一種九裡香懸浮細胞的快速繁殖方法
2023-06-24 02:41:46 4
一種九裡香懸浮細胞的快速繁殖方法
【專利摘要】本發明研究了一種九裡香懸浮細胞的快速繁殖方法，包括九裡香無菌葉片的消毒、愈傷組織的誘導、液體懸浮細胞的培養、懸浮細胞培養的優化等步驟，本發明方法所製備的九裡香懸浮細胞生長速度快，可以獲得較高的懸浮細胞，可以建立一個快速生長的懸浮細胞培養體系，維持其可持續開發和利用。
【專利說明】 一種九裡香懸浮細胞的快速繁殖方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種九裡香懸浮培養的快繁方法，屬於生物【技術領域】。
【背景技術】
[0002]九裡香,又稱:石辣椒、九秋香、九樹香等,芸香科,iforraja exotica Z.,小喬木，九裡香喜溫暖，最適宜生長的溫度為20_32°C，不耐寒。常見於離海岸不遠的平地、緩坡、小丘的灌木叢中。喜生於砂質土、向陽地方。九裡香產於:雲南、貴州、湖南、廣東、廣西、福建、海南、中國臺灣等地，以及亞洲其他一些熱帶及亞熱帶地區。產臺灣、福建、廣東、海南、廣西五省區南部。九裡香葉含多種香豆精類化合物,從廣東、雲南、海南、臺灣等各地產品中已分離得到:九裡香甲素，九裡香乙素，九裡香丙素，長葉九裡香內酯二醇，長葉九裡香醛，5，7-二甲氧基-8- (3』 -甲基-2』-酮基丁基)香豆精，海南九裡香內酯等，行氣活血；散瘀止痛；解毒消腫。主胃脘疼痛；跌扑腫痛；瘡癰；蛇蟲咬傷。主治跌打腫痛，風溼骨痛，胃痛，牙痛，破傷風，流行性乙型腦炎，蟲、蛇咬傷，局部麻醉。用於胃痛，風溼痺痛；外治牙痛，跌扑腫痛，蟲蛇咬傷。種植方法為種子繁殖，壓條繁殖，扦插繁殖。
【發明內容】
[0003]本發明所要解決的技術問題是提供一種九裡香懸浮細胞的快速繁殖方法，由該方法所製備的九裡香懸浮細胞生長速度快，可以獲得較高的懸浮細胞，建立一個快速生長的懸浮細胞培養體系，維持其可持續開發和利用。
[0004]本發明所要解決的技術問題是通過以下方案來實現的:
取九裡香幼嫩的葉片，流水衝洗20min,超淨工作檯上0.1%的升萊處理8min,無菌水衝洗5次，吸水紙吸乾，消毒處理過的九裡香幼嫩的葉片接入MSB+IAA1.0mg/L+6-BA10mg/L+2mg/LKT培養基中進行愈傷組織誘導，附加蔗糖30g/L，瓊脂7g/L，pH5.8，暗室培養，溫度25°C，相對溼度75%，誘導出來的愈傷組織放入液體培養基MSB+4-5Mmol/L2, 4-D+l-l.5Mmol/L6-BA進行液體懸浮細胞培養，附加蔗糖50g/L，pH5.8，光照45001x，溫度25°C，接種密度為8%，125ml藥瓶裝25ml培養基，轉速110r/min，懸浮培養兩周後的出來的細胞放入附加了醋酸鈉10mg/L+苯丙酸鈉10mg/L的液體培養基中，30d後測定懸浮細胞的增長率。
[0005]採用本發明製備的懸浮細胞增長率高，周期短，產量大，汙染小，利於大規模種植。
[0006]下面將結合【具體實施方式】對本發明作進一步闡述，但本發明要求保護的範圍並不局限於下列實施方式。
【具體實施方式】
[0007]實施例1
取九裡香幼嫩的葉片，流水衝洗20min,超淨工作檯上0.1%的升萊處理8min,無菌水衝洗5次，吸水紙吸乾，消毒處理過的九裡香幼嫩的葉片接入MSB+IAA1.0mg/L+6-BAlOmg/L+2mg/LKT培養基中進行愈傷組織誘導，附加蔗糖30g/L，瓊脂7g/L，pH5.8，暗室培養，溫度25°C，相對溼度75%，誘導出來的愈傷組織放入液體培養基MSB+4Mmol/L2，4-D+lMmol/L6-BA進行液體懸浮細胞培養，附加蔗糖50g/L，pH5.8，光照45001x，溫度25°C，接種密度為8%，125ml藥瓶裝25ml培養基，轉速110r/min，懸浮培養兩周後的出來的細胞放入附加了醋酸鈉10mg/L+苯丙酸鈉10mg/L的液體培養基中，30d後測定懸浮細胞的增長率，增長率提高50%。
