溫鬱金提取物脂肪乳注射劑及其製備方法和用途的製作方法

2023-06-24 02:31:41

專利名稱：：溫鬱金提取物脂肪乳注射劑及其製備方法和用途的製作方法
技術領域：
：本發明涉及溫鬱金提取物的新注射劑型，更具體地說涉及脂肪乳劑型。本發明還涉及該劑型的製備方法和用途。現有技術近年來，在抗癌天然藥物研究領域中的許多研究人員都致力於研究紫杉醇、欖香烯各種異構體、薑黃提取物、溫鬱金提取物等的抗癌活性和這些藥物的各種製劑形式。欖香烯是存在於某些植物中的一種倍半闢類化合物，拉丁名為Elemenum,英文名為Elemene,化學名是1-曱基-1-乙烯基-2，4-二異丙烯基環己烷，分子式(:151。欖香烯有多種異構體，這些異構體中卩-欖香烯，S-欖香烯，Y-欖香烯已被證實有抗癌活性。欖香烯是可以從植物溫鬱金(CurcumaWenyujinY.H.ChenetC.1ing)的才艮莖(俗稱溫莪朮)的揮髮油中提取的化合物，或是從植物香茅(Cymbopoqoncitratus(DC)Stapt)的油中提取的化合物，例如從香茅油中除掉檸檬醛、香茅醇之後餘下的混合油狀物，提取的化合物實際上是包含卩-欖香烯的欖香烯異構體混合物。上述植物溫鬱金與另外兩種可作為天然藥物使用的植物莪朮和薑黃同屬於姜科植物類群，產於中國的廣東、四川、福建、廣西、浙江等省。包含欖香烯的植物有溫鬱金、香茅、水菖蒲、土木香、人參等50多種，其中香茅是在中國分布廣、資源充足的植物。目前，欖香烯類化合物主要從溫鬱金油和香茅油中提取。有許多文獻涉及直接採用天然藥物製備防治癌症的草藥製劑，例如中國專利公開CN1216256A公開了治療肝癌的草藥製劑，它包括含有白花蛇舌草、薑黃，虎杖和山豆根的提取物作為主要天然藥物的可注射組合物(A)和含有白花蛇舌草、重樓、虎杖、山豆根、龍膽草、大黃、連翹、赤芍、薑黃和石菖蒲的提取物作為主要天然藥物的口服組合物(B)。在中國專利公開CN1302559中公開了薑黃素製劑，它是通過製備在水可混合的有機溶劑中或水和水可混合的有機溶劑的混合物中的薑黃素分子分散體，然後向該溶液添加保護膠體水溶液，薑黃素的疏水相形成毫微分散相。最終的製劑形式主要是水性分散體或乾粉，在優選的情況下粒徑小於1Qym。在CN1200266A中公開了通過二次分餾從香茅油中^是取p-欖香烯的方法。在中國專利公開CN1247756A中公開了用於治療惡性胂瘤的姜鬱注射液，其中薑黃與鬱金的重量比為50-60:50-40，該注射液是一種簡單的混合物。中國專利公開CN1076613A涉及攬香烯乳注射液及其製備方法，該注射液是一種乳狀液，平均粒徑一般不超過15微米，特別不超過2微米。中國專利公開CN1244389A涉及欖香烯注射液及其製備方法，該注射液是一種簡單混合物，不是脂質體。中國專利公開CN1110134A涉及脂質體製備工藝及製劑，其中特別描述了欖香烯脂質體注射液製備方法和由該方法獲得的欖香烯脂質體注射液，欖香烯的包封率達85%以上，但沒有給出有關脂質體的平均粒徑的數據。從製備方法可以判斷該脂質體具有較大的平均粒徑。中國專利公開CN1221607A涉及利用C02的臨界或超臨界方法來製備脂溶性藥物脂質體的工藝和所製備的欖香烯脂質體注射液，雖然欖香烯的脂質體的包封率很高，但脂質體的平均粒徑同樣太大。以上這些文獻所公開的製劑在貯存穩定性和抗癌活性上都存在著不足。另外，在一些專利文獻中還公開了欖香烯的各種衍生物和欖香烯金屬絡合物。例如，在CN11531158A中公開了一種欖香烯金屬絡合物和它作為抗癌藥物的使用。CN1153167A涉及欖香烯含氮衍生物及其作為抗癌藥物的用途。CN1153168A涉及欖香烯羥基類衍生物及其作為抗癌藥物的用途。
發明內容本發明的目的是提供溫鬱金提取物脂肪乳注射劑。本發明的另一個目的是提供該注射劑型的製備方法。本發明的再一個目的是提供溫鬱金提取物脂肪乳注射劑用於製備治療癌症或缺血性中風的藥物注射劑的用途，這些注射劑型用於緩解腫瘤疼痛的用途，以及用於抑制和/或治療腫瘤的用途。本發明提供這些藥物的新劑型。以溫鬱金提耳又物作為原料分別製備成脂肪乳劑型。這些劑型的平均粒徑一般小於或等於l微米，甚至小於或等於100納米。附圖簡述圖1是實施例1的1A製劑的透射電鏡照片。本發明的詳細說明現有
技術領域：
中已經知道欖香烯某些異構體、薑黃提取物、溫鬱金提取物具備抑制腫瘤的作用，一些文獻公開了這些天然藥物的各種製劑形式(或劑型)，例如脂質體、乳劑、脂肪乳等製劑。但是，由於這些劑型的平均粒徑普遍較大，注射到人或動物體內後會引起人或動物體內的各種反應，例如刺激性大，有時候發生溶血現象。本發明人經過多年的研究工作，發現將倍半闢烯類化合物或從植物中提取的含倍半萜烯類的提取物製成平均粒徑《1微米或<100納米的各種注射劑型，其中包括脂質體劑型，納米脂質體劑型，前體脂質體劑型，長循環脂質體劑型，長循環納米脂質體劑型，納米微乳劑型，靜脈乳劑型，脂質納米微球劑型，脂肪乳劑型等，可以克服現有技術的注射製劑中的諸多問題，尤其本發明的這些劑型在靜脈注射應用中大大減少了刺激性，它們的穩定性得到進一步提高。