一組糖基轉移酶及其應用的製作方法

2023-05-26 02:50:46

一組糖基轉移酶及其應用的製作方法
【專利摘要】本發明涉及一組糖基轉移酶及其應用。具體地，提供了糖基轉移酶gGT25、gGT13、gGT30、gGT25-1、gGT25-3、gGT25-5，gGT29、gGT29-3、gGT29-4，gGT29-5，gGT29-6，gGT29-7、3GT1、3GT2、3GT3、3GT4及其衍生多肽在萜類化合物糖基化催化及新皂苷合成中的應用，其中，糖基轉移酶能特異和高效地催化四環三萜化合物底物的C-20位和/或C-6位和/或C-3的羥基糖基化，和/或將來自糖基供體的糖基轉移到四環三萜類化合物的C-3位的第一個糖基上以延伸糖鏈。本發明糖基轉移酶還可應用於構建人工合成稀有人參皂苷及多種新人參皂苷及其衍生物。
【專利說明】一組糖基轉移酶及其應用
【技術領域】
[0001]本發明涉及生物技術和植物生物學領域，具體地，本發明涉及一種糖基轉移酶及其應用。
【背景技術】
[0002]人參皂苷是從人參及其同屬植物(如三七、西洋參等)中分離到的皂苷的總稱，屬於三萜類皂苷，是人參中的主要有效成份。目前，已經從人參中分離出了至少60種皂苷，其中一些人參皂苷被證實具有廣泛的生理功能和藥用價值:包括抗腫瘤、免疫調節、抗疲勞、護心、護肝等功能。
[0003]從結構上來看，人參皂苷是皂苷元經過糖基化後形成的生物活性小分子。人參皂苷的皂苷元只有有限的幾種，主要是達瑪烷型的原人參二醇和原人參三醇，以及齊墩果烷酸。近年來，人們又從三七中分離到了新的皂苷元，25-OH-Pro和25-0CH3-Pro，這些新的皂苷元都具有非常好的抗腫瘤活性。
[0004]皂苷元通過糖基化後，可以提高水溶性，並產生出不同的生理活性。原人參二醇型皂苷的糖鏈一般結合在 皂苷元的C3 (和)或C20的羥基上。原人參三醇皂苷與原人參二醇皂苷相比，在C6位多一個羥基，目前發現的原人參三醇型皂苷都是在C6 (和)或C20的羥基上結合糖基化，在C3上結合糖基的原人參三醇型皂苷尚未見報導。糖基可以是葡萄糖、鼠李糖、木糖、和阿拉伯糖。
[0005]不同的糖基結合位點，糖鏈組成和長度使人參皂苷在生理功能和藥用價值上產生極大的差異。例如，人參皂苷Rbl，Rd和Re都是以原人參二醇為皂苷元的皂苷，它們之間的差別只是糖基修飾上的差別，但它們之間的生理功能就有很多的差別。Rbl有穩定中心神經元系統的功能，而Re的功能卻是抑制中心神經元系統的功能，Rbl的生理功能非常廣泛，而Rd卻只有非常有限的幾種功能。
[0006]人參皂苷皂苷元和皂苷之間的結構多樣性還體現在空間立體結構上，雖然四環三萜的骨架上存在很多的手性碳原子，但是能夠產生空間立體結構的主要是在C20位上。幾乎每種人參皂苷和皂苷元都存在C20位的差向異構體。在人參中，C20位S構型的人參皂苷和皂苷元含量要遠遠高於C20位R構型的人參皂苷和皂苷，所以一般情況下所說的人參皂苷和皂苷元都指的C20位S構型的人參皂苷和皂苷元。但是，人參皂苷和皂苷元C20位的差向異構體具有明顯不同的生理活性。例如，S構型人參皂苷Rh2(3-O-0 -(D-glucopyranosyl) -20 (S) -protopanaxadiol)可以明顯抑制前列腺癌細胞,但是R構型人參阜苷Rh2(3-0- β - (D-glucopyranosyl) -20 (R) -protopanaxadiol)的抑制效果卻很差。R 構型人參皂苷Rh2可以選擇性地抑制破骨細胞的生成且沒有任何細胞毒性作用，但是S構型人參皂苷Rh2抑制破骨細胞生成的作用很弱，但是對破骨細胞卻有很強的細胞毒性作用。並且S構型和R構型人參皂苷Rh2對於P-糖蛋白的調節作用也存在很大的差異。
