一種迷迭香懸浮細胞培養的快速繁殖方法

2023-06-24 02:31:11 2

一種迷迭香懸浮細胞培養的快速繁殖方法
【專利摘要】本發明研究了一種迷迭香懸浮細胞培養的快速繁殖方法，包括無菌苗的獲得、愈傷組織的誘導、懸浮細胞的培養和優化、植株再生等步驟，本發明方法所製備的迷迭香懸浮細胞增殖率高，生長周期短，次生代謝物含量高，有利於迷迭香藥用成分的開發和利用。
【專利說明】 一種迷迭香懸浮細胞培養的快速繁殖方法

【技術領域】
[0001]本發明涉及迷迭香組織培養的快繁方法，屬於植物【技術領域】。

【背景技術】
[0002]迷迭香,唇形科,TPo1Smarizw1S別稱:海洋之露,灌木,分布區域:中國、地中海、歐洲、美國，原產歐洲及北非地中海沿岸，曹魏時即曾引入中國，中國園圃中偶有引種栽培。葉帶有茶香，味辛辣、微苦，常被使用在烹飪上，也可用來泡花草茶喝。常綠灌木，古代認為迷迭香能增強記憶，目前公認的最具備有抗氧化作用的植物。迷迭香中的抗氧化成分主要為鼠尾草酸、鼠尾草酚、迷迭香酚、熊果酸、迷迭香酸等成分，消除胃氣脹、增強記憶力、提神醒腦、減輕頭痛症狀、對傷風、腹脹、肥胖等亦很有功效。迷迭香性喜溫暖氣候，但臺灣平地高溫期生長緩慢，冬季沒有寒流的氣溫較適合它的生長，水分供應方面由於迷迭香葉片本身就屬於革質，較能耐旱，因此栽種的土壤以富含砂質使能排水良好較有利於生長發育，值得注意的是迷迭香生長緩慢，這也意味著它的再生能力不強。目前主要的繁殖方法為種子繁殖和扦插繁殖，組培技術操作簡單，再生能力強，目前還尚待研究。


【發明內容】

[0003]本發明所要解決的技術問題是提供一種迷迭香的快速繁殖方法，由該方法所製備得到的迷迭香成活率高，生長周期短，操作簡單，可以在短期內獲得大量的迷迭香幼苗。
[0004]本發明所要解決的技術問題是通過以下方案來實現的:
取迷迭香種子，在漂白粉中浸泡3min，毛刷去除表面被毛，流水衝洗2h，超淨工作檯上次氯酸鈉消毒17min，無菌水衝洗5遍，吸水紙吸去表面水分，接入1/2MS培養基中，獲得無菌苗，獲得的無菌苗植株中上部0.2-0.5cm長嫩莖段作外植體，接種入MS+2，4-D0.5mg/L+KT0.3mg/L培養基中進行愈傷組織誘導，附加7g/L瓊脂，30g/L蔗糖，弱光1000_15001χ，暗室誘導，誘導出來的迷迭香愈傷組織接入不加瓊脂的液體培養基中，附加1.0-5.0 mg/L2，4- 二氯苯氧乙酸進行懸浮細胞培養，附加半乳糖50g/L，瓊脂7g/L，pH6.0，光照30001x，溫度24°C，培養出來的懸浮細胞轉移到固體培養基增殖後的愈傷組織篩選嫩綠鬆散的愈傷組織接入液體培養基 MS+NAA0.5-lmg/L+0.01-0.lmg/L6-BA+0.05-0.5 mg/LKT+0.5mg/LGA3，，分化培養I個月獲得Icm左右的再生次生代謝物高產植株。
[0005]採用本發明製備的迷迭香操作工藝簡單可控，生長周期短，遺傳穩定性好，能耗少，利於大規模生產。
[0006]下面將結合【具體實施方式】對本發明作進一步闡述，但本發明要求保護的範圍並不局限於下列實施方式。