本發明的新劑型顯著提高了藥物製劑的藥效，但這些劑型的抑制癌細胞的機理目前還不是十分清楚。本發明人根據大量的試驗結果作出以下推測由於本發明製劑具有小的平均粒徑並且具有特殊的表面性質(例如親水/親脂平衡，表面電荷等)，使得這些製劑中的藥物(或活性成分)對癌細胞有較強的親和力，能夠充分附著於癌細胞上，讓活性成分直"^妄作用於癌細胞，達到抑制或殺滅癌細胞的效果。另夕卜，發現，納米粒度的製劑起效快，防止癌細胞轉移方面有一定效果。同時，儘管本發明製劑具有小的平均粒徑，但是所獲得的各種劑型的製劑同時具有高的穩定性，它們在長時間的貯存中不會發生凝聚問題，使得可以較長時間進行貯存而不降低穩定性。本發明提供溫鬱金提取物脂肪乳注射劑，它含有從溫鬱金植物中經填料式真空精餾裝置精餾或分子蒸鎦儀提取的具有總倍半闢烯類含量》70wty。的提取物、大豆磷脂、大豆油、甘油和注射用水，該注射劑是一種水性分散體，分散相的平均粒徑70wt。/。的提取物；(2)、將步驟(1)獲得的提取物按照提取物與大豆磷脂加入大豆油中，升溫成油相，將該油相加入到含甘油的水溶液，經高壓均質化處理，直到獲得分散相平均粒徑《1微米的穩定水性分散體為止，從而製得注射劑，其中提取物佔最終配製劑總量的0.08wt%~0.8wt%,大豆磷脂佔0.8wt%~2.5wt%，大豆油佔8~12wt%，甘油佔1.8wt%~2.8wt%，注射用水加至5000ml，溫肩p金4是耳又物脂肪乳注射劑中倍半碎烯類活性成分的最終濃度為1-10mg/ml的。能夠在本發明中用來製成新劑型的從植物中提取的倍半闢烯類(C15H24),倍半闢烯類化合物的混合物或從植物中提取的倍半碎烯類提取物，對於這些提取產物要求倍半闢烯類化合物的純度在70%以上，優選在75%以上，更優選在85%以上.，特別優選在90%以上，甚至特別優選在95%以上。需要指出的是，在本發明中用於製備各種劑型的製劑的各種原料可以使用商購的產品如欖香烯產品(提取物)、p-欖香烯產品(提取物)、薑黃提取物或溫鬱金提取物，以及樹蘭花、香^f春子、海風藤、丁香、沒藥、黃花杜鵑、葛縷子、百裡香、歐芹、廣藿香、茅蒼朮、蛇床子、啤酒花、檀香木、香檸檬、防風根、柏木、松節油以及香茅、人參等的提取物產品。如果在本申請中需要自己製備這些提取物，用於製備這些提取物的各種揮髮油可以使用商購產品，也可以使用通過普通的水蒸汽蒸餾法或分子蒸餾法從植物中獲得的揮髮油。倍半碎烯類包括欖香烯(elemene),薑黃烯(curcumene)，姜烯(zingiberene),f皮旁丈希(bourbonene),蟲它麻丈希(humulene),金合5t欠花烯(farnesene)，杜松歸(cadinene)，茅子婦(selinene)，馬阿里烯(maaliene)，檀香烯(santalene),廣藿香歸(patchonlene)，石竹烯(也稱作丁香烯，caryophyliene),吉馬烯(大香葉烯，ge服crene)，畢澄痴油火希(cubebene)，；f白木火希(cedrene),長p十歸(longifolene),防風根烯(或紅沒藥烯，bisabolene),香檸檬烯(bergamotene),古芸烯(gurjimene)，愈掩木烯(guaiene),衣蘭烯(ylangene),異石竹烯(isocaryophyllene)，長蒗烯(longipinene),白菖歸(calarene)，木羅烯(muurolene)，菖蒲二蹄(acoradiene)，倍半水芽烯([3-sesquiphellandrene)等。原則上，從植物中提取的含有60wt。/。以上倍半闢烯類的所有提取物都可用於製備本發明的新劑型，倍半碎烯類是所有劑型的活性成分。含有70wt。/o以上倍半萜烯類的提取物是理想的，含有75wt。/。以上倍半薛烯的提取物是優選的，含有85wt。/。以上倍半碎烯的提取物是更優選的，含有90wt。/。以上或甚至含有95wt。/。以上倍半闢烯類的提取物是特別優選的。從天然植物中提取的含欖香烯的提取物通常含有a-欖香烯，卩-欖香烯，S-欖香烯，Y-欖香烯，波旁烯等。在本發明中作為特定的實施方案，以溫鬱金CurcumawenyujinY.H.ChenetC.Ling揮髮油、香茅油Cymbopoqoncitratus(DC.)Stapt次要成分(香茅油除掉檸檬醛、香茅醇之後餘下的混合油狀物)為原料，經填料式真空精餾裝置或分子蒸餾儀精製出欖香烯。另外，每一種欖香烯異構體如or欖香烯，p-欖香烯，5-欖香烯或Y-欖香烯只要純度在85wto/。以上也能夠用於製成本發明的新劑型。目前根據國內欖香烯質量標準(參見2000年的國家藥品監督管理局頒發的國家藥品標準WSr(X-094)-2000Z)，若分離出的產物(提取物)用氣相色譜法(聚乙二醇2謹為固定相，白色硅藻土擔體60~80目，柱溫為135~M(TC，理論板數按P-欖香烯計算應不低於1000)檢測總欖香烯異構體純度達到>85%則該產物稱作欖香烯，若檢測出P-欖香烯純度達到>95%則產物為p-欖香烯，實際上這是不準確的，因為使用靈敏度更高的色譜儀器例如30米長毛細管氣相色譜-質鐠聯用儀.