某些苯基萘基化合物在治療多發性硬化症(ms)中保護神經元和少突膠質細胞的用途的製作方法

2023-05-26 18:04:06

專利名稱：某些苯基萘基化合物在治療多發性硬化症(ms)中保護神經元和少突膠質細胞的用途的製作方法
技術領域：
本發明涉及治療多發性硬化症的方法。具體而言，本發明涉及使用式I化合物及其異構體、外消旋物、對映異構體、它們的鹽以及含有它們的藥劑來保護多發性硬化症患者的神經元和/或少突膠質細胞。
背景技術：
多發性硬化症(MS)是自身免疫性疾病，它導致中樞神經系統(CNS)髓磷脂損失、少突膠質細胞死亡以及軸突破壞，從而引起嚴重的功能缺陷。MS在女性中的發病率比男性高2至3倍(Duquette等人，1992.Can.J.Neurol.Sci.19466-71.)，雌激素可在妊娠中三月和末三月降低疾病的嚴重程度(Confavreux等人，1998.N Eng J Med 339285-291)，但據報導，出現過在分娩後MS臨床症狀加劇的情況(Evron等人，1984.Am.J.Reprod.Immunol.5109-113；Mertin和Rumjanek，1985，J.Neurol Sci.6815-24；Grossman，1989.J.Steroid Biochem.34241-245；Confavreux等人，1998，N.Engl.J.Med.339285-291)。採用雌三醇進行的治療減小了釓增強的病灶損害以及磁共振成像(MRI)容積(Voskuhl和Palaszynski，2001，Neuroscientist.7(3)258-270；Sicotte等人，2002，Ann Neurol.52421-428)。此外，雌激素在齧齒動物EAE(實驗性變態反應性腦脊髓炎)模型中引起免疫反應移位、臨床症狀改善以及髓磷脂形成增加(Curry和Heim，1966，Nature 811263-1272；Kim等人，1999，Neurology.521230-1238；Ito等人，2002，Clin Immunol.102(3)275-282)。據報導，雌激素保護少突膠質細胞免受細胞毒性誘導的細胞死亡(Takao等人，2004.J.Neurochem.89660-673)；並據報導，17β-雌二醇(E2)促進少突膠質細胞上多重的、相互關聯過程的進行(Zhang等人，2004，J.Neurochem.89674-684)。
越來越多的證據顯示，雌激素通過增強細胞存活、軸突生長、再生反應、突觸傳遞以及神經形成在對變性疾病和損傷的響應中起了直接的保護作用。在中樞神經系統內，雌激素合成增加並且在損傷部位雌激素受體表達增強(Garcia-Segura等人，2001，Prog.in Neurobiol.6329-60)；雌激素介導的細胞保護作用已在許多神經變性體外模型中被確定，包括β-澱粉狀蛋白誘導的細胞毒性、興奮性神經毒性以及氧化應激(Behl等人，1995，Biochem.Biophys.Res.Commun.216，473-482；Goodman等人，1996.J.Neurochem.661836-1844；Green等人，1997，J.Neurosci.17511-515；Behl等人，1999.Trends Pharmacol.Sci.20441-444)。最新的臨床研究表明，雌激素替代療法也可能降低風險，並延遲阿爾茨海默症和精神分裂症的發作和發展。(綜述參見Garcia-Segura等人，2001，Prog.in Neurobiol.6329-60)。能穿過血腦屏障的親脂性激素E2維持了腦系統在下起作用(sub-serving)的覺醒、注意力、情緒以及認知能力(Lee和McEwan，2001.Annu.Rev.Pharmacol. Toxicol.41569-591)。此外，天然雌激素和合成的選擇性雌激素受體調節劑(SERM)如他莫昔芬均減少缺血性中風造成的神經損傷，而E2或雷洛昔芬則保護神經元抵抗1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氫吡啶誘導的毒性(Callier等人，2001，Synapse 41131-138；Dhandapani和Brann，2003，Endocrine 2159-66)。
