唑來膦酸佐劑及含唑來膦酸佐劑的疫苗的製作方法
2023-05-26 03:44:06 4
唑來膦酸佐劑及含唑來膦酸佐劑的疫苗的製作方法
【專利摘要】本發明提供一種唑來膦酸佐劑及含唑來膦酸佐劑的疫苗，即每單份疫苗劑中含有10～50μg的唑來膦酸佐劑。本發明提供的唑來膦酸佐劑的毒、副作用小，在免疫劑量範圍內使用是安全可靠的，能夠有效的誘導抗原特異性的體液免疫應答，且其所誘導的體液免疫應答效果接近鋁佐劑，原料易得，性能穩定，可作為多種疫苗的佐劑。
【專利說明】唑來膦酸佐劑及含唑來膦酸佐劑的疫苗
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種唑來膦酸免疫佐劑，以及含唑來膦酸佐劑的疫苗,屬於免疫學【技術領域】。
【背景技術】
[0002]佐劑是一類與能免疫原性物質特異性或非特異性結合，誘發機體產生長期、有效的特異性免疫反應，發揮輔助作用的物質。佐劑能夠減少免疫原的用量，降低疫苗的生產成本。近年來依託現代生物技術和基因工程的迅猛發展，疫苗的研製取得了很大的進步，重組亞單位疫苗、抗獨特型抗體疫苗、核酸疫苗及合成肽疫苗等得到開發，但由於這些疫苗存在著分子小、免疫原性弱、靶向性差等因素，難以誘導機體產生有效免疫應答，因此需要應用佐劑來增強其免疫原性或增強宿主對抗原免疫應答。
[0003]鋁佐劑是第一個被批准並普遍用於人類的疫苗佐劑，其作用機理是形成抗原貯藏庫；產生顆粒性抗原來促進抗原提呈給免疫細胞；使抗原滯留，緩慢釋放，從而吸引活性淋巴細胞，激活補體系統。但多年實踐證明，鋁佐劑對於小分子量抗原增強免疫應答的效果不夠理想，可引起局部刺激症狀和不良反應，此外鋁鹽還可能導致神經退行性疾病的發生。隨著研究者對於佐劑作用機制的深入研究和分子生物學的發展，人們將會更有針對性的選擇合適的疫苗佐劑來預防和治療疾病，而佐劑的應用也將會更加安全高效，但目前可供使用的人用佐劑並不多。 因此開發研製新型的免疫佐劑有著重要的意義。
[0004]唑來膦酸為第三代的二磷酸鹽類藥物，主要用於治療骨質疏鬆、乳腺癌，多發性骨髓瘤，肺癌，前列腺癌以及多種實體瘤引起的骨轉移和高鈣血症。唑來膦酸能阻斷腫瘤細胞產生的各種各樣的刺激因子可誘導鈣離子的釋放，減慢骨轉移的發生和發展，可直接導致某些腫瘤細胞的死亡。近年來研究發現唑來膦酸不僅可以抑制腫瘤及骨相關疾病，還可以作用於機體免疫系統，如刺激Y S T淋巴細胞增殖，刺激樹突狀細胞(DCs)成熟。因此我們對唑來膦酸的佐劑效應進行了相關研究，發現該化合物具有較好的免疫增強效用，可以作為疫苗佐劑應用於多種疫苗。
【發明內容】
[0005]為解決現有疫苗佐劑存在毒副作用、價格昂貴等問題，本發明提供一種安全、有效、穩定的唑來膦酸佐劑以及含有唑來膦酸佐劑的疫苗。
[0006]本發明所述唑來膦酸在製備疫苗佐劑中的應用。
[0007]所述唑來膦酸為市購醫用產品，分子式為C5HltlN2O7P2 H2O,分子量為290.10，結構式如圖1所示,在人體中推薦劑量:為每200 μ L疫苗液中，唑來膦酸用量不超過2mg,優選10 ~50 μ g0
[0008]本發明提供的含有唑來膦酸佐劑的疫苗，其特徵在於每單份疫苗劑中含有10~50 μ g唑來膦酸。
[0009]本發明提供的含有唑來膦酸佐劑的疫苗經過下列方法製備:按每單份疫苗劑加入10~50 μ g唑來膦酸的量，在疫苗中加入唑來膦酸後，再加生理鹽水至100 - 200ul，按常規混合，得含有唑來膦酸佐劑的疫苗。
[0010]所述每單份疫苗劑為臨床或者動物實驗中使用的常規單次注射參考量。
[0011 ] 所述疫苗為常規A肝抗原、B肝抗原、狂犬病毒抗原中的一種。
[0012]唑來膦酸佐劑能顯著增強抗原特異性的體液免疫反應。
