Stc2基因在作為結直腸癌肝轉移分子標記中的應用的製作方法
2023-05-30 12:41:36
Stc2基因在作為結直腸癌肝轉移分子標記中的應用的製作方法
【專利摘要】本發明公開了STC2基因在作為結直腸癌肝轉移分子標記中的應用。本發明提供了一種鑑定或輔助鑑定待測結腸癌患者是否發生肝轉移的試劑盒，包括用於檢測STC2基因表達量的試劑和記載如下判斷標準的載體：若所述待測結腸癌患者癌組織中STC2基因表達量高於確診為非肝轉移結腸癌患者癌組織中STC2基因表達量，且二者存在顯著差異，則待測結腸癌患者發生或候選發生肝轉移；本發明的實驗證明STC2在結直腸癌肝轉移組病人原發灶中的表達明顯高於非肝轉移組，後期的體外功能學實驗結果提示STC2可能通過促進腫瘤遷移侵襲能力進而參與結直腸癌肝轉移的過程，這一發現為進一步尋找結直腸癌肝轉移分子標誌物提供了線索。
【專利說明】STC2基因在作為結直腸癌肝轉移分子標記中的應用
【技術領域】
[0001] 本發明涉及生物【技術領域】，尤其涉及一種STC2基因在作為結直腸癌肝轉移分子 標記中的應用。
【背景技術】
[0002] 結直腸癌是常見的消化道惡性腫瘤，其發生率僅次於胃癌和食道癌。影響結直腸 癌患者預後的最重要因素就是癌轉移，其中又以肝臟轉移最為多見。據統計，結直腸癌患者 在確診時有20 % - 40 %的病人已發生肝轉移，異時性肝轉移的發生率更高達50 %。不經治 療的肝轉移癌患者平均生存期為16-18月，而廣泛轉移者生存期僅為3-5個月。絕大多數 伴肝轉移的患者往往因為後期出現肝外轉移病灶、肝臟腫塊累及多支大血管或預留功能肝 不足等因素而無法獲得根治性切除。因此，若能早期發現肝臟轉移，早診斷，早治療，將會大 大提高結直腸癌患者的生存率。在結直腸癌腫瘤轉移相關的標誌物研究方面，雖然人們已 經進行了大量的研究，但至今仍未找到一種敏感度、特異度均足夠高的，適合於早期診斷的 標誌物。
[0003] 因此，從分子水平探索結直腸癌肝轉移的機制，尋找新的、理想的結直腸癌肝轉移 相關的分子標誌，早期發現結直腸癌肝轉移，制定個體化的治療方案，是進一步提高結直腸 癌患者生存率的有效途徑。
【發明內容】
[0004] 本發明的一個目的是提供一種鑑定或輔助鑑定待測結腸癌患者是否發生肝轉移 的試劑盒。
[0005] 本發明提供的試劑盒，包括用於檢測STC2基因表達量的試劑和記載如下判斷標 準的載體：
[0006] 若所述待測結腸癌患者癌組織中STC2基因表達量高於確診為非肝轉移結腸癌患 者癌組織中STC2基因表達量，且二者存在顯著差異，則待測結腸癌患者發生或候選發生肝 轉移；
[0007] 若所述待測結腸癌患者癌組織中STC2基因表達量高於確診為非肝轉移結腸癌患 者癌組織中STC2基因表達量且二者無顯著差異或者所述待測結腸癌患者癌組織中STC2基 因表達量不高于于確診為非肝轉移結腸癌患者癌組織中STC2基因表達量，則待測結腸癌 患者未發生或候選未發生肝轉移。
[0008] 上述試劑盒中，所述待測結腸癌患者癌組織中STC2基因表達量高於確診為非肝 轉移結腸癌患者癌組織中STC2基因表達量，且二者存在顯著差異體現在待測結腸癌患者 癌組織中STC2基因表達量/確診為非肝轉移結腸癌患者癌組織中STC2基因表達量得到 的差異倍數大於2 ;
[0009] 所述待測結腸癌患者癌組織中STC2基因表達量高於確診為非肝轉移結腸癌患者 癌組織中STC2基因表達量且二者無顯著差異或者所述待測結腸癌患者癌組織中STC2基因 表達量不高于于確診為非肝轉移結腸癌患者癌組織中STC2基因表達量體現在待測結腸癌 患者癌組織中STC2基因表達量/確診為非肝轉移結腸癌患者癌組織中STC2基因表達量得 到的差異倍數小於等於2。
[0010] 所述顯著差異為Ρ〈〇· 05
