灑金珊瑚的快速繁殖方法

2023-05-26 03:20:16

專利名稱：灑金珊瑚的快速繁殖方法
技術領域：
本發明屬於植物離體組織培養方法技術領域，特別涉及植物灑金珊瑚的快速繁殖方法。
背景技術：
灑金珊瑚學名Aucuba japonica Thunb. Variegata D』 Ombr，別名花葉青木，金沙樹(中國植物志第56卷第10頁)，灑金東瀛珊瑚，黃葉日本桃葉珊瑚，灑金桃葉珊瑚，屬於山茱萸目，山茱萸科，桃葉珊瑚屬。灑金珊瑚樹形圓整，枝繁葉茂，葉片兩面油綠而富光澤，葉面黃斑點點，酷似灑金，黃綠相映，凌冬不凋，植於庭園、牆隅、假山、池邊、湖畔等庇蔭處，很有觀賞價值，是珍貴的耐陰觀葉樹種。灑金珊瑚莖、葉供藥用，可治燙火傷，果實對艾氏腹水癌細胞有抑制作用，葉還可作牛、羊的飼料(王春梅主編.綠化樹木選擇.延邊大學出版社，2000年04月第1版.第200-201頁)。灑金珊瑚對煙塵及大氣汙染抗性強，是城市及工礦區綠化的好材料(沈宗英，白皋主編.家庭養花必備手冊(室內篇).上海科學技術文獻出版社，2008. 1.)。灑金珊瑚還可以作為植物對「二甲苯」汙染的指示植物(桂懌霖.用灑金桃葉珊瑚監測室內裝修汙染.科學課.(小學版)2006年6月上半月.第討頁)。灑金珊瑚在長江流域不易收到種子(裘文達.花卉每月管理技術新編.中國農業出版社， 2006. 01第231頁)，採用種子播種，發芽較遲，苗期生長緩慢(李國龍.西充中學植物譜. 四川大學出版社，2009.4.第79頁)。灑金珊瑚繁殖常用的方法是高空繁殖一 4月份選用樹冠上生長1年以上的枝條，用刀進行環狀剝皮，環寬1. 5 2釐米，然後用手把糊狀土粘在傷口上形成一個土球，土球直徑4釐米(不能過大)，隨即用塑料布把土球全部包好， 再用塑料帶從下往上綁紮，上下口要紮緊。此後保持土球溼潤，對母株其他方面照常管理。 8月中旬從母體上剪下栽植，前後需要120多天。也有用嫩枝扦插取當年3月驚蟄萌發的葉芽，5月初扦插，9月中旬移栽，50天生根(夏雨書.灑金珊瑚的繁殖和栽培管理.中國花卉盆景.1994年第4期)等營養生殖方法繁殖，其繁殖方法受時間和其他條件限制。由於上述原因，灑金珊瑚播種繁殖的局限性，扦插的季節性限制等問題，一直阻礙著灑金珊瑚的快速大量繁殖，園林對灑金珊瑚的需求量大，灑金珊瑚的快速繁殖可以解決以上問題。現今灑金珊瑚的組織培養和快速繁殖的研究現查找不到相關資料。我們曾選用組織培養慣用的細胞分裂素6-BA與NAA或IBA等激素種類，以不同濃度組合配製而成的培養基對灑金珊瑚進行愈傷組織分化誘導，但未能使之分化。

發明內容
本發明的目的在於克服灑金珊瑚現有繁殖技術的不足，提供一種灑金珊瑚離體培養的快速繁殖方法。本發明的灑金珊瑚快速繁殖方法的技術方案為以灑金珊瑚的頂芽為外植體，經過消毒、滅菌、剝除外層鱗片葉，接種於啟動誘導培養基中，培養基組分為MS+6-BA 0.8 1. 2mg/L +ΝΑΑ0. 1 0. 3mg/L +蔗糖25 33g/L +瓊脂6 9g/L，啟動誘導培養形成無菌芽，將無菌芽形成的愈傷組織切塊兒接種到愈傷分化培養基中，其培養基組分為MS + TDZ 0. 3 0. 5mg/L + KT 0. 3 0. 