應用乳酸細菌治療腹膜炎的製作方法
2023-05-26 12:45:41 1
專利名稱：應用乳酸細菌治療腹膜炎的製作方法
技術領域：
本發明涉及應用能夠與腸道黏膜粘附並主要在其上定植的乳酸細菌治療與腹膜炎相關的疾病。特別是，本發明涉及應用這樣的乳酸細菌治療由於肝硬化導致的腹膜炎。
腹膜炎是腹膜的炎症，通常由於嚴重的局部感染導致，所述局部感染通常由胃腸道炎症和感染、胃腸道穿孔和創傷引起，包括手術和腹膜透析。在這種情況下，致病性和潛在致病性微生物，偶爾有細胞殘留進入腹膜，引起宿主免疫應答，而這種免疫應答通常無法對付病原體的侵襲。
上述情況在肝硬化患者中更是如此。肝硬化患者通常有腸道細菌的過度生長和免疫應答的減弱，這似乎至少部分是由於腹水中調理素活性的減低。因此晚期肝硬化通常伴有自發性細菌性腹膜炎(SBP)，這種腹膜炎通常涉及正常情況下存在於腸道的革蘭氏陰性腸道病原體。因此在腹水中發生SBP被認為是由於腸道細菌從腸道轉位到腹膜導致的。
腹膜炎的主要危害是細菌播散，即病原體通過血液和淋巴系統的擴散，引起多數組織感染，導致受累個體發生威脅生命的狀況。一旦細菌進入腹腔，播散就相當迅速。在狗腹腔內孵育細菌6分鐘，胸部淋巴培養即呈陽性，而孵育12分鐘則可導致血液細菌水平的上升。
儘管在腹膜炎的診斷和治療方面已經有了一些進步，但是仍有大約三分之一合併這種感染的住院患者最終死於消化道出血、肝功能衰竭或肝腎症候群。
目前，預防和/或治療腹膜炎典型的醫學手段包括抗生素治療，特別是在手術前。但是這種方法的缺點是可能引起導致腹膜炎的耐藥細菌的產生。而且，由於腹膜炎可能由革蘭氏陽性和革蘭氏陰性兩種細菌導致，應用抗生素可能不會在所有病例中發揮足夠的功效。
此外，抗生素治療是非特異性的，還可導致多種非致病性微生物的損傷，而這些非致病性微生物通常可以通過細菌拮抗作用預防細菌性疾病，特別是胃腸道疾病。因此，應用廣譜抗生素一段較長時間，可以抑制絕大多數腸道內生存細菌的生長，而致病性微生物中的抗生素耐藥菌株則可自由繁殖。導致的結果是，抗生素有時可能會使腹膜炎惡化，而非預防其發生。
WO 97/00081披露了另一種腹膜炎的治療方法。該文件提示可以應用CD14拮抗劑，CD14是已知能夠與細菌脂多糖發生相互作用的表面抗原。已知細菌脂多糖能夠通過與免疫系統細胞的表面受體結合，刺激免疫系統，開始產生並分泌細胞因子和其他介質，來刺激免疫系統。而業已發現，這些細胞因子和介質可以支持細菌的生長和侵襲。因此提議的治療主旨在於幹擾產生細胞因子/介質的早期免疫應答。據信通過阻斷CD14的激活，基本上防止細胞因子的產生，還可以抑制細菌的生長。但這種方法的缺點在於宿主的免疫應答功能也受到大大損傷，宿主自身的防禦機制進一步惡化。
因此，有需要尋求一種有效的方法，預防和/或治療局部感染，如與腹膜炎相關的疾病。因此本發明的一個目標就是提供這樣一種方法。
在導向本發明的大量實驗中，研究人員探討了這樣一個理論，即個體腸道中的乳酸細菌對腹膜中的免疫系統細胞特別是臨近腸道的免疫系統細胞是否具有正面影響。業已發現，應用特定的乳酸細菌可以分別明顯降低腹膜炎動物腹水和腹膜中的細菌數量，提示乳酸細菌，特別是益生性乳酸細菌，能夠有效減少腸道細菌的過度生長和病原體的轉位。
因此，可以通過應用乳酸細菌解決上述問題，所述乳酸細菌能夠粘附於腸道黏膜，並主要在其上定植，製備成可吸收載體，用於預防和/或治療與腹膜炎相關的疾病。
