用於評估腎毒性的手段和方法

2023-05-26 01:45:11 2

用於評估腎毒性的手段和方法
【專利摘要】本發明涉及用於腎毒性的診斷法和化學化合物風險分級的毒理學評估領域。具體而言，它公開了用於診斷腎毒性的方法。它還公開了用於確定化合物是否能夠在受試者中誘導這種腎毒性的方法，和公開了鑑定用於治療腎毒性的藥物的方法。另外，本發明公開了用於診斷腎毒性的裝置和試劑盒。
【專利說明】用於評估腎毒性的手段和方法
[0001]發明描述
[0002]本發明涉及用於腎毒性的診斷法和化學化合物風險分級的毒理學評估領域。具體而言，它涉及用於診斷腎毒性的方法。它還涉及一種用於確定化合物是否能夠在受試者中誘導這種腎毒性的方法並涉及一種鑑定用於治療腎毒性的藥物的方法。另外，本發明涉及用於診斷腎毒性的裝置和試劑盒。
[0003]腎是具有幾種功能的成對器官並且具有三個主要解剖區域:皮質、髓質和乳頭。腎皮質是腎的最外區域並且含有腎小球、近端和遠端腎小管和管周毛細血管。皮質血流量高，皮層接受大約90%的腎血流量。由於血源性毒物將偏好地遞送至皮質，故而它們更可能影響皮質功能，而非髓質或乳頭的那些功能。腎髓質是中間部分並且主要含有亨勒袢、直小血管和集合管。雖然髓質僅接受約6%的腎血流量，但是它可能暴露於管狀結構內部高濃度的毒物。乳頭是腎的最小解剖部分並且僅接受約1%的腎血流量。然而，因為小管液最大程度地濃縮並管腔液最大程度地減少，所以乳頭中潛在毒物的濃度可能極高，導致在乳頭小管細胞和/或間質細胞中的細胞損傷。腎單位是腎的功能單位。腎系統的主要功能是消除從內源代謝或從生物異源物質代謝衍生的廢物。腎還在調節身體穩態、調節細胞外液容量和電解質平衡中發揮重要作用。腎的其他功能包括合成影響代謝的激素。腎素，一種參與血管緊張素和醛固酮形成的激素，在腎中形成，幾種前列腺素也在腎中形成。
[0004]幾種因素涉及腎對許多種毒物的敏感性，不過高腎血流量和從小管液重吸收水後分泌產物的增加濃度明顯具有主要的重要性。腎構成小於1%的身體質量，但是它們接受大約25%的心輸出量。因而，顯著量的外源化學品和/或它們的代謝物遞送至腎。影響腎對化學品敏感性的第二個重要因素是其濃縮小管液並因此濃縮它含有的任何化學品的能力。腎小管的運輸特徵還有助於遞送潛在有毒濃度的化學品至細胞。如果一種化學品從血液主動分泌至小管液，則它將起初積累於近端腎小管的細胞內，或，如果它從小管液重吸收，則它將以相對高的濃度進入細胞。化學品向反應性並且因此潛在有毒的代謝物的生物轉化是腎毒性的關鍵特徵。肝臟中存在的許多相同活化反應也存在於腎中，並且許多毒物可以在這兩種器官任一者中活化，包括醋氨酚、溴代苯、氯仿和四氯化碳，因此具有肝毒性或腎毒性的潛力。腎的一些區域具有高水平的生物異源物質代謝酶類，特別是近端腎小管直部(一個特別易遭化學損傷的區域)中的細胞色素P450。由於反應性代謝物通常不穩定，並且因此或多或少暫時地，它們可能與靠近生成部位的細胞大分子組分相互作用。因此，雖然活化酶如細胞色素P450的活性在腎中比肝臟中低，但是它們在腎毒性方面比肝臟的那些酶更重要性，原因在於它們靠近作用部位。與其他器官中的毒性一樣，毒性終點的最終表現是反應性代謝物的產生與它們脫毒作用之間平衡的結果。腎毒物的其他例子包括重金屬。已知某些抗生素具有腎毒性，最值得注意地是氨基糖甙類。
[0005]腎代表經常受生物異源物質影響的器官，原因在於其獨特的功能和結構組織形式以及其在控制身體穩態和消除生物異源物質中的作用。腎毒性，也稱作腎毒性，是指化學引起或驅動的腎損傷。歸因於腎毒素的可能作用的多樣性，評估腎毒性是相當複雜的過程。當前方法通常包括臨床研究(例如超聲檢查)，病理和組織病理研究以及生物化學分析。然而，這類參數受到相當複雜地調節並且參數變化有時可以甚至在相當進展的階段出現。組織病理評估的主要缺點是，它們具有侵入性，並且甚至與臨床病理測量組合時，它們較不可靠，因為它們部分地基於實施研究的毒理學家的個人解釋。另外，因腎毒素引起的腎毒性所致的前述疾病和病症可能幾乎無法通過當前臨床測量與所述疾病或病症的其他病因區分(見，例如，Cohen AH(2006)Renal anatomy and basic concepts and methods inrenal pathology, 3-17,引自；Fogo AB, Cohen AH, Jennette JC, Bruijn JA, Colvin RB (編著)Fundamentals of renal pathology, Springer, New York, NY, USA ；Greaves P (1998)The urinary system, 89-125,引自:Target organ pathology, a basic text, Turton J和 Hooson J(編著)Taylor&Francis, London, United Kingdom, 1998;Hodgson E, LeviPE (2004)第 15 章 Nephrotoxicity, 273-278，引自:A textbook of modern toxicology,第 3 版(Hodgson 編著)，Wiley-VCH Verlag GmbH, Weinheim Germany ；Lemley KV, KrizW (1991) Kidney Internat.39:370-381 ；MoIema G, Meijer DKF (2OOl 編著)Drug TargetingOrgan-Specific Strategies,第 5 章,121-156, Wiley-VCH Verlag GmbH, WeinheimGermany ；Verlander J (1998), Toxiocl.Pathol.26:1-17)。
[0006]如果考慮到腎毒性迄今為止是藥物退出市場的最常見原因之一，則腎毒性的重要性可以是顯而易見的。而且，例如，在歐洲共同體的任何種類產業中使用的化學化合物現在將需要符合REACH(化學品註冊、評估和許可)。應當理解化學化合物誘導腎毒性的潛力將視為化合物的高風險，並且因此，化合物將僅對有限的應用並且在遵守高安全標準時可用。
[0007]以高效及可靠方式評估化學化合物的毒理學特性和特別是評估腎毒性的敏感及特異性方法仍不可獲得，但是將是高度期待的。
[0008]因此，本發明的技術問題可以視為提供用於符合前述需求的手段和方法。這個技術問題通過權利要求中表徵及下文描述的實施方案來解決。
[0009]因此，本發明涉及一種用於診斷腎毒性的方法，所述方法包括:
[0010](a)確定疑似遭遇腎毒性的受試者的測試樣品中選自表la、lb、lc、ld、2a、2b、2c、2d、3a、3b、3c、3d、4a、4b、4c、4d、5a、5b、6a、6b、7a、7b、8a、8b、Ila 或 Ilb 中任一表的至少一種生物標誌物的量,和
[0011](b)將步驟(a)中確定的量與參考比較，由此診斷腎毒性。
[0012]在前述方法的一個優選實施方案中，所述受試者已經與疑似能夠誘導腎毒性的化合物接觸。
[0013]本發明還涉及一種確定化合物是否能夠在受試者中誘導腎毒性的方法，所述方法包括:
[0014](a)確定已經與疑似能夠誘誘導腎毒性的化合物接觸的受試者的樣品中選自表la、lb、Ic、Id、2a、2b、2c、2d、3a、3b、3c、3d、4a、4b、4c、4d、5a、5b、6a、6b、7a、7b、8a、8b、Ila 或lib中任一表的至少一種生物標誌物的量，和
[0015](b)將步驟(a)中確定的量與參考比較，由此確定化合物誘導腎毒性的能力。
[0016]在前述方法的一個優選實施方案中，所述化合物是選自以下的至少一種化合物:兩性黴素 B (Amphotericin B)、3 -紫羅酮(Beta-1onone)、咖啡因(Caffeine)、卡託普利(Captopril)、卡鉬(Carboplatin)、環孢菌素 A、高 2，4-滴丙酸(Dichlorprop-p)、安乃近(Dipyrone)、乙苯、呋塞米(Furosemide)、六氯丁二烯、氫醌、賴諾普利(Lisinopril)、石膽酸、MCPA>高2-甲-4-氯丙酸(Mecoprop-p)、青黴胺(Penicillamine)、五氯酌.(Pentachlorophenol)、丙磺舒(Probenecid)、雷米普利(RamipriI)、可可鹼、茶鹼、妥布黴素s.c.(Tobramycin s.c.)、磷酸三甲苯酯、1，1，2，2-四氯乙燒、2，2，4-三甲基戍燒、D-芋烯和萘烷。
[0017]在本發明方法的另一個優選實施方案中，所述參考源自(i)遭遇腎毒性的受試者或受試者組或(ii)已經與選自以下的至少一種化合物接觸的受試者或受試者組:兩性黴素B、β -紫羅酮、咖啡因、卡託普利、卡鉬、環孢菌素Α、高2，4-滴丙酸、安乃近、乙苯、呋塞米、六氯丁二烯、氫醌、賴諾普利、石膽酸、MCPA、高2-甲-4-氯丙酸、青黴胺、五氯酚、丙磺舒、雷米普利、可可鹼、茶鹼、妥布黴素s.c.、磷酸三甲苯酯、1，I, 2，2-四氯乙烷、2，2，4-三甲基戊烷、D-薴烯和萘烷。在所述方法的一個更優選的實施方案中，測試樣品中生物標誌物與參考的基本上相同的量指示腎毒性。