6ml/L，愈傷分化培養出叢生芽，再將叢生芽接種到壯苗增殖培養基中，其培養基組分構成與啟動誘導培養基相同，進行壯苗增殖培養得到不完全苗，然後將不完全苗轉接到生根培養基中，培養基組分為1/2MS+NAA0. 2 0. %ig/L，進行生根培養形成生根苗，生根苗經過煉苗、移栽得到再生植株。頂芽消毒滅菌方法為挑選灑金珊瑚的頂芽，用小毛刷刷洗乾淨，自來水衝洗2 3h,用75%體積分數的酒精溶液浸泡2 3min，取出後用無菌水衝洗3 5次，再用0. 1%質量分數的升汞溶液浸泡6 8min，取出後用無菌水衝洗5次。啟動誘導培養、愈傷分化培養、壯苗增殖培養和生根培養條件均為pH值5. 7-5. 9， 溫度23 27 ,光照時間11 13h/d，光照強度2500LUX。啟動誘導培養時間為20 25d，愈傷分化培養時間20-25d，壯苗增殖培養時間 25-35d，生根培養時間^-32d。煉苗、移栽步驟為；將生根苗瓶口打開，讓苗與空氣接觸，控制溼度80 90%，溫度 20 22°C，時間3-5d，然後用流水洗去生根苗根部的培養基，用0. 1%質量分數的高錳酸鉀溶液浸泡1 2 min後取出，移栽到消毒的栽培基質中培養，栽培基質組分為泥炭土 蛭石 =2:1，得到再生植株。本發明技術方案通過以下步驟實現
步驟一，頂芽處理挑選灑金珊瑚的頂芽，用小毛刷刷洗乾淨，自來水衝洗2 池，用 75%體積分數的酒精溶液浸泡2 3min，取出後用無菌水衝洗3 5次，再用0. 1%質量分數的升汞溶液浸泡6 8min，取出後用無菌水衝洗5次，進行消毒滅菌處理。步驟二，啟動誘導培養剝除滅菌處理後的頂芽外部2-3層鱗片葉，接種到啟動誘導培養基中，培養基組分為MS+6-BA 0. 8 1. 2mg/L +ΝΑΑ0. 1 0. 15mg/L +蔗糖25 33g/ L+瓊脂6 9g/L，培養條件為pH值5. 7-5. 9，溫度23 27°C，光照時間11 13h/d，光照強度2500LUX，啟動誘導培養出無菌芽，培養時間20-25d。步驟三，愈傷分化培養將步驟二中獲得的無菌芽的愈傷組織切成0. 3 0. 5cm 的小塊，接種到愈傷分化培養基上，培養基組分為MS+ TDZ 0. 3 0. 5mg/L + KT 0. 3 0. 6ml/L，進行愈傷分化培養得到叢生芽，培養條件同步驟二，培養時間20-25d，每塊愈傷可得到2-4個叢生芽。步驟四，壯苗增殖培養將叢生芽轉入壯苗增殖培養基進行壯苗增殖培養，培養基組分構成和培養條件與啟動誘導培養相同，培養得到不完全苗，培養時間25-35d，較小的不完全苗可以切成1-2節的小段兒，再次接種於啟動誘導培養基中繼續增殖培養，以此反覆達到增殖效果。步驟五，生根培養將步驟四得到的壯苗轉入生根培養基中，培養基組分為 1/2MS+NAA0. 2 0. 4mg/L,進行生根培養，培養條件同步驟二，培養時間^-32d，得到生根苗。步驟六，煉苗、移栽將生根苗瓶口打開，使其與空氣接觸，保持溼度80 90%、溫度20 22°C，煉苗時間3-5d，然後用流水洗去生根苗基部的培養基，用0. 1%質量分數的高錳酸鉀溶液浸泡1 2 min後取出，移栽到消毒的栽培基質中培養，栽培基質為泥炭土 蛭石=2:1，培養得到再生植株，再生植株成活率達90%以上，從壯苗增殖培養到再生植株56-72d。