(色譜儀Bio-RadFTS-65A,HP5890II,色i普柱BP-5)來檢測該>95%純度的(3-欖香烯樣品，會發現它仍然含有至少6%的波旁烯(在低靈敏度色譜儀的色譜圖，p-攬香烯的峰與波旁烯的峰重疊成一個峰)，欖香烯樣品是多種倍半闢烯的混合物，即含有卩-欖香烯，S-欖香烯，Y-欖香烯，波旁烯，丁香烯、吉馬烯等。薑黃RhizomaCurcu隨LongaL.提取物是/人薑黃植物獲耳又的揮髮油中提取的產物。在本發明中作為特定的實施方案，薑黃提取物指薑黃揮髮油經填料式真空精餾裝置或分子蒸餾儀精製出的提取物，經GC-MS檢測，薑黃提取物通常含有》70wt。/。，優選》75wty。，更優選>80wt%，特別優選》85wty。，甚至更優選》90wt。/。的倍半闢烯類如薑黃烯、姜烯等和少量(相當於全部倍半碎烯類總重量的約1/25~1/5)的薑黃素。溫鬱金Curc畫訓yujinY.H.ChenetC.Ling提取物包括從溫鬱金植物中獲取的揮髮油中提取的產物。在本申請中作為特定的實施方案，溫鬱金提取物指溫鬱金揮髮油經真空填料式精餾裝置精餾出的組分或經分子蒸餾儀精製出的產物，經GC-MS檢測，產物含有>70wt%,優選》75wty。，更優選》80wt。/。，特別優選》85wt。/。，甚至更優選》90wty。的倍豐闢烯類如各種欖香烯異構體、吉馬烯、丁香烯等和較少量(相當於全部倍半萜烯類總重量的約1/50-1/10)的薑黃素。術語的解釋在本發明中所述的粒徑或粒度是指分散相的粒徑或粒度。在本申請中，溫鬱金提取物指溫鬱金揮髮油經真空填料式精餾裝置精餾出的組分或經分子蒸餾儀精製出的組分，經GC-MS檢測，溫鬱金提取物含有主要量的倍半萜烯類和較少量的薑黃素。如果在劑型前加"糹內米"修飾，則指該劑型的平均粒徑《150納米，在理想的情況下平均粒徑《100納米。注射劑和注射製劑可互換使用。脂質體劑型，在本發明中是指分散或懸浮在含水介質中的由磷脂和膽固醇等組成的脂雙層結構，該脂雙層結構類似於細胞膜結構。納米脂質體劑型，在本發明中是指平均粒徑低於或等於150納米的脂質體。前體脂質體劑型，在本發明中是指在脂質體的配方基礎上再添加賦形劑，通過真空冷凍乾燥(真空凍幹)方法所制-備的凍乾粉。該凍乾粉在臨床應用之前通過添加注射用水，經過振搖或振蕩，使之恢復成脂質體形態。長循環脂質體劑型，簡單地說，在本發明中是指在脂質體的配方基礎上再增加聚乙二醇磷脂醯乙醇胺所製備的脂質體。它注射到體內後比普通的脂質體在體內發揮效用的時間更長，或在體內消除緩慢。納米樣i乳劑型，指平均粒徑《150納米，在理想情況下《100納米的乳劑。靜脈乳劑型.，在本發明中指平均粒徑《1微米的注射乳。脂質納米微球劑型，在本發明中是指平均粒徑90wt%,更特別優選>95wt%。該提取物含有《25wt。/i的薑黃素，理想地含有《15wt。/。的薑黃素，優選含有《10wt。/。的薑黃素，更優選含有《5w"/。的薑黃素。使用這裡所述的30米長毛細管氣相色譜-質譜聯用儀檢測提取物，含有>70wtM咅半萜烯類的提取物就可用於本發明中。本申請中所使用的溫鬱金提取物可以通過商業途徑以提取物(各種異構體混合物)或純異構體(要求純度高於85wtW產物形式購買獲得，也可以根據需要自己製備，對於溫鬱金提取物的製備方法參見製備例。本申請中所使用的溫鬱金提取物原料、試劑沒有特別的限制，只要該提取物是從天然植物溫鬱金中提取並且總倍半薛烯類純度>70wty。就可在本發明中使用，更理想的是，該純度^75wty。，更理想>80wt%,優選》85wty。，特別優選》90wt0/0。除非另有說明，否則在本發明中使用的其它成分如膽固醇、大豆磷脂、卵磷脂、甘油、亞油酸、聚乙二醇磷脂醯乙醇胺、脂族胺、大豆油等一般要求符合國家藥用標準，溶劑也應該符合國家藥用標準，這些主要出於健康方面的考慮；類似地，對於一些原料用"精製"修飾，表明該原料必須符合國家藥用標準，例如精製大豆磷脂是注射劑可用的產品，精製大豆油是注射劑可用的產品。除非另有說明，否則在本申請中所使用的氣相色鐠儀是Bio-RadFTS-65A，HP5890II,色語柱是BP-5。本發明的各種劑型能夠以靜脈注射、局部給藥方式用於治療目的。本發明的優選實施方案在下列的實施方案中作為原料主要使用提取物"欖香烯"、提取物"(3-欖香烯"、薑黃提取物、溫鬱金提取物，還可以使用樹蘭花、香椿子、海風藤、丁香.沒藥、黃花杜鵑、葛縷子、百裡香、歐芽、廣愛香、茅蒼朮、蛇床子、啤酒花、檀香木、香檸檬、防風根、柏木、松節油以及香茅、人參等的提取物。顯然，其中某一種倍半萜烯異構體的純度較高(例如>85wtZ)的產品都能夠作為原料，而且利用化學方法合成的各種倍半萜烯類及其衍生物都能夠用於本發明中。本發明提供了脂質體或納米脂質體的製備方法，它包括將提取物與大豆磷脂、膽固醇以重量比0.5-1.5:2.5-4.0:1.0-2.0，優選0.8-1.2:2.8-3.6:1.2-1.8,更優選0.9-1.1:3.0-3.4:1.4-1.6，特別優選l:3.2:1.5進行混合；添加溶劑(如乙醚或丙酮或氯仿)，添加量足以使混合物充分溶解，置入旋轉蒸發儀上脫除溶劑成膜，添加餘量的注射用水(根據所要配製的最終濃度來計算該餘量)，然後置入常規的超聲波細胞粉碎機中進行超聲波處理；取樣利用帶標尺的顯微鏡、Coulter儀、電子顯微鏡來檢驗平均粒徑，在達到規定的平均粒徑例如《1微米(脂質體).