[0007]糖基轉移酶的功能是將糖基供體(核苷二磷酸糖，例如m)P-葡萄糖)上的糖基轉移到不同的糖基受體上。根據胺基酸序列的不同，目前糖基轉移酶已有94個家族。目前已測序的植物基因組中，發現了上百種以上不同的糖基轉移酶。這些糖基轉移酶的糖基受體包括糖、脂、蛋白、核酸、抗生素和其它的小分子。在人參中參與皂苷糖基化的糖基轉移酶，其作用是把糖基供體上的糖基轉移到皂苷元或者苷元的C-3、C-6或C-20的羥基上，從而形成具有不同藥用價值的皂苷。
[0008]目前，通過對人參，花旗參和三七的轉錄組分析，研究人員已經發現了大量的糖基轉移酶基因，但是還不明確哪些糖基轉移酶參與了人參皂苷的合成。由於人參中含有數量眾多的糖基轉移酶，且它們的含量都很低，所以它們的分離純化的研究進展緩慢。
[0009]稀有人參皂苷是指在人參中含量極低的皂苷。人參皂苷CK(20-0-13-(D-glucOpyranosyl)-20 (S)-protopanaxadiol)屬於原人參二醇類的阜苷,在阜苷元的C-20位羥基上連有一個葡萄糖基。人參皂苷CK在人參中含量極低，它是原人參二醇型皂苷在人體腸道中被微生物水解後產生的主要代謝產物。研究表明，多數原人參二醇型皂苷只有被代謝為CK後才能被人體吸收，所以人參皂苷CK是直接被體內吸收和發揮作用的真正實體，而其他皂苷只是藥物前體。人參皂苷CK具有很好的抗腫瘤活性，可以誘導腫瘤細胞凋亡，抑制腫瘤細胞轉移。它與放療和化療結合試驗，可以增強放療和化療的效果。除此之外，人參皂苷CK還有具有抗過敏活性，抗炎活性，並且可以起到神經保護作用，抗糖尿病作用和抗皮膚衰老作用。人參皂苷CK的藥理活性具有多靶點、高活性和低毒性的特點。
[0010]人參阜苷Fl (20-0- β -D-glucopyranosyl-20 (S) -protopanaxatriol)屬於原人參三醇型皂苷，它在人參中的含量也非常低，也屬於稀有人參皂苷。人參皂苷Fl的結構與CK非常接近，也是在皂苷元的C-20位羥基上連有一個葡萄糖基。人參皂苷Fl也具有獨特的藥用價值。它具有抗衰老和抗氧化的功能。
[0011]人參阜苷Rhl (6-0- β -D-glucopyranosyl-20 (S) -protopanaxatriol)屬於原人參三醇型皂苷，它在人參中的含量也非常低，也屬於稀有人參皂苷。人參皂苷Rhl的結構與Fl非常接近，但是它的糖基化位點是在C6位上的羥基。人參皂苷Rhl也具有特殊的生理功能，能夠抗過敏和抗炎症。
[0012]人參阜音Rh2 (3-0- β - (D-glucopyranosyl) -20 (S) -protopanaxadiol)在人參中含量極低，它的含量大約只有人參乾重的萬分之一左右，也屬於稀有人參皂苷。但是，人參皂苷Rh2具有良好的抗腫瘤活性，是人參中最主要的抗腫瘤活性成分之一，能夠抑制腫瘤細胞生長、誘導腫瘤細胞凋亡、抗腫瘤轉移。研究表明人參阜苷Rh2能夠抑制lung cancercells3LL (mice), Morris liver cancer cells (rats), B_16melanoma cells (mice),以及HeLa cells (human)的增值。在臨床上，人參皂苷Rh2與放療或化療結合治療，可以增強放療和化療的效果。此外，人參皂苷Rh2還具有抗過敏，提高機體免疫力的功能，抑制NO和PGE產生的炎症等作用。
[0013]人參皂苷Rg3在人參中含量也很低，具有明顯的抗腫瘤的作用，與人參皂苷Rh2在抗腫瘤的功能方面有互補性，臨床使用證明，Rg3與Rh2聯合使用其治療腫瘤的增效作用進
一步提聞。
