芽孢乳桿菌、培養方法及其應用的製作方法
2023-05-26 02:11:06 1
專利名稱：芽孢乳桿菌、培養方法及其應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及兩株芽孢乳桿菌菌株、培養方法及其在泡菜生產中的應用。
現有技術中，申請號為94111749.9的發明專利公開了一種利用純種乳酸菌生產泡菜的工藝，該工藝中使用的菌種為已知的乾酪乳桿菌(Lactobacillus casei)和短乳桿菌(Lactobacillus brevis)，其生長慢，生產中對不利條件的耐受性較低，生產的泡菜品種較單一。
本發明的目的是提供兩種芽孢乳桿菌菌株，其生長快，工業生產中對不利條件的耐受性高，生產工藝簡單，成本低，生產的泡菜種類多、質量好。
本發明的目的還提供所述菌株的培養方法，及其在泡菜生產中的應用。
本發明提供的芽孢乳桿菌為芽孢乳桿菌L.B.P.C--5(Sporolactobacillus sp.L.B.P.C--5)CCTCCNOM200024，已於2000年7月6日保藏在中國典型培養物保藏中心(縮寫為CCTCC)，保藏號為CCTCCNOM200024。該菌株是從成熟的泡菜液中分離篩選得到的，其特徵如下(1)菌落特徵在平板上菌落為圓形，凸起，全緣，表面光滑，溼潤，未見明顯的粘稠狀，菌苔表面顏色呈深奶酪色，基質未見分泌的色素。
(2)菌體形態特徵革蘭氏陽性，直長桿菌，以單個細胞形式存在，培養24小時可見芽孢形成，36小時能觀察到個別芽孢脫落，48小時芽孢形成數量增加，3-4天後大量芽孢脫落，細胞不運動，未見鞭毛。
(3)生理生化特性過氧化氫酶實驗接觸酶實驗陰性；可耐5％的NaCl生長，兼性厭氧，在液體培養基中生長有明顯的焦糖香味，可利用阿拉伯糖、核糖、鼠李糖、木糖、纖維二糖、水楊甙產酸。
上述特徵表明，該菌株屬芽孢乳桿菌屬，其生理生化特性及部分形態特徵與芽孢乳桿菌屬現有的種有明顯的區別，其中主要不同點在於現有種不能利用上述六種糖產酸，細胞運動，有少數長的周生鞭毛。
本發明提供的另一芽孢乳桿菌為芽孢乳桿菌L.B.P.C--6(Sporolactobacillus sp.L.B.P.C--6)CCTCCNOM200023，已於2000年7月6日保藏在中國典型培養物保藏中心(縮寫為CCTCC)，保藏號為CCTCCNOM200023。該菌株是從成熟的泡菜液中分離篩選得到的，其特徵如下(1)菌落特徵在平板上菌落為圓形，凸起，全緣，表面光滑，溼潤，有明顯的粘稠狀物質，菌苔表面顏色呈奶酪色，基質未見分泌的色素。
(2)菌體形態特徵革蘭氏陽性，長桿菌，粗壯、以多個細胞聚集在一起，培養12小時，菌體生長旺盛，24小時內可見芽孢形成和少許芽孢脫落，36小時能觀察到部分芽孢脫落，48小時芽孢數量增加，3-4天後大量芽孢脫落，細胞不運動，未見鞭毛。
(3)生理生化特性過氧化氫酶實驗接觸酶實驗陰性；可耐10％的NaCl生長，兼性厭氧，可利用阿拉伯糖、核糖、鼠李糖、木糖、纖維二糖、水楊甙產酸。
上述特徵表明，該菌株屬芽孢乳桿菌屬，其生理生化特性及部分形態特徵與芽孢乳桿菌屬現有的種有明顯的區別，其中主要不同點在於現有種不能利用上述六種糖產酸，在含NaCl 7％的培養基上，大多數種不生長，含NaCl 10％的培養基所有種均不生長，細胞運動，有少數長的周生鞭毛。
本發明的另一目的是提供一種上述菌株的培養方法，芽孢乳桿菌L.B.P.C-5、L.B.P.C--6在乳酸菌培養基上生長，所述的培養基是酵母膏0.75％，蛋白腖0.75％，葡萄糖1％，西紅柿汁28％-32％，KH2PO 0.2％，Twean0.05％，瓊脂2％-2.5％的水溶液，PH6.5--7.0。
同時，本發明還提供上述菌株的應用，先將培養2-3天的菌苔按十倍的梯度擴培二至三次製成培養液(培養液是上述乳酸菌培養基不加瓊脂而成)，每次均培養2-3天，按泡漬液容積的5％--10％加入到泡漬液中，其中菌液可以是L.B.P.C-5的菌液、L.B.P.C-6的菌液、或L.B.P.C-5、L.B.P.C-6的混合菌液，其混合比例為30-70％∶70-30％，泡漬液是由下列成分(重量比)，食鹽8％-15％，蔗糖1％-3％，白酒0.5％-1.5％組成的水溶液，還可根據口味需要加入不超過1％的天然植物香辛料花椒、幹辣椒、八角、三奈，可任意加入一種或幾種成分，再將蔬菜洗淨、晾乾，常溫下泡製1-7天或30天以上，即得到佐餐型或烹調型泡菜。本發明的生產工藝簡單、成本低，產品風味獨特、質量好、品種多。
下面結合實施例對本發明做進一步說明
實施例一 菌體的培養將芽孢乳桿菌L.B.P.C-5 28℃-30℃培養3天後，將其從乳酸菌培養基斜面接種到乳酸菌培養液中同樣溫度下培養3天，然後按十倍的梯度在乳酸菌培養液中再擴培2次，即得到可用於生產的菌株培養液。