[0018]在本發明方法的另一個優選實施方案中，所述參考源自(i)已知未遭遇腎毒性的受試者或受試者組或(ii)尚未與選自以下的至少一種化合物接觸的受試者或受試者組:兩性黴素B、β -紫羅酮、咖啡因、卡託普利、卡鉬、環孢菌素Α、高2，4-滴丙酸、安乃近、乙苯、呋塞米、六氯丁二烯、氫醌、賴諾普利、石膽酸、MCPA、高2-甲-4-氯丙酸、青黴胺、五氯酚、丙磺舒、雷米普利、可可鹼、茶鹼、妥布黴素s.c.、磷酸三甲苯酯、1，I, 2，2-四氯乙烷、2，2，4-三甲基戊烷、D-薴烯和萘烷。在所述方法的一個更優選實施方案中，生物標誌物的在測試樣品中與參考相比不同的量指示腎毒性。
[0019]在本發明方法的又一個實施方案中，所述參考是針對受試者群體中生物標誌物的經計算的參考。在所述方法的一個更優選實施方案中，生物標誌物的在測試樣品中與參考相比不同的量指示腎毒性。
[0020]本發明還構思了一種鑑定用於治療腎毒性的物質的方法，所述方法包括步驟:
[0021](a)確定遭遇腎毒性的受試者的樣品中選自表la、lb、lc、ld、2a、2b、2c、2d、3a、3b、3c、3d、4a、4b、4c、4d、5a、5b、6a、6b、7a、7b、8a、8b、Ila 或 Ilb 中任一表的至少一種生物標誌物的量，所述受試者已經與疑似能夠治療腎毒性的候選物質接觸；和
[0022](b)將步驟(a)中確定的量與參考比較，由此鑑定能夠治療腎毒性的物質。
[0023]在前述方法的一個優選實施方案中，所述參考源自(i)遭遇腎毒性的受試者或受試者組或(ii)已經與選自以下的至少一種化合物接觸的受試者或受試者組:兩性黴素B、β -紫羅酮、咖啡因、卡託普利、卡鉬、環孢菌素Α、高2，4-滴丙酸、安乃近、乙苯、呋塞米、六氯丁二烯、氫醌、賴諾普利、石膽酸、MCPA、高2-甲-4-氯丙酸、青黴胺、五氯酚、丙磺舒、雷米普利、可可鹼、茶鹼、妥布黴素s.c.、磷酸三甲苯酯、1，I, 2，2-四氯乙烷、2，2，4-三甲基戊烷、D-薴烯和萘烷。在所述方法的一個更優選實施方案中，測試樣品中生物標誌物與參考的不同的量指示能夠治療腎毒性的物質。
[0024]在前述方法的另一個優選實施方案中，所述參考源自(i)已知未遭遇腎毒性的受試者或受試者組或(ii)尚未與選自以下的至少一種化合物接觸的受試者或受試者組:兩性黴素B、β-紫羅酮、咖啡因、卡託普利、卡鉬、環孢菌素A、高2，4-滴丙酸、安乃近、乙苯、呋塞米、六氯丁二烯、氫醌、賴諾普利、石膽酸、MCPA、高2-甲-4-氯丙酸、青黴胺、五氯酚、丙磺舒、雷米普利、可可鹼、茶鹼、妥布黴素s.c.、磷酸三甲苯酯、1，I, 2，2-四氯乙烷、2，2，4-三甲基戊烷、D-薴烯和萘烷。在所述方法的一個更優選實施方案中，測試樣品中生物標誌物與參考的基本上相同的量指示能夠治療腎毒性的物質。
[0025]在前述方法的又一個優選的實施方案中，所述參考是針對受試者群體中生物標誌物的經計算的參考。在所述方法的一個更優選實施方案中，測試樣品中生物標誌物與參考的基本上相同的量指示能夠治療腎毒性的物質。
[0026]本發明還涉及選自表la、lb、Ic、Id、2a、2b、2c、2d、3a、3b、3c、3d、4a、4b、4c、4d、5a、5b、6a、6b、7a、7b、8a、8b、Ila或lib中任一表的至少一種生物標誌物或針對所述生物標誌
物的檢測劑用於診斷受試者樣品中腎毒性的用途。
[0027]另外，本發明涉及一種用於診斷疑似遭遇腎毒性的受試者的樣品中腎毒性的裝置，所述裝置包含:
[0028](a)分析單元，其包含針對選自表 la、lb、lc、ld、2a、2b、2c、2d、3a、3b、3c、3d、4a、4b、4c、4d、5a、5b、6a、6b、7a、7b、8a、8b、Ila或Ilb中任一表的至少一種生物標誌物的檢測齊U，所述分析單元允許確定樣品中存在的所述生物標誌物的量；和與所述分析單元有效連接的，
[0029](b)包含存儲的參考和數據處理器的評價單元，所述評價單元允許相對於存儲的參考，比較由分析單元確定的所述至少一種生物標誌物的量，由此診斷腎毒性。
[0030]在本發明裝置的一個優選實施方案中，所述存儲的參考是源自已知遭遇腎毒性的受試者或受試者組或已經與選自以下的至少一種化合物接觸的受試者或受試者組的參考:兩性黴素B、P -紫羅酮、咖啡因、卡託普利、卡鉬、環孢菌素A、高2，4-滴丙酸、安乃近、乙苯、呋塞米、六氯丁二烯、氫醌、賴諾普利、石膽酸、MCPA、高2-甲-4-氯丙酸、青黴胺、五氯酚、丙磺舒、雷米普利、可可鹼、茶鹼、妥布黴素s.c.、磷酸三甲苯酯、1，I, 2，2-四氯乙烷、2，2，4-三甲基戊烷、D-薴烯和萘烷，並且所述數據處理器執行指令以相對於存儲的參考，比較由分析單元確定的至少一種生物標誌物的量，其中測試樣品中至少一種生物標誌物與參考相比基本上相同的量指示存在腎毒性或其中測試樣品中至少一種生物標誌物與參考相比不同的量指示不存在腎毒性。
[0031]在本發明裝置的另一個優選實施方案中，所述存儲的參考是源自已知未遭遇腎毒性的受試者或受試者組或尚未與選自以下的至少一種化合物接觸的受試者或受試者組的參考:兩性黴素B、P -紫羅酮、咖啡因、卡託普利、卡鉬、環孢菌素A、高2，4-滴丙酸、安乃近、乙苯、呋塞米、六氯丁二烯、氫醌、賴諾普利、石膽酸、MCPA、高2-甲-4-氯丙酸、青黴胺、五氯酚、丙磺舒、雷米普利、可可鹼、茶鹼、妥布黴素s.c.、磷酸三甲苯酯、1，I, 2，2-四氯乙烷、2，2，4-三甲基戊烷、D-薴烯和萘烷，並且所述數據處理器執行指令以相對於存儲的參考，比較由分析單元確定的至少一種生物標誌物的量，其中測試樣品中至少一種生物標誌物與參考相比不同的量指示存在腎毒性或其中測試樣品中至少一種生物標誌物與參考相比基本上相同的量指示不存在腎毒性。
[0032]另外，本發明涉及一種用於診斷腎毒性的試劑盒，所述試劑盒包含針對選自表la、Ib、Ic、Id、2a、2b、2c、2d、3a、3b、3c、3d、4a、4b、4c、4d、5a、5b、6a、6b、7a、7b、8a、8b、Ila 或I Ib中任一表的至少一種生物標誌物的檢測劑和針對至少一種生物標誌物的標準物,所述標準物的濃度是源自已知遭遇腎毒性的受試者或受試者組或源自已知未遭遇腎毒性的受試者或受試者組。
[0033]具體而言，本發明還構思了以下具體方法、用途、裝置和試劑盒。[0034]以下定義和解釋在已作必要修正的情況下適用於本發明的先前全部實施方案以及下文中描述的實施方案。
[0035]根據本發明提到的方法可以基本上由前述步驟組成或可以包括其他步驟。其他步驟可以涉及樣品預處理或評價通過所述方法獲得的診斷結果。本文中他處描述優選的其他評價步驟。這些方法可以部分地或完全由自動化輔助。例如，涉及確定生物標誌物的量的步驟可以由機器人和自動化讀數裝置自動化。同樣地，涉及比較數量的步驟可以由合適的數據處理裝置(如計算機)自動化，所述數據處理裝置包含當執行時自動實施該比較的程序代碼。這種情況下的參考將從從存儲的參考(例如，從資料庫)提供。應當理解該方法優選地是對受試者樣品離體(ex vivo)實施,即不對人體或動物體實施的方法。
[0036]如本文所用，術語「診斷」指評估概率，其中根據所述概率，受試者正在遭遇某種病狀，如中毒，(本文中稱作疾病或病症)或具有遭遇這種病狀的素質。對素質的診斷有時可以稱作預後或預測受試者未來將在預定時間窗內形成該病狀的可能性。如本領域技術人員將理解，這種評估儘管優選是對100%待診斷的受試者正確，但通常可能不是對100%待診斷的受試者正確。然而，該術語要求可以將統計顯著部分的受試者鑑定為遭受該病狀或具有易遭受該病狀的素質。某個部分是否為統計顯著可以在不另外費力的情況下由本領域技術人員使用使用各種熟知的統計評價工具(例如，置信區間確定、P-值測定、student t-檢驗、Mann-Whitney 檢驗等)確定。能在 Dowdy 和 Wearden, Statistics for Research, Johnffiley&Sons,New Yorkl983中找到詳細內容。優選的置信區間是至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%或至少95%。P-值是優選地0.2、0.1、0.05。
[0037]本發明的診斷還包括對病狀或其症狀以及其素質的監測、證實和分類。監測是指持續追蹤已經診斷的病狀或素質。監測例如涵蓋確定該病狀或素質的進展、確定特定治療對病狀進展的影響或預防性措施如預防性治療或膳食對具有疾病素質的受試者中病狀之形成的影響。證實涉及增強或證明對已經使用其他指示物或標誌物確定的病狀或該病狀素質的診斷。分類涉及(i)將病狀劃分成不同類別，例如，對應於伴隨病狀的症狀的強度，或