[0014]由於稀有人參皂苷CK、Fl、Rhl，Rh2和Rg3的含量非常低，所以目前生產的方法是從人參中的大量皂苷出發，通過選擇性水解糖基的方法進行轉化後再進行提取和純化。以人參屬植物的總皂苷或原人參二醇類皂苷為原料，轉化、分離和提取20 (S)-原人參皂苷-Rh2。該製備方法的優點是利用了大量的二醇類皂苷，但是需在高溫和高壓下反應(宋長春等.20 (S)-人參皂苷-Rh2的製備方法及其藥物組合物及應用[P].中國專利:1225366，1999年)。韓國人參菸草研究所公開了 2種從人參成分中製備20 (R&S)-人參皂苷-Rh2的方法。其特徵在於首先得到原人參二醇皂苷組分，再經酸水解處理得20 (R&S)-人參皂苷_Rg3，然後將人參皂苷Rg3處理得到人參皂苷Rh2。以上這些方法主要缺陷在於產物的起始材料需要原人參二醇類系列單體皂苷，使得反應步驟較繁瑣，原料損失較大，操作繁瑣，從而導致成本增加，而且難以提高產率。由於CK和Fl在C-20位的糖基容易在水解過程中被破壞，所以化學法不適用於CK和Fl的生產。而酸法和鹼法水解皂苷製備Rhl的產率很低，而且還存在很多副產物。
[0015]由於酶轉化法的條件溫和，專一性強、產物易分離純化的特點，是目前生產CK、Fl和Rhl的主要方法。用於製備人參皂苷CK，Fl、Rhl和Rh2的酶主要有柚苷酶、果膠酶、纖維素酶及乳糖酶等。人參皂苷CK也可以通過微生物轉化的方法獲得，主要是利用腸道來源的厭氧菌。雖然，生物轉化法(酶法和微生物法)製備稀有人參皂苷CK、FURhl和Rh2取得了很大的進步，但是由於其原料為人參皂苷，所以製備CK、FU Rhl和Rh2的成本仍然非常高，並且其產量也相當有限(中國專利:CN1105781C ;金東史等，大連輕工業學院學報，2001年)。
[0016]由於人參皂苷Rh2的重要生物活性和巨大的經濟價值，幾十年來人們也一直嘗試利用化學合成的方法來生產這種皂苷，其基本思路是由原人參二醇和相應糖基縮和而成，即半合成法(日本專利:特開平8-208688，1996年)。該方法以原人參二醇為原料半合成20 (S)-原人參皂苷-Rh2，其合成步驟分為六步，且在糖苷化反應中使用了當量的碳酸銀作為催化劑，價格貴重使得該方法的成本較高，同時該催化劑的立體選擇性不高，產物得率低。另一種方法利用了芳香烴類的醯基或烷基取代原人參二醇C-12位羥基，再在有機溶劑和惰性氣體的保護下，加入活化了 C-1為羥基的葡萄糖基供體，在分子篩存在和路易斯酸的催化下生發生縮合反應，生成的產物經過柱層析或重結晶純化後出去保護基團，得到20 (S)-人參皂苷-R h2 (惠永正等，20 (S)-人參皂苷-Rh2的製備方法，中國專利:CN1587273A，2005 年)
[0017]目前本領域尚缺乏一種有效的生產稀有人參皂苷CK、Fl、Rhl、Rh2和Rg3的方法，因此迫切需要開發多種特異高效的糖基轉移酶。

【發明內容】

[0018]本發明的目的就是提供一組糖基轉移酶及其應用。
[0019]在本發明的第一方面，提供了一種體外糖基化方法，包括步驟:
[0020]在糖基轉移酶存在下，將糖基供體的糖基轉移到四環三萜類化合物的以下位點上:
[0021]C-20位、C-6位、C-3位上或C-3位的第一個糖基上；
[0022]從而形成糖基化的四環三萜類化合物；
[0023]其中，所述的糖基轉移酶選自:
[0024]如SEQ ID NOs.: 2、16、18、20、22、24、26、28、41、43、55、57、59 或 61 所示的糖基轉移酶。
[0025]本發明第二方面，提供了一種分離的多肽，所述的多肽選自下組:[0026](a)具有 SEQ ID NOs.:2、16、18、20、26、28、41、43、55、57、59 或 61 中任一條所示氨
基酸序列的多肽；
[0027](b)將 SEQ ID NOs.:2、16、18、20、26、28、41、43、55、57、59 或 61 中任一條所示氨基
酸序列的多肽經過一個或多個胺基酸殘基的取代、缺失或添加而形成的、或是添加信號肽序列後形成的、並具有糖基轉移酶活性的衍生多肽；