，或《100納米(納米脂質體)後，調節PH，使PH值為4.5~6.5,經0.8ju;f啟孔濾膜過濾和然後裝瓶，100。C蒸汽流滅菌，利用色譜儀(氣相或液相)測得活性成分的最終濃度(倍半碎烯類活性成分的重量(mg)/總製劑體積(ml))為l~10mg/ml,優選為2~7.5mg/nil,更通常為5~7.5mg/ml。納米脂質體的包封率檢測用分子篩法才企測，即，利用S印hadexG25層析系統，將提取物納米脂質體製劑分成兩個流份，即提取物納米脂質體流份-和游離的提取物流份，經氣相色語儀檢測兩個流份中含有的提取物含量。包封率計算公式=提取物納米脂質體流份的提取物含量+(提取物納米脂質體流份的提取物含量+游離的提取物含量)。顯微鏡或透射電鏡驗證是否為脂質體。本發明提供前體脂質體的製備方法將提取物與精製大豆磷脂、膽固醇以重量比0.5-1.5:2.5-4.0:1.0-2.0,優選0.8-1.2:2.8-3.6:1.2-1.8，更優選0.9-1.1:3.0-3.4:1.4-1.6，特別優選l:3.2:1.5進行混合，添加溶劑(如乙醚或丙酮或氯仿)，添加量足以充分溶解該混合物，置入旋轉蒸發儀上脫除溶劑成膜，添加餘量的注射用水(根據所要配製的最終濃度來計算該餘量)，然後置入超聲波細胞粉碎機進行超聲處理，取樣利用帶標尺的顯孩i鏡或Coulter儀來檢驗平均粒徑，當平均粒徑《1微米後，調節PH，使PH值為4.5~6.5,經0.8p微孔濾膜過濾和然後裝瓶，加入佔總製劑量的1-2wty。的賦形劑(例如乳糖或平均分子量Mw為約4000-40000的低分子右旋糖苷)，IO(TC蒸汽流滅菌，無菌條件下冷凍乾燥、灌封。在使用之前添加注射水以達到最終活性成分濃度(倍半闢烯類活性成分的重量(mg)/製劑體積(ml))為l~10mg/ml，優選為2~8mg/ml，更優選為27.5mg/ml,更通常為5~7.5mg/ml。包封率的檢測用分子篩法檢測方法，即根據所要配製的最終製劑濃度(mg/ml)，將一定量的提取物前體脂質體製劑先添加餘量體積的水振搖均勻，此時又變成了脂質體，利用SephadexG25層析系統分成兩個流份，即提取物脂質體流份和游離的提取物流份，經氣相色譜儀檢測兩個流份中含有的提取物量。包封率計算公式=提取物脂質體流份的提取物含量+(提取物脂質體流份的提取物含量+游離的提取物量)。顯微鏡或透射電鏡證實是否為前體脂質體。本發明提供長循環提取物納米脂質體的製備方法，該方法包括將提取物與精製大豆磷脂、聚乙二醇(2000)磷脂醯乙醇胺、膽固醇以重量比0.5-1.5:1,5-3.5:0.3-1.2:0.8-2.0，優選以重量比0.8-1.2:1.8-3.0:0.4-1.0:1.2-1.8,更優選以重量比0.9-1.1:2.4-2.8:0.6-1.0:1.2-1.6,特別優選以重量比1:2.6-2.7:0.7-0.9:1.3-1.5進行混合，添加溶劑(如乙醚或丙酮或氯仿)，添加量足以充分溶解該混合物，置入旋轉蒸發儀上脫除溶劑成膜，添加餘量的注射用水(根據所要配製的最終濃度來計算該餘量)，然後置入常規的超聲波細胞粉碎機進行超聲波處理，取樣利用帶標尺的顯微:鏡、Coulter儀或電子顯微鏡來檢驗平均粒徑，在達到^見定的平均粒徑(例如《100納米)後，調節PH,使PH值為4.5~6.5，經0.8ju微孔濾膜過濾和然後裝瓶，IO(TC蒸汽流滅菌，(氣相或液相)色譜法測得活性成分的最終濃度(倍半萜烯類活性成分的重量(mg)/總製劑體積(ml))為1~10mg/ml，優選為2~7.5mg/iri1，更優選為2~8mg/ml，更通常為5~7.5mg/ml。對於聚乙二醇(2000)磷脂醯乙醇胺，其中"2000"指聚乙二醇鏈段的平均分子量(道爾頓)。該注射劑的包封率的檢測與前面的脂質體注射劑的包封率檢測方法才目同。本發明提供帶負電荷及帶正電荷的提取物納米微乳的製備方法製備方法1:帶負電荷的納米微乳的製備將提取物與精製大豆磷脂、膽固醇以重量比0.5-1.5:2.5-4.0:1.0-2.0，優選0.8-1.2:2.8-3.6:1.2-1.8,更優選0.9-1.1:3.0-3.4:1.4-1.6,特別優選1:3.2:1.5進行混合,添加溶劑(如乙醚或丙酮或氯仿)，添加量足以充分溶解該混合物，置入旋轉蒸發儀上脫除溶劑成膜，添加餘量的注射用水(根據所要配製的最終濃度來計算該餘量)，然後置入常規的超聲波細胞粉碎機進行超聲波處理，取樣利用帶標尺的顯微鏡、Coulter儀或電子顯微鏡來檢驗平均粒徑，在達到規定的平均粒徑(例如《100納米)後，調節PH，使PH值為4.5~6.5,經0.8ja微孔濾膜過濾和然後裝瓶，IO(TC蒸汽流滅菌，活性成分的最終濃度(倍半闢烯類活性成分的重量(mg)/總製劑體積(ml))為l~10mg/nil,優選為2~7.5mg/ml,更通常為5-7.5mg/ml。顯微鏡、透射電鏡檢測，證實是否是納米微乳。