[0011] 本發明的另一個目的是提供一種鑑定或輔助鑑定待測結腸癌患者是否發生肝轉 移的試劑盒。
[0012] 本發明提供的試劑盒，包括用於檢測STC2基因表達量的試劑和記載如下判斷標 準的載體：
[0013] 若在某檢測時刻所述待測結腸癌患者癌組織中STC2基因表達量高於該結腸癌患 者確診為非肝轉移時期肝臟中STC2基因表達量，且二者存在顯著差異，則待測結腸癌患者 發生或候選發生肝轉移；
[0014] 若在某檢測時刻所述待測結腸癌患者癌組織中STC2基因表達量高於該結腸癌患 者確診為非肝轉移時期肝臟中STC2基因表達量，且二者無顯著差異，或在某檢測時刻所述 待測結腸癌患者癌組織中STC2基因表達量不高於該結腸癌患者確診為非肝轉移時期肝臟 中STC2基因表達量，則待測結腸癌患者未發生或候選未發生肝轉移。
[0015] 上述試劑盒中，
[0016] 所述在某檢測時刻所述待測結腸癌患者癌組織中STC2基因表達量高於該結腸癌 患者確診為非肝轉移時期肝臟中STC2基因表達量，且二者存在顯著差異體現在某檢測時 刻所述待測結腸癌患者癌組織中STC2基因表達量/該結腸癌患者確診為非肝轉移時期肝 髒中STC2基因表達量得到的差異倍數大於2 ;
[0017] 所述在某檢測時刻所述待測結腸癌患者癌組織中STC2基因表達量高於該結腸癌 患者確診為非肝轉移時期肝臟中STC2基因表達量，且二者無顯著差異，或在某檢測時刻所 述待測結腸癌患者癌組織中STC2基因表達量不高於該結腸癌患者確診為非肝轉移時期肝 髒中STC2基因表達量體現在某檢測時刻所述待測結腸癌患者癌組織中STC2基因表達量/ 該結腸癌患者確診為非肝轉移時期肝臟中STC2基因表達量得到的差異倍數小於等於2。
[0018] 上述的試劑盒中，所述用於檢測STC2基因表達量的試劑包括用於擴增STC2基因 的引物對；所述STC2基因表達量為STC2相對表達量，為STC2基因表達量/ β-actin表達 量；
[0019] 所述用於擴增STC2基因的引物對由序列表中序列1所示的單鏈DNA分子和序列 表中序列2所示的單鏈DNA分子組成。
[0020] 上述的試劑盒中，所述用於檢測STC2基因表達量的試劑還包括用於擴增內參基 因的引物對，所述內參基因為β-actin，所述用於擴增β-actin基因的引物對由序列表中 序列3所不的單鏈DNA分子和序列表中序列4所不的單鏈DNA分子組成。
[0021] 上述的試劑盒中，所述用於檢測STC2基因表達量的試劑也可以為表達譜晶片；具 體為 Affymetrix GeneChip Human Genome U133Plus2. OArray。
[0022] 本發明的實驗證明，STC2在結直腸癌肝轉移組病人原發灶中的表達明顯高於非肝 轉移組，後期的體外功能學實驗結果提示STC2可能通過促進腫瘤遷移侵襲能力進而參與 結直腸癌肝轉移的過程，這一發現為進一步尋找結直腸癌肝轉移分子標誌物提供了線索。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0023] 圖1為變性瓊脂糖凝膠電泳顯示18S和28S電泳條帶
[0024] 圖2為差異基因火山圖
[0025] 圖3為差異基因聚類分析熱圖
[0026] 圖4為Microarray與qRT-PCR差異基因結果對比圖
【具體實施方式】
[0027] 下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規方法。
[0028] 下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業途徑得到。
[0029] 標本收集獲得武漢大學中南醫院醫學倫理委員會的批准。