將芽孢乳桿菌L.B.P.C-6 28℃-30℃培養3天後，將其從乳酸菌培養基斜面接種到乳酸菌培養液中同樣溫度下培養3天，然後按十倍的梯度在乳酸菌培養液中再擴培2次，即得到可用於生產的菌株培養液。
斜面培養基酵母膏7.5g蛋白腖7.5g 葡萄糖10.0g西紅柿汁280ml KH2PO42.0g Twean 0.5ml蒸餾水720ml 瓊脂20.0gPH 7.0。
乳酸菌液體培養基上述培養基中不加瓊脂即可。
實施例二 佐餐型泡菜的生產泡漬液的配製水50kg 食鹽5kg 蔗糖1kg 白酒0.5kg 花椒0.25kg 八角0.25kg將準備好的L.B.P.C-5或L.B.P.C-6菌體培養液按泡漬液容積的5％接入泡漬液中，然後將新鮮蔬菜洗淨、晾乾，置入泡漬液常溫泡製1-7天，滅菌，包裝，檢驗，成品，得到佐餐型泡菜。
實施例三 烹調型泡菜的生產泡漬液的配製水50kg 食鹽7kg 蔗糖1kg 白酒0.5kg 幹辣椒0.1kg 香菌0.2kg將準備好的L.B.P.C-5或L.B.P.C-6菌體培養液按泡漬液容積的7％接入泡漬液中，然後將新鮮蔬菜洗淨、晾乾，置入泡漬液常溫泡製30天以上，包裝，檢驗，成品，得到烹調型泡菜。
實施例四 佐餐型泡菜的生產泡漬液的配製水50kg 食鹽4kg 蔗糖1kg 白酒0.5kg 花椒0.25kg 八角0.25kg將準備好的L.B.P.C-5和L.B.P.C-6菌體培養液以6∶4的比例混合，再按泡漬液容積的6％接入泡漬液中，然後將新鮮蔬菜洗淨、晾乾，置入泡漬液常溫泡製1-7天，滅菌，包裝，檢驗，成品，得到佐餐型泡菜。
實施例五 烹調型泡菜的生產泡漬液的配製水50kg 食鹽7kg 蔗糖0.6kg 白酒0.25kg幹辣椒0.1kg 香菌0.2kg將準備好的L.B.P.C-5和L.B.P.C-6菌體培養液以5∶5比例混合，再按泡漬液容積的9％接入泡漬液中，然後將新鮮蔬菜洗淨、晾乾，置入泡漬液常溫泡製30天以上，包裝，檢驗，成品，得到烹調型泡菜。
權利要求
1.一種芽孢乳桿菌菌株，其特徵在於是由中國典型培養物保藏中心保藏的保藏號為CCTCCNOM200024的芽孢乳桿菌L.B.P.C-5(Sporolactobacillus sp.L.B.P.C-5)。
2.一種芽孢乳桿菌菌株，其特徵在於是由中國典型培養物保藏中心保藏的保藏號為CCTCCNOM200023的芽孢乳桿菌L.B.P.C--6(Sporolactobacillus sp.L.B.P.C--6)。
3.一種如權利要求1或權利要求2所述的芽孢乳桿菌L.B.P.C-5、L.B.P.C--6的培養方法，其特徵在於芽孢乳桿菌L.B.P.C-5、L.B.P.C--6在乳酸菌培養基上生長，所述的乳酸菌培養基是含酵母膏0.75％，蛋白腖0.75％，葡萄糖1％，西紅柿汁28％-32％，KH2PO40.2％，Twean 0.05％，瓊脂2％-2.5％的水溶液，PH6.5--7.0
4.一種利用權利要求1或2所述的芽孢乳桿菌L.B.P.C-5、L.B.P.C--6生產泡菜的工藝，其特徵在於按泡漬液容積的5％--10％加入芽孢乳桿菌L.B.P.C-5菌液或L.B.P.C-6菌液，其中泡漬液是食鹽8％--15％，蔗糖1％--3％，白酒0.5％-1.5％所組成的水溶液。
5.一種利用權利要求1和2所述的芽孢乳桿菌L.B.P.C-5、L.B.P.C--6生產泡菜的工藝，其特徵在於先按30-70％∶70-30％的比例將L.B.P.C-5菌液和L.B.P.C-6菌液混合，再按泡漬液容積的5％--10％加入混合菌液，其中泡漬液是食鹽8％--15％，蔗糖1％--3％，白酒0.5％--1.5％所組成的水溶液。
6.根據權利要求4所述的泡菜生產工藝，其特徵在於泡漬液中還可加入不超過泡漬液重量1％的天然植物香辛料以適應口味的需要，該天然香辛料為花椒、幹辣椒、八角、三奈，可以是單一成分或組合成分。
全文摘要
本發明涉及兩株芽孢乳桿菌菌株、培養方法及其在泡菜生產中的應用。一種芽孢乳桿菌菌株,是由中國典型培養物保藏中心保藏的保藏號為CCTCCNO:M200024的芽孢乳桿菌L.B.P.C－5(Sporolactobacillus sp.L.B.P.C－5);另一種芽孢乳桿菌菌株,是由中國典型培養物保藏中心保藏的保藏號為CCTCCNO:M200023的芽孢乳桿菌L.B.P.C—6(Sporolactobacillus sp.L.B.P.C—6),其生長快,工業生產中對不利條件的耐受性高,生產工藝簡單,成本低,生產的泡菜種類多、質量好。
文檔編號C12N1/20GK1368547SQ01107098
公開日2002年9月11日 申請日期2001年2月8日 優先權日2001年2月8日
發明者李幼筠 申請人:成都市調味品研究所