腹膜炎可以是自發性細菌性腹膜炎(SBP)，如在腹膜中突然出現潛在病原體導致的腹膜炎，這種情況通常在肝功能損傷的情況下發生，如在肝硬化期間。而且，腹膜炎還可能是由病毒誘導的，或者在透析或手術後發生。
根據一個優選實施方案，乳酸細菌是益生菌，優選乳桿菌和雙岐桿菌屬，更優選約氏乳桿菌(Lactobacillus johnsonii)CNCM I-1225、類乾酪乳桿菌(Lactobacillus paracasei)CNCM I-2116或雙岐桿菌(Bifidobacterium)CNCM I-2168。
根據本發明，所用乳酸細菌被整合到載體中，所述載體可以是食品或藥品，如乳類，酸奶，凝乳，奶酪，發酵乳，乳基發酵製品，冰淇淋，發酵穀物基產品，奶粉，嬰兒配方以及片劑，細菌懸液，幹的口服添加劑，溼的口服添加劑，幹的管飼物和溼的管飼物等。
載體中還可以包括已知對損傷的腸道狀況有益的其他化合物，如抗氧化劑，如維生素C，維生素E，硒或鋅。根據各自的治療和/或預防性治療的需要，本領域技術人員可以選擇適宜的醫學形式和/或添加劑，幫助改善個體的健康狀況。
不受任何理論的限制，據信微生物的活性主要取決於兩個因素已知益生菌對宿主的免疫系統具有有益作用。在目前情況下，乳酸細菌似乎能夠刺激腹膜免疫系統，特別是位於個體腸道周圍的非特異性免疫防禦系統，抵禦微生物通過腸壁對腹膜的侵襲。該免疫屏障在罹患肝硬化的患者中通常減弱。
另一方面，據信定植於腸道壁的乳酸細菌可以物理性防止或者至少降低潛在病原體通過腸道對腹膜的侵襲。通過與腸道的粘附，細菌可以與腸道表面的病原體腸道黏膜遮蔽受體建立緊密的聯繫。
應該指出，微生物活性呈劑量依賴性，即整合到可吸收食品或藥物組合物中的微生物越多，保護性和/或治癒活性越高。因此，本發明所用食品或藥物組合物可以包含的乳酸細菌數量大約為105cfu/g載體-1012cfu/g載體。本發明所用的縮略語「cfu」是指「集落形成單位」，其定義為通過瓊脂平板上微生物計數獲得的細菌細胞數量。
由於應用的微生物對於人類和動物來說是無害的，而且最終是從自然環境中分離的，即從嬰兒糞便中分離，因此可以整合大量微生物，使微生物可以定植於個體腸道的絕大部分。
現在將以實施例的形式闡述本發明，但實施例不應被認為是對實施方案的限制。
實施例1治療動物研究共包括31隻雄性Sprague-Dawley大鼠，其中19隻通過每周強制性灌胃誘發肝硬化，灌胃物為四氯化碳和含苯巴比妥的水(1.5mmol/l)隨意。飼料為標準BK(Barcelona，Spain)，大鼠可以隨意取食。在整個研究期間，對照組的12隻大鼠接受標準飼料(上述)和含苯巴比妥的水，而實驗組其他大鼠(19)接受的標準飼料中含有大約1010cfu/天的乳酸細菌CNCM I-1225(約氏乳桿菌，La1)或水。
所有對照組大鼠在開始飲用含苯巴比妥的水18周後處死。12隻對照大鼠中，有6隻接受A處理(水)，6隻接受B處理(水加乳桿菌)。處理通過強制手段實施。在分別接受處理或無處理後10天，麻醉進行剖腹手術，收集盲腸糞便、迴腸糞便、迴腸壁、腸繫膜淋巴結、腹水和胸水樣本進行微生物學研究。從腔靜脈收集血液，確定是否存在內毒素血症。此外，還收集迴腸壁、盲腸壁、脾臟和肝臟樣本進行組織學研究，門脈壓通過門靜脈壓力和脾臟/大鼠重量比率進行評價。
對於實驗組，當大鼠產生腹水後(大約在開始誘導肝硬化後20周)，麻醉進行腹腔穿刺，核實腹水的存在，然後將這些大鼠隨機分為兩組一組(n＝8)接受A處理(水)，另一組(n＝11)接受B處理(加乳酸細菌)。處理通過強制手段實施。研究結束時(處理後10天)，病程在對照組大鼠中相同。