【具體實施方式】
[0007]實施例1
取迷迭香種子，在漂白粉中浸泡3min，毛刷去除表面被毛，流水衝洗2h，超淨工作檯上次氯酸鈉消毒17min，無菌水衝洗5遍，吸水紙吸去表面水分，接入1/2MS培養基中，獲得無菌苗，獲得的無菌苗植株中上部0.2-0.5cm長嫩莖段作外植體，接種入MS+2，4-D0.5mg/L+KT0.3mg/L培養基中進行愈傷組織誘導，附加7g/L瓊脂，30g/L蔗糖，弱光1000_15001χ，暗室誘導，誘導出來的迷迭香愈傷組織接入不加瓊脂的液體培養基中，附加1.0mg/L2，4- 二氯苯氧乙酸進行懸浮細胞培養，附加半乳糖50g/L，瓊脂7g/L，pH6.0，光照30001x，溫度24°C，培養出來的懸浮細胞轉移到固體培養基增殖後的愈傷組織篩選嫩綠鬆散的愈傷組織接入液體培養基 MS+NAAlmg/L+0.5mg/L6-BA+0.01mg/LKT+0.5mg/LGA3,分化培養 I 個月獲得Icm左右的再生次生代謝物高產植株，成活率85%。
[0008]實施例2
取迷迭香種子，在漂白粉中浸泡3min，毛刷去除表面被毛，流水衝洗2h，超淨工作檯上次氯酸鈉消毒17min，無菌水衝洗5遍，吸水紙吸去表面水分，接入1/2MS培養基中，獲得無菌苗，獲得的無菌苗植株中上部0.2-0.5cm長嫩莖段作外植體，接種入MS+2，4-D0.5mg/L+KT0.3mg/L培養基中進行愈傷組織誘導，附加7g/L瓊脂，30g/L蔗糖，弱光1000_15001χ，暗室誘導，誘導出來的迷迭香愈傷組織接入不加瓊脂的液體培養基中，附加5.0mg/L2，4- 二氯苯氧乙酸進行懸浮細胞培養，附加半乳糖50g/L，瓊脂7g/L，pH6.0，光照30001x，溫度24°C，培養出來的懸浮細胞轉移到固體培養基增殖後的愈傷組織篩選嫩綠鬆散的愈傷組織接入液體培養基MS+NAAlmg/L+0.lmg/L6-BA+0.5 mg/LKT+0.5mg/LGA3，分化培養 I 個月獲得Icm左右的再生次生代謝物高產植株，成活率86%。
[0009]實施例3
取迷迭香種子，在漂白粉中浸泡3min，毛刷去除表面被毛，流水衝洗2h，超淨工作檯上次氯酸鈉消毒17min，無菌水衝洗5遍，吸水紙吸去表面水分，接入1/2MS培養基中，獲得無菌苗，獲得的無菌苗植株中上部0.2-0.5cm長嫩莖段作外植體，接種入MS+2，4-D0.5mg/L+KT0.3mg/L培養基中進行愈傷組織誘導，附加7g/L瓊脂，30g/L蔗糖，弱光1000_15001χ，暗室誘導，誘導出來的迷迭香愈傷組織接入不加瓊脂的液體培養基中，附加3.0 mg/L2，4- 二氯苯氧乙酸進行懸浮細胞培養，附加半乳糖50g/L，瓊脂7g/L，pH6.0，光照30001x，溫度24°C，培養出來的懸浮細胞轉移到固體培養基增殖後的愈傷組織篩選嫩綠鬆散的愈傷組織接入液體培養基MS+NAAlmg/L+0.01mg/L6-BA+0.5mg/LKT+0.5mg/LGA3,分化培養 I 個月獲得Icm左右的再生次生代謝物高產植株，成活率84%。
【權利要求】
1.一種迷迭香懸浮細胞培養的快速繁殖方法，包括無菌苗的獲得、愈傷組織的誘導、懸浮細胞的培養和優化、植株再生，其主要步驟如下: (1)採取迷迭香的種子，在超淨工作檯上對其進行消毒處理，接入1/2MS培養基中，獲得無菌苗； (2)取步驟(I)獲得的無菌苗植株中上部0.2-0.5cm長嫩莖段作外植體，接種入MS+2, 4-D0.5mg/L+KT0.3mg/L培養基中進行愈傷組織誘導，附加7g/L瓊脂，30g/L蔗糖，弱光1000-15001x，暗室誘導； (3)取步驟(2)中誘導出來的迷迭香愈傷組織接入步驟(2)不加瓊脂的液體培養基中，附加1.0-5.0 mg/L 2，4- 二氯苯氧乙酸進行懸浮細胞培養,附加半乳糖50g/L,瓊脂7g/L,ρΗ6.0，光照 30001χ，溫度 240C ； (4)取步驟(3)培養出來的懸浮細胞轉移到固體培養基增殖後的愈傷組織篩選嫩綠鬆散的愈傷組織接入液體培養基 MS+NAA0.5-lmg/L+0.01-0.lmg/L6-BA+0.05-0.5 mg/LKT+0.5mg/LGA3，分化培養I個月獲得Icm左右的再生次生代謝物高產植株。
2.按照權利要求1所述的一種迷迭香懸浮細胞培養的快速繁殖方法，其特徵在於:步驟(I)中所述迷迭香種子的消毒處理為，取迷迭香種子，在漂白粉中浸泡3min，毛刷去除表面被毛，流水衝洗2h，超淨工作檯上次氯酸鈉消毒17min，無菌水衝洗5遍，吸水紙吸去表面水分。
3.按照權利要求1所述的一種迷迭香懸浮細胞培養的快速繁殖方法，其特徵在於:步驟(3)懸浮細胞培養中附加了 2，4-二氯苯氧乙酸，可促進次生代謝物質的合成。
4.按照權利要求1所述的一種迷迭香懸浮細胞培養的快速繁殖方法，其特徵在於:步驟(4)分化培養之前的懸浮細胞用高壓滅菌過的300目的濾網過濾。
【文檔編號】A01H4/00GK104160969SQ201410463170
【公開日】2014年11月26日 申請日期:2014年9月12日 優先權日:2014年9月12日
【發明者】楊存 申請人:南京通澤農業科技有限公司