(ii)區分伴隨病狀的不同階段、疾病或病症。病狀的素質可以基於風險程度(即受試者稍後將形成該病狀的概率)分類。另外，分類還優選地包括將作用模式分配給待通過本發明方法測試的化合物。具體而言，本發明的方法允許確定化合物的具體作用模式，對於所述化合物而言，這種作用模式尚未已知。這優選地通過以下方式實現:將針對代表所述化合物的至少一種生物標誌物或生物標誌物譜確定的量與針對作用模式已知的稱作參考的化合物所確定的生物標誌物或生物標誌物譜的量比較。因為確定了化合物的分子靶，所以作用模式的分類允許甚至更可靠地評估該化合物的毒性。
[0038]如本文所用的術語「腎毒性」涉及導致腎功能受損、尤其腎小管或腎小球功能受損的任何腎損傷或損害。優選地，腎的排洩相關功能受腎毒性影響。優選地，如本文所用的腎毒性由施用化學化合物或藥物引起或是施用化學化合物或藥物的結果，即所謂毒素引起的腎毒性。更優選地，腎毒性伴有受損的腎小管功能。具體而言，近端腎小管受影響。最優選地，位於近端腎小管直部中的P450脫毒酶的功能將受如本文提到的腎毒化合物影響。
[0039]腎毒性的前述表現的症狀和臨床體徵是本領域技術人員熟知的並且在標準毒理學書籍，例如，H.Marquardt, S.G.Schiitcr, R.0.McClellan, F.Welsch (編著)，「Toxicology」,第 14 章:The Kidney,第 297-330 頁，1999，Academic Press, London.第 13 章:The Liver, 1999, Academic Press, London 中描述。
[0040]腎毒性的優選方面涉及受損的多尿、腎小球-腎小管缺陷、腎小管缺陷、受損的弱酸排洩、腎小管壞死、ACE抑制劑誘導樣缺陷如腎損害或腎衰竭、間質性腎炎、a2u球蛋白-腎病和/或直接腎小管缺陷。
[0041]優選地被確定以便診斷受損的多尿作為腎毒性的一個方面的生物標誌物是表la、lb、Ic和Id中列出的那些。
[0042]優選地被確定以便診斷腎小球-腎小管缺陷作為腎毒性的一個方面的生物標誌物是表2a、2b、2c和2d中列出的那些。
[0043]優選地被確定以便診斷腎小管缺陷作為腎毒性的一個方面的生物標誌物是表3a、3b、3c和3d中列出的那些。
[0044]優選地被確定以便診斷受損的弱酸排洩作為腎毒性的一個方面的生物標誌物是表4a、4b、4c和4d中列出的那些。
[0045]優選地被確定以便診斷腎小管壞死作為腎毒性的一個方面的生物標誌物是表5a和5b中列出的那些。
[0046]優選地被確定以便診斷ACE抑制劑誘導樣缺陷作為腎毒性的一個方面的生物標誌物是表6a和6b中列出的那些。
[0047]優選地被確定以便診斷間質性腎炎作為腎毒性的一個方面的生物標誌物是表7a和7b中列出的那些。
[0048]優選地被確定以便診斷直接腎小管缺陷作為腎毒性的一個方面的生物標誌物是表8a和8b中列出的那些。
[0049]優選地被確定以便診斷a 2u球蛋白-腎病作為腎毒性的一個方面的生物標誌物是表Ila和Ilb中列出的那些。
[0050]根據本發明發現，表中所列的多於一種生物標誌物的組合進一步增強診斷，因為每種生物標誌物是用於診斷的明顯統計獨立的預測物。另外，腎毒性的特異性還顯著地增力口，因為抵消了來自其他組織對標誌物豐度的影響。因而，如本文所用，術語「至少一種」優選地指至少2種、至少3種、至少4種、至少5種、至少6種、至少7種、至少8種、至少9種或至少10種在後續表的任一表中提到的生物標誌物的組合。優選地，在任一表中提及的全部生物標誌物均根據本發明方法組合地確定。
[0051]因而，優選地，至少一種生物標誌物是選自前述組的至少一種生物標誌物，或至少一種生物標誌物是由前述組的生物標誌物組成的生物標誌物組合或包含前述組的生物標誌物的生物標誌物組合。已經鑑定前述生物標誌物和生物標誌物組合作為具有特別高的診斷價值的關鍵生物標誌物，如後續實施例中更詳細地描述。
[0052]另外，仍可以額外地確定其他生物標誌物或臨床參數，包括已知的代謝物、遺傳突變、轉錄物和/或蛋白質數量或酶活性。可以根據本發明方法確定的這類額外的臨床或生物化學參數是本領域熟知的。
[0053]如本文所用，術語「生物標誌物」指這樣的化學化合物，其在樣品中的存在或濃度指示病狀(優選地，如本文提到的腎毒性)的存在或不存在或強度。該化學化合物優選地是代謝物或從其衍生的分析物。分析物是可以與生物中存在的實際代謝物相同的化學化合物。然而，該術語還包括這類代謝物的衍生物，所述衍生物內源地生成或在分離或樣品預處理期間或因實施本發明方法而生成，例如，在純化和/或確定步驟期間生成。在具體情況下，分析物還以化學特性如溶解度來表徵。歸因於所述特性，分析物可以在純化和/或確定過程期間獲得的極性或脂質級分中出現。因而，化學特性並且優選地，溶解度，應當導致分析物在純化和/或確定過程期間所獲得的極性或脂質級分中出現。因此，視作分析物在純化和/或確定過程期間所獲得的極性或脂質級分中出現的所述化學特性和尤其溶解度應當進一步表徵分析物並且輔助其鑑定。下文描述關於這些化學特性可以怎樣確定並且視為在後續實施例中存在的細節內容。優選地，分析物以定性和定量方式代表代謝物並且因此自然而然允許得出以下結論:在受試者中或至少在所述受試者的測試樣品中代謝物存在或不存在或代謝物的量。雖然生物標誌物、分析物和代謝物在本文中以單數形式提到，但所述術語是還包括複數形式的術語，即指相同分子種類的多個生物標誌物、分析物或代謝物分子。另外，本發明的生物標誌物並不必然地與一個分子種類相對應。相反，生物標誌物可以包含化合物的立體異構體或對映異構體。另外，生物標誌物也可以代表生物類別的異構分子的異構體的總和。所述異構體應當在一些情況下顯示相同分析特徵，並且因此是通過各種分析方法不可區分的，所述分析方法包括在下文描述的後續實施例中應用的那些。然而，異構體將共有至少相同的總式參數並且因此，在例如脂類的情況下，共有相同的鏈長度和脂肪酸和/或鞘鹼部分中相同的雙鍵數目。
[0054]如本文所用，術語「測試樣品」指待用於通過本發明方法診斷腎毒性的樣品。優選地，所述測試樣品是生物樣品。來自生物來源的樣品(即生物樣品)通常包含多種代謝物。待用於本發明方法中的優選生物樣品是來自體液、優選地血液、血漿、血清、唾液、膽汁、尿或腦脊液的樣品，或(例如通過活組織檢查)源自細胞、組織或器官、優選地源自肝臟的樣品。更優選地，樣品是血液、血漿或血清樣品，最優選地，是血漿樣品。生物樣品源自如本文中他處所述的受試者。用於獲得前述不同類型的生物樣品的技術是本領域熟知的。例如，血液樣品可以通過採血獲得，而組織或器官樣品將例如通過活組織檢查獲得。
[0055]前述樣品優選地在它們用於本發明的方法之前預處理。如下文更詳細地描述，所述預處理可以包括為釋放或分離化合物或除去過多材料或廢物所需要的處理。合適的技術包括離心、提取、分級、超濾、蛋白質沉澱，隨後實施化合物的過濾和純化和/或富集。另外，實施其他預處理，目的是以適於化合物分析的形式或濃度提供化合物。例如，如果在本發明的方法中使用氣相色譜偶聯質譜法，則將需要在所述氣相色譜之前衍生化該化合物。合適和必需的預處理取決於用於實施本發明方法的手段並且是本領域技術人員熟知的。如之前描述的預處理樣品也由如根據本發明使用的術語「樣品」包含。
[0056]如本文所用的術語「受試者」指動物，優選地涉及哺乳動物如小鼠、大鼠、豚鼠、兔、倉鼠、豬、綿羊、犬、貓、馬、猴或奶牛，並且還優選地涉及人。更優選地，受試者是嚙齒類，並且最優選地是大鼠。可以採用本發明方法診斷的其他動物是魚類、鳥類或爬行類。優選地，所述受試者接觸於疑似能夠誘導腎毒性的化合物或已經與之接觸。已經與疑似誘導腎毒性的化合物接觸的受試者可以例如是實驗室動物，如在用於例如化合物毒性的篩選分析法中使用的大鼠。疑似已經與能夠誘導腎毒性的化合物接觸的受試者可以還是待診斷以選擇合適治療的受試者。優選地，如本文所用的能夠誘導腎毒性的化合物是兩性黴素B、β-紫羅酮、咖啡因、卡託普利、卡鉬、環孢菌素Α、高2，4-滴丙酸、安乃近、乙苯、呋塞米、六氯丁二烯、氫醌、賴諾普利、石膽酸、MCPA、高2-甲-4-氯丙酸、青黴胺、五氯酚、丙磺舒、雷米普利、可可鹼、茶鹼、妥布黴素S.C.、磷酸三甲苯酯、1，I, 2，2-四氯乙烷、2，2，4-三甲基戊烷、D-薴烯和萘烷。
[0057]優選地，如果受試者是雌性，則通過本發明方法待確定的至少一種生物標誌物選自表 la、lb、2a、2b、3a、3b、4a、4b、5a 或 5b 中的任一表。
[0058]優選地，如果受試者是雄性，則通過本發明方法待確定的至少一種生物標誌物選自表 lc、ld、2c、2d、3c、3d、4c、4d、6a、6b、7a、7b、8a、8b、Ila 或 Ilb 中的任一表。
[0059]優選地待確定以便診斷受損的多尿作為腎毒性的一個方面的優選生物標誌物組或組合涵蓋至少以下生物標誌物或基本上由以下生物標誌物組成:用於雌性受試者的18-羥-11-去氧皮質酮、肌酸酐、纈氨酸、反-4-羥脯氨酸和脯氨酸；以及用於雄性受試者的膽鹼縮醛磷脂No02、鞘磷脂(dl8:2，C16:0)、膽鹼縮醛磷脂No03、蘇氨酸和神經醯胺(dl8:l，C24:l)。更優選地，相對於尚未與咖啡因、呋塞米、賴諾普利、可可鹼或茶鹼接觸或未遭遇腎毒性的參考，前述生物標誌物改變，如後續下表中所示。