製備方法2:帶正電荷的納米微乳的製備將提取物、精製卵磷脂、C14-C22直鏈或支鏈脂族胺、膽固醇以重量比0.5-1.5:2.5-3.5:0.2-0.6:1,0-2.0,優選0.8-1.2:2.5-3.0:0.3-0.5:1.2-1.8，更優選0.9一1.1:2,7-2.9:0.3-0.5:1.4-1.6,特別優選1:2.8:0.4:1.5進行混合，添加溶劑(如乙醚或丙酮或氯仿)，添加量足以充分溶解該混合物，置入旋轉蒸發儀上脫除溶劑成膜，然後添加餘量的注射用水(根據所要配製的濃度計算出該餘量)，然後置入常規的超聲波細胞粉碎機進行超聲處理，取樣利用帶標尺的顯微鏡、Coulter儀或電子顯微鏡來檢驗平均粒徑，在達到規定的平均粒徑(例如《100納米)後，調節PH，4吏PH值為7.5~9.0，經O.8)i微孔濾膜過濾和然後裝瓶，IO(TC蒸汽流滅菌，倍半碎烯類活性成分的最終濃度為1~10mg/ml,優選為2~7.5mg/ml，更通常為5~7.5mg/ml。顯微鏡、透射電鏡檢測，證實是否為納米微乳。本發明還提供提取物脂質納米球的製備方法，該方法包括取提取物與大豆磷脂一起加入大豆油中，升溫控制成油相(保持為油相)，將該油相加入到含甘油的水溶液中。其具體重量比例為提取物佔最終配製劑總量的0.08~0.8wt%,大豆磷脂0.8~2.5wt%,大豆油8-12wt%，甘油1.8-2.8wt%,注射用水加至5000ml;優選的重量比例為提取物佔最終配製劑總量的0.lwt%~0.5wt%,大豆磷脂1.2wt%~2.Owt%，大豆油10wt%，甘油2.25~2.5wt%,注射用水加至5000ml。然後高速攪拌，調節PH為4.5~6.5,再經過普通的高壓均質機(例如M110-E/H型(日本MIZUHO產))處理，然後進行前面所述的超聲波處理，取樣利用帶標尺的顯微#:、Coulter儀或電子顯微鏡來檢驗平均粒徑，在其脂質球的平均粒徑達到規定值例如《10Qnm之後，再經Q.8M微孔濾膜過濾和然後裝瓶，100°C~120。C滅菌。(氣相或液相)色語法測得倍半薛烯類活性成分的最終濃度為l~10mg/ml,優選為2~7.5mg/ml,更通常為2~5fflg/ml，更理想為2.0~3.Omg/ml。根據需要可以在該最終製劑中加入適量膽固醇、亞油酸等。本發明提供提取物靜脈注射乳的製備方法，該方法包括將提取物、精製大豆磷脂、膽固醇以重量比0.5-1.5:2.5-4.0:1.0-2.0,優選O.8-1.2:2.8-3.6:1.2-1.8，更優選0.9-1.1:3.0-3.4:1.4-1.6,特別優選1:3.2:1.5,與餘量的注射用水(根據所要配製的最終濃度來計算該餘量)進行混合，用常規的高壓均質機(例如M110-E/H型(日本MIZUHO產))乳化，取樣利用帶標尺的顯孩i鏡或Coulter儀來檢驗平均粒徑，在達到規定的平均粒徑例如《1微米後，調節PH，使PH值為4.5~6.5，經1.2]u微孔濾膜過濾和然後裝瓶，經10(TC12(TC滅菌，得到提取物靜脈乳，(氣相或液相)色譜法測得倍半萜烯類活性成分的最終濃度為l~10mg/ml,優選為2~7.5mg/ml，更通常為5~7.5mg/ml。本發明提供提取物脂肪乳的製備方法，該方法包括取提取物與大豆磷脂加入大豆油中，升溫控制成油相(保持為油相)，將該油相加入到含甘油的水溶液中。其具體重量比為提取物佔最終配製劑總量的0.08~0.8wt%,大豆磷脂0.8~2.5wt%,大豆油8-12wt%，甘油1.8-2.8wt%，注射用水加至5000ml;優選的重量比例為糹是取物佔最終配製劑總量的0.lwt%~0.5wt%,大豆磷脂1.2wt%~2.Owt%,大豆油10wt%,甘油2.25-2.5wt%，注射用水加至5000ml。然後高速攪拌，調節PH為4.5~6.5,再經過普通的高壓均質機(例如M110-E/H型(日本MIZUHO產))處理，使其粒徑小於lji，再經L2]u微孔濾膜過濾和然後裝瓶，100°C~12(TC滅菌。倍半碎烯類活性成分的最終濃度為l~10mg/ml，優選為2~7.5mg/ml,更理想為2.0~3.Omg/ml或為5~7.5mg/ml。根據需要可以在該最終製劑中加入適量膽固醇、亞油酸等。根據需要，本發明的製劑可以用不同尺寸例如1.2ja、l.On、0.9ji、0.8|i、0.7ja、0.6|i、0.5|i等的微孔濾膜進行過濾，可以截取平均粒徑《0.8p、《0.7m、《0.6ju、《0.5m、《0.45p、《0.4ju、《0.3ju等的分散相。下面的製備例和實施例用於舉例說明本發明J旦不應"^人為限制本發明的範圍。本發明的保護範圍由權利要求來定義。製備例溫鬱金提取物的製備製備方法A:以溫鬱金揮髮油為原料，經廣州漢維機電公司MD-S80型分子蒸餾儀精製，其工藝條件蒸餾溫度3545。C，蒸鎦壓力7090Pa，刮膜速度300~32Q轉/分，冷凝面溫度20~25°C,系統溫度2Q25。C，物料流速15-30毫升/小時，4又收集餾餘物，將餾餘物繼續進行分子蒸餾。蒸餾溫度為45~60°C，蒸餾壓力30--70Pa,刮膜速度300~320轉/分，冷凝面溫度20~25°C,系統保溫20~25°C,物料流速15~30毫升/小時，分別收集餾出物與餾餘物，將餾餘物進行分子蒸餾。