雌激素的神經保護作用通過bcl-2表達的調控、cAMP和促細胞分裂劑激活的激酶信號傳導途徑的激活、細胞內鈣穩態的調控、抗氧化劑活性的增強和/或可作為激素調節性轉錄因子的雌激素受體(ER)的激活而介導(Mangelsdorf等人，1995.Cell 83835-839；Katzenellenbogen等人，1996.Mol.Endocrinol.10119-131；Singer等人，1996.Neurosci.Lett.21213-16；Singer等人，1998.Neuroreport 92565-2568；Singer等人，1999.Neurosci.Lett.21213-16；Weaver等人，1997.Brain Res.761338-341；Watters和Dorsa，1998.J.Neurosci.186672-6680；Singh等人，1999.J.Neurosci.191179-1188；Alkayed等人，2001.J.Neurosci.217543-7550；Garcia-Segura等人，2001.Prog.in Neurobiol.6329-60)。兩種經鑑定的雌激素受體ERα和ERβ均屬於I類激素受體家族，該家族作為核轉錄因子起作用。ERα和ERβ(mRNA或蛋白質形式)表達於各種神經細胞內，包括施萬細胞(即周圍神經系統的髓磷脂形成細胞)、中樞神經系統神經元、星形膠質細胞以及少突膠質細胞(Miranda和Toran-Allerand，1992；Santagati等人，1994；Kuiper等人，1996；Mosselman等人，1996；Thi等人，1998；Platania等人，2003)。在少突膠質細胞(即在MS中損失的中樞神經系統中髓磷脂形成細胞)中，ERα被報導為是細胞核的，而ERβ是細胞質的，並可容易地檢測到細胞質和髓鞘內的體內免疫反應性(Zhang等人，2004.J Neurochem 89674-684)。最近，Arvanitis等人，2004(J Neurosci Res.75603-613)報導了存在於分離的CNS髓磷脂、脊髓和腦部的髓鞘以及少突膠質細胞的細胞膜中的與ERβ類似的ER。
藉助於為ERβ的配體的小分子或在不同於傳統ERα的位點上優先模擬雌激素作用的化合物來模擬和/或增強雌激素在MS中的有益作用有可能在MS的治療中有益處，因為小分子將避免不希望的由ERα介導的雌激素的「激素」作用。這些其它ER位點可包括最近鑑定的ER-X，其在神經元中被鑑定出並在發育上受到調控(Toran-Allerand 2004，Endocrinology 1451069-1074)；或GPR30，它允許雌激素觸發將細胞表面信號與基因轉錄整合的不同途徑(Kanda和Watanabe 2003，J.Invest.Derm.121771-780)。
這些化合物也可用於治療或預防其它脫髓鞘疾病、包括沙-馬-圖病、佩-梅病、腦脊髓炎、視神經脊髓炎、腎上腺腦白質營養不良、吉-巴綜合症以及其中髓磷脂形成膠質細胞(少突膠質細胞或施萬細胞)被破壞的疾病、包括脊髓損傷、神經病和神經損傷的發展。
發明概述本發明的主題是某些聯苯基化合物在治療多發性硬化症中的新用途。
某些化合物可用於保護多發性硬化症患者的少突膠質細胞和神經元，所述化合物包括5-氯-6-(4-羥基苯基)-2-萘酚
和6-(4-羥基-苯基)-2-萘甲醇 發明詳述本發明還涉及上述化合物與無機酸或有機酸形成的加成鹽。
含有一個或多個不對稱中心的化合物具有異構形式；這些異構體和混合物構成了本發明的一個部分。這些化合物的外消旋物和對映異構體也構成了本發明的一個部分。
含有一個或多個不對稱中心的上述化合物具有異構形式；這些異構體和混合物構成了本發明的一個部分。這些化合物的外消旋物和對映異構體也構成了本發明的一個部分。