[0028](c)序列中含有(a)或(b)中所述多肽序列的衍生多肽；
[0029](d)胺基酸序列與 SEQ ID NOs:2、16、18、20、26、28、41、43、55、57、59 或 61 中任一
條中所示胺基酸序列的同源性> 85%或> 90%(較佳地> 95%)，並具有糖基轉移酶活性的衍生多肽。
[0030]在另一優選例中，所述的序列(C)為由(a)或(b)添加了標籤序列、信號序列或分泌信號序列後所形成的融合蛋白。
[0031]在另一優選例中，所述的多肽為SEQ ID NOs.:2、16、18、20、26、28、41、43、55、57、
59或61所示胺基酸序列的多肽。
[0032]本發明的第三方面，提供了一種分離的多肽，所述的多肽選自下組:
[0033](al)具有SEQ ID NOs.:22,24中任一條所示胺基酸序列的多肽；
[0034](bl)序列中含有(al)中所述多肽序列的多肽；和/或所述的多肽選自下組:
[0035](a2)具有SEQ ID NOs.:4或6中任一條所示胺基酸序列的多肽；
[0036](b2)將SEQ ID NOs.:4或6中任一條所示胺基酸序列的多肽經過一個或多個胺基酸殘基的取代、缺失或添加而形成的、或是添加信號肽序列後形成的、並具有糖基轉移酶活性的衍生多肽；
[0037](c2)序列中含有(b2)中所述多肽序列的衍生多肽；
[0038](d2)胺基酸序列與SEQ ID NOs.:4或6中任一條中所示胺基酸序列的同源性^ 85%(較佳地> 95%)，並具有糖基轉移酶活性的衍生多肽。
[0039]在另一優選例中，所述的序列(c2)為由(a2)或(b2)添加了標籤序列、信號序列或分泌信號序列後所形成的融合蛋白。
[0040]在本發明的第四方面，提供了一種分離的多核苷酸，所述的多核苷酸為選自下組的序列:
[0041](A)編碼第一或第二方面所述多肽的核苷酸序列；
[0042](B)編碼如 SE`Q ID NOs.:2、4、6、16、18、20、22、24、26、28、41、43、55、57、59 或 61 所
示多肽的核苷酸序列；
[0043](C)如 SEQ ID NOs.: 1、3、5、15、17、19、21、23、25、27、40、42、54、56、58 或60所示的
核苷酸序列；
[0044](D)與 SEQ ID NOs.: 1、3、5、15、17、19、21、27、40、42、54、56、58 或60所示序列的同
源性≥95% (較佳地≥98%)的核苷酸序列；
[0045](E)在 SEQ ID NOs.: 1、3、5、15、17、19、21、23、25、27、40、42、54、56、58 或 60 所示核苷酸序列的5』端和/或3』端截短或添加1-60個(較佳地1-30，更佳地1-10個)核苷酸所形成的核苷酸序列；
[0046](F)與(A)-(E)任一所述的核苷酸序列互補(較佳地完全互補)的核苷酸序列。
[0047]在另一優選例中，所述的核苷酸的序列如SEQ ID NOs.: 1、3、5、15、17、19、21、23、25、27、40、42、54、56、58或 60 所示。
[0048]在另一優選例中，序列如SEQ ID NOs.: 1、3、5、15、17、19、21、23、25、27、40、42、54、56、58或60所示的多核苷酸編碼胺基酸序列分別如SEQ ID NOs.: 2、4、6、16、18、20、22、24、
26、28、41、43、55、57、59或 61 所示的多肽。
[0049]在本發明的第五方面，提供了一種載體，所述的載體含有第三方面所述的多核苷酸。較佳地，所述載體包括表達載體、穿梭載體、整合載體。