[0060]優選地待確定以便診斷腎小球-腎小管缺陷作為腎毒性的一個方面的優選生物標誌物組或組合涵蓋至少以下生物標誌物或基本上由以下生物標誌物組成:用於雌性受試者的肌酸、葡糖胺、甘露糖胺、反油酸(C18:反[9]1)和3-羥基吲哚硫酸酯；以及用於雄性受試者的蘇糖酸、半胱氨酸、溶血磷脂醯膽鹼(C18:2)、變腎上腺素和肌酸。更優選地，相對於尚未與卡託普利、環孢菌素A、青黴胺、或磷酸三甲苯酯接觸或未遭遇腎毒性的參考，前述生物標誌物改變，如後續下表中所示。
[0061]優選地待確定以便診斷腎小管缺陷作為腎毒性的一個方面的優選生物標誌物組或組合涵蓋至少以下生物標誌物或基本上由以下生物標誌物組成:用於雌性受試者的肌酸、溶血磷脂醯膽鹼(C18:l)、吲哚-3-乙酸、組氨酸和極性級分甘油；以及用於雄性受試者的假尿苷、牛磺酸、TAG(C18:1，C18:2)、尿囊素和犬尿喹啉酸。更優選地，相對於尚未與3 -紫羅酮、卡鉬或呋塞米、六氯丁二烯接觸或未遭遇腎毒性的參考，前述生物標誌物改變，如後續下表中所示。
[0062]優選地待確定以便診斷受損的弱酸排洩作為腎毒性的一個方面的優選生物標誌物組或組合涵蓋至少以下生物標誌物或基本上由以下生物標誌物組成:用於雌性受試者的脯氨酸、溶血磷脂醯膽鹼(C18:2)、吲哚-3-乳酸，Y-亞麻酸(C18:順[6,9, 12] 3)和反-4-羥脯氨酸；以及用於雄性受試者的溶血磷脂醯膽鹼(C18:0)、磷脂醯膽鹼(C16:0，C20:5)、甲硫氨酸、吲哚-3-乳酸和神經酸(C24:順[15] I)。更優選地，相對於尚未與高2，4-滴丙酸、MCPA、高2-甲-4-氯丙酸、五氯酚或丙磺舒接觸或未遭遇腎毒性的參考，前述生物標誌物改變，如後續下表中所示。
[0063]優選地待確定以便診斷腎小管壞死作為腎毒性的一個方面的優選生物標誌物組或組合涵蓋至少以下生物標誌物或基本上由以下生物標誌物組成:用於雌性受試者的馬尿酸、二十二碳六烯酸(C22:順[4，7，10，13，16，19]6)、亮氨酸、二十二碳五烯酸(C22:順[7，10，13，16，19]5)和乳酸酯。更優選地，相對於尚未與兩性黴素B、六氯丁二烯或妥布黴素s.c.接觸或未遭遇腎毒性的參考，前述生物標誌物改變，如後續下表中所示。
[0064]優選地待確定以便診斷ACE抑制劑誘導樣缺陷作為腎毒性的一個方面的優選生物標誌物組或組合涵蓋至少以下生物標誌物或基本上由以下生物標誌物組成:用於雄性受試者的賴氨酸、甘氨酸、胞嘧啶、1，5-失水山梨醇和穀氨酸鹽。更優選地，相對於尚未與賴諾普利或雷米普利、可可鹼、茶鹼、妥布黴素s.C.或磷酸三甲苯酯接觸或未遭遇腎毒性的參考，前述生物標誌物改變，如後續下表中所示。
[0065]優選地待確定以便診斷間質性腎炎作為腎毒性的一個方面的優選生物標誌物組或組合涵蓋至少以下生物標誌物或基本上由以下生物標誌物組成:用於雄性受試者的二十四烷酸(C24:0)、肌酸、絲氨酸、蘇氨酸和二十烷酸(C20:0)。更優選地，相對於尚未與安乃近、乙苯或石膽酸接觸或未遭遇腎毒性的參考，前述生物標誌物改變，如後續下表中所
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[0066]優選地待確定以便診斷直接腎小管缺陷作為腎毒性的一個方面的優選生物標誌物組或組合涵蓋至少以下生物標誌物或基本上由以下生物標誌物組成:用於雄性受試者的溶血磷脂醯乙醇胺(C22:0)、亮氨酸、油酸(C18:順[9]1)、TAG No02和極性級分甘油-3-磷酸。更優選地，相對於尚未與六氯丁二烯或氫醌接觸或未遭遇腎毒性的參考，前述生物標誌物改變，如後續下表中所示。
[0067]如本文所用，術語「確定該量」指確定生物標誌物(即代謝物或分析物)的至少一個特徵性特徵。本發明的特徵性特徵是表徵生物標誌物的物理和/或化學特性(包括生物化學特性)的特徵。這類特性例如包括分子量、粘度、密度、電荷、自旋、光學活性、顏色、螢光、化學發光、元素組成、化學結構、與其他化合物反應的能力、在生物讀出系統中激發反應的能力(例如，誘導報導基因)等。所述特性的值可以充當特徵性特徵並且可以通過本領域熟知的技術確定。另外，特徵性特徵可以是通過標準操作(例如，數學計算如乘法、除法或對數演算)從生物標誌物的物理和/或化學特性的值推導出的任何特徵。最優選地，至少一個特徵性特徵允許確定和/或化學鑑定生物標誌物及其量。因此，特徵值，優選地，還包含信息，所述信息涉及推導出特徵值的生物標誌物的豐度。例如，生物標誌物的特徵值可以是質譜中的峰。這種峰含有生物標誌物的特徵信息，即m/z (質/荷比)信息，以及與樣品中所述生物標誌物(即其量)的豐度相關的強度值。
[0068]如之前討論，根據本發明方法待確定的至少一種生物標誌物可以優選地定量或半定量地確定。對於定量確定，將確定生物標誌物的絕對量或精確量；或生物標誌物的相對量將基於針對上文中提到的特徵性特徵所確定的值來確定。相對量可以在其中可以不確定或應當不確定生物標誌物的精確量的情況下確定。在這種情況下，可以確定生物標誌物存在的量是否相對於以第二量包含所述生物標誌物的第二樣品放大或削減。因此，定量分析生物標誌物還包括有時所稱的生物標誌物半定量分析。
[0069]另外，如在本發明方法中使用的確定優選地包括在先前所提到的分析步驟之前使用化合物分離步驟。優選地，所述化合物分離步驟導致由樣品包含的至少一種生物標誌物的時間分辨分離。因此，根據本發明優選待使用的合適分離技術包括全部色譜分離技術，如液相色譜(LC)、高效液相色譜(HPLC)、氣相色譜(GC)、薄層層析、大小排阻或親和層析。這些技術是本領域技術人員熟知的並且可以由本領域技術人員在不另外費力的情況下應用。最優選地，LC和/或GC是由本發明方法構思的色譜技術。用於這類生物標誌物確定的合適裝置是本領域熟知的。優選地，使用質譜法，特別是氣相色譜質譜法(GC-MS)，液相色譜質譜法(LC-MS)、直接注入質譜法或傅立葉變換離子迴旋共振質譜法(FT-1CR-MS)、毛細管電泳質譜法(CE-MS)、高效液相色譜偶聯質譜法(HPLC-MS)、四極質譜法、任何依次耦合質譜法，如MS-MS或MS-MS-MS、電感耦合等離子體質譜法(ICP-MS)、熱解質譜法(Py-MS)、離子遷移率質譜法或時間飛行質譜法(TOF)。最優選地，使用LC-MS和/或GC-MS，如下文詳細描述。所述技術在 Nissenl995, Journal of Chromatography A, 703:37-57、US4, 540，884 或US5, 397，894中公開,所述文獻的公開內容因而通過引用的方式併入作為參考。作為替代或除質譜技術之外，以下技術可以用於化合物確定:核磁共振(NMR)、磁共振成像(MRI)Ji立葉變換紅外分析(FT-1R)、紫外(UV)光譜法、折射率(RI)、螢光檢測、放射化學檢測、電化學檢測、光散射(LS)，色散拉曼光譜法或火焰電離檢測(FID)。這些技術是本領域技術人員熟知的並且可以在不另外費力的情況下應用。本發明的方法應當優選地由自動化輔助。例如，樣品加工或預處理可以由機器人自動化。數據處理和比較優選地由合適的電腦程式和資料庫輔助。如前文所述的自動化允許以高通量方案使用本發明的方法。
[0070]另外，也可以通過特異性化學或生物測定法確定生物標誌物。所述測定法應當包含允許特異性檢測樣品中生物標誌物的手段。優選地，所述手段能夠特異性識別生物標誌物的化學結構或能夠基於生物標誌物與其他化合物反應的能力或它在生物讀出系統中激發反應的能力(例如，誘導報導基因)特異性鑑定該生物標誌物。能夠特異性識別生物標誌物的化學結構的手段優選地是與生物標誌物特異性結合的檢測劑，更優選地是與化學結構特異性相互作用的抗體或其他蛋白質，如受體或酶，或適配子。例如，可以使用生物標誌物作為抗原，通過本領域熟知的方法獲得特異性抗體。如本文提到的抗體包括多克隆和單克隆抗體，以及其能夠結合抗原或半抗原的片段，如Fv、Fab和F(ab) 2片段。本發明還包括人源化雜合抗體，其中顯示所需抗原特異性的非人類供體抗體的胺基酸序列與人類接納體抗體的序列組合。另外，涵蓋單鏈抗體。供體序列通常將至少包括供體的結合抗原的胺基酸殘基，但是也可以包含供體抗體的結構上和/或功能上相關的其他胺基酸殘基。可以通過本領域熟知的幾種方法製備這類雜合體。能夠特異性識別代謝物的合適蛋白質優選地是參與所述生物標誌物的代謝轉化的酶。所述酶可以利用生物標誌物(例如，代謝物)作為底物或可以將底物轉化成生物標誌物，例如，代謝物。另外，所述抗體可以用作基礎以產生特異性識別生物標誌物的寡肽。這些寡肽應當例如包含針對所述生物標誌物的酶結合結構域或袋。基於抗體和/或酶的合適測定法可以是RIA (放射免疫測定法)、ELISA (酶聯免疫吸附測定法)、夾心酶免疫試驗、電化學發光夾心免疫測定法(ECLIA)、解離增強鑭系元素螢光免疫測定法(DELFIA)或固相免疫試驗。與生物標誌物特異性結合的適配子可以通過本領域熟知的方法產生(Ellingtonl990, Nature346:818-822 ；Vater2003, Curr Opin DrugDiscov Devel6(2):253-261)。另外，也可以基於生物標誌物與其他化合物反應的能力，即通過特定化學反應鑑定生物標誌物。另外，可以基於生物標誌物在生物讀出系統中激發反應的能力而確定樣品中的生物標誌物。應當將生物學反應作為讀數檢出，所述讀數表示由樣品包含的代謝物的存在和/或其量。生物學反應可以例如是誘導細胞或生物的基因表達或表型反應。