[0008]實施例2
取九裡香幼嫩的葉片，流水衝洗20min,超淨工作檯上0.1%的升萊處理8min,無菌水衝洗5次，吸水紙吸乾，消毒處理過的九裡香幼嫩的葉片接入MSB+IAA1.0mg/L+6-BAlOmg/L+2mg/LKT培養基中進行愈傷組織誘導，附加蔗糖30g/L，瓊脂7g/L，pH5.8，暗室培養，溫度25°C，相對溼度75%，誘導出來的愈傷組織放入液體培養基MSB+5Mmol/L2，4-D+1.5Mmol/L6-BA進行液體懸浮細胞培養，附加蔗糖50g/L，pH5.8，光照45001x，溫度25°C，接種密度為8%，125ml藥瓶裝25ml培養基，轉速110r/min，懸浮培養兩周後的出來的細胞放入附加了醋酸鈉10mg/L+苯丙酸鈉10mg/L的液體培養基中，30d後測定懸浮細胞的增長率，增長率提高45%。
[0009]實施例3
取九裡香幼嫩的葉片，流水衝洗20min,超淨工作檯上0.1%的升萊處理8min,無菌水衝洗5次，吸水紙吸乾，消毒處理過的九裡香幼嫩的葉片接入MSB+IAA1.0mg/L+6-BAlOmg/L+2mg/LKT培養基中進行愈傷組織誘導，附加蔗糖30g/L，瓊脂7g/L，pH5.8，暗室培養，溫度25°C，相對溼度75%，誘導出來的愈傷組織放入液體培養基MSB+4Mmol/L2，4-D+1.5Mmol/L6-BA進行液體懸浮細胞培養，附加蔗糖50g/L，pH5.8，光照45001x，溫度25°C，接種密度為8%，125ml藥瓶裝25ml培養基，轉速110r/min，懸浮培養兩周後的出來的細胞放入附加了醋酸鈉10mg/L+苯丙酸鈉10mg/L的液體培養基中，30d後測定懸浮細胞的增長率，增長率提高47%。
【權利要求】
1.一種九裡香懸浮細胞的快速繁殖方法，包括九裡香無菌葉片的消毒、愈傷組織的誘導、液體懸浮細胞的培養、懸浮細胞培養的優化，其主要步驟如下: (1)取九裡香幼嫩的葉片，進行消毒處理； (2)取步驟(I)消毒處理過的九裡香幼嫩的葉片接入MSB+IAAl.0mg/L+6-BAlOmg/L+2mg/LKT培養基中進行愈傷組織誘導，附加蔗糖30g/L，瓊脂7g/L，pH5.8，暗室培養，溫度25 °C，相對溼度75%; (3)取步驟(2)誘導出來的愈傷組織放入液體培養基MSB+4-5Mmol/L2, 4-D+l-l.5Mmol/L6-BA進行液體懸浮細胞培養，附加蔗糖50g/L，pH5.8，光照45001x，溫度 25 0C ； (4)取步驟(3)懸浮培養兩周後的出來的細胞放入附加了醋酸鈉10mg/L+苯丙酸鈉10mg/L的液體培養基中。
2.按照權利要求1所述的一種九裡香懸浮細胞的快速繁殖方法，其特徵在於:步驟(O中所述九裡香無菌葉片的獲得為取九裡香幼嫩的葉片，流水衝洗20min，超淨工作檯上0.1%的升萊處理8min,無菌水衝洗5次,吸水紙吸乾。
3.按照權利要求1所述的一種九裡香懸浮細胞的快速繁殖方法，其特徵在於:步驟(3)中九裡香懸浮細胞培養的條件為無菌抽濾後接種密度為8%，125ml藥瓶裝25ml培養基，轉速110r/min，培養周期為30d。
【文檔編號】A01H4/00GK104255478SQ201410463221
【公開日】2015年1月7日 申請日期:2014年9月12日 優先權日:2014年9月12日
【發明者】楊存 申請人:南京通澤農業科技有限公司