[0050]在本發明的第五方面，提供了本發明第一或第二方面所述分離的多肽的用途，它被用於催化以下一種或多種反應，或被用於製備催化以下一種或多種反應的催化製劑:將來自糖基供體的糖基轉移到四環三萜類化合物C-20位和/或C-6位和/或C-3位的羥基以替換所述羥基的H，以及將來自糖基供體的糖基轉移到四環三萜類化合物的C-3位的第一個糖基上以延伸糖鏈。 [0051]在另一優選例中，所述的糖基供體包括選自下組的核苷二磷酸糖:UDP-葡萄糖，ADP-葡萄糖，TDP-葡萄糖，CDP-葡萄糖，⑶P-葡萄糖，UDP-乙醯基葡萄糖，ADP-乙醯基葡萄糖，TDP-乙醯基葡萄糖，⑶P-乙醯基葡萄糖，⑶P-乙醯基葡萄糖，UDP-木糖，ADP-木糖，TDP-木糖，CDP-木糖，⑶P-木糖，UDP-半乳糖醛酸，ADP-半乳糖醛酸，TDP-半乳糖醛酸，CDP-半乳糖醛酸，⑶P-半乳糖醛酸，UDP-半乳糖，ADP-半乳糖，TDP-半乳糖，CDP-半乳糖，⑶P-半乳糖，UDP-阿拉伯糖，ADP-阿拉伯糖，TDP-阿拉伯糖，CDP-阿拉伯糖，⑶P-阿拉伯糖，UDP-鼠李糖，ADP-鼠李糖，TDP-鼠李糖，CDP-鼠李糖，GDP-鼠李糖，或其他核苷二磷酸己糖或核苷二磷酸戊糖，或其組合。
[0052]在另一優選例中，所述的糖基供體包括選自下組的尿苷二磷酸(UDP)糖:UDP_葡萄糖，UDP-半乳糖醛酸，UDP-半乳糖，UDP-阿拉伯糖，UDP-鼠李糖，或其他尿苷二磷酸己糖或尿苷二磷酸戊糖，或其組合。
[0053]在另一優選例中，所述分離的多肽用於催化下述一種或多種反應或被用於製備催化下述一種或多種反應的催化製劑:
[0054]
【權利要求】
1.一種體外糖基化方法，其特徵在於，包括步驟: 在糖基轉移酶存在下，將糖基供體的糖基轉移到四環三萜類化合物的以下位點上: C-20位、C-6位、C-3位上或C-3位的第一個糖基上； 從而形成糖基化的四環三萜類化合物； 其中，所述的糖基轉移酶選自: 如 SEQ ID NOs.:2、16、18、20、22、24、26、28、41、43、55、57、59 或 61 所示的糖基轉移酶。
2.一種分離的多肽，其特徵在於，所述的多肽選自下組: (a)具有SEQ ID NOs.:2、16、18、20、26、28、41、43、55、57、59 或 61 中任一條所示胺基酸序列的多肽； (b)將SEQ ID NOs.:2、16、18、20、26、28、41、43、55、57、59 或 61 中任一條所示胺基酸序列的多肽經過一個或多個胺基酸殘基的取代、缺失或添加而形成的、或是添加信號肽序列後形成的、並具有糖基轉移酶活性的衍生多肽； (c)序列中含有(a)或(b)中所述多肽序列的衍生多肽； (d)胺基酸序列與SEQ ID NOs.:2、16、18、20、26、28、41、43、55、57、59 或 61 中任一條中所示胺基酸序列的同源性≥85%(較佳地≥95%)，並具有糖基轉移酶活性的衍生多肽。
3.一種分離的多肽，其特徵在於， 所述的多肽選自下組: (al)具有SEQ ID NOs.: 22或24中任一條所示胺基酸序列的多肽； (bl)序列中含有(al)中所述多肽序列的多肽；和/或 所述的多肽選自下組: (a2)具有SEQ ID NOs.:4或6中任一條所示胺基酸序列的多肽； (b2)將SEQ ID NOs.:4或6中任一條所示胺基酸序列的多肽經過一個或多個胺基酸殘基的取代、缺失或添加而形成的、或是添加信號肽序列後形成的、並具有糖基轉移酶活性的衍生多肽； (c2)序列中含有(b2)中所述多肽序列的衍生多肽； (d2)胺基酸序列與SEQ ID NOs.:4或6中任一條中所示胺基酸序列的同源性≥85%(較佳地≥ 95%)，並具有糖基轉移酶活性的衍生多肽。
4.一種分離的多核苷酸，其特徵在於，所述的多核苷酸為選自下組的序列: (A)編碼權利要求2或3所述多肽的核苷酸序列；
