維醫動物模型的造模方法、模型、反證和綜合評價方法
2023-05-26 07:21:16
專利名稱：維醫動物模型的造模方法、模型、反證和綜合評價方法
技術領域：
本發明屬於維吾爾醫學男科疾病研究領域，具體涉及一種維醫異常黏液質證侯動物模型的造模方法、一種維醫異常黏液質證侯模型、一種維醫異常黏液質陽痿病證動物模型製備的反證和綜合評價方法。
背景技術：
陽痿是指男子陰莖不舉或舉而不堅為主要特徵的病證，在現代醫學中稱為陰莖勃起功能障礙(erectile dysfunction,ED),並可見性慾減低與早洩等證狀。當今社會男性因生活節奏加快，平均睡眠時間少、飲食結構與環境的變化，更因心理健康與其他各類致病因素導致陽痿的發病率逐年上升。現代醫學研究資料顯示在世界範圍內於1995年ED患者達
I.52億人，在40-70歲的男性中，約有52%的男性有不同程度的ED，預計到2025年將會上升到3. 22億人；我國城市男性患病率達到26. 1%，40歲以上總患病率為40. 2%。目前對ED治療藥物與方法而言，雖然有V型磷酸二脂酶抑制劑、激素、AGEs抑制劑等多種方法可供選擇，尤其是磷酸二酯鍵抑制劑的產生給ED的治療帶來了革命性的變化，然而與人們的期望值仍有較大差距，整體治療效果尚有不足。維吾爾醫學作為祖國傳統醫學的重要組成部分，在新疆醫療衛生體系中發揮著重要作用。維醫學其以獨立的理論體系與獨特的治療方法在男科疾病的治療上有著獨到之處和顯著療效，尤其是對陽痿、早洩類疾病的治療是維醫的一大優勢特色。但因維醫實驗動物學起步較晚，不同證型陽痿的病證動物模型尚未建立，導致其生物學基礎與現代醫學發病機制的研究尚屬空白，從而制約著維醫男科學診療的標準化與現代化。於此同時，在病證動物模型基礎上的實驗研究與新藥研發、藥效評價等工作無法開展，因此建立維醫異常黏液質陽痿病證動物模型。
發明內容
針對上述現有技術的不足，本發明的目的之一是提供一種維醫異常黏液質證侯動物模型的造模方法，該方法可以應用與建立維醫異常黏液質證侯模型。技術方案是一種維醫異常黏液質證侯動物模型的造模方法，該方法如下將實驗動物分為對照組和造模組；對照組於常規環境中飼養，每組每日20:00-22:00給300g普通飼料，500 ml水，更換墊料，墊料量為80 g;造模組置於人工氣候箱中飼養，每組每日20:00-22:00給溼寒飼料300g，500 ml水，更換墊料，墊料量為80 g ;對照組和造模組均隨機飲食水；動態觀測。作為優選，所述實驗動物為大鼠。作為優選，所述大鼠為雄性SD大鼠。本發明的目的之二是提供一種維醫異常黏液質證侯模型，該模型可應用於維醫異常黏液質陽痿病證動物模型製備的反證和綜合評價方法。技術方案是一種維醫異常黏液質證侯模型，該方法採用上述權利要求1-3任一權利要求所述的維醫異常黏液質證侯動物模型的造模方法。本發明的目的之三是提供一種維醫異常黏液質陽痿病證動物模型製備的反證和綜合評價方法，該方法可應用在陽痿病證臨床試驗中。技術方案是一種維醫異常黏液質陽痿病證動物模型製備的反證和綜合評價方法，該方法如下建立如權利要求4所述的維醫異常黏液質證侯模型；通過APO陰莖勃起實驗並結合性行為學實驗篩選出陽痿病證模型；將陽痿病證模型隨機分為病證模型組Al、自然反證組A2和藥物反證組A3 ;未成陽痿的證侯模型隨機分為證侯模型組BI、自然反證組B2和藥物反證組B3，反證時間為2周；反證結束時，再進行APO陰莖勃起實驗與性行為學檢測；自然反證對照將自然反證組A2和B2於常規環境下飼養2周，常規飲食，通過生物學表徵觀測及其與正常對照組比較後，確定模型自然恢復情況；藥物反證對照將藥物反證組 