樹脂串聯層析柱分離菸草多種類糖苷的方法
2023-05-26 03:27:21 2
樹脂串聯層析柱分離菸草多種類糖苷的方法
【專利摘要】本發明公開了一種樹脂串聯層析柱分離菸草多種類糖苷的方法，其特徵在於：包含以下步驟：（1）裝柱：三菱HP20樹脂裝柱後甲醇浸泡，水洗至無味；（2）減壓過濾：將烤菸超臨界總提物與水充分攪拌混合，減壓過濾；（3）萃取：用水層與萃取液按體積比1:2的比例進行萃取，然後把萃取後的水層進行減壓旋蒸；（4）過樹脂：用水層上樣到三菱HP20樹脂，待其充分吸附後以PH=4.5鹽酸酸水洗脫至無生物鹼、無色，用甲醇洗脫，將其濃縮去除甲醇後用水溶解即得糖苷初提物；（5）過層析柱：把糖苷初提物採用幹法或溼法上樣先選擇過正相矽膠柱，用氯仿與甲醇的混合物衝洗正相矽膠柱，然後根據不同分離段薄層展析矽膠板上斑點的位置及形狀情況確定合併分離段以及選擇過反相矽膠或凝膠柱。
【專利說明】樹脂串聯層析柱分離菸草多種類糖苷的方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種樹脂串聯層析柱分離菸草多種類糖苷的方法。
【背景技術】
[0002]菸草香味是菸草品質的重要體現。因此對於菸草香味成分的分離、鑑定和分析一直以來都是菸草研究的重要領域，其中潛香物質結合態糖苷就是菸草香氣組成的重要部分。糖苷是單糖或低聚糖的半縮醛羥基和另一分子中的羥基、氨基、硫羥基等失水而產生的化合物，當配基為香氣成分時形成的物質即為糖苷。糖苷類化合物是在菸葉生長發育過程中形成的，在自然狀態下雖不具揮發性或揮發性很低，但通過分解、調製、陳化、醇化、加工或燃燒能釋放出致香成分，因此糖苷類物質的組成和含量對菸葉和煙氣香氣質量有重要影響。
[0003]目前分離菸草中糖苷的方法主要分為三大類:第一類方法是提取的菸葉浸膏經水溶解後直接過樹脂，然後再用水層進行有機溶劑萃取，該方法選擇先過樹脂再萃取，則水層因雜質太多不利於樹脂對糖苷的充分吸附；第二類方法是提取的菸葉浸膏經水溶解後，先用有機溶劑萃取，再過不同種類的樹脂，該方法提取物經有機溶劑萃取後水層直接上樣進樹脂，不利於除有機溶劑環節，不利於糖苷的充分吸附。
[0004]目前在分離菸葉糖苷類物質的方法中，均存在不利於去除有機溶劑、不利於糖苷類物質充分吸附等缺點，且尚無對樹脂柱與層析柱之間以及層析柱之間的先後順序做出過詳細分析論證，也沒有報導過糖苷富集過程中層析柱的成本核算和分離效率分析。針對這些缺點，分離富集菸葉中的糖苷類物質並建立相關的檢測方法，對於分析菸葉中重要糖苷類物質含量、製備菸葉重要潛香物質具有十分重要的現實意義。
【發明內容】
[0005]本發明要解決的技術問題是:提供一種成本低廉、高效快速分離菸草多種類糖苷的方法，以解決現有技術中樹脂對糖苷的充分吸附不充分、分離成本高的問題。
[0006]本發明的技術方案是:一種樹脂串聯層析柱分離菸草多種類糖苷的方法，其特徵在於:包含以下步驟:
(1)裝柱:三菱HP20樹脂裝柱後甲醇浸泡，水洗至無味；(2)減壓過濾:將烤菸超臨界總提物與水充分攪拌混合，減壓過濾；
(3)萃取:用水層與萃取液按體積比1:2的比例進行萃取，然後把萃取後的水層進行減壓旋蒸；
(4)過樹脂:用水層上樣到三菱HP20樹脂，待其充分吸附後以？訴45鹽酸酸水洗脫至無生物鹼、無色，用甲醇洗脫，將其濃縮去除甲醇後用水溶解即得糖苷初提物；
(5)過層析柱:把糖苷初提物採用幹法或溼法上樣先選擇過正相矽膠柱，用氯仿與甲醇的混合物衝洗正相矽膠柱，然後根據不同分離段薄層展析矽膠板上斑點的位置及形狀情況確定合併分離段以及選擇過反相矽膠或凝膠柱。[0007]步驟(2)中烤菸超臨界總提物與水的混合比例為體積比1:10。所述萃取液為正己烷:乙醚體積比1:1混合而成。
[0008]本發明的有益效果:
一、水層中混有的有機溶劑與水及溶於水中的糖苷不溶而相互排斥，不利於樹脂對水層中糖苷等物質的吸附截留，在過三菱即20樹脂之前將其減壓旋蒸除去夾雜在水層中的有機溶劑，削弱因相互不溶的排斥力，使得糖苷完全溶於水後更易進入三菱即20樹脂的空腔內，達到最大限度的保留了糖苷種類的齊全。