蒸餾溫度為30~7(TC,蒸餾壓力10~50Pa,刮膜速度300320轉/分，冷凝面溫度20~25°C，系統保溫20~25°C,物料流速15~30毫升/小時，收集餾出物，力i掉餾餘物，將得到的二次餾出物混合，繼續蒸餾，一直到經氣相色譜儀檢測達到總倍半萜烯含量》75wt。/。為止(利用30米長毛細管氣相色譜-質譜聯用儀氣相色譜儀;險測，色譜儀Bio-RadFTS-65A,HP5890II,色i普柱.BP-5)。該提取物經上述氣相色譜儀檢測，還含有相當於全部倍半碎烯類總重量的約1/25的薑黃素。用氣相色譜法制定供檢測用指紋圖鐠。該產物稱作溫鬱金提取物A。製備方法B.將溫鬱金揮髮油，經填料式真空精餾裝置精餾，填料式真空精餾裝置由裝溫鬱金揮髮油的釜、填料-精餾J答、回流填料為狄克松填料(Q網環填料)，真空度為13mraHg,收集82°C/3隨Hg以上的餾分。經氣相色譜儀分析為倍半碎烯化合物(利用30米長毛細管氣相色譜-質鐠聯用儀氣相色譜儀檢測)，總倍半闢烯含量》75wt。/。。提取物經上述氣相色譜儀檢測，還含有相當於全部倍半碎烯類總重量的約1/25的薑黃素。用氣相色譜法制定供檢測用指紋圖譜。該產物稱作溫鬱金提取物B。另外，取經C02超臨界提取過揮髮油的溫鬱金藥渣，加入甲醇加熱回流3小時，得到棕色溶液，用旋轉蒸發儀脫除掉曱醇，得到棕色粘稠物，將該棕色粘稠膏狀物用矽膠進行製備色譜，以氯仿洗脫，得到純度>90wt。/。的薑黃素產物。將上述產物A和產物B以50:50重量比混合，將所形成的混合物與該薑黃素產物按20:1(重量)的比例進行混合而獲得另一種混合物，稱作提取物C。實施例1:溫鬱金提取物的納米脂質體注射劑的製備程序1A:將製備例的產品A與精製大豆磷脂、膽固醇以重量比1:3.2:1.5混合，添加乙醚，添加量足以充分溶解該混合物，置入旋轉蒸發儀上脫除乙醚成膜，添加餘量的注射用水(根據所要配製的最終濃度即5mg/ml來計算該餘量)，然後置入山東濟寧超聲電子儀器廠出產的超聲波細胞粉碎機(型號JCS-204)超聲處理，取樣利用帶標尺的顯微鏡、Coulter儀或電子顯微鏡來檢驗平均粒徑，當平均粒徑《100納米後，用1M磷酸二氬鈉水溶液調節PHJ吏PH值為4.5~6.5，經0.8n微孔濾膜(上海新亞淨化器件廠生產，規格0.8n)過濾和然後裝瓶，IO(TC蒸汽流滅菌，所獲得的注射劑產品簡稱1A。取樣用氣相色譜法(利用30米長毛細管氣相色語-質譜聯用儀氣相色譜儀)測得活性成分(總倍半碎烯類活性成分的重量(mg)/製劑體積(ml))的最鄉冬濃度為5±0.10mg/ml。用分子篩法檢測包封率，即，利用S印hadexG25層析系統將提取物納米脂質體製劑分成兩個流份，即提取物納米脂質體流份和游離的提取物流份，經氣相色譜儀檢測兩個流份中含有的提取物含量。包封率超過85%。包封率計算公式=提取物納米脂質體流份的提取物含量+[提取物納米脂質體流份的提取物含量+游離的提取物量]。顯微鏡、透射電鏡檢測，證實是納米脂質體，在附圖1中給出該注射劑的透射電鏡照片(標尺50nm)。程序1B:重複上述1A程序，只是用製備例的產物B代替製備例的產物A。顯微鏡、透射電鏡檢測，證實製劑是納米脂質體。製劑中總倍半萜烯類的濃度為約5±0.10mg/ml。包封率高於85%。該注射劑筒稱1B。實施例2:溫鬱金提取物的前體脂質體的製備2A:按照與實施例1的1A程序中相同的方法和原料配比，重複進行實施例1的1A程序，只是超聲波處理後要求分散.相的粒徑<1微米以及在過濾之後和在裝瓶之前，加入佔總製劑重量的1-2%的乳糖，然後利用IO(TC蒸汽流滅菌，無菌條件下冷凍乾燥、灌封(分裝)。用Coulter儀4全測證實製劑是前體脂質體。該注射劑產品簡稱2A。包封率高於85%。該製劑在注射應用之前添加注射水以達到最終活性成分(總倍半闢烯類)濃度為5±0.10mg/ml。2B:重複上述2A，只是用製備例的B產物代替製備例的產物A,用平均分子量Mw為約40000的低分子右旋糖苷代替乳糖。該注射劑簡稱2B。用Coulter儀檢測證實製劑是前體脂質體。包封率高於85%。該製劑在注射應用之前添加注射水以達到最終活性成分濃度(總倍半萜烯類的重量(mg)/製劑體積(ml))為5±0.10mg/ml。實施例3:溫鬱金提取物的長循環納米脂質體的製備3A:按照與實施例l的1A程序中相同的方法，重複進4亍實施例1的1A程序，只是原料和它們的重量配比是溫鬱金提取物A:大豆磷脂:聚乙二醇(2000)磷脂醯乙醇胺:膽固醇=1:2.7:0.8:1.4。該注射劑簡稱3A。取樣檢驗平均粒徑《100nm。製劑中總倍半闢烯類的最終濃度為5±0.10mg/ml。包封率高於85%。3B:重複上述3A,只是用製備例的產物B代替製備例的產物A。所獲得的注射劑簡稱3B。平均粒徑《100nra。製劑中總倍半闢烯類的最終濃度為5±0.10mg/ml。包封率高於85%。實施例4:帶負電荷及帶正電荷的溫鬱金提取物的納米微乳的製備4A-1:帶負電荷的納米微乳的製備重複實施例1的1A程序，只是不測定包封率。