使用本發明的組織培養方法對灑金珊瑚進行快速繁殖，打破了季節的限制，不受自然條件的影響，實現灑金珊瑚的工廠化生產；技術方案中從啟動誘導培養到壯苗增殖培養一步完成，與常規的誘導愈傷組織和分化芽的分化需要兩次培養的方法相比，減少了一個步驟，縮短了一個培養步驟的時間，達到快速繁殖的效果；叢生芽轉入壯苗增殖培養後， 較大的不完全苗直接轉入生根培養，較小的不完全苗切成1-2節的小段兒，再次接種於壯苗增殖培養基，繼續培養，可反覆得到大量的不完全苗，從壯苗增殖培養到再生植株僅需2 個月左右，實現了大量、快速獲得再生植株的目的；再生植株成活率達90%以上，而且具有再生植株變異小和遺傳穩定性高的優點，是實現灑金珊瑚快速、大量繁殖的一項行之有效的實用技術；本發明技術產生的愈傷組織還可作為灑金珊瑚轉基因的受體，應用本發明中愈傷分化、不完全苗、生根苗和再生植株的培養技術獲得灑金珊瑚轉基因植株。


圖1為頂芽圖片圖2為無菌芽圖片圖3為叢生芽圖片圖4為不完全苗圖片圖5為生根苗圖片。
具體實施例方式以下實施例對本發明作進一步說明。實施例1
步驟一，頂芽處理挑選灑金珊瑚的頂芽，用小毛刷刷洗乾淨，自來水衝洗池，用75%體積分數的酒精溶液浸泡2min，取出後用無菌水衝洗3次，再用0. 1%質量分數的升汞溶液浸泡8min，取出後用無菌水衝洗5次，進行消毒滅菌處理，附圖1為頂芽圖片。步驟二，啟動誘導培養剝除滅菌處理後的頂芽外部2-3層鱗片葉，接種到啟動誘導培養基中，培養基組分為MS+6-BA 0. 8mg/L +NAAO. lmg/L +蔗糖25g/L +瓊脂6g/L，培養條件為pH值5. 7，溫度M±1°C，光照時間llh/d，光照強度2500LUX，啟動誘導培養出無菌芽，培養時間25d，附圖2為無菌芽圖片。步驟三，愈傷分化培養將步驟一中獲得的無菌芽的愈傷組織切成0. 3cm的小塊， 接種到愈傷分化培養基上，培養基組分為MS+ TDZ 0. 3mg/L + KT 0. ;3ml/L，進行愈傷分化培養得到叢生芽，培養條件同步驟二，培養時間25d，每塊愈傷得到2個叢生芽，附圖3為叢生芽圖片。步驟四，壯苗增殖培養將叢生芽轉入壯苗增殖培養基進行壯苗增殖培養，培養基組分構成和培養條件與啟動誘導培養相同，培養得到不完全苗，培養時間35d，附圖4為不完全苗圖片。步驟五，生根培養將步驟四得到的壯苗轉入生根培養基中，培養基組分為 1/2MS+NAA0. ang/L，進行生根培養，培養條件同步驟二，培養時間32d，得到生根苗，附圖5 為生根苗圖片。
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步驟六，煉苗、移栽將生根苗瓶口打開，使其與空氣接觸，保持溼度80 85%、溫度20士 1 °C，煉苗時間5d，然後用流水洗去生根苗基部的培養基，用0. 1%質量分數的高錳酸鉀溶液浸泡2 min後取出，移栽到消毒的栽培基質中培養，栽培基質為泥炭土 蛭石=2:1， 培養得到再生植株，再生植株成活率90%，從壯苗增殖培養到再生植株72d。實施例2
