛，可操作性強，應用價值高等優點。具有 投入少，產出高的特點。本發明所述七葉一枝花的快速繁殖方法，其具體操作步驟如下1)外植體的選取與滅菌選用七葉一枝花的根莖上芽體作為培養材料，經洗潔 精和自來水洗淨，置流水下衝洗10-30分鐘後，置於75%酒精中處理10-30秒，然後再經 0. 的升汞消毒10分鐘後用無菌水衝洗，切去外植體變色的部分後備用。2)芽體的萌發將滅菌處理後的芽體接種在MS+6-BA0. 5mg/L+NAA0. 4mg/L培養基 上，PH值為5. 8，培養溫度23-27°C，每天光照16小時，光照強度1000LX，接種後6_8天左右 芽體的萌發，10天左右形成帶葉的小苗。3)叢生芽誘導和增殖培養將小苗切下轉接於MS+6-BA1. 5mg/L+IAA0. 4mg/L培 養基上，直至形成叢生芽，PH值為5. 8，培養溫度23-27 °C，每天光照16小時，光照強度 1000LX。30天左右為一個生長周期，以保持高速度遞增，增殖係數為5以上。4)生根培養選擇 MS+6-BA1. 5mg/L+IAA0. 4mg/L+NAA 0. 5mg/L 作為生根培養基， PH值為5. 8，培養溫度23-27°C，每天光照16小時，光照強度1000LX，生根率達到90%以上， 只需要25天左右形成完整植株。5)試管苗的移栽選取根系生長良好的試管苗，放入清水中把根部的瓊脂清洗幹 淨，移載到沙土中，注意保水保溼，移載1個月後，移載成活率達到90 %以上。技術效果(1)利用七葉一枝花帶芽根莖段為外植體，使得外植體取材較容易，一年四季均可 取材，而且數量多，採用根莖芽體做外植體，保證了遺傳穩定性，同時克服了組織培養中，愈 傷組織在分化培養基上隨著芽的分化而逐漸停止生長，失去增殖能力的弱點，可防止傷組 織繼代培養過程中，隨著培養代數的增加，分化出來的苗出現變異的現象。(2)本發膽方法利用外植體建立，增殖生根同步化這一技術路線，僅需30天左右 形成完整植株，4-6個月內事獲得大量完整植株，實現七葉一枝花的大規模工廠化育苗。(3)本發明方法獲得的試管苗在移載時所採用的基質利用沙土，方法簡單，而且大 大降低了移載成本。本培養方法出芽快，增殖率高，方法簡單，生產成本低，可批量生產，應 用價值高。(4)七葉一枝花的生產可以在人為控制條件下進行，不受季節、氣候條件與土壤等 因素的制約，可排除病蟲害的侵襲和農藥殘留的影響，嚴格控制七葉一枝花的質量。增殖速度快，生產周期短，設備簡單，佔地面積少，能節省人力、物力等，便於工廠
化生產。
(5)使用本發明提供的組培快繁技術得到的七葉一枝花幼苗進行人工栽培，可以 得到個體差異小，品質均一的七葉一枝花成品。(6)可以保存七葉一枝花的種質資源，同時有利於保護七葉一枝花野生資源，減少 對自然資源的破壞。
具體實施例方式下面，本發明將用實施例進行進一步的說明，但是它並不限於這些實施例的任一 個或類似實例。實施例1 取材七葉一枝花帶芽根莖段為外植體1、外植體的選取與滅菌採自湖南慈利的七葉一枝花鮮嫩芽根莖段等幼嫩組織， 作為培養材料，經洗潔精和自來水洗淨，置流水下衝洗10-30分鐘後，置於75%酒精中處理 10-30秒，然後再經0. 1 %的升汞消毒10分鐘後用無菌水衝洗，切去外植體變色的部分後備用。2、芽體的萌發將滅菌處理後的芽體接種在MS+6-BA0. 5mg/L+NAA0. 4mg/L培養基 上，PH值為5. 