本發明的方法中所用的化合物可以通過本領域已知的合成方法、例如美國專利US 6,147,119中公開的那些來製備。
本文所用的術語具有本說明書所定義的含義。
a)「可藥用鹽」指任何可能用本發明的化合物製備的酸加成鹽或鹼加成鹽。
「可藥用的酸加成鹽」指鹼性式I化合物的任意無毒性的有機或無機酸加成鹽。可形成適宜鹽的解釋性無機酸包括鹽酸、氫溴酸、硫酸和磷酸以及酸式金屬鹽，例如正磷酸氫二鈉和硫酸氫鉀。可形成適宜鹽的解釋性有機酸包括一元、二元和三元羧酸。這類酸的解釋性實例有乙酸、乙醇酸、乳酸、丙酮酸、丙二酸、琥珀酸、戊二酸、富馬酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、抗壞血酸、馬來酸、羥基馬來酸、苯甲酸、羥基苯甲酸、苯乙酸、肉桂酸、水楊酸、2-苯氧基苯甲酸、對甲苯磺酸，以及磺酸如甲磺酸和2-羥基乙磺酸。可以形成一元酸鹽或二元酸鹽，這類鹽可以以水合形式或基本上無水的形式存在。通常這些化合物的酸加成鹽較易溶於水和各種親水有機溶劑，並且與它們的游離鹼形式相比，通常顯示出較高的熔點。
「可藥用的鹼加成鹽」指式(I)化合物的無毒性的有機或無機鹼加成鹽。其實例有鹼金屬或鹼土金屬氫氧化物，例如氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鈣、氫氧化鎂或氫氧化鋇；氨以及脂肪族、脂環族或芳香族有機胺，例如甲胺、三甲胺和甲基吡啶。選擇適當的鹽可以是重要的，以便使得酯不發生水解。對適當鹽的選擇標準是本領域技術人員已知的。
b)「患者」指溫血動物，例如大鼠、小鼠、狗、貓、豚鼠以及靈長類如人類。
c)「治療」指任何形式的治療，包括但不限於暫時地或永久地減輕症狀、消除症狀的起因，或者預防或減慢症狀的出現和所述疾病或病症的發展。
d)「治療有效量」指有效治療所述疾病或病症的化合物的量。
e)「可藥用載體」是無毒性的溶劑、分散劑、賦形劑、佐劑，或與本發明的化合物混合以形成醫藥組合物、即能夠施用於患者的劑量形式的其它材料。這類載體的一個實例是通常用於胃腸道外給藥的可藥用油。
f)「立體異構體」是對區別僅在於原子空間取向不同的單獨分子的所有異構體的通稱。它包括鏡像異構體(對映異構體)、幾何異構體(順式或反式)、以及具有一個以上手性中心的化合物的相互不為鏡像的異構體(非對映異構體)。
在治療患有上述病症的患者時，式(I)化合物可以通過任意使得治療有效量的化合物是生物可利用的形式或模式施用，包括經口、舌下、含服、皮下、肌內、靜脈內、透皮、鼻內、直腸、局部等形式或模式。根據針對所治療病症或疾病而選擇的化合物的具體性質、疾病階段、患者的狀況以及其它有關情況，製藥領域的熟練技術人員能夠決定恰當的給藥形式和模式。例如參見Remington’s Pharmaceutical Sciences，第18版，Mack出版公司(1990)，其引入本文作為參考。
本發明的組合物可經口施用，例如以片劑、錠劑、膠囊、酏劑、混懸劑、溶液、糖漿、糯米紙囊劑、咀嚼膠等形式施用，並且可以含有一種或多種下列佐劑粘合劑，例如微晶纖維素、西黃蓍膠或明膠；賦形劑，例如澱粉或乳糖；崩解劑，例如海藻酸、Primogel或玉米澱粉等；潤滑劑，例如硬脂酸鎂或Sterotex；助流劑，例如膠體二氧化矽；以及甜味劑，例如蔗糖或糖精；或矯味劑，例如薄荷、水楊酸甲酯或橙味香精。當劑量單位形式是膠囊時，其除了上述類型的材料外還可含有液體載體，例如聚乙二醇或脂肪油。其它單位劑量形式還可含有能改變劑量單位的物理形式的其它各種材料，例如包衣。因此，片劑或丸劑可包有糖衣、蟲膠或其它腸包衣材料。除了本發明的化合物外，糖漿劑還可含有作為甜味劑的蔗糖以及某些防腐劑、染劑、色素和矯味劑。