[0013]本發明與現有技術相比具有下列優點和效果:(1)唑來膦酸佐劑的毒、副作用小，在免疫劑量範圍內使用是安全可靠的；(2)唑來膦酸佐劑能夠有效的誘導抗原特異性的體液免疫應答，且其所誘導的體液免疫應答效果接近鋁佐劑；(3)唑來膦酸佐劑原料易得，為市售產品，性能穩定，可作為多種疫苗的佐劑。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0014]圖1為唑來膦酸分子結構式。
【具體實施方式】
[0015]下面結合實施例，進一步闡述本發明。這些實施例僅用於說明本發明而不用於限制本發明的範圍，下列實施例中未註明具體條件的實驗方法，按照常規條件或按照製造廠商所建議的條件。文中所述的較佳條件實施方法僅作示範之用。
[0016]實施例1
本發明提供的含有唑來膦酸佐劑的疫苗是:在每單份HAV抗原(即動物實驗中使用的單次注射劑量)中，加入IOyg唑來膦酸注射液，再加生理鹽水至200ul，按常規混合後，得含有唑來膦酸佐劑10 μ g、A肝抗原18`EU的A肝疫苗。
[0017]所述，HAV抗原為市購的抗原滴度為512EU/ml的18EU HAV抗原液，購自中國醫學科學院醫學生物學研究所，所述唑來膦酸為市購的唑來膦酸注射液，購自江蘇揚子江藥業集團有限公司。
[0018]實施例1所得含有唑來膦酸佐劑的A肝疫苗，其免疫試驗和效果如下:
A、免疫
將6 — 8周齡、體重18 — 22g清潔級雌性ICR小鼠分為唑來膦酸佐劑組、氫氧化鋁佐劑組、無佐劑組和空白組，共四組，每組8隻；其中，所用氫氧化鋁為常用的氫氧化鋁膠體佐劑，其製法參照《中國藥典(三部)》，(國家藥典委員會.北京:人民衛生出版社.2005:118-119)。
[0019]對唑來膦酸佐劑組:注射實施例1的含有唑來膦酸佐劑的A肝疫苗至小鼠體內，注射劑量為每隻小鼠200 μ L，其中:200 μ L疫苗中唑來膦酸為10 μ g，A肝抗原為18EU。
[0020]對氫氧化鋁佐劑組:注射氫氧化鋁佐劑與A肝疫苗液的混合物，注射劑量為每隻小鼠200 μ L，其中:200 μ L疫苗中氫氧化鋁佐劑為0.lmg，A肝抗原為18EU。
[0021]無佐劑組:注射A肝疫苗液，注射劑量為每隻小鼠200μ L，其中A肝抗原為18EU。
[0022]空白組:注射生理鹽水，注射劑量為每隻小鼠200μ L。
[0023]免疫方案:在第O周經腹部皮下注射免疫小鼠，免疫次數為一次。
[0024]B、ELISA檢測血清抗一A肝抗原IgG抗體水平
在第O周免疫後第4、8、12、16周，採集小鼠尾靜脈血，分離血清，ELISA檢測血清抗一A肝抗原IgG水平，按KPL公司生產的通用ELISA\試劑盒按試劑盒說明書進行操作。
[0025]C、數據分析
對所獲得的實驗數據以SPSS11.5統計軟體進行單因素方差分析，以P < 0.05為差異的統計學意義。
[0026]表1為使用實施例1中16周內，各實驗組小鼠血清抗-A肝抗原IgG抗體效價。
[0027]表1
【權利要求】
1.唑來膦酸在製備疫苗佐劑中的應用。
2.如權利要求1所述的唑來膦酸在製備疫苗佐劑中的應用，其特徵在於所述唑來膦酸為化合物Zoledronic Acid，其化學名稱為[1-羥基-2- (1-咪唑基)乙叉]二磷酸-水合物，分子式為C5HltlN2O7P2 H2O,分子量為290.10。
3.一種含有唑來膦酸佐劑的疫苗，其特徵在於每單份疫苗劑中含有10~50 μ g的唑來勝Ife佐劑。
4.如權利要求3所述的含有唑來膦酸佐劑的疫苗，其特徵在於經過下列方法製備:按每單份疫苗劑加入10~50 μ g唑來膦酸的量，在疫苗中加入唑來膦酸後，再加生理鹽水至100 - 200ul，按常規混合，得含有唑來膦酸佐劑的疫苗。
【文檔編號】A61K39/39GK103768595SQ201410039446
【公開日】2014年5月7日 申請日期:2014年1月27日 優先權日:2014年1月27日
【發明者】王海漩, 李虹娟, 胡凝珠, 胡云章, 李彥涵, 李建芳 申請人:中國醫學科學院醫學生物學研究所