步驟一，頂芽處理挑選灑金珊瑚的頂芽，用小毛刷刷洗乾淨，自來水衝洗池，用75%體積分數的酒精溶液浸泡3min，取出後用無菌水衝洗5次，再用0. 1%質量分數的升汞溶液浸泡6min，取出後用無菌水衝洗5次，進行消毒滅菌處理。步驟二，啟動誘導培養剝除滅菌處理後的頂芽外部2-3層鱗片葉，接種到啟動誘導培養基中，培養基組分為MS+6-BA1. 2mg/L+NAA0. 15mg/L +蔗糖33g/L +瓊脂9g/L，培養條件為PH值5. 9，溫度沈士 1°C，光照時間13h/d，光照強度2500LUX，啟動誘導培養出無菌芽，培養時間23d。步驟三，愈傷分化培養將步驟二中獲得的無菌芽的愈傷組織切成0. 4cm的小塊， 接種到愈傷分化培養基上，培養基組分為MS+TDZO. 4mg/L+KT0. 6ml/L，進行愈傷分化培養得到叢生芽，培養條件同步驟二，培養時間23d，每塊愈傷得到3個叢生芽。步驟四，壯苗增殖培養將叢生芽轉入壯苗增殖培養基進行壯苗增殖培養，培養基組分構成和培養條件與啟動誘導培養相同，培養得到不完全苗，培養時間31d，較小的不完全苗切成1-2節的小段兒，再次接種於壯苗增殖培養基中繼續增殖培養。步驟五，生根培養將步驟四得到的較大不完全苗轉入生根培養基中，培養基組分為1/2MS+NAA0. %ig/L，進行生根培養，培養條件同步驟二，培養時間30d，得到生根苗。步驟六，煉苗、移栽將生根苗瓶口打開，使其與空氣接觸，保持溼度85 90%、溫度21 士 1 °C，煉苗時間4d，然後用流水洗去生根苗基部的培養基，用0. 1%質量分數的高錳酸鉀溶液浸泡Imin後取出，移栽到消毒的栽培基質中培養，栽培基質為泥炭土 蛭石=2 1，培養得到再生植株，再生植株成活率93%，從壯苗增殖培養到再生植株65d。實施例3
步驟一，頂芽處理挑選灑金珊瑚的頂芽，用小毛刷刷洗乾淨，自來水衝洗池，用75%體積分數的酒精溶液浸泡2min，取出後用無菌水衝洗4次，再用0. 1%質量分數的升汞溶液浸泡7min，取出後用無菌水衝洗5次，進行消毒滅菌處理。步驟二，啟動誘導培養剝除滅菌處理後的頂芽外部2-3層鱗片葉，接種到啟動誘導培養基中，培養基組分為MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. lmg/L +蔗糖30g/L +瓊脂8g/L，培養條件為PH值5. 8，溫度25士 1°C，光照時間12h/d，光照強度2500Lux，啟動誘導培養出無菌芽，培養時間20d。步驟三，愈傷分化培養將步驟二中獲得的無菌芽的愈傷組織切成0. 5cm的小塊， 接種到愈傷分化培養基上，培養基組分為MS+TDZO. 5mg/L+KT0. 5ml/L，進行愈傷分化培養得到叢生芽，培養條件同步驟二，培養時間20d，每塊愈傷得到4個叢生芽。步驟四，壯苗增殖培養將叢生芽轉入壯苗增殖培養基進行壯苗增殖培養，培養基組分構成和培養條件與啟動誘導培養相同，培養得到不完全苗，培養時間25d，較小的不完全苗切成1-2節的小段兒，再次接種於壯苗增殖培養基中繼續增殖培養。步驟五，生根培養將步驟四得到的較大不完全苗轉入生根培養基中，培養基組分為1/2MS+NAA0. :3mg/L，進行生根培養，培養條件同步驟二，培養時間觀山得到生根苗。