A3和B3於常規環境下飼養2周，常規飲食，同時以對證藥物伊木薩克片幹預2周，並通過生物學表徵觀測及其與正常對照組比較後，對證藥物的治療效果；性行為學檢測室內保持安靜，燈光調暗至僅夠觀察，將雄性大鼠放在玻璃箱中適應環境10分鐘，按2:1投入雌鼠，觀測並記錄30分鐘內雄性大鼠的騎跨潛伏期、騎跨次數、插入潛伏期、插入次數、射精潛伏期、射精次數；所述常規飲食為每組每日20:00-22:00給300g普通飼料，500 ml水。作為優選，所述藥物反證組A3和B3每日是用250mg伊木薩克片/Ikg蒸餾水灌胃，自然反證組A2、自然反證組B2、病證模型組Al和證侯模型組BI每日是用Ikg蒸餾水灌
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冃 作為優選，所述APO陰莖勃起先將雄性大鼠放在觀察箱中適應環境10分鐘，燈光調暗，僅夠觀察即可，室內保持安靜，然後每隻大鼠在頸項皮膚鬆弛處注射阿樸嗎啡(APO) 85 μ g/kg (AP0溶解於O. 5mg/kg的維生素C與生理鹽水中，調整體積為5ml/kg)，每隻大鼠於注射後立刻觀察30分鐘，觀察指標包括勃起潛伏期及勃起次數。陰莖龜頭充血及末端陰莖體出現記為陰莖勃起一次。作為優選，所述生物學表徵觀測為定性指標觀測和定量指標觀測。作為優選，所述定性指標觀測為皮膚毛髮在日光下觀察，情緒反應以一籠內各大鼠相互反應為主觀察30分鐘，行為狀態以此期間內的活動為主、安靜環境下觀察30分鐘，興奮程度以夾尾實驗時的反應為主，舌象舌苔在日光下觀察、記錄並拍照，飲食水狀態以各組同一時間餵飼觀察飲食水狀態，小便以各組大鼠當日正排尿時顏色為主，大便狀態以當日正排大便時大便形態為主；
所述定量指標為避免生理節奏的影響，每天固定於20:00-22:00收集各項資料，其中體重每天按規定時間稱重並記錄，以每籠總體重除以該籠大鼠只數，得出平均體重，並按下述公式得出模型組各籠體重比值並記錄，體重比值=模型組平均體重-模型組初始體重/正常組平均體重-正常組初始體重；飲食量每天20:00添加飼料300g，次日20:00稱食物餘量，根據下述公式得出IOOg體重相對應的飲食量並記錄；飲水量每天20:00給水500ml，次日20:00量剩餘水量，計算得出IOOg體重相對應的飲水量並記錄；尿量造模第一天記錄好給的幹墊料重量，第二天按規定時間稱含有尿液及大便的溼墊料的重量並記錄，然後在恆溫鼓風乾燥箱100°C下2小時烘乾後再次稱重，計算各組尿量；大便量計算IOOg體重相對應的大便量並記錄。通過本發明的實驗發現，從模擬病因、證狀表現、慢性過程與自然會恢復反證和對證藥物反證方面建立的異常黏液質證侯與陽痿病證大鼠模型符合維吾爾醫學異常黏液質證侯的認識特點，模擬出的一般狀態改變符合維吾爾醫學異常黏液質的證侯特徵，篩選的ED模型，也較穩定。我們認為，本研究中建立的異常黏液質證侯與陽痿病證動物模型是可靠的、可行的，並具有良好的重複性與科學性。本發明異常黏液質陽痿病證的動物模型可用於異常黏液質證與異常黏液質陽痿病證的生物學基礎研究和藥物幹預研究。本發明的有益效果在於本發明通過採取溼寒環境和溼寒飼料飼養得到的異常黏液質陽痿病證動物模型。研究數據顯示，造模組出現了蜷臥少動，喜扎堆，行動遲緩，毛髮亂無光澤，舌質暗，舌苔白膩，口腔、鼻腔分泌物增多等現象。同時可見造模組體重增長緩慢，飲食量增加，飲水量減少，大小便量顯著增多，且尿液清，色淡，大便時軟時溏等情況，上述生物學表徵符合維醫臨床證侯特點，從而從異常黏液質證侯大鼠模型中可成功篩選處陽痿病證大鼠模型，且該模型具有良好的科學性、可靠性和穩定性。