取樣測得總倍半萜烯類的最終濃度為5±0.10mg/ml。用Coulter儀證實是納米微乳。該注射劑產品簡稱4A-1。4A-2:帶正電荷的納米微乳的製備重複實施例1的1A程序，只是原料和它們的重量配比是提取物A:卵磷脂正十八烷基胺月旦固醇=1:2.8:0.4:1.5,不測定包封率。取樣測得總倍半闢烯類的最終濃度為5±0.10mg/ml。用Cou11er儀證實是納米微乳。該注射劑簡稱4A-2。4B-1:帶負電荷的納米微乳的製備重複上述4A-1，只是用製備例的產物B代替製備例的產物A。取樣測得總倍半萜烯類的最終濃度為5±0.10mg/ml。用Coulter儀證實是納米微乳。所獲得的注射劑簡稱4B-1。4B-2:帶正電荷的納米^t乳的製備重複上述4A-2,只是用製備例的產物B代替製備例的產物A。取樣測得總倍半萜烯類的最終濃度為5±0.10mg/ral。用Coulter儀證實是納米微乳。所獲得的注射劑簡稱4B-2。實施例5:溫鬱金提取物的脂質納米球製劑的製備5A:取製備例的提取物A與大豆磷脂一起加入大豆油中，升溫控制成油相(即保持為油相)，將該油相加入到含甘油的水溶液中。其具體重量比為提取物A佔總製劑重量的0.2%,大豆磷脂1.7%,大豆油10%，甘油2.5%,餘量為注射用水，然後高速攪拌，用1M磷酸二氬鈉水溶液調節PH為4.5~6.5,再經M110-E/H型(日本MIZUH0產)高壓均質機處理，然後按照實施例3中相同方法進行超聲波處理，使其脂質球的平均粒徑《100nm,再經0.8y微孔濾膜過濾和然後裝瓶，IO(TC~120。C滅菌。取樣測得總倍半萜烯類的最終濃度為2±0.04mg/ml。所獲得的注射劑簡稱5A。根據需要可以在原料中包括適量的膽固醇、亞油酸等。5B:重複上述5A程序，只是用製備例的產物B代替製備例的產物A。脂質球的平均粒徑《100nm。色譜法測得總倍半闢烯類的最終濃度為2±0.04mg/mlc所獲得的注射劑簡稱5B。實施例6:溫鬱金提取物的靜脈注射乳的製備6A:將製備例的溫鬱金提取物A、精製大豆磷脂、膽固醇以重量比l:3.2:1.5與餘量的注射用水(根據所需最終的濃度即5mg/rnl來計算該餘量)混合，用M110--E/H型(日本MIZUHO產)高壓均質才幾乳化，一直用Coulter儀檢驗粒徑小於lni為止。然後，用1M磷酸二氬鈉水溶液調節PH,使PH值為4.5~6.5,經1.2u微孔濾膜過濾和然後裝瓶，經IQ(TC~12Q。C滅菌，得到溫鬱金提取物靜脈乳，取樣測得總倍半闢烯類的最終濃度為5±0.10mg/ml。該注射劑簡稱6A。6B:重複以上6A，只是用製備例的產物B代替製備例的產物A。用Coulter儀檢驗粒徑小於1微米。製劑中總倍半薛烯類的最終濃度為5±0.10mg/ml。所獲得的注射劑簡稱6B。實施例7:溫鬱金提取物脂肪乳的製備7A:取製備例的產物A與大豆磷脂加入大豆油中，升溫控制成油相，將該油相加入到含甘油的水溶液中。其具體重量比為提取物A佔總製劑重量的0.2%，大豆磷脂1.2%，大豆油10%,甘油2.5%,餘量為注射用水。然後高速攪拌，用1M磷酸二氫鈉水溶液調節PH為4.5~6.5,再經Ml10-E/H型(日本MIZ冊0產)高壓均質才幾處理，一直到用Coulter儀檢驗粒徑《lja為止，再經1.2ja微孔濾膜過濾和然後裝瓶，IO(TC~12(TC滅菌。測得總倍半萜烯類的最終濃度為2±0.04mg/ml。所獲得的注射劑簡稱7A。根據需要可以在原料中包括適量膽固醇、亞油酸等。7B:重複上述7A，只是用製備例的產物B代替製備例的產物A。測得在製劑中總倍半闢烯類的最終濃度為2±0.04mg/ml。所獲得的注射劑筒稱7B。實施例8:C02超臨界法製備脂質體8A:將佔膽固醇重量的1Owty。的三氯曱烷加入月旦固醇中^f吏之浸潤，將大豆磷脂和製備例的提取物A加入其中進行混合(提取物a:大豆磷脂膽固醇=重量比1.2:3.2:1.5),將所獲得的混合物放入c02超臨界提取儀(廣州漢維機電公司生產，型號SFE100ml)的萃取器中，通入C(U壓力50-80kg)，體系溫度5(TC,進行臨界或超臨界分散，使混合物均勻混合，然後緩慢減壓釋放C02,讓C02將三氯甲烷帶出，取出萃取器，在萃取器中加入餘量的注射用水(根據注射劑的最終濃度計算該餘量)，用攪拌器攪拌，將所形成的分散體用超聲波處理，一直到脂質體的分散相粒徑《100納米為止(稱為納米脂質體)。然後將脂質體用1M磷酸二氬鈉水溶液調節PH，使ph值為4.5~6.5，經0.8m微孔濾膜(上海新亞淨化器件廠生產，規格0.8m)過濾和然後裝瓶，IO(TC蒸汽流滅菌，所獲得的注射劑產品筒稱8a。取樣用氣相色譜法測得總倍半薛烯類的最終濃度為5±0.10mg/ml。包封率高於88%。8B:重複上述8A，只是用製備例的產物b代替製備例的產物a,製得脂質體。測得在製劑中總倍半萜烯類的最終濃度為5±0.10mg/ml。所獲得的注射劑簡稱8B。包封率高於88%。8C:重複上述8A,只是用製備例的提取物c代替製備例的產物a，製得脂質體。測得在製劑中總倍半萜烯類的最終濃度為5±0.10mg/ml。