在所有對照和肝硬化大鼠中，在開始處理前24小時和處理結束時，通過測定尿中乳果糖和甘露醇，進行了腸道滲透性研究。而且，在肝硬化誘導期或對照期，對所有對照組和肝硬化大鼠每4周進行一次腸道滲透性研究。
實施例2腹水、細菌轉位和細菌性腹膜炎的出現在剖腹手術中，7/8應用水處理(處理A)的肝硬化大鼠和7/11處理B的肝硬化大鼠具有可檢測的腹水。腸繫膜淋巴結培養在所有22隻對照大鼠中均為陰性。在所有接受B處理的肝硬化大鼠中，腸繫膜淋巴結、腹水和胸水培養也均呈陰性。而接受水處理的肝硬化大鼠，5/8大鼠顯示有細菌轉位(培養呈陽性)，轉移到腸繫膜淋巴結或腹水或胸水(在接受A和B處理的組間，p＜0.01)2隻轉位到胸水，2隻轉位到腸繫膜淋巴結，1隻轉位到腹水和腸繫膜淋巴結。分離出的細菌為2例大腸桿菌，2例大腸桿菌+腸球菌，1例大腸桿菌+鏈球菌。
結果見下表I表I
從上面的結果可以明顯看出，接受約氏乳桿菌CNCM 1225的肝硬化大鼠相較於接受水的肝硬化大鼠，細菌轉位明顯受到抑制。
實施例3腸道微生物學研究在該研究中，測試了多種微生物，用於上述實施例1和2，處理對照和肝硬化大鼠。
與水處理的肝硬化大鼠相比，*P＜0.01，**p＜0.001和***p＜0.03(Mann-Whitney檢驗)。
與水處理的肝硬化大鼠相比，#p＜0.05和##p＜0.01。
nd＝未測上述數據還證實腸道微生物平衡確實存在損傷，即與對照大鼠相比，肝硬化大鼠中潛在致病性細菌存在過度生長。與水處理組大鼠相比，處理B降低了腸細菌和腸球菌的數量，增加了乳桿菌的數量。因此，處理B可能糾正肝硬化大鼠中潛在致病性細菌的過度生長。
134表
關於微生物保藏的說明(細則13之二)
PCT/RO/134表(1992年7月)
關於微生物保藏的說明(細則13之二)
PCT/RO/134表(1992年7月)
關於微生物保藏的說明(細則13之二)
PCT/RO/134表(1992年7月)
權利要求
1.應能夠與腸道黏膜粘附並主要在其上定植的乳酸細菌在製備可吸收載體中的用途，所述載體用來預防和/或治療與腹膜炎相關的疾病。
2.權利要求1的用途，其中所述乳酸細菌是益生菌。
3.任何前述權利要求的用途，其中所述細菌選自乳桿菌或雙岐桿菌。
4.權利要求3的用途，其中所述細菌是約氏乳桿菌CNCM I-1225，類乾酪乳桿菌CNCM I-2116或雙岐桿菌CNCM I-2168。
5.任何前述權利要求的用途，其中所述腹膜炎是自發性細菌性腹膜炎(SBP)，病毒誘導的腹膜炎或透析誘導的腹膜炎(DIP)。
6.任何前述權利要求的用途，其中所述腹膜炎與肝硬化相關。
7.任何前述權利要求的用途，其中載體中所含的乳酸細菌量大約為105cfu/g載體-1012cfu/g載體。
8.權利要求7的乳酸細菌的用途，其中含有乳酸細菌的載體是食品或藥物組合物。
9.權利要求7的用途，其中載體是食品組合物，選自乳類，酸奶，凝乳，奶酪，發酵乳，乳基發酵製品，冰淇淋，發酵穀物基產品，奶粉，嬰兒配方，片劑，細菌懸液，幹的口服添加劑，溼的口服添加劑，幹的管飼物和溼的管飼物等。
全文摘要
本發明涉及應用能夠與腸道黏膜粘附並主要在其上定植的乳酸細菌治療與腹膜炎相關的疾病。特別是，本發明涉及應用這樣的乳酸細菌治療由於肝硬化導致的腹膜炎。
文檔編號A23G9/52GK1419454SQ01807119
公開日2003年5月21日 申請日期2001年3月22日 優先權日2000年3月24日
發明者E·施夫林, C·古爾納, G·索裡爾諾 申請人:雀巢製品公司