具體實施例方式下面結合附表為本發明做進一步說明。維醫異常黏液質陽痿病證動物模型的製備
(I)實驗動物SD大鼠，平均體重203-237g，清潔級SPF級，新疆醫科大學實驗動物中心提供。(2)主要試劑、藥物及實驗儀器阿樸嗎啡，美國Sigma公司；黃體酮，浙江仙琚製藥股份有限公司；雌二醇，上海通用藥業股份有限公司；RQH-350型人工氣候箱，上海精宏實驗設備有限公司產品；伊木薩克片，新疆和田維吾爾藥業有限責任公司。(3)實驗方法100隻具有正常性功能的雄性SD大鼠，實驗前1_3天均於常規環境中飼養。從中隨機取10隻為正常對照組，在常規環境中飼養(溫度20°C ±2°C，溼度55%-65%，12h/12h人工照明)，每日300g普通飼料，500ml水，80墊料；其餘90隻為造模組，置於人工氣候箱中飼養(設定溫度6°C，溼度85%-95%)，9:00-19:00放入，每日300g溼寒飼料，該溼寒飼料由每Ikg常規飼料中加入芫荽實和菠菜實各150g製成，水和墊料與正常組相同。固定每日20:00-22:00給予飼料、飲水，更換墊料，觀測生物學表徵的變化。表一、維醫異常粘液質陽痿病證動物模型的定向指標觀察。
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C3 Sy*￡11 Q s5i C3異常黏液質陽痿病證動物模型的體重及體重比值變化。
權利要求
1.一種維醫異常黏液質證侯動物模型的造模方法，該方法如下 將實驗動物分為對照組和造模組； 對照組於常規環境中飼養，每組每日20:00-22: OO給300g普通飼料，500 ml水，更換墊料，墊料量為80 g ;造模組置於人工氣候箱中飼養，設定溫度6°C，溼度85% 95%，每組每日20:00 22:00給溼寒飼料300g，500 ml水，更換墊料，墊料量為80 g ； 對照組和造模組均隨機飲食水； 動態觀測。
2.根據權利要求I所述的維醫異常黏液質證侯動物模型的造模方法，其特徵在於所述實驗動物為大鼠。
3.根據權利要求2所述的維醫異常黏液質陽痿病證動物模型的製備方法，其特徵在於所述大鼠為雄性SD大鼠。
4.一種維醫異常黏液質證侯模型，其特徵在於該方法採用上述權利要求1-3任一權利要求所述的維醫異常黏液質證侯動物模型的造模方法。
5.一種維醫異常黏液質陽痿病證動物模型製備的反證和綜合評價方法，該方法如下 建立如權利要求4所述的維醫異常黏液質證侯模型； 通過APO陰莖勃起實驗並結合性行為學檢測篩選出陽痿病證模型； 將陽痿病證模型隨機分為病證模型組Al、病證自然反證組A2和病證藥物反證組A3 ;未成陽痿的證侯模型隨機分為證侯模型組BI、證侯自然反證組B2和證侯藥物反證組B3，反證時間為2周； 反證結束時，再進行APO陰莖勃起實驗與性行為學檢測； 自然反證對照將自然反證組A2和B2於常規環境下飼養2周，常規飲食，通過生物學表徵觀測及其與正常對照組比較後，確定模型自然恢復情況； 藥物反證對照將藥物反證組A3和B3於常規環境下飼養2周，常規飲食，同時以對證藥物伊木薩克片幹預2周，並通過生物學表徵觀測及其與正常對照組比較後，確定對證藥物的治療效果； 性行為學檢測室內保持安靜，燈光調暗至僅夠觀察，將雄性大鼠放在玻璃箱中適應環境10分鐘，按2:1投入雌鼠，觀測並記錄30分鐘內雄性大鼠的騎跨潛伏期、騎跨次數、插入潛伏期、插入次數、射精潛伏期、射精次數； 所述常規飲食為每組每日20:00-22:00給300g普通飼料，500 ml水。