步驟六，煉苗、移栽將生根苗瓶口打開，使其與空氣接觸，保持溼度80 85%、溫度21 士 1 °C，煉苗時間3d，然後用流水洗去生根苗基部的培養基，用0. 1%質量分數的高錳酸鉀溶液浸泡anin後取出，移栽到消毒的栽培基質中培養，栽培基質為泥炭土 蛭石=2 1，培養得到再生植株，再生植株成活率95%，從壯苗增殖培養到再生植株56d。
權利要求
1.灑金珊瑚快速繁殖方法，其特徵在於以灑金珊瑚的頂芽為外植體，經過消毒、滅菌、剝除外層鱗片葉，接種於啟動誘導培養基中，培養基組分為MS+6-BA 0.8 1.2mg/L +ΝΑΑ0. 1 0. 3mg/L +蔗糖25 33g/L +瓊脂6 9g/L，啟動誘導培養形成無菌芽，將無菌芽形成的愈傷組織切塊兒接種到愈傷分化培養基中，其培養基組分為MS + TDZ 0.3 0. 5mg/L + KT 0.3 0.6ml/L，愈傷分化培養出叢生芽，再將叢生芽接種到壯苗增殖培養基中，其培養基組分構成與啟動誘導培養基相同，進行壯苗增殖培養得到不完全苗，然後將不完全苗轉接到生根培養基中，培養基組分為1/2MS+NAA0. 2 0. %ig/L，進行生根培養形成生根苗，生根苗經過煉苗、移栽得到再生植株。
2.如權利要求1所述灑金珊瑚快速繁殖方法，其特徵在於頂芽消毒滅菌方法為一挑選灑金珊瑚的頂芽，用小毛刷刷洗乾淨，自來水衝洗2 池，用75%體積分數的酒精溶液浸泡2 3min，取出後用無菌水衝洗3 5次，再用0. 1%質量分數的升汞溶液浸泡6 8min， 取出後用無菌水衝洗5次。
3.如權利要求1所述灑金珊瑚快速繁殖方法，其特徵在於啟動誘導培養、愈傷分化培養、壯苗增殖培養和生根培養條件均為pH值5. 7-5. 9，溫度23 27 ,光照時間11 14h/ d，光照強度2500LUX。
4.如權利要求1所述灑金珊瑚快速繁殖方法，其特徵在於啟動誘導培養時間為20 25d，愈傷分化培養時間20-25d，壯苗增殖培養時間25-35d，生根培養時間^-32d。
5.如權利要求1所述灑金珊瑚快速繁殖方法，其特徵在於煉苗、移栽步驟為一將生根苗瓶口打開，讓苗與空氣接觸，控制溼度80 90%，溫度20 22°C，時間3_5d，然後用流水洗去生根苗根部的培養基，用0. 1%質量分數的高錳酸鉀溶液浸泡1 2 min後取出，移栽到消毒的栽培基質中培養，得到再生植株。
6.如權利要求5所述灑金珊瑚快速繁殖方法，其特徵在於栽培基質組分為泥炭土 蛭石=2:1。
全文摘要
一種灑金珊瑚快速繁殖方法，以灑金珊瑚的頂芽為外植體，經過滅菌接種於啟動誘導培養基中形成無菌芽，利用無菌芽形成的愈傷組織接種到增值分化培養基中形成叢生芽，叢生芽再接種到壯苗培養基中進行壯苗培養，然後轉接到生根培養基中進行生根誘導形成生根苗，生根苗經過煉苗得到再生植株。本發明的方法使灑金珊瑚的繁殖打破了季節的限制，快速誘導大量叢生芽，獲得再生植株，繁殖周期大大縮短，再生植株成活率高達90%以上，而且具有變異小和遺傳穩定性高的優點。
文檔編號A01H4/00GK102349448SQ20111026112
公開日2012年2月15日 申請日期2011年9月6日 優先權日2011年9月6日
發明者張先雲, 李長看, 胡述龍, 蔣素華 申請人:鄭州師範學院