[0071]術語「參考」指至少一種生物標誌物的特徵性特徵的值，並且優選地，指表示能與腎毒性相關的所述生物標誌物的量的值。
[0072]這類參考優選地從源自遭遇腎毒性的受試者或受試者組的樣品中或從源自已經與兩性黴素B、P -紫羅酮、咖啡因、卡託普利、卡鉬、環孢菌素A、高2，4-滴丙酸、安乃近、乙苯、呋塞米、六氯丁二烯、氫醌、賴諾普利、石膽酸、MCPA、高2-甲-4-氯丙酸、青黴胺、五氯酚、丙磺舒、雷米普利、可可鹼、茶鹼、妥布黴素s.c.、磷酸三甲苯酯、1，I, 2，2-四氯乙烷、2，2，4-三甲基戍燒、D-芋烯或萘燒接觸的受試者或受試者組的樣品中獲得。受試者或受試者組可以分別通過局部或全身施用模式與所述化合物接觸，只要該化合物變得生物可利用即可。優選的施用模式在下文後續實施例中描述。
[0073]備選地，但是卻仍是優選地，參考可以從下述樣品獲得，所述樣品源自尚未與兩性黴素B、β -紫羅酮、咖啡因、卡託普利、卡鉬、環孢菌素Α、高2，4-滴丙酸、安乃近、乙苯、呋塞米、六氯丁二烯、氫醌、賴諾普利、石膽酸、MCPA、高2-甲-4-氯丙酸、青黴胺、五氯酚、丙磺舒、雷米普利、可可鹼、茶鹼、妥布黴素s.c.、磷酸三甲苯酯、1，I, 2，2-四氯乙烷、2，2，4-三甲基戊烷、D-薴烯或萘烷接觸的受試者或受試者組或相對於腎毒性和更優選地也相對於其他疾病而言的健康受試者或這類受試者的組。
[0074]可以如上文所述就生物標誌物的量確定參考。具體而言，優選地通過以下方式從如本文提到的受試者組的樣品獲得參考:分別確定來自該組的每位個體的樣品中至少一種生物標誌物各自的相對量或絕對量並且隨後確定所述相對量或絕對量或通過使用本文中他處所提到的統計技術從其中推導出的任何參數的中位數或平均值。備選地，參考可以優選地通過確定樣品中至少一種生物標誌物各自的相對量或絕對量來獲得，所述樣品來自如本文提到的受試者組的樣品的混合物。這種混合物優選地由來自樣品的等體積部分組成，其中所述樣品從所述組的每位個體獲得。
[0075]另外，參考還優選地可以是經計算的參考，最優選地是源自個體群體的至少一種生物標誌物各自的相對量或絕對量的平均值或中位值。所述個體群體是本發明方法待研究的受試者所來源的群體。然而，應當理解為確定經計算的參考而待研究的受試者群體優選地由表觀健康的受試者(例如未治療過)組成或包含許多位表觀健康的受試者，所述受試者多到足以在統計上抵抗因所述群體中存在試驗對象所致的顯著平均數或中位數變化。可以如本文中他處所述那樣確定該群體的所述個體的至少一種生物標誌物的絕對量或相對量。如何計算合適的參考值，優選地，平均數或中位數，是本領域熟知的。用於計算合適參考的其他技術包括使用接收者操作特徵(ROC)曲線計算法優化，所述計算法也是本領域熟知的並且可以基於給定的受試者組群在不另外費力的情況下，對具有給定特異性和靈敏度的分析系統實施計算。之前所指的受試者群體或組應當包含多位受試者，優選地，至少5、
10、50、100、1，000或10，000位受試者至多達整個群體。更優選地，在這個情境下提到的受試者組是具有統計上代表給定群體的大小的受試者組，即統計代表性樣品。應當理解通過本發明方法待診斷的受試者和所述多個受試者中的受試者具有相同的物種並且優選地具有相同的性別。
[0076]更優選地，參考將存儲於合適的數據存儲介質如資料庫中，並且因此還可用於未來的診斷。這還允許有效地診斷腎毒性素質，因為一旦(在未來)已經證實從中獲得相應參考樣品的受試者(確實)形成腎毒性，則可以在資料庫中鑑定合適的參考結果。
[0077]術語「比較」指評估至少一種生物標誌物的定性或定量確定的量是否與參考相同或與參考不同。
[0078]在參考結果從源自遭遇腎毒性的受試者或受試者組或已經與兩性黴素B、β -紫羅酮、咖啡因、卡託普利、卡鉬、環孢菌素Α、高2，4-滴丙酸、安乃近、乙苯、呋塞米、六氯丁二烯、氫醌、賴諾普利、石膽酸、MCPA、高2-甲-4-氯丙酸、青黴胺、五氯酚、丙磺舒、雷米普利、可可鹼、茶鹼、妥布黴素s.c.、磷酸三甲苯酯、1，I, 2，2-四氯乙烷、2，2，4-三甲基戊烷、D-薴烯或萘烷接觸的受試者或受試者組的樣品獲得的情況下，可以基於從測試樣品獲得的量和前述參考之間相同或相似性的程度，即基於就至少一種生物標誌物而言相同的定性或定量組成而診斷腎毒性。相同的量包括這些量，所述量並不以統計顯著方式不同並且優選地至少處於參考的第I和第99百分位數、第5和第95百分位數，第10和第90百分位數，第20和第80百分位數、第30和第70百分位數、第40和第60百分位數之間、更優選地，參考的第50、第60、第70、第80、第90或第95百分位數之間的區間內部。從源自遭遇腎毒性的受試者或受試者組或已經與兩性黴素B、P -紫羅酮、咖啡因、卡託普利、卡鉬、環孢菌素A、高2，4-滴丙酸、安乃近、乙苯、呋塞米、六氯丁二烯、氫醌、賴諾普利、石膽酸、MCPA、高
2-甲-4-氯丙酸、青黴胺、五氯酚、丙磺舒、雷米普利、可可鹼、茶鹼、妥布黴素s.c.、磷酸三甲苯酯、1，I, 2，2-四氯乙烷、2，2，4-三甲基戊烷、D-薴烯或萘烷接觸的受試者或受試者組的樣品所獲得的參考可以在本發明的方法中應用，以便診斷腎毒性或用於確定化合物是否能夠在受試者中誘導腎毒性。在這種情況下，優選地，至少一種生物標誌物的與參考基本上相同的量將指示存在腎毒性或能夠誘導腎毒性的化合物，而至少一種生物標誌物的與參考不同的量將指示不存在腎毒性或不能夠誘導腎毒性的化合物。
[0079]另外，從源自遭遇腎毒性的受試者或受試者組或已經與兩性黴素B、P -紫羅酮、咖啡因、卡託普利、卡鉬、環孢菌素A、高2，4-滴丙酸、安乃近、乙苯、呋塞米、六氯丁二烯、氫醌、賴諾普利、石膽酸、MCPA、高2-甲-4-氯丙酸、青黴胺、五氯酚、丙磺舒、雷米普利、可可鹼、茶鹼、妥布黴素s.c.、磷酸三甲苯酯、1，I, 2，2-四氯乙烷、2，2，4-三甲基戊烷、D-薴烯或萘烷接觸的受試者或受試者組的樣品所獲得的參考可以用於鑑定用於治療腎毒性的物質。在這種情況下，優選地，至少一種生物標誌物的與參考不同的量指示適於治療腎毒性的物質，而至少一種生物標誌物的與參考基本上相同的量將指示不能夠治療腎毒性的物質。
[0080]在參考結果從源自尚未與兩性黴素B、0 -紫羅酮、咖啡因、卡託普利、卡鉬、環孢菌素A、高2，4-滴丙酸、安乃近、乙苯、呋塞米、六氯丁二烯、氫醌、賴諾普利、石膽酸、MCPA、高2-甲-4-氯丙酸、青黴胺、五氯酚、丙磺舒、雷米普利、可可鹼、茶鹼、妥布黴素s.c.、磷酸三甲苯酯、1，1，2，2-四氯乙烷、2，2，4-三甲基戊烷、D-薴烯或萘烷接觸或未遭遇腎毒性的受試者或受試者組的樣品獲得的情況下，可以基於從測試樣品獲得的測試量和前述參考之間的差異，即就至少一種生物標誌物而言定性或定量組成的差異而診斷所述腎毒性。
[0081]如果使用如上所述的經計算的參考，則同樣適用。
[0082]差異可以是至少一種生物標誌物的絕對量或相對量增加(有時稱作生物標誌物的上調；還見實施例)或所述量的減少或不存在可檢測量的生物標誌物(有時稱作生物標誌物的下調；還見實施例)。優選地，相對量或絕對量的差異是顯著的，即處於參考的第45和第55百分位數、第40和第60百分位數、第30和第70百分位數、第20和第80百分位數、第10和第90百分位數、第5和第95百分位數、第I和第99百分位之間數之間的區間外部。
[0083]從源自尚未與兩性黴素B、(6-紫羅酮、咖啡因、卡託普利、卡鉬、環孢菌素A、高2，4-滴丙酸、安乃近、乙苯、呋塞米、六氯丁二烯、氫醌、賴諾普利、石膽酸、MCPA、高
2-甲-4-氯丙酸、青黴胺、五氯酚、丙磺舒、雷米普利、可可鹼、茶鹼、妥布黴素s.c.、磷酸三甲苯酯、1，I, 2，2-四氯乙 烷、2，2，4-三甲基戊烷、D-薴烯或萘烷接觸或未遭遇腎毒性的受試者或受試者組的樣品所獲得的參考可以在本發明的方法中應用，以便診斷腎毒性或用於確定化合物是否能夠在受試者中誘導腎毒性。在這種情況下，優選地，至少一種生物標誌物的與參考不同的量將指示存在腎毒性或能夠誘導腎毒性的化合物，而至少一種生物標誌物的與參考基本上相同的量將指示不存在腎毒性或不能夠誘導腎毒性的化合物。另外，從源自尚未與兩性黴素B、β -紫羅酮、咖啡因、卡託普利、卡鉬、環孢菌素Α、高2，4-滴丙酸、安乃近、乙苯、呋塞米、六氯丁二烯、氫醌、賴諾普利、石膽酸、MCPA、高2-甲-4-氯丙酸、青黴胺、五氯酚、丙磺舒、雷米普利、可可鹼、茶鹼、妥布黴素s.c.、磷酸三甲苯酯、1，I, 2，2-四氯乙烷、2，2，4-三甲基戊烷、D-薴烯或萘烷接觸或未遭遇腎毒性的受試者或受試者組的樣品所獲得的參考可以用來鑑定用於治療腎毒性的物質。在這種情況下，優選地，至少一種生物標誌物的與參考基本上相同的量指示適於治療腎毒性的物質，而至少一種生物標誌物的與參考不同的量將指示不適於治療腎毒性的物質。