所獲得的注射劑簡稱8C。包封率高於88°/。。藥效學試驗藥物製劑的體內抗腫瘤效果的評價方法已在以上列舉的某些專利文獻中有描迷(例如參見CN1153168A)。在本發明中，各種劑型的製劑對皮下接種的人體腫瘤異種移植模型QGY肝癌、MKN-"胃癌的療效，可以通過以80mg(^f咅半碎烯類)/kg(體重)、40mg/kg和20mg/kg的劑量，每天尾靜脈給藥1次，連續給藥IO天的治療方案來確認，其中沒有給藥的作為對照組。具體的操作過程和胂瘤抑制率(抑瘤率)的計算按照目前(指本申請的申請曰以前)的國家藥品監督管理局的相關規定"抗肺瘤藥物的藥效評價辦法"來實施。抑瘤率％=[(沒有給藥的模型的腫瘤重量-給藥的模型的腫瘤重量)/沒有給藥的模型的腫瘤重量]x100%表1.人體腫瘤異種移植模型QGY肝癌的抑瘤率tableseeoriginaldocumentpage28tableseeoriginaldocumentpage29tableseeoriginaldocumentpage30另夕卜，各種劑型的注射劑對荷Lewis肺癌的小鼠NK細月包與對照組比活性提高21%~23%。各種劑型的注射劑對荷Lewis肺癌的小鼠淋巴細胞增殖活性影響、刺激指標提高了1.4-1.55。總之，從上述表中數據可以看出，各種製劑經QGY肝癌、MKN-45胃癌、小鼠腦瘤G422模型藥理學試驗有效。對免疫功能影響試驗，荷Lewis肺癌的小鼠M細胞與對照組比提高21%~23%。淋巴細胞增值活性影響、刺激指標提高了1.4~1.55.所以，注射劑能夠用於抑制和/或治療腫瘤。另外，經過試驗，該製劑還能夠用於抑制癌細胞轉移，用於緩解腫瘤疼痛，用於預防或治療缺血性中風。權利要求1.溫鬱金提取物脂肪乳注射劑，它含有從溫鬱金植物中經填料式真空精餾裝置精餾或分子蒸餾儀提取的具有總倍半萜烯類含量≥70wt％的提取物、大豆磷脂、大豆油、甘油和注射用水，其特徵在於該注射劑是一種水性分散體，分散相的平均粒徑≤1微米，其中提取物佔最終配製劑總量的0.08～0.8wt％，大豆磷脂佔0.8～2.5wt％，大豆油佔8～12wt％，甘油佔1.8％～2.8wt％，注射用水加至5000ml，溫鬱金提取物脂肪乳注射劑中倍半萜烯類活性成分的最終濃度為1-10mg/ml。2、根據權利要求1所述的溫鬱金提取物脂肪乳注射劑，其特徵在於所述提取物佔最終配製劑總量的0.lwt%~0.5wt%，大豆磷脂佔1.2~2.Owt%，大豆油佔10wt%,甘油佔2.25wt%~2.5wt%。3、根據權利要求1所述的溫鬱金提取物脂肪乳注射劑，其特徵在於所述溫鬱金提取物靜脈乳劑中倍半闢烯類活性成分的最終濃度為2~-7.5mg/ml。。4、根據權利要求2所述的溫鬱金提取物脂肪乳注射劑，其特徵在於所述溫鬱金^^是取物靜脈乳劑中倍半薛烯類活性成分的最終濃度為2~7.5mg/ml。。5、根據權利要求1-4中任一權利要求所述的溫鬱金提取物脂肪乳注射劑，其特徵在於所述提取物含有相當於倍半闢烯類總重量的1/50~1/10的薑黃素。6、權利要求1所述的溫鬱金提取物脂肪乳注射劑的製備方法，它包括下述步驟(1)、從溫鬱金揮髮油中經填料式真空精餾裝置精餾或分子蒸餾儀提取總倍半薛烯類含量>70wt"/。的提取物；(2)、將步驟(1)獲得的提取物按照提取物與大豆磷脂加入大豆油中，升溫成油相，將該油相加入到含甘油的水溶液，經高壓均質化處理，直到獲得分散相平均粒徑《1微米的穩定水性分散體為止，從而製得注射劑，其中提取物佔最終配製劑總量的0.08wt%~0.8wt%,大豆石粦脂佔0.8wt%~2.5wt%，大豆油佔8~12wt/。，甘油佔1.8wt%~2.8wt°/o,注射用水加至5000ml,溫鬱金提取物脂肪乳注射劑中倍半格烯類活性成分的最終濃度為1—10mg/ml的。7、根據權利要求6所述的製備方法，其特徵在於所述提取物佔最終配製劑總量的0.lwt%0.5wt%，大豆磷脂佔1.2~2.Owt%,大豆油佔10wt%,甘油佔2.25wt%~2.5wt%。8、根據權利要求6或7所述的製備方法，其特徵在於所述提取物含有相當於倍半萜烯類總重量的1/50~1/10的薑黃素。9、權利要求1-5中任一權利要求所述的溫鬱金提取物脂肪乳注射劑用於製備抑制或治療癌症的藥物的用途。全文摘要本發明溫鬱金提取物脂肪乳注射劑及其製備方法和用途涉及溫鬱金提取物的新注射劑型，更具體地說涉及脂肪乳劑型及該劑型的製備方法和用途。本發明溫鬱金提取物脂肪乳注射劑含有從溫鬱金揮髮油中經填料式真空精餾裝置精餾或分子蒸餾儀提取總倍半萜烯類含量≥70wt％的提取物、大豆磷脂、大豆油、甘油和注射用水，將提取物和大豆磷脂加入大豆油中，升溫成油相，將該油相加入到含甘油的水溶液，經高壓均質化處理，直到獲得分散相平均粒徑≤1微米的穩定水性分散體為止，從而製得注射劑。本發明的溫鬱金提取物脂肪乳注射劑顯著提高了藥物製劑的藥效，並且減少了在靜脈注射應用中的刺激性，提高了穩定性。文檔編號A61K31/01GK101306183SQ20081012641公開日2008年11月19日申請日期2002年4月17日優先權日2002年4月17日發明者李德山,恬謝申請人:恬謝