8，培養溫度23-27°C，每天光照16小時，光照強度1000LX ；接種後6_8天左右 芽體的萌發，10天左右形成帶葉的小苗。3、叢生芽誘導和增殖培養將小苗切下轉接於MS+6-BA1. 5mg/L+IAA0. 4mg/L培 養基上，直至形成叢生芽，PH值為5. 8，培養溫度23-27°C，每天光照16小時，光照強度 1000LX。30天左右為一個生長周期，以保持高速度遞增，增殖係數為5以上。4、生根培養選擇 MS+6-BA1. 5mg/L+IAA0. 4mg/L+NAA 0. 5mg/L 作為生根培養基， PH值為5. 8，培養溫度23-27°C，每天光照16小時，光照強度1000LX，生根率達到90%以上， 只需要25天左右形成完整植株。5、試管苗的移栽選取根系生長良好的試管苗，放入清水中把根部的瓊脂清洗幹 淨，移載到沙土中，注意保水保溼，移載1個月後，移載成活率達到90%以上。實施例2 取材七葉一枝花帶芽根莖段為外植體1、外植體的選取與滅菌採自湖南慈利的七葉一枝花鮮嫩芽根莖段等幼嫩組織， 作為培養材料，經洗潔精和自來水洗淨，置流水下衝洗10-30分鐘後，置於75%酒精中處理 10-30秒，然後再經0. 1 %的升汞消毒10分鐘後用無菌水衝洗，切去外植體變色的部分後備用。2、芽體的萌發將滅菌處理後的芽體接種在MS+6-BA0. 5mg/L+NAA0. 3mg/L培養基 上，PH值為5. 8，培養溫度23-27°C，每天光照16小時，光照強度1000LX ；接種後7_8天左右 芽體的萌發，12天左右形成帶葉的小苗。3、叢生芽誘導和增殖培養將小苗切下轉接於MS+6-BA1. 5mg/L+IAA0. 4mg/L培 養基上，直至形成叢生芽，PH值為5. 8，培養溫度23-27°C，每天光照16小時，光照強度 1000LX。30天左右為一個生長周期，以保持高速度遞增，增殖係數為5以上。4、生根培養選擇 MS+6-BA1. 5mg/L+IAA0. 4mg/L+NAA 0. 5mg/L 作為生根培養基， PH值為5. 8，培養溫度23-27°C，每天光照16小時，光照強度1000LX，生根率達到90%以上，只需要25天左右形成完整植株。5、試管苗的移栽選取根系生長良好的試管苗，放入清水中把根部的瓊脂清洗幹 淨，移載到沙土中，注意保水保溼，移載1個月後，移載成活率達到90%以上。實施例1 取材七葉一枝花帶芽根莖段為外植體1、外植體的選取與滅菌採自湖南慈利的七葉一枝花鮮嫩芽根莖段等幼嫩組織， 作為培養材料，經洗潔精和自來水洗淨，置流水下衝洗10-30分鐘後，置於75%酒精中處理 10-30秒，然後再經0. 1 %的升汞消毒10分鐘後用無菌水衝洗，切去外植體變色的部分後備用。2、芽體的萌發將滅菌處理後的芽體接種在MS+6-BA0. 5mg/L+NAA0. 4mg/L培養基 上，PH值為5. 8，培養溫度23-27°C，每天光照16小時，光照強度1000LX ；接種後6_8天左右 芽體的萌發，10天左右形成帶葉的小苗。3、叢生芽誘導和增殖培養將小苗切下轉接於MS+6-BA1. 5mg/L+IAA0. 4mg/L培 養基上，直至形成叢生芽，PH值為5. 8，培養溫度23-27°C，每天光照16小時，光照強度 1000LX。30天左右為一個生長周期，以保持高速度遞增，增殖係數為5以上。4、生根培養選擇MS+6-BA1. 5mg/L+NAA 0. 5mg/L作為生根培養基，pH值為5. 8，培 養溫度23-27°C，每天光照16小時，光照強度1000LX，生根率達到95%以上，只需要20天左 右形成完整植株。5、試管苗的移栽選取根系生長良好的試管苗，放入清水中把根部的瓊脂清洗幹 淨，移載到沙土中，注意保水保溼，移載1個月後，移載成活率達到85%以上。