[0084]優選的參考是在後續表中提到的那些或可以在後續實施例後產生的那些。另外，相對差異，即各個生物標誌物的量的增加或減少，優選地是下表中列舉的那些。另外，優選地，觀察到的差異(即增加或減少)的程度優選地是根據下表中所示因素的增加或減少。
[0085]優選地，當選自表la、lc、2a、2c、3a、3c、4a、4c、5a、6a、7a、8a 或 Ila 時，至少一種生物標誌物相對於尚未與兩性黴素B、β-紫羅酮、咖啡因、卡託普利、卡鉬、環孢菌素Α、高2，4-滴丙酸、安乃近、乙苯、呋塞米、六氯丁二烯、氫醌、賴諾普利、石膽酸、MCPA、高
2-甲-4-氯丙酸、青黴胺、五氯酚、丙磺舒、雷米普利、可可鹼、茶鹼、妥布黴素s.c.、磷酸三甲苯酯、1，I, 2，2-四氯乙烷、2，2，4-三甲基戊烷、D-薴烯或萘烷接觸或未遭遇腎毒性的參考和更優選地相對於下表所用的參考而言增加。
[0086]優選地，當選自表lb、ld、2b、2d、3b、3d、4b、4d、5b、6b、7b、8b 或 Ilb 時，至少一
種生物標誌物相對於尚未與兩性黴素B、β-紫羅酮、咖啡因、卡託普利、卡鉬、環孢菌素Α、高2，4-滴丙酸、安乃近、乙苯、呋塞米、六氯丁二烯、氫醌、賴諾普利、石膽酸、MCPA、高
2-甲-4-氯丙酸、青黴胺、五氯酚、丙磺舒、雷米普利、可可鹼、茶鹼、妥布黴素s.c.、磷酸三甲苯酯、1，I, 2，2-四氯乙烷、2，2，4-三甲基戊烷、D-薴烯或萘烷接觸或未遭遇腎毒性的參考和更優選地相對於下表所用的參考而言減少。
[0087]比較優選地由自動化輔助。例如，可以使用合適的電腦程式，所述電腦程式包含用於比較兩個不同數據集(例如，包含特徵性特徵的值的數據集)的算法。這類電腦程式和算法是本領域熟知的。不限於上文所述，也可以手工地實施比較。
[0088]術語「用於治療腎毒性的物質」指這樣的化合物，所述化合物可以直接幹擾引起在本說明書中其他地方提到的腎毒性的生物學機制。備選地，優選的化合物還可以幹擾與腎毒性相關的症狀的形成或進展。通過本發明方法待鑑定的物質可以是有機和無機化學品，如小分子、多核苷酸、包括siRNA、核酶或微RNA分子的寡核苷酸、肽、包括抗體的多肽或其他人工或生物聚合物，如適配子(aptamer)。優選地，該物質適合作為藥物、前藥或用於開發藥物或前藥的前導物質。
[0089]應當理解如果本發明的方法待用於鑑定用於治療腎毒性的藥物或用於毒理學評估化合物(即確定化合物是否能夠誘導腎毒性)，則可以出於統計原因研究多位受試者的試樣。優選地，這種試驗對象組群內部的代謝組學應當儘可能地相似，以避免例如由除了待研究化合物之外的多種因素造成的差異。待用於所述方法的受試者優選地是實驗室動物如嚙齒類並且更優選地是大鼠。應當進一步理解所述實驗室動物應當優選地在完成本發明的方法後處死。試驗組群的全部受試者和參考動物應當在相同條件下維持以避免任何差異性環境影響。W02007/014825中詳述了提供這類動物的合適條件和方法。所述條件在此通過引用方式併入作為參考。
[0090]本發明的方法可以優選地用本發明的裝置實施。如本文所用的裝置應當包括至少前述單元。該裝置的單元彼此有效連接。怎樣以運行方式連接單元將取決於包括於該裝置中的單元的類型。例如，當在分析單元中應用自動定性或定量確定至少一種生物標誌物的手段情況下，通過所述自動運行單元獲得的數據可以由評價單元處理，例如，由作為數據處理器的計算機上運行的電腦程式處理以促進診斷。在這種情況下，優選地，所述單元由單一裝置包含。然而，分析單元和評價單元也可以物理地分離。在這種情況下，有效連接可以藉助單元之間允許數據傳輸的有線和無線連接實現。無線連接可以使用無線區域網(WLAN)或網際網路。接線可以由單元之間的光纜連接和非光纜連接實現。用於有線連接的電纜優選地適於高通量數據傳輸。
[0091]用於確定至少一種生物標誌物的優選分析單元包括特異性識別如本文中他處所述的至少一種生物標誌物的檢測劑，如抗體、蛋白質或適配子，和使所述檢測劑與待測試樣品接觸的區帶。檢測劑可以固定在用於接觸的區帶上或可以在已經加載樣品後施加至所述區帶。分析單元應當優選地適用於定性和/或定量確定檢測劑和至少一種生物標誌物的複合物的量。應當理解當檢測劑與至少一種生物標誌物結合時,至少一種生物標誌物、檢測劑或兩者的至少一種可度量物理或化學特性將改變，從而可以通過檢測器測量所述改變，優選地，所述檢測器包含於分析單元中。然而，在使用分析單元如測試條的情況下，檢測器和分析單元可以是僅為測量才置於一起的分別的組件。基於至少一種可度量物理或化學特性的檢測到的改變，分析單元可以計算如本文中他處所述的至少一種生物標誌物的強度值。隨後可以為進一步加工和評價將所述強度值傳輸至評價單元。最優選地，至少一種生物標誌物的量可以基於使用如本文中他處所述的檢測劑的技術，通過ELISA、EIA或RIA確定。備選地，如本文提到的分析單元優選地包括用於分離生物標誌物的設備，如色譜設備，和用於確定生物標誌物的設備，如光譜測定設備。上文已經詳細描述了合適的設備。待用於本發明系統中的用於分離化合物的優選設備包括色譜設備，更優選地用於液相色譜、HPLC和/或氣相色譜的設備。用於確定化合物的優選設備包括質譜設備，更優選地，GC-MS、LC-MS、直接注入質譜法、FT-1CR-MS、CE-MS、HPLC-MS、四極質譜法、依次耦合質譜法(包括MS-MS或MS-MS-MS)、ICP-MS, Py-MS或T0F。分離和確定設備優選地彼此偶聯。最優選地，LC-MS和/或GC-MS用於根據本發明提到的分析單元中。
[0092]本發明裝置的評價單元優選地包括數據處理設備或計算機，其適應於執行用於實施如本文中他處所述的比較的規則。另外，評價單元優選地包括具有存儲的參考的資料庫。如本文所用的資料庫包括在合適存儲介質上的數據集合。另外，該資料庫優選地還包含資料庫管理系統。資料庫管理系統優選地是基於網絡、分層或面向對象的資料庫管理系統。另夕卜，資料庫可以是聯邦或綜合資料庫。更優選地，資料庫將作為分布式(聯邦)系統如作為客戶-伺服器-系統執行。更優選地，將資料庫結構化以便允許檢索算法將試驗數據集與由數據集合構成的數據集比較。具體而言，通過使用這種算法，可以就指示腎毒性的相似或相同數據集檢索資料庫(例如查詢檢索)。因而，如果可以在數據集合中鑑定到相同或相似的數據集，則試驗數據集將與腎毒性相關。評價單元也可以優選地包括其他資料庫或與之有效關聯，所述其他資料庫具有基於建立的腎毒性診斷對治療性或預防性介入或改進生活方式的推薦。所述其他資料庫可以優選地用通過評價單元所獲得的診斷結果自動檢索，以確定對於已經從中獲得測試樣品的受試者合適的推薦，目的是治療或預防腎毒性。
[0093]在本發明裝置的一個優選實施方案中，所述存儲的參考是源自已知遭遇腎毒性的受試者或受試者組或已經與選自以下的至少一種化合物接觸的受試者或受試者組的參考:兩性黴素B、P -紫羅酮、咖啡因、卡託普利、卡鉬、環孢菌素A、高2，4-滴丙酸、安乃近、乙苯、呋塞米、六氯丁二烯、氫醌、賴諾普利、石膽酸、MCPA、高2-甲-4-氯丙酸、青黴胺、五氯酚、丙磺舒、雷米普利、可可鹼、茶鹼、妥布黴素s.c.、磷酸三甲苯酯、1，I, 2，2-四氯乙烷、2，2，4-三甲基戊烷、D-薴烯和萘烷，並且所述數據處理器執行指令以相對於存儲的參考，比較由分析單元確定的至少一種生物標誌物的量，其中測試樣品中至少一種生物標誌物與參考相比基本上相同的量指示存在腎毒性或其中測試樣品中至少一種生物標誌物與參考相比不同的量指示不存在腎毒性。
[0094]在本發明裝置的另一個優選實施方案中，所述存儲的參考是源自已知未遭遇腎毒性的受試者或受試者組或尚未與選自以下的至少一種化合物接觸的受試者或受試者組的參考:兩性黴素B、P -紫羅酮、咖啡因、卡託普利、卡鉬、環孢菌素A、高2，4-滴丙酸、安乃近、乙苯、呋塞米、六氯丁二烯、氫醌、賴諾普利、石膽酸、MCPA、高2-甲-4-氯丙酸、青黴胺、五氯酚、丙磺舒、雷米普利、可可鹼、茶鹼、妥布黴素s.c.、磷酸三甲苯酯、1，I, 2，2-四氯乙烷、2，2，4-三甲基戊烷、D-薴烯和萘烷，並且所述數據處理器執行指令以相對於存儲的參考，比較由分析單元確定的至少一種生物標誌物的量，其中測試樣品中至少一種生物標誌物與參考相比不同的量指示存在腎毒性或其中測試樣品中至少一種生物標誌物與參考相比基本上相同的量指示不存在腎毒性。
[0095]該裝置因此也可以在沒有專門醫學知識的情況下由通過醫療或實驗室工作人或患者使用，尤其在包括作出推薦的專家系統時使用。該裝置還適於貼近患者應用，因為該裝置可以改造成便攜樣式。