[0009]二、在層析柱的順序上選擇先過正相矽膠柱，然後再過反相矽膠或凝膠柱。這樣可以將更多的雜質充分的吸附在便宜的正相矽膠柱上，從而實現保護昂貴反相矽膠或凝膠柱的目的。這樣節約了成本。糖苷在菸草中的含量極低，加上糖苷屬於極性分子，所以在同等柱床體積下，優先選擇正相矽膠柱因其便宜且能吸附分離含量極低的極性分子糖苷，可以實現一次上樣量最大化。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0010]圖1為總提物核磁共振圖譜；
圖2為三菱！！？20樹脂分離後糖苷類物質核磁共振圖譜；
圖3為三菱!！？20樹脂分離後薄層展析圖，其中1、暗箱三用紫外線分析儀；2、碘缸顯色；3、3萘酚糖苷顯色劑；4、生物鹼顯色劑；
圖4為層析柱分離後糖苷類物質核磁共振圖譜；
圖5為本發明的工藝流程圖。`【具體實施方式】
[0011]1、裝柱:三菱！！？20樹脂裝柱後甲醇浸泡48小時，水洗至無味。
[0012]2、減壓過濾:將烤菸超臨界總提物與水按1:10的比例充分攪拌混合，減壓過濾。
[0013]從圖1看出，總提物中化學成分較為複雜，從核磁圖譜中，能看出含有生物鹼類，糖苷類，萜類，脂肪酸類物質的4吸收特徵峰。
[0014]3、萃取:用水層與萃取液(正己烷:乙醚=1:1)按1:2的比例進行萃取，直至萃取液無色為止，最後把萃取後的水層進行減壓旋蒸，直至水層中的有機溶劑蒸發完畢。
4、過樹脂:用水層上樣到三菱!！？20樹脂，控制流速以快速滴落為宜，待其充分吸附後以？訴4 5鹽酸酸水洗脫至無生物鹼、無色，用甲醇洗脫，將其濃縮去除甲醇後用水溶解即得糖苷初提物，薄層展析甲醇:丙酮=1:2.採用丙酮、甲醇、水交替的衝洗樹脂至白色，最後用水洗至無色無味後加幾滴甲醇待下次使用。
[0015]從圖2和圖3對比可以看出，兩圖得出的結果相互印證，三菱!！？20樹脂分離後的混合物糖苷特徵吸收峰得以加強且雜質峰減少。低場區生物鹼類物質的核磁共振吸收基本上消失，可以判斷，生物鹼類成分與糖苷類成分分離程度較好。
[0016]5、過層析柱:把糖苷初提物採用幹法或溼法上樣先選擇過正相矽膠柱，用不同比例的氯仿與甲醇的混合物衝洗正相矽膠柱，然後再根據不同分離段薄層展析斑點情況確定合併分離段以及選擇過反相矽膠或凝膠柱。過反相矽膠或凝膠柱的操作流程與正相矽膠類似。[0017]在圖4上已經看出，處於糖苷特徵吸收峰位置的峰形單一，吸收強度大。說明分離效果良好，能 夠滿足解析化合物結構的需要。
【權利要求】
1.一種樹脂串聯層析柱分離菸草多種類糖苷的方法，其特徵在於:包含以下步驟: (1)裝柱:三菱即20樹脂裝柱後甲醇浸泡，水洗至無味；(2)減壓過濾:將烤菸超臨界總提物與水充分攪拌混合，減壓過濾； (3)萃取:用水層與萃取液按體積比1:2的比例進行萃取，然後把萃取後的水層進行減壓旋蒸； (4)過樹脂:用水層上樣到三菱!！？20樹脂，待其充分吸附後以邱=4.5鹽酸洗脫至無生物鹼、無色，用甲醇洗脫，將其濃縮去除甲醇後用水溶解即得糖苷初提物； (5)過層析柱:把糖苷初提物採用幹法或溼法上樣先選擇過正相矽膠柱，用氯仿與甲醇的混合物衝洗正相矽膠柱，然後根據不同分離段薄層展析矽膠板上斑點的位置及形狀情況確定合併分離段以及選擇過反相矽膠或凝膠柱。
2.根據權利要求1所述的一種樹脂串聯層析柱分離菸草多種類糖苷的方法，其特徵在於:^^(2)中烤菸超臨界總提物與水的混合比例為體積比1:10。
3.根據權利要求1所述的一種樹脂串聯層析柱分離菸草多種類糖苷的方法，其特徵在於:所述萃取液為正己烷:乙醚體積比1:1混合而成。
【文檔編號】C07H1/08GK103833798SQ201310636152
【公開日】2014年6月4日 申請日期:2013年12月3日 優先權日:2013年12月3日
【發明者】耿召良, 葛永輝, 鄧加德, 張婕, 向章敏, 周淑平 申請人:貴州省菸草科學研究院