6.一種如權利要求5所述的維醫異常黏液質陽痿病證動物模型製備的反證和綜合評價方法，其特徵在於所述藥物反證組A3和B3每日是用250mg伊木薩克片/Ikg蒸餾水灌胃，自然反證組A2、自然反證組B2、病證模型組Al和證侯模型組BI每日是用Ikg蒸餾水灌 胃。
7.—種如權利要求5所述的維醫異常黏液質陽痿病證動物模型製備的反證和綜合評價方法，其特徵在於所述APO陰莖勃起先將雄性大鼠放在觀察箱中適應環境10分鐘，燈光調暗，僅夠觀察即可，室內保持安靜，然後每隻大鼠在頸項皮膚鬆弛處注射阿樸嗎啡(APO) 85 μ g/kg (AP0溶解於O. 5mg/kg的維生素C與生理鹽水中，調整體積為5ml/kg)，每隻大鼠於注射後立刻觀察30分鐘，觀察指標包括勃起潛伏期及勃起次數；陰莖龜頭充血及末端陰莖體出現記為陰莖勃起一次。
8.—種如權利要求5所述的維醫異常黏液質陽痿病證動物模型製備的反證和綜合評價方法，其特徵在於所述生物學表徵觀測為定性指標觀測和定量指標觀測。
9.一種如權利要求7所述的維醫異常黏液質陽痿病證動物模型製備的反證和綜合評價方法，其特徵在於 所述定性指標觀測為皮膚毛髮在日光下觀察，情緒反應以一籠內各大鼠相互反應為主觀察30分鐘，行為狀態以此期間內的活動為主、安靜環境下觀察30分鐘，興奮程度以夾尾實驗時的反應為主，舌象舌苔在日光下觀察、記錄並拍照，飲食水狀態以各組同一時間餵飼觀察飲食水狀態，小便以各組大鼠當日正排尿時顏色為主，大便狀態以當日正排大便時大便形態為主； 所述定量指標為避免生理節奏的影響，每天固定於20:00-22:00收集各項資料，其中體重每天按規定時間稱重並記錄，以每籠總體重除以該籠大鼠只數，得出平均體重，並按下述公式得出模型組各籠體重比值並記錄，體重比值=模型組平均體重-模型組初始體重/正常組平均體重-正常組初始體重；飲食量每天20:00添加飼料300g，次日20:00 稱食物餘量，根據下述公式得出IOOg體重相對應的飲食量並記錄；飲水量每天20:00給水500ml，次日20:00量剩餘水量，計算得出IOOg體重相對應的飲水量並記錄；尿量造模第一天記錄好給的幹墊料重量，第二天按規定時間稱含有尿液及大便的溼墊料的重量並記錄，然後在恆溫鼓風乾燥箱100°C下2小時烘乾後再次稱重，計算各組尿量；大便量計算IOOg體重相對應的大便量並記錄。
全文摘要
本發明公開了一種維醫異常黏液質證侯、病證動物模型的造模方法、模型、反證和綜合評價方法，屬維吾爾醫學男科領域，異常黏液質證侯動物模型的造模方法，成模後予以再分組、反證並綜合評價。方法為將實驗動物分為對照組和造模組；對照組於常規環境中以常規飲食飼養；造模組置於人工氣候箱(設定溫度6°C，溼度85%～95%)中，以溼寒性飼料飼養，對照組和造模組均隨機飲食水；全程動態觀測各組生物學表徵與陰莖勃起功能、性行為學改變。本發明具有可靠的、可行的，並具有良好的重複性與科學性，並可用於維醫異常黏液質證與異常黏液質陽痿病證的生物學基礎研究和藥物幹預研究。
文檔編號A61D7/00GK102845365SQ20111025964
公開日2013年1月2日 申請日期2011年9月5日 優先權日2011年9月5日
發明者哈木拉提·吾甫爾, 阿地力江·伊明 申請人:新疆醫科大學