[0096]術語「試劑盒」指前述組分的集合，所述組分優選地分別或在單一容器中提供。該容器還包括用於實施本發明方法的說明書。這些說明書可以處於手冊的形式或可以由在計算機或數據處理裝置上執行時能夠實施本發明方法中所提到的比較並且因此建立診斷的電腦程式代碼提供。電腦程式代碼可以在數據存儲介質或設備如光或磁存儲介質(例如，光碟(CD)、CD-ROM、硬碟、光儲存介質或磁碟盒)上或直接在計算機或數據處理裝置上提供。結合本發明試劑盒所提到的「標準」是當至少一種生物標誌物在溶液中存在或在預定體積溶液中溶解時，至少一種生物標誌物的與所述至少一種生物標誌物的下述量相似的量，所述量存在於(i)已知遭遇腎毒性的受試者或受試者組或已經與選自兩性黴素B、^ -紫羅酮、咖啡因、卡託普利、卡鉬、環孢菌素A、高2，4-滴丙酸、安乃近、乙苯、呋塞米、六氯丁二烯、氫醌、賴諾普利、石膽酸、MCPA、高2-甲-4-氯丙酸、青黴胺、五氯酚、丙磺舒、雷米普利、可可鹼、茶鹼、妥布黴素s.c.、磷酸三甲苯酯、1，I, 2，2-四氯乙烷、2，2，4-三甲基戊烷、D-薴烯和萘烷的至少一種化合物接觸的受試者或受試者組中，或(ii)源自已知未遭受腎毒性的受試者或受試者組或尚未與選自兩性黴素B、P -紫羅酮、咖啡因、卡託普利、卡鉬、環孢菌素A、高2，4-滴丙酸、安乃近、乙苯、呋塞米、六氯丁二烯、氫醌、賴諾普利、石膽酸、MCPA、高2-甲-4-氯丙酸、青黴胺、五氯酚、丙磺舒、雷米普利、可可鹼、茶鹼、妥布黴素S.c.、磷酸三甲苯酯、1，I, 2，2-四氯乙烷、2，2，4-三甲基戊烷、D-薴烯和萘烷的至少一種化合物接觸的受試者或受試者組。
[0097]有利地，已經在作為本發明基礎的研究中發現，如本文中指出的至少一種生物標誌物的量允許診斷腎毒性，具體而言，由兩性黴素B、β -紫羅酮、咖啡因、卡託普利、卡鉬、環孢菌素Α、高2，4-滴丙酸、安乃近、乙苯、呋塞米、六氯丁二烯、氫醌、賴諾普利、石膽酸、MCPA、高2-甲-4-氯丙酸、青黴胺、五氯酚、丙磺舒、雷米普利、可可鹼、茶鹼、妥布黴素s.c.、磷酸三甲苯酯、1，I, 2，2-四氯乙烷、2，2，4-三甲基戊烷、D-薴烯和萘烷引起的腎毒性。通過確定增加數目的或甚至全部的前述生物標誌物，甚至將更多地改善該方法的特異性和準確度。代謝組學的定量和/或定性組成相對於這些特定生物標誌物的變化在所述毒性的其他體徵臨床上出現之前就指示腎毒性。與本發明提供的生物標誌物確定相比，目前用於診斷腎毒性的形態學、生理學以及生物化學參數較不特異性並且較不靈敏。歸功於本發明，可以更有效地和可靠地評估化合物的腎毒性。另外，基於前述研究結果，可用於治療腎毒性的藥物篩選測試法是可行的。通常而言，本發明構思了受試者樣品中選自表la、lb、lc、ld、2a、2b、2c、2d、3a、3b、3c、3d、4a、4b、4c、4d、5a、5b、6a、6b、7a、7b、8a、8b、Ila 或 Ilb 中任一表的至少一種生物標誌物或針對所述生物標誌物的檢測劑的用途，用於診斷腎毒性、用於確定化合物是否能夠誘導腎毒性或用於鑑定能夠治療腎毒性的物質。另外，本發明總體上構思了受試者樣品中至少一種生物標誌物或針對該生物標誌物的檢測劑用於鑑定易響應腎毒性治療的受試者的用途。在本發明的這種情境下待使用的優選檢測劑是本文中他處所提到的那些。另外，本發明的方法可以有利地以裝置實施。另外，可以提供允許實施所述方法的試劑盒。
[0098]本發明還涉及數據集合,所述數據集合包含在表la、lb、lc、ld、2a、2b、2c、2d、3a、3b、3c、3d、4a、4b、4c、4d、5a、5b、6a、6b、7a、7b、8a、8b、Ila 或 Ilb 的任一表中所述的生物標
志物的特徵值。術語「數據集合」指可以按物理和/邏輯方式歸結分組的數據匯集。因此，可以在單獨的數據存儲介質中或在彼此有效連接的物理分立的數據儲存介質中實施數據集合。優選地，藉助資料庫實施數據集合。因此，如本文所用的資料庫包括在合適存儲介質上的數據集合。另外，該資料庫優選地還包含資料庫管理系統。資料庫管理系統優選地是基於網絡、分層或面向對象的資料庫管理系統。另外，資料庫可以是聯邦或綜合資料庫。更優選地，資料庫將作為分布式(聯邦)系統如作為客戶-伺服器-系統執行。更優選地，將資料庫結構化以便允許檢索算法將試驗數據集與由數據集合構成的數據集比較。具體而言，通過使用這種算法，可以就指示腎毒性的相似或相同數據集檢索資料庫(例如查詢檢索)。因而，如果可以在數據集合中鑑定到相同或相似的數據集，則試驗數據集將與腎毒性相關。因此，從數據集合獲得的信息可以用來基於從受試者獲得的試驗數據集診斷腎毒性。
[0099]另外，本發明涉及包含所述數據集合的數據存儲介質。如本文所用的術語「數據存儲介質」涵蓋基於單一物理實體的數據儲存介質，如CD、CD-ROM、硬碟、光儲存介質或磁碟盒。另外，該術語還包括由物理分立的實體組成的數據儲存介質，所述數據儲存介彼此以如此方式有效連接，以至於提供前述數據集合，優選地，以合適查詢檢索的方式提供。
[0100]本發明還涉及一個系統，該系統包含:
[0101](a)用於比較樣品的至少一種生物標誌物的特徵值的設備，所述設備有效連接至
[0102](b)本發明的數據存儲介質。[0103]如本文所用的術語「系統」指彼此有效連接的不同設備。所述設備可以在單一裝置中實現或可以在彼此有效連接的物理分立的裝置中實現。用於比較生物標誌物的特徵值的設備優選地基於如之前提到的比較算法運行。數據存儲介質，優選地包含前述數據集合或資料庫，其中每種存儲的數據集指示腎毒性。因而，本發明的系統允許確定試驗數據集是否包含於存儲在數據存儲介質中的數據集合中。因此，本發明的系統可以作為診斷腎毒性中的診斷手段應用。在系統的一個優選實施方案中，包含用於確定樣品的生物標誌物的特徵值的設備。術語「用於確定生物標誌物的特徵值的設備」優選地指用於確定生物標誌物的前述設備，如質譜設備、ELISA設備、NMR設備或用於實施分析物的化學或生物測定的設備。
[0104]上文所提及的全部參考均就以上描述中明確提到的其完整公開內容以及其特定公開內容，通過引用的方式併入作為參考。以下實施例僅用於說明本發明的目的。無論如何，它們應當不被解釋為在任何方面限制本發明的範圍。
實施例
[0105]實施例:與腎毒性相關的生物標誌物
[0106]在28日期間，對雄性大鼠和雌性大鼠各5隻的組每日一次用所指示的化合物給藥(關於化合物、施加的劑量和施用細節，見下表9)。
[0107]研究中的每個劑量組由每種性別5隻大鼠組成。雄性動物和雌性動物各5隻的額外組充當對照。在開始處理期之前，供應時為62-64日齡的動物適應於舍飼和環境條件7日。將動物群體的全部動物在相同的恆定溫度(20-24±3°C)和相同的恆定溼度(30-70%)下維持。動物群體的動物隨意採食。待使用的食物基本上不含化學汙染物或微生物汙染物。還隨意提供飲用水。因此，水不含如歐洲飲用水指令98/83/EG中制定的化學汙染物和微生物汙染物。照明期是12小時光照，隨後12小時黑暗(12小時光照，從6:00至18:00，和12小時黑暗，從18:00至6:00)。研究在AAALAC批准的實驗室中根據德國動物福利法和歐洲理事會指令86/609/EE進行。根據OE⑶407用於嚙齒類中重複劑量28日口服毒性研究的化學品檢驗指南安排測試系統。如表中所述投予和施用測試物質(表9中的化合物)。
[0108]在第7、14和28日早晨，從麻醉的禁食動物的眶後靜脈叢取得血液。從每隻動物，採集Iml血液，以EDTA作為抗凝血劑。將樣品離心以便產生血漿。全部血漿樣品用N2氣覆蓋並隨後存儲在_80°C直至分析。
[0109]對於基於質譜的代謝物概況分析，提取血漿樣品並且獲得極性級分和非極性(脂質)級分。對於GC-MS分析，將非極性級分在酸性條件下用甲醇處理以產生脂肪酸甲酯。在分析之前，將兩種級分進一步用鹽酸0-甲基-羥胺和吡啶衍生化以使氧代基團轉化成0-甲基肟並且隨後用甲矽烷基化劑衍生化。在LC-MS分析中，將兩種級分均在適宜的溶劑混合物中重構。通過在反相分離柱上梯度洗脫進行HPLC。如W02003073464中所述應用允許與完整篩選分析平行地靶向和高靈敏度MRM(多反應監測)概況分析的質譜檢測。
[0110]通過在線SPE-LC-MS(固相提取-LC-MS)測量類固醇和它們的代謝物。如Yamada等人(Yamada2002, Journal of Analytical Toxicology, 26 (I): 17-22))所述，通過在線SPE-LC-MS測量」L茶酚胺和它們的代謝物。
[0111]在綜合的分析驗證步驟後，將每種分析物的數據針對來自匯集樣品的數據歸一化。這些樣品在整個過程期間平行地進行以解釋過程變異性。通過使用WELCH檢驗比較處理組的均值和相應的未處理對照組的均值,確定對性別、處理持續時間和代謝物特異的處理組值的顯著性並且用相對於對照的處理率和P-值定量。
[0112]通過下表中分析物的排序確定每種毒性模式的最重要生物標誌物。因此，將(表中顯示的)給定模式的參考處理中的代謝變化與其他不相關處理中相同代謝物的變化比較。對於每種代謝物，獲得參考和對照處理的T-值並且由Welch檢驗比較以評估這兩個組是否為顯著差異。取相應T值的最大絕對值表示該模式的最重要代謝物。
[0113]下表中顯示了表明處理大鼠後腎毒性的血漿代謝物組的變化:
[0114]表1a:雌性大鼠中腎毒性(多尿作用)的標誌物；標出顯著上調變化(P-值(0.2) (*)。對於一些代謝物(以#標記)，在表10中提供額外的信息。全部化合物均以高劑量施用。
[0115]
【權利要求】