權利要求
1.本發明所述七葉一枝花的快速繁殖方法，其具體操作步驟如下1)外植體的選取與滅菌選用七葉一枝花的根莖上芽體作為培養材料，經洗潔精和自 來水洗淨，置流水下衝洗10-30分鐘後，置於75%酒精中處理10-30秒，然後再經0. 的 升汞消毒10分鐘後用無菌水衝洗，切去外植體變色的部分後備用。2)芽體的萌發將滅菌處理後的芽體接種在MS+6-BA0.5mg/L+NAA0. 4mg/L培養基上， PH值為5. 8，培養溫度23-27°C，每天光照16小時，光照強度1000LX，接種後6_8天左右芽 體的萌發，10天左右形成帶葉的小苗。3)叢生芽誘導和增殖培養將小苗切下轉接於MS+6-BA1.5mg/L+IAA0. 4mg/L培養基 上，直至形成叢生芽，PH值為5. 8，培養溫度23-27°C，每天光照16小時，光照強度1000LX。 30天左右為一個生長周期，以保持高速度遞增，增殖係數為5以上。4)生根培養選擇MS+6-BA1.5mg/L+IAA0. 4mg/L+NAA 0. 5mg/L作為生根培養基，pH值 為5. 8，培養溫度23-27°C，每天光照16小時，光照強度1000LX，生根率達到90%以上，只需 要25天左右形成完整植株。5)試管苗的移栽選取根系生長良好的試管苗，放入清水中把根部的瓊脂清洗乾淨， 移載到沙土中，注意保水保溼，移載1個月後，移載成活率達到90%以上。
2.根據權利要求1所說的七葉一枝花的快速繁殖方法，其特徵在於，所述的外植體的 選取與滅菌具體過程如下選用七葉一枝花的根莖段作為培養材料，經洗潔精和自來水洗 淨，置流水下衝洗10-30分鐘後，置於75%酒精中處理10-30秒，然後再經0. 的升汞消 毒10分鐘後用無菌水衝洗。
3.根據權利要求1所說的七葉一枝花的快速繁殖方法，其特徵在於，所述的芽體的萌 發具體如下培養溫度23-27°C，每天光照16小時，光照強度1000LX，接種後6_8天左右芽 體的萌發，10天左右形成帶葉的小苗。
全文摘要
本發明提供了一種七葉一枝花的快速繁殖技術。該方法是在MS培養基上培養七葉一枝花的根莖段等組織，確切取帶1-2個芽的根莖段為外植體，消毒後，接種在MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.4mg/L培養基中培養，接種後6-8天左右芽體的萌發，10天左右形成帶葉的小苗，將小苗切下轉接於MS+6-BA1.5mg/L+IAA0.4mg/L培養基上，以保持高速度遞增，增殖係數為5以上。選擇MS+6-BA1.5mg/L+IAA0.4mg/L+NAA 0.5mg/L作為生根培養基，生根率達到90％以上，只需要25天左右形成完整植株。試管苗移載到沙土中，注意保水保溼，移載1個月後，移載成活率達到90％以上，建立了一套高頻穩定再生體系。本發明方法具有穩定好，操作簡便，繁殖速度快，生產成本低，達到產業化水平等優點。
文檔編號A01H4/00GK102144553SQ20111002644
公開日2011年8月10日 申請日期2011年1月25日 優先權日2011年1月25日
發明者唐忠海 申請人:唐忠海