[0030] 組織標本來源：標本來自2012年06月一2012年11月期間就診於武漢大學中南 醫院腹部腫瘤科的結直腸癌患者6例，其中伴肝轉移者3例，不伴肝轉移者3例，納入本研 究的所有病例均有明確的術後病理診斷。其中結直腸癌伴肝轉移的診斷遵循中華醫學會 外科學分會胃腸外科學組和結直腸肛門外科學組、中國抗癌協會大腸癌專業委員會於2010 年發布的結直腸癌肝轉移診斷和綜合治療指南（V2010)中的標準。收集的信息包括患者住 院號、姓名、性別、年齡、出生地、聯繫地址、聯繫電話、腫瘤家族史、腸鏡結果、重要的影像學 檢查資料、手術記錄、術後病理診斷結果。初次記錄資料不完整者，後期藉助醫院電子病歷 系統和病案室存檔資料補充完善。
[0031] 術中標本離體後，迅速留取結直腸癌癌組織。放入事先準備好的冷凍保存管中，做 好標記，並於5min內置入液氮罐中，以避免RNA降解。病例選取條件為：（1)術後均經病檢 確診；（2)術前未進行過放療、化療或其他抗腫瘤治療。
[0032] 實施例1、分子標記基因 STC2的發現
[0033] 一、表達譜晶片篩選結直腸癌肝轉移差異表達基因
[0034] 1、提取 RNA
[0035] 結直腸癌病例6例，其中結直腸癌肝轉移組男性2例，女性1例，中位年齡54. 67 歲；結直腸癌非肝轉移組男性2例，女性1例，中位年齡68. 67歲。如下表1，樣本名稱由患 者住院號表示，中間隱去兩位數字。
[0036] 表1為結直腸癌病例
[0037]
【權利要求】
1. 一種鑑定或輔助鑑定待測結腸癌患者是否發生肝轉移的試劑盒，包括用於檢測 STC2基因表達量的試劑和記載如下判斷標準的載體： 若所述待測結腸癌患者癌組織中STC2基因表達量高於確診為非肝轉移結腸癌患者 癌組織中STC2基因表達量，且二者存在顯著差異，則待測結腸癌患者發生或候選發生肝轉 移； 若所述待測結腸癌患者癌組織中STC2基因表達量高於確診為非肝轉移結腸癌患者癌 組織中STC2基因表達量且二者無顯著差異或者所述待測結腸癌患者癌組織中STC2基因表 達量不高於確診為非肝轉移結腸癌患者癌組織中STC2基因表達量，則待測結腸癌患者未 發生或候選未發生肝轉移。
2. -種鑑定或輔助鑑定待測結腸癌患者是否發生肝轉移的試劑盒，包括用於檢測 STC2基因表達量的試劑和記載如下判斷標準的載體： 若在某檢測時刻所述待測結腸癌患者癌組織中STC2基因表達量高於該結腸癌患者確 診為非肝轉移時期肝臟中STC2基因表達量，且二者存在顯著差異，則待測結腸癌患者發生 或候選發生肝轉移； 若在某檢測時刻所述待測結腸癌患者癌組織中STC2基因表達量高於該結腸癌患者 確診為非肝轉移時期肝臟中STC2基因表達量，且二者無顯著差異，或在某檢測時刻所述待 測結腸癌患者癌組織中STC2基因表達量不高於該結腸癌患者確診為非肝轉移時期肝臟中 STC2基因表達量，則待測結腸癌患者未發生或候選未發生肝轉移。
3. 根據權利要求1或2所述的試劑盒，其特徵在於： 所述用於檢測STC2基因表達量的試劑包括用於擴增STC2基因的引物對； 所述用於擴增STC2基因的引物對由序列表中序列1所示的單鏈DNA分子和序列表中 序列2所示的單鏈DNA分子組成。
4. 根據權利要求3所述的試劑盒，其特徵在於： 所述用於檢測STC2基因表達量的試劑還包括用於擴增內參基因的引物對，所述內參 基因為β-actin，所述用於擴增β-actin基因的引物對由序列表中序列3所示的單鏈DNA 分子和序列表中序列4所示的單鏈DNA分子組成。
5. 根據權利要求1或2所述的試劑盒，其特徵在於：所述用於檢測STC2基因表達量的 試劑為表達譜晶片。
【文檔編號】C12Q1/68GK104087670SQ201410329446
【公開日】2014年10月8日 申請日期:2014年7月10日 優先權日:2014年7月10日
【發明者】謝偉, 楊倩, 馮茂輝, 馬翔, 陳雙倩, 王國洲, 李華馳 申請人:武漢大學