溶液或混懸液也可包含一種或多種下列佐劑無菌稀釋劑，例如注射用水、生理鹽水、非揮發性油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它合成溶劑；抗菌劑，例如苄醇或尼泊金甲酯；抗氧化劑，例如抗壞血酸或亞硫酸氫鈉；螯合劑，例如乙二胺四乙酸；緩衝劑，例如乙酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽；以及調節滲透壓的物質，例如氯化鈉或葡萄糖。胃腸道外製劑可被封在安瓿瓶、一次性注射器或多劑量小瓶內。
根據具體的化合物、病症的嚴重程度、患者、配方、患者所患的其它潛在疾病以及可共同施用於患者的其它藥物，本發明的化合物呈現其治療能力的劑量範圍將有所不同。一般而言，式(I)化合物將於約0.001mg/kg患者體重/日至約100mg/kg患者體重/日的劑量範圍呈現其治療活性。
本文所討論的所有出版物和專利的內容由此引入本文作為參考。
下述實施例解釋說明而非限制本發明
本發明的產品的藥理學研究結合分析法採用Panvera’s螢光偏振競爭分析試劑盒(產品目錄號P2698和P2700)測試了許多化合物與ERα和ERβ的結合。簡言之，使ERα或ERβ在冰上從-80℃開始融化。對於ERα和ERβ分別採用15/1和10/1的摩爾比形成雌激素受體和螢光配體(Fluormone TM)的複合物(2X複合物)。在分析緩衝液中進行測試化合物的系列稀釋，在黑色96孔板上將50μl 2X受體-配體的複合物加入50μl化合物溶液中開始分析法。在含有50μl緩衝液和50μl 2X受體-配體複合物的孔中測得0％競爭(理論最大偏振值)。將板輕搖後於室溫在黑暗中溫育。反應開始後7小時內，採用FARCyte螢光讀數儀(Amersham)讀取偏振值(mP)，激發波長和發射波長分別為485nm和535nm。採用非線性回歸法分析數據，採用GraphPad Prism軟體確定IC50值。使用雌二醇作為參比化合物。
少突膠質細胞毒性分析從出生2-3天後的大鼠(Sprague Dawley)的大腦獲取原代大鼠少突膠質細胞祖細胞。移去腦脊膜，以機械方式剝離組織。將細胞鋪在T75燒瓶中並用DMEM+10％FBS餵養。
通過機械分離法從星形膠質細胞單層收集濃縮的OLP，在補充有促細胞分裂劑PDGF-AA(10ng/ml)和FGF-2(10ng/ml)的無血清培養基(SFM)中擴展。
為了產生成熟的少突膠質細胞，在培養24小時後將祖細胞轉移至補充有IGF-1(10ng/ml)的SFM中，使細胞在這些條件下生長7天，然後進行實驗分析。
將細胞鋪在96孔板上，每孔10,000個細胞。將培養基換為新鮮培養基，細胞用化合物預處理1小時。加入毒素，得到下列終濃度Sin-110mM；喜樹鹼10μM。
24小時後，移去培養基並採用Promega cytotox 96試劑盒(產品目錄號G1780)分析LDH活性。計算結果，以對抗毒素誘導的毒性的保護％表示。
評估了這些化合物抵抗毒性物質如SIN-1(3-嗎啉代基斯德酮亞胺(sydnonimine)，產生過氧亞硝酸根離子)和喜樹鹼造成細胞死亡的保護功效。體外評估的靶細胞是齧齒動物少突膠質細胞祖細胞的初級培養物以及它們的成熟副本。
權利要求
1.通過保護他們的神經元或少突膠質細胞治療多發性硬化症患者的方法，該方法包括給多發性硬化症患者施用治療有效量的選自5-氯-6-(4-羥基苯基)-2-萘酚和6-(4-羥基-苯基)-2-萘甲醇的化合物、其異構體、外消旋物和對映異構體以及所述化合物與無機酸或有機酸形成的鹽，或者相同或不同且表示氫原子或含有1至4個的烷基。
2.權利要求1的方法，其中所述有效量每日施用，為約0.001至約100mg/kg患者體重/日。
全文摘要
某些聯苯基化合物，包括5－氯－6－(4－羥基苯基)－2－萘酚和6－(4－羥基苯基)－2－萘甲醇，可用於為多發性硬化症患者的少突膠質細胞和神經元提供保護。
文檔編號A61P25/28GK101094665SQ200580045831
公開日2007年12月26日 申請日期2005年12月14日 優先權日2005年1月4日
發明者J·梅裡爾, S·弗內斯, W·佩特柯, F·維爾茨－布魯格, K·尚德羅斯 申請人:安萬特藥物公司