(B)編碼如SEQ ID NOs.: 2、4、6、16、18、20、22、24、26、28、41、43、55、57、59 或61 中任一條所示多肽的核苷酸序列； (C)如SEQ ID NOs.:1、3、5、15、17、19、21、23、25、27、40、42、54、56、58 或60 中任一條所示的核苷酸序列； (D)與SEQ ID NOs.: 1、3、5、15、17、19、25、27、40、42、54、56、58 或60 中任一條所示序列的同源性≥95%(較佳地≥98%)的核苷酸序列；
(E)在SEQ ID NOs.: 1、3、5、15、17、19、21、23、25、27、40、42、54、56、58 或60 中任一條所 示核苷酸序列的5』端和/或3』端截短或添加1-60個(較佳地1-30，更佳地1-10個)核苷酸所形成的核苷酸序列； (F)與(A)-(E)任一所述的核苷酸序列互補的核苷酸序列。
5.—種載體，其特徵在於，所述的載體含有權利要求4所述的多核苷酸。
6.權利要求2或3所述分離的多肽的用途，其特徵在於，它被用於催化以下一種或多種反應，或被用於製備催化以下一種或多種反應的催化製劑: (i)將來自糖基供體的糖基轉移到四環三萜類化合物的C-20位的羥基； (?)將來自糖基供體的糖基轉移到四環三萜類化合物的C-6位的羥基； (iii)將來自糖基供體的糖基轉移到四環三萜類化合物的C-3位的羥基； (iv)將來自糖基供體的糖基轉移到四環三萜類化合物的C-3位的第一個糖基上，延伸糖鏈。
7.如權利要求6所述的用途，其特徵在於，所述分離的多肽用於催化下述一種或多種反應或被用於製備催化下述一種或多種反應的催化製劑:
8.一種進行糖基催化反應的方法，其特徵在於，包括步驟:在權利要求2或3所述的多肽或其衍生多肽存在的條件下，進行糖基催化反應。
9.如權利要求8所述的方法，其特徵在於，所述糖基催化反應的底物為式(I)、(III)、(V)、(VII)、(IX)或(XI)化合物，且所述的產物為(II)、(IV)、(VI)、(VIII)、⑴或(XII)化合物；較佳地，所述的式(I)化合物為原人參二醇PPD (Protopanaxadiol),並且式(II)化合物為人參皂苷CK (20-0- β - (D-吡喃葡萄糖基)-原人參二醇)(20-0- β - (D-glucopyranosyl)-protopanaxadiol))； 或，所述的式(I)化合物為人參皂苷Rh2 (3-0-β-(D-吡喃葡萄糖基)-原人參二醇)(3-0-β -(D-glucopyranosyl)-protopanaxadiol)),並且式(II)化合物為人參阜苷 F2(3-0- β - (D-吡喃葡萄糖基)-20-0- β - (D-吡喃葡萄糖基)-原人參二醇)(3-0- β - (D-glucopyranosyl)-20-0-β -(D-glucopyranosyl)-protopanaxadiol))； 或，所述的式(I)化合物為人參皂苷Rg3，並且式(II)化合物為人參皂苷Rd; 或，所述的式(I)化合物為原人參三醇PPT (Protopanaxatriol),並且式(II)化合物為人參阜苷Fl (20-0-β-(D-吡喃葡萄糖基)-原人參三醇)(20-0-β-(D-glucopyranosyI)-protopanaxatriol))； 或，所述的式(I)化合物為達瑪烯二醇DM(Dammarenediol II),並且式(II)化合物為人參阜苷20-0- β - (D-吡喃葡萄糖基)-達瑪烯二醇(20-0- β - (D-glucopyranosyl) -Dammarenediol II ； 或，所述的式(III)化合物為原人參三醇PPT，並且式(IV)化合物為人參皂苷Rhl (6-0- β - (D-吡喃葡萄糖基)-原人參三醇)(6-0_ β - (D-glucopyranosyl) -protopanaxatriol))； 或，所述的式(III)化合物為人參皂苷F1，並且式(IV)化合物為人參皂苷Rgl (6-0- β - (D-吡喃葡萄糖基)-20-0- β - (D-吡喃葡萄糖基)-原人參二醇)(6_0_ β - (D-glucopyranosyl)-20-0-β - (D-glucopyranosyl)-protopanaxadiol))； 或，所述的式(V)化合物為原人參二醇，並且式(VI)化合物為人參皂苷Rh2 (3-0- β - (D-吡喃葡萄糖基)-原人參二醇)(3-0- β - (D-glucopyranosyl) -protopanaxadiol))； 或，所述的式(V)化合物為CK，並且式(VI)化合物為人參皂苷F2 (3-0-β-(D-吡喃葡萄糖基)-20-0- β - (D-吡喃葡萄糖基)-原人參二醇)(3-0- β - (D-glucopyranosyl) -20-0-β -(D-glucopyranosyl)-protopanaxadiol))； 或，所述的式(V)化合物為原人參三醇PPT，並且式(VI)化合物為人參皂苷3-0- β - (D-吡喃葡萄糖基)-原人參三醇(3-0- β - (D-glucopyranosyl) -protopanaxatrioI); 或，所述的式(V)化合物為人參皂苷Fl，並且式(VI)化合物為人參皂苷3-0-β-(D-吡喃葡萄糖基)-Fl (3-0- β - (D-glucopyranosyl) -Fl)；或，所述的式(V)化合物為達瑪烯二醇DM，並且式(VI)化合物為人參皂苷3-0- β -(D-吡喃葡萄糖基)-達瑪烯二醇(3-0-β - (D-glucopyranosyl) -DammarenediolII); 或，所述的式(VII)化合物為25-OH-原人參二醇(25-OH-protopanaxadiol)，並且式(VIII)化合物為人參皂苷3-0-β-(D-吡喃葡萄糖基)-25-OH-原人參二醇(3-0_i3-(D-glucopyranosyl)-25-OH-protopanaxadiol)； 或，所述的式(VII)化合物為25-0CH3-原人參二醇(25-0CH3-protopanaxadiol)，並且式(VIII)化合物為人參皂苷3-0-β-φ-吡喃葡萄糖基)-25-0CH3-原人參二醇(3_0_β-(D-glucopyranosyl)-25_0CH3-protopanaxadiol)； 或，所述的式(IX)化合物為人參皂苷Rh2，並且式(X)化合物為人參皂苷Rg3 ； 或，所述的式(IX)化合物為人參皂苷F2，並且式(X)化合物為人參皂苷Rd; 或，所述的式(XI)化合物為羊毛甾醇(Ianosteix)I)，並且式(XII)化合物為3-0- β - (D-吡喃葡萄糖基)-羊毛留醇(3-0- β - (D-glucopyranosyl) -lanosterol)。
10.一種遺傳工程化的宿主細胞，其特徵在於，所述的宿主細胞含有權利要求5所述的載體，或其基因組中整合有權利要求4所述的多核苷酸。
11.權利要求10所述的宿主細胞的用途，其特徵在於，用於製備酶催化試劑，或生產糖基轉移酶、或作為催化細胞、或產生糖基化的四環三萜類化合物。
12.—種產生轉基因植物`的方法，其特徵在於，包括步驟:將權利要求11所述的遺傳工程化的宿主細胞再生為植物，並且所述的遺傳工程化的宿主細胞為植物細胞。
【文檔編號】C12P33/02GK103849672SQ201310658887
【公開日】2014年6月11日 申請日期:2013年12月6日 優先權日:2012年12月6日
【發明者】周志華, 嚴興, 範雲, 王平平, 魏維, 魏勇軍, 張珺 申請人:中國科學院上海生命科學研究院