1.一種用於診斷腎毒性的方法，包括: (a)確定疑似遭遇腎毒性的受:試者的測試樣品中選自表la、lb、lc、ld、2a、2b、2c、2d、3a、3b、3c、3d、4a、4b、4c、4d、5a、5b、6a、6b、7a、7b、8a、8b、Ila 或 lib 中任一表的至少一種生物標誌物的量,和 (b)將步驟(a)中確定的量與參考比較，由此診斷腎毒性。
2.權利要求1的方法，其中所述受試者已經與疑似能夠誘導腎毒性的化合物接觸。
3.一種確定化合物是否能夠在受試者中誘導腎毒性的方法，包括: (a)確定已經與疑似能夠誘導腎毒性的化合物接觸的受試者的樣品中選自表la、lb、lc、ld、2a、2b、2c、2d、3a、3b、3c、3d、4a、4b、4c、4d、5a、5b、6a、6b、7a、7b、8a、8b、Ila 或 Ilb 中任一表的至少一種生物標誌物的量,和 (b)將步驟(a)中確定的量與參考比較，由此確定化合物誘導腎毒性的能力。
4.權利要求2或3的方法，其中所述化合物是選自以下的至少一種化合物:兩性黴素B、@ -紫羅酮、咖啡因、卡託普利、卡鉬、環孢菌素A、高2，4-滴丙酸、安乃近、乙苯、呋塞米、六氯丁二烯、氫醌、賴諾普利、石膽酸、MCPA、高2-甲-4-氯丙酸、青黴胺、五氯酚、丙磺舒、雷米普利、可可鹼、茶鹼、妥布黴素s.c.、磷酸三甲苯酯、1，I, 2，2-四氯乙烷、2，2，4-三甲基戊烷、D-薴烯和萘烷。
5.權利要求1至4中任一項所述的方法，其中所述參考源自(i)遭遇腎毒性的受試者或受試者組或(ii)已經與選自以下的至少一種化合物接觸的受試者或受試者組:兩性黴素B、P -紫羅酮、咖啡因、卡託普利、卡鉬、環孢菌素A、高2，4-滴丙酸、安乃近、乙苯、呋塞米、六氯丁二烯、氫醌、賴諾普利、石膽酸、MCPA、高2-甲-4-氯丙酸、青黴胺、五氯酚、丙磺舒、雷米普利、可可鹼、茶鹼、妥布黴素s.c.、磷酸三甲苯酯、1，I, 2，2-四氯乙烷、2，2，4-三甲基戊烷、D-薴烯和萘烷。
6.權利要求5的方法，其中測試樣品中生物標誌物與參考的基本上相同的量指示腎毒性。
7.權利要求1至4中任一項所述的方法，其中所述參考源自(i)已知未遭遇腎毒性的受試者或受試者組或(ii)尚未與選自以下的至少一種化合物接觸的受試者或受試者組:兩性黴素B、P -紫羅酮、咖啡因、卡託普利、卡鉬、環孢菌素A、高2，4-滴丙酸、安乃近、乙苯、呋塞米、六氯丁二烯、氫醌、賴諾普利、石膽酸、MCPA、高2-甲-4-氯丙酸、青黴胺、五氯酚、丙磺舒、雷米普利、可可鹼、茶鹼、妥布黴素s.c.、磷酸三甲苯酯、1，I, 2，2-四氯乙烷、2，2，4-三甲基戊烷、D-薴烯和萘烷。
8.權利要求1至4中任一項所述的方法，其中所述參考是針對受試者群體中生物標誌物的經計算的參考。
9.權利要求7或8的方法，其中測試樣品中生物標誌物與參考相比不同的量指示腎毒性。
10.一種鑑定用於治療腎毒性的物質的方法，包括步驟: (a)確定遭遇腎毒性的受試者的樣品中選自表la、lb、lc、ld、2a、2b、2c、2d、3a、3b、3c、3d、4a、4b、4c、4d、5a、5b、6a、6b、7a、7b、8a、8b、Ila 或 Ilb 中任一表的至少一種生物標誌物的量，所述受試者已經與疑似能夠治療腎毒性的候選物質接觸；和 (b)將步驟(a)中確定的量與參考比較，由此鑑定能夠治療腎毒性的物質。
11.權利要求10的方法，其中所述參考源自(i)遭遇腎毒性的受試者或受試者組或(ii)已經與選自以下的至少一種化合物接觸的受試者或受試者組:兩性黴素B、β-紫羅酮、咖啡因、卡託普利、卡鉬、環孢菌素Α、高2，4-滴丙酸、安乃近、乙苯、呋塞米、六氯丁二烯、氫醌、賴諾普利、石膽酸、MCPA、高2-甲-4-氯丙酸、青黴胺、五氯酚、丙磺舒、雷米普利、可可喊、茶喊、妥布黴素s.c.、和憐酸二甲苯酯、1，1, 2, 2-四氯乙燒、2，2，4- 二甲基戍燒、D-薴烯和萘烷。
12.權利要求11的方法，其中測試樣品中生物標誌物與參考的不同的量指示能夠治療腎毒性的物質。
13.權利要求10的方法，其中所述參考源自(i)已知未遭遇腎毒性的受試者或受試者組或(ii)尚未與選自以下的至少一種化合物接觸的受試者或受試者組:兩性黴素B、β -紫羅酮、咖啡因、卡託普利、卡鉬、環孢菌素Α、高2，4-滴丙酸、安乃近、乙苯、呋塞米、六氯丁二烯、氫醌、賴諾普利、石膽酸、MCPA、高2-甲-4-氯丙酸、青黴胺、五氯酚、丙磺舒、雷米普利、可可鹼、茶鹼、妥布黴素s.c.、磷酸三甲苯酯、1，1, 2，2-四氯乙烷、2，2，4-三甲基戊烷、D-薴烯和萘烷。
14.權利要求10的方法，其中所述參考是針對受試者群體中生物標誌物的經計算的參考。
15.權利要求13或14的方法，其中測試樣品中生物標誌物與參考的基本上相同的量指示能夠治療腎毒性的物質。
16.選自表la、lb、lc、ld、2a、2b、2c、2d、3a、3b、3c、3d、4a、4b、4c、4d、5a、5b、6a、6b、7a、7b、8a、8b、lla或lib中任一表的至少一種生物標誌物的用途或針對所述生物標誌物的檢測劑的用途，用於診斷受試者樣品中的腎毒性。
17.一種用於診斷疑似遭遇腎毒性的受試者的樣品中腎毒性的裝置，包含: (a)分析單元，其包含針對選自表la、lb、lc、ld、2a、2b、2c、2d、3a、3b、3c、3d、4a、4b、4c、4d、5a、5b、6a、6b、7a、7b、8a、8b、1la或1lb中任一表的至少一種生物標誌物的檢測劑，所述分析單元允許確定樣品中存在的所述生物標誌物的量；和與所述分析單元有效連接的， (b)包含存儲的參考和數據處理器的評價單元，所述評價單元允許相對於存儲的參考，比較由分析單元確定的所述至少一種生物標誌物的量，由此診斷腎毒性。
18.權利要求17的裝置，其中所述存儲的參考是源自已知遭遇腎毒性的受試者或受試者組或已經與選自以下的至少一種化合物接觸的受試者或受試者組的參考:兩性黴素B、β -紫羅酮、咖啡因、卡託普利、卡鉬、環孢菌素Α、高2，4-滴丙酸、安乃近、乙苯、呋塞米、六氯丁二烯、氫醌、賴諾普利、石膽酸、MCPA、高2-甲-4-氯丙酸、青黴胺、五氯酚、丙磺舒、雷米普利、可可鹼、茶鹼、妥布黴素s.c.、磷酸三甲苯酯、1，1, 2，2-四氯乙烷、2，2，4-三甲基戊烷、D-薴烯和萘烷，並且所述數據處理器執行指令以相對於存儲的參考，比較由分析單元確定的至少一種生物標誌物的量,其中測試樣品中至少一種生物標誌物與參考相比基本上相同的量指示存在腎毒性或其中測試樣品中至少一種生物標誌物與參考相比不同的量指示不存在腎毒性。
19.權利要求17的裝置，其中所述存儲的參考是源自已知未遭遇腎毒性的受試者或受試者組或尚未與選自以下的至少一種化合物接觸的受試者或受試者組的參考:兩性黴素B、e -紫羅酮、咖啡因、卡託普利、卡鉬、環孢菌素A、高2，4-滴丙酸、安乃近、乙苯、呋塞米、六氯丁二烯、氫醌、賴諾普利、石膽酸、MCPA、高2-甲-4-氯丙酸、青黴胺、五氯酚、丙磺舒、雷米普利、可可鹼、茶鹼、妥布黴素s.c.、磷酸三甲苯酯、1，I, 2，2-四氯乙烷、2，2，4-三甲基戊烷、D-薴烯和萘烷，並且所述數據處理器執行指令以相對於存儲的參考，比較由分析單元確定的至少一種生物標誌物的量,其中測試樣品中至少一種生物標誌物與參考相比不同的量指示存在腎毒性或其中測試樣品中至少一種生物標誌物與參考相比基本上相同的量指示不存在腎毒性。
20.一種用於診斷腎毒性的試劑盒，包含針對選自表la、lb、lc、ld、2a、2b、2c、2d、3a、3b、3c、3d、4a、4b、4c、4d、5a、5b、6a、6b、7a、7b、8a、8b、Ila 或 Ilb 中任一表的至少一種生物標誌物的檢測劑和針對至少一種生物標誌物的標準物，所述標準物的濃度源自(i)已知遭遇腎毒性的受試者或受試者組或已經與選自以下的至少一種化合物接觸的受試者或受試者組:兩性黴素B、P -紫羅酮、咖啡因、卡託普利、卡鉬、環孢菌素A、高2，4-滴丙酸、安乃近、乙苯、呋塞米、六氯丁二烯、氫醌、賴諾普利、石膽酸、MCPA、高2-甲-4-氯丙酸、青黴胺、五氯酚、丙磺舒、雷米普利、可可鹼、茶鹼、妥布黴素s.c.、磷酸三甲苯酯、1，I, 2，2-四氯乙烷、2，2，4-三甲基戊烷、D-薴烯和萘烷；或源自(ii)已知未遭遇腎毒性的受試者或受試者組或尚未與選自以下的至少一種化合物接觸的受試者或受試者組:兩性黴素B、P -紫羅酮、咖啡因、卡託普利、卡鉬、環孢菌素A、高2，4-滴丙酸、安乃近、乙苯、呋塞米、六氯丁二烯、氫醌、賴諾普利、石膽酸、MCPA、高2-甲-4-氯丙酸、青黴胺、五氯酚、丙磺舒、雷米普利、可可鹼、茶鹼 、妥布黴素s.c.、磷酸三甲苯酯、1，I, 2，2-四氯乙烷、2，2，4-三甲基戊烷、D-薴烯和萘烷。
【文檔編號】G01N33/53GK103814295SQ201280044868
【公開日】2014年5月21日 申請日期:2012年9月14日 優先權日:2011年9月14日
【發明者】H·坎普, T·B·沃克, B·V·拉文茲韋, W·梅勒特, E·法比安, V·施特勞斯, J·C·威爾莫, R·洛塞, M·M·赫羅爾德, A·普奧